Name: Valutazione delle risposte ospite-patogeno e lefficacia del vaccino nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Scopri come valutare le risposte immunitarie e l'efficacia dei vaccini nei topi con questo protocollo in vivo. Il metodo consente di misurare il carico batterico e le reazioni ospite in tempo reale.

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<li>Andreasen, C., Carbonetti, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis+toxin+inhibits+early+chemokine+production+to+delay+neutrophil+recruitment+in+response+to+Bordetella+pertussis+respiratory+tract+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pertussis toxin inhibits early chemokine production to delay neutrophil recruitment in response to Bordetella pertussis respiratory tract infection in mice.</a> Infection and Immunity. 76 (11), 5139-5148 (2008).</li>
<li>Mills, K. H., Gerdts, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+and+pig+models+for+studies+of+natural+and+vaccine-induced+immunity+to+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Mouse and pig models for studies of natural and vaccine-induced immunity to Bordetella pertussis.</a> Journal of Infectious Diseases. 209, Suppl 1 16-19 (2014).</li>
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<li>Denoel, P., Godfroid, F., Guiso, N., Hallander, H., Poolman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acellular+pertussis+vaccines-induced+immunity+against+infection+due+to+Bordetella+pertussis+variant+isolates+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Comparison of acellular pertussis vaccines-induced immunity against infection due to Bordetella pertussis variant isolates in a mouse model.</a> Vaccine. 23 (46-47), 5333-5341 (2005).</li>
<li>Marr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+activity+of+the+Bordetella+pertussis+BrkA+autotransporter+in+the+murine+lung+colonization+model%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Protective activity of the Bordetella pertussis BrkA autotransporter in the murine lung colonization model.</a> Vaccine. 26 (34), 4306-4311 (2008).</li>
<li>Feunou, P. F., Bertout, J., Locht, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-+and+B-cell-mediated+protection+induced+by+novel%2C+live+attenuated+pertussis+vaccine+in+mice.+Cross+protection+against+parapertussis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">T- and B-cell-mediated protection induced by novel, live attenuated pertussis vaccine in mice. Cross protection against parapertussis.</a> PLoS One. 5 (4), 10178(2010).</li>
<li>Mills, K. H., Ryan, M., Ryan, E., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+in+which+protection+correlates+with+pertussis+vaccine+efficacy+in+children+reveals+complementary+roles+for+humoral+and+cell-mediated+immunity+in+protection+against+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">A murine model in which protection correlates with pertussis vaccine efficacy in children reveals complementary roles for humoral and cell-mediated immunity in protection against Bordetella pertussis.</a> Infection and Immunity. 66 (2), 594-602 (1998).</li>
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<li>Hagen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Multi-Donor+Study+of+IFNgamma+Secretion+and+Expression+by+Human+PBMCs+Using+ELISPOT+Side-by-Side+with+ELISA+and+Flow+Cytometry+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Comparative Multi-Donor Study of IFNgamma Secretion and Expression by Human PBMCs Using ELISPOT Side-by-Side with ELISA and Flow Cytometry Assays.</a> Cells. 4 (1), 84-95 (2015).</li>
<li>Raeven, R. H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+signatures+underlying+superior+immunity+against+Bordetella+pertussis+upon+pulmonary+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular signatures underlying superior immunity against Bordetella pertussis upon pulmonary vaccination.</a> Mucosal Immunology. 11 (3), 1009(2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Il protocollo completo descritto qui per studiare l'immunità indotta dal vaccino all'infezione di b. pertussis permetterà anche la valutazione della risposta ospite ad una varietà di altri agenti patogeni. Il protocollo viene descritto metodi per consegnare le immunizzazioni, determinare vaccino efficacia segue agente patogeno sfida e dissezione parallela della funzione immune. Adattare il protocollo al fine di studiare altri agenti patogeni, diversi parametri avrebbero bisogno di essere modificati. Questi inclu...

I vaccini rappresentano uno dei più grandi successi di salute pubblica del ventesimo secolo, ma noi ancora non comprendiamo pienamente i meccanismi da cui successo vaccini stimolano l'immunità protettiva. L'identificazione di marcatori molecolari (ad es., gli indicatori di attivazione delle cellule, espansione dei sottotipi cellulari e pattern di espressione genica) indotto dopo vaccinazione offre una pletora di informazioni per la previsione e generando un efficace risposta immunitaria. La complessità delle risposte ospite-patogeno non può essere replicata adeguatamente utilizzando in vitro delle cellule di coltura sistemi1. In vivo vaccino modelli sono progettati per valutare simultaneamente più tipi di cellule immunitarie all'interno dell'host. Questo fornisce un vantaggio quando che caratterizzano vaccino antigene elaborazione e presentazione, secrezione di citochine differenziale ed espansione delle cellule immuni. Il protocollo descritto qui fornisce un metodo dettagliato per determinare l'efficacia del vaccino attraverso la valutazione delle risposte immunitarie sistemiche e locali e la quantificazione del carico dell'agente patogeno nei tessuti di interesse. L'esempio qui fornito prove dell'efficacia di un vaccino sperimentale per l'agente patogeno Bordetella pertussis (pertosse del b.).
B. pertussis è un batterio gram-negativo che è l'agente eziologico della malattia respiratoria pertosse (pertosse)2,3. Stretto contatto con persone infette (sintomatiche o asintomatiche) conduce alla trasmissione, la colonizzazione e la malattia. Nonostante vaccino globale significativa copertura4, pertosse è considerata una malattia resurging in molte nazioni nel mondo ed è delle principali cause di infanzia evitabili morti5,6,7, 8. nel 2015, b. pertussis e pertosse sono stati inclusi nel Istituto nazionale dell'allergia e delle malattie infettive (NIAID) emergenti elenco agente patogeno/malattia infettiva, sottolineando la necessità per lo sviluppo di un vaccino migliore che conferisce immunità protettiva longevo.
Attualmente, un'area attiva di ricerca per controllare la rinascita di pertosse è lo sviluppo di un vaccino di pertosse acellulare di prossima generazione (aPV) con una combinazione ottimale di nuovi adiuvanti e antigeni per simulare la risposta immunitaria provocata dall'intero-cellula pertosse vaccino (wPV)9. Mediante il protocollo descritto, abbiamo recentemente riportato che la modifica di un attuale approvato dalla FDA aPV con l'aggiunta di un romanzo ausiliario, fattore di colonizzazione di Bordetella A (BcfA), ha provocato più efficiente riduzione della carica batterica di b. pertussis da del mouse polmoni10,11. Questa protezione aumentata è stata accompagnata dall'inclinazione di una risposta di immunitaria Th1/Th2 allume-indotta al più protettivo Th1/Th17 profilo immunitario10. Questo protocollo è dettagliata e completa, che consente al ricercatore di ottenere informazioni massimale attraverso la valutazione simultanea dell'host e le risposte immunitarie ai vari agenti patogeni.
Il protocollo descritto qui segue la pianificazione di vaccino rappresentativo, illustrata nella Figura 1, affinché le risposte immunitarie ospite ottimale.

<table><tbody><tr><td>Camera di induzione da 2 litri</td><td>Vet Equip</td><td>941444</td> Fluriso Vet One V1 501017 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>qualsiasi marca è appropriata</td></tr><tr><td>Bordet Gengou Agar Base</td><td>BD bioscience</td><td>248200</td><td></td></tr><tr><td>Caseina</td><td>Sigma</td><td>C-7078</td><td></td></tr><tr><td>Acidi casamino</td><td>VWR</td><td>J851-500G</td><td>Filtro Scholte (SS) componenti dei media</td></tr><tr><td>Acido L-glutammico</td><td>Prodotti di ricerca Int</td><td>G36020-500</td><td></td></tr><tr><td>L-Prolina</td><td>Prodotti di ricerca Int</td><td>P50200-500</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Fisher</td><td>BP358-10</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico</td><td>Fisher</td><td>BP362-1</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Fisher</td><td>M2670-500G</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Fisher</td><td>C75-500</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Fisher</td><td>BP153-1</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteina HCl</td><td>Fisher</td><td>BP376-100</td><td>SS media suplements</td></tr><tr><td>Solfato ferroso eptaidrato</td><td>Sigma</td><td>F-7002</td><td></td></tr><tr><td>Niacina</td><td>Prodotti di ricerca Int</td><td>N20080-100</td><td></td></tr><tr><td>Glutatione</td><td>Prodotti di ricerca Int</td><td>G22010-25</td><td></td></tr><tr><td>Acido ascorbico</td><td>Prodotti di ricerca Int</td><td>A50040-500</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma</td><td>F2442-500mL</td><td>&nbsp; qualsiasi fonte statunitense, gentamicina non inattivata dal calore</td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15710064</td><td></td></tr><tr><td>B-mercaptoetanolo</td><td>Fisher</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>15mL dounce macina tessuti</td><td>Wheaton</td><td>357544</td><td>qualsiasi marca simile è appropriato</td></tr><tr><td>Omogeneizzatore manuale senza fili</td><td>Kontes/Sigma&nbsp;</td><td>Z359971-1EA</td><td>qualsiasi marca simile è appropriata</td></tr><tr><td>Strumenti - forbici, forbici curve, pinze, pinze fini, divaricatori triangolari</td><td></td><td></td><td>qualsiasi marca è appropriata</td></tr><tr><td>Siringhe da 3 ml</td><td>BD bioscience</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>tubi conici da 15 ml</td><td>Fisher</td><td></td><td></td>339651</tr><tr><td>provette per microfuge da 1,5 ml</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>70um filtri cellulari</td><td>Fisher</td><td></td><td></td>22363548</tr><tr><td>piastre da 60 mm</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>130181</td><td></td></tr><tr><td>piastre per coltura tissutale a 48 pozzetti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>08-772-1C</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da insulina da 1 ml 28G1/2</td><td>Fisher Scientific/Excel Int.</td><td>14-841-31</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! Kit</td><td>Invitrogen / eBioscience</td><td>50-173-21</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td><td>Invitrogen / eBioscience</td><td>50-173-77</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td><td>Invitrogen / eBioscience</td><td>50-172-09</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione delle risposte ospite-patogeno e l'efficacia del vaccino nei topi

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

I vaccini sono una meraviglia medica di 20th secolo. Hanno drasticamente ridotto la morbilità e la mortalità causata da malattie infettive e contribuito ad un aumento notevole nella speranza di vita intorno al globo. Tuttavia, determinare l'efficacia del vaccino rimane una sfida. La prova emergente suggerisce che l'attuale vaccino acellulare (aPV) per Bordetella pertussis (pertosse del b.) induce immunità non ottimali. Di conseguenza, una sfida importante è la progettazione di un vaccino di prossima generazione che induce immunità protettiva senza gli effetti collaterali di un vaccino a cellule intere (wPV). Qui descriviamo un protocollo che abbiamo usato per testare l'efficacia di un adiuvante promettente, romanzo che inclina le risposte immunitarie ad un fenotipo Th1/Th17 protettivo e promuove una migliore distanza di una sfida di b. pertussis dal tratto respiratorio murino. Questo articolo viene descritto il protocollo per l'immunizzazione del mouse, inoculazione batterica, tessuto raccolta e analisi delle risposte immunitarie. Utilizzando questo metodo, all'interno del nostro modello, abbiamo con successo Abbiamo delucidato meccanismi cruciali suscitate da un vaccino di pertosse acellulare promettente, generazione. Questo metodo può essere applicato a qualsiasi modello di malattia infettiva al fine di determinare l'efficacia del vaccino.

Il modello descritto illustra un metodo per valutare l'efficienza del vaccino e le risposte immunitarie durante le interazioni ospite-patogeno. Figura 1 illustra la pianificazione rappresentante vaccino usata per immunizzare e infettare i topi e tessuti per l'analisi della raccolta. Figura 2 viene illustrato il programma di installazione del sistema di anestesia impiegato per indurre i topi, consentendo gli investigatori a conseg...

Qui presentiamo un elegante protocollo per la valutazione in vivo di vaccino efficacia e host le risposte immunitarie. Questo protocollo può essere adattato per i modelli di vaccino che studiano virale, batterica o parassitari patogeni.

Valutazione delle risposte ospite-patogeno e l'efficacia del vaccino nei topi

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Il protocollo consente la valutazione delle risposte dell'ospite a una varietà di agenti patogeni e formulazioni di vaccini. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente la valutazione del carico batterico e delle risposte immunitarie in vivo, utilizzando un modello animale trattabile. A dimostrare questa procedura è Kacy Yount, una studentessa laureata del mio laboratorio.Per l'immunizzazione, confermare la mancanza di risposta al dito del piedi in un topo anestetizzato di sei-dodici settimane e caricare una siringa per insulina da un millilitro, dotata di un ago calibro 28,5 con uno 0,1 millilitro del vaccino di interesse. Tenendo la siringa con un angolo di 45 gradi, con la smussatura rivolta verso l'alto, inserire l'ago di circa cinque millimetri nel deltoide del mouse e iniettare il vaccino. Tenere l'ago inserito nel muscolo per cinque o dieci secondi, quindi ruotare la siringa di 180 gradi, in modo che la smussatura sia rivolta verso il basso per creare un sigillo e per evitare perdite di vaccino, prima di ritrarre lentamente l'ago dal sito di iniezione.Quindi riportare il topo nella sua gabbia, con monitoraggio, fino al pieno recupero. Circa due settimane dopo l'aumento, infettare i topi immunizzati. Afferrare un topo anestetizzato per la collottola del torace dorsale, dietro le scapole e il collo, e posizionare il mouse in posizione verticale per accedere al naso.Utilizzando una punta di pipetta da 200 microlitri, applicare lentamente da 20 a 25 microlitri dell'inoculo batterico di interesse per ogni rullante dell'animale, tenendo il topo fino a quando l'intero inoculo non è stato inalato. Quindi fornire un volume uguale di PBS sterile a un gruppo di topi come controllo negativo. Nel punto finale sperimentale appropriato, posizionare un lato ventrale del topo infetto su una scheda di dissezione e fissare gli arti.Bagnare il corpo con il 70% di etanolo e utilizzare le forcep per stringere la pelle sotto l'addome al centro del bacino. Usando forbici affilate, fai un taglio verticale fino alla mattiglia e seziona la pelle dalla parete peritoneale. Spostare la pelle ai lati della carcassa per creare un campo senza ostacoli per la raccolta sterile degli organi e afferrare il peritoneo intatto sotto la gabbia toracica, a o vicino al fegato.Tagliare il peritoneo verso la gabbia toracica per esporre il tratto digestivo inferiore e spostare il colon a sinistra per rivelare la milza. Usando le forcelle curve, afferrare la milza e sezionare via il tessuto connettivo con le forbici. Quindi mettere la milza in un tubo conico da 15 millilitri contenente 3 millilitri di RPMI e il 5% di siero bovino fetale sul ghiaccio.Utilizzate le forcep per stabilizzare la gabbia toracica nel processo xifoide e aprite il diaframma. I polmoni dovrebbero sgonfiarsi e cadere verso la colonna vertebrale. Tagliare la gabbia toracica ai lati per rimuovere la corazza e tagliare le arterie polmonari e le vene per isolare e rimuovere il lobo superiore del polmone destro.Fissare il lobo in un tubo conico da 15 millilitri di formalina tamponata neutra al 10% a temperatura ambiente per almeno 24 ore e isolare i lobi rimanenti dei polmoni destro e sinistro. Quindi posizionare i lobi in un tubo conico da 15 millilitri, contenente due millilitri di caseina all'1% in PBS sul ghiaccio. Utilizzare un pipettaio da un millilitro con punta per raccogliere il sangue che riempie la cavità toracica e trasferire il sangue in un tubo microcentrifugo pre-etichettato da 1,5 millilitri sul ghiaccio.Rimuovere le ghiandole parotidi, sublingui e submascellari e i linfonodi che coprono la trachea e aprire e rimuovere le membrane protettive che circondano la trachea. Usando forcelle e forbici fini, separare accuratamente la trachea dall'esofago e qualsiasi altro tessuto connettivo dalla parte superiore delle clavicola al fondo della mattiera. Usa le forcep per tenere la trachea e tagliare la trachea in cima alla clavicola.Tirare giù la trachea per massimizzare l'elasticità, e tagliare la trachea nella parte inferiore della mattiera, proprio sopra la laringe, isolando circa un centimetro di tessuto. Quindi posizionare l'organo in un tubo di microcentrifugo da 1,5 millilitri preetichettato, contenente 0,3 millilitri di caseina all'1% in PBS su ghiaccio. Ora gira il mouse per un chiaro accesso al naso e spruzza la testa con il 70% di etanolo.Afferrare manualmente l'animale direttamente dietro il cranio e utilizzare le forbici per tagliare la polpa morbida del muso, partendo dal fondo del naso e muovendosi verso l'alto. Rimuovere la pelliccia, la pelle e i baffi da tutto il naso e inserire le punte di un paio di forbici curve nei nares con le curve puntate verso il basso. Tagliare il passaggio nasale verso gli occhi, creando una formazione simile a un V.Quindi utilizzare forcep fini per raccogliere il setto nasale e il tessuto molle all'interno della formazione e posizionare il tessuto in un tubo microcentrifugo preetichettato da 1,5 millilitri contenente 0,3 millilitri di caseina all'1% in PBS, sul ghiaccio. Per elaborare il tessuto polmonare, trasferire l'intero contenuto del tubo del campione polmonare in un omogeneizzatore sterile Dounce da 15 millilitri e utilizzare un pestello per omogeneizzare il tessuto. Dissociare il campione fino a quando non rimangono grandi particelle di tessuto e riportare la sospensione omogeneizzata al tubo originale da 15 millilitri.Rimuovere un'aliquota di 0,3 millilitri per la placcatura delle unità di formazione della colonia e raccogliere il resto dell'omogeneato mediante centrifugazione. Aliquota 0,5 millilitri di supernatante in tubi microcentrifugi preetichettati per lo stoccaggio a 20 gradi Celsius fino all'analisi dell'espressione delle citochine da parte di Eliza. Quindi, diluire in serie le aliquote di 0,1 millilitri della sospensione polmonare omogeneizzata messa a riposo in 0,9 millilitri di PBS sterile per diluizione e utilizzare uno spargitore a triangolo sterile per placcare 0,1 millilitri di ogni diluizione scelta empiricamente su piastre preetichettate 10%Bordet-Gengou più streptomicina.Qui vengono mostrate le misurazioni e i calcoli rappresentativi della densità ottica 600 per ottenere una sospensione batterica a densità ottica, per preparare un inoculo batterico diluito cento volte da consegnare ai topi. Dopo sette giorni di stimolazione dell'antigene vaccino, le cellule di milza immunizzate del gruppo vaccinale combinato producono gamma di interferone e IL17, mentre regolano significativamente il5, promuovendo un aiutante T, un aiutante T 17 polarizzazione della risposta immunitaria durante un'infezione da pertosse B. L'enumerazione dell'unità di formazione della colonia dei batteri recuperati dai problemi delle vie respiratorie di un topo infetto da pertosse B può essere utilizzata per valutare gli effetti protettivi del vaccino di interesse.Lavorare nel modo più rapido ed efficiente possibile al fine di evitare la necrosi tissutale e conservare il tessuto isolato sul ghiaccio per preservare la vitalità dei batteri recuperati. La citometria del flusso ELISpot e l'isolamento del DNA e dell'RNA possono essere eseguiti per valutare le cellule immunitarie, la produzione di analiti e per consentire analisi epigenetiche e trascritomiche. Quando si lavora con agenti infettivi come la pertosse di Bordetella, è importante ricordare di indossare i DPI appropriati e lavorare in un armadio di biosicurezza certificato al fine di prevenire la trasmissione di agenti patogeni.Questo protocollo descrive in dettaglio l'enumerazione CFU dalle vie respiratorie, in particolare la faringe nasale. Per affrontare le domande nei campi del vaccino e delle malattie infettive sul targeting della colonizzazione batterica nel naso.

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

In questo video, descriviamo un protocollo per testare l'efficacia di un vaccino acellulare contro la pertosse contro l'infezione da Bordetella pertosse nei topi. Dopo la vaccinazione, i topi sono stati sottoposti a infezione e il loro omogenato tissutale è stato coltivato per analizzare le colonie batteriche come lettura dell'immunità protettiva indotta dal vaccino.

Valutazione dell'immunità indotta da vaccino contro l'infezione batterica in un modello murino

La risposta immunitaria dell'ospite all'infezione patogeno è un processo strettamente regolata. Utilizzando un polmone modello di esposizione lipopolisaccaride nei topi, è possibile effettuare valutazioni ad alta risoluzione dei complessi meccanismi associati alla patogenesi della malattia.

L&#39;utilizzo di orofaringea intratracheale PAMP Amministrazione e lavaggio broncoalveolare per valutare la risposta immunitaria nei topi Host

Modelli animali hanno dimostrato di essere strumenti preziosi nella definizione di accoglienza e patogeni meccanismi specifici che contribuiscono allo sviluppo di infiammazione cronica. Qui si descrive un modello murino di infezione orale con il patogeno umano Porphyromonas gingivalis e le metodologie di dettaglio per valutare la progressione di infiammazione nei siti locali e sistemiche.

Un modello di topo per patogeni indotta infiammazione cronica a siti locali e sistemici

Descriviamo in dettaglio la metodologia seguita per confrontare l'efficacia protettiva e la risposta immunitaria polmonare indotta dall'immunizzazione intranasale e sottocutanea con BCG nel modello murino. I nostri risultati mostrano i benefici della vaccinazione polmonare e suggeriscono un ruolo della risposta mediata da IL17 nella protezione indotta dal vaccino.

L&#39;efficacia e la protezione polmonare risposta immunitaria seguito sottocutanea e intranasale BCG Amministrazione nei topi

Questo protocollo descrive come inoculare topi C57BL / 6J con il ceppo EGD di Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) e per misurare l'interferone-γ (IFN-γ) risposte da parte delle cellule natural killer (NK), cellule T natural killer (NKT), e adattiva linfociti T dopo l'infezione. Questo protocollo descrive anche come condurre studi di sopravvivenza in topi dopo l'infezione con una versione modificata del DL 50 dosi del patogeno.

Infezione sperimentale con<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Come modello per lo studio Host Interferone-gamma Risposte

Influenza A virus (IAVs) è importanti patogeni respiratori umani. Per capire la patogenicità di IAVs e per eseguire test preclinici di approcci vaccinali romanzo, modelli animali che imita la fisiologia umana sono necessari. Qui, descriviamo le tecniche per valutare IAV patogenesi, le risposte umorali e l'efficacia del vaccino utilizzando un modello murino di infezione.

Studi del Virus di riossidazione A in un modello murino di infezione

Qui presentiamo un'applicazione per una tecnica immunologica standard (CFSE macchiato OT-ho proliferazione) destinato a monitorare rapidamente adiuvante-mediata di linfociti T citotossici (CTL) generazione in vivo. Questa veloce stima delle capacità CTL è utile per lo sviluppo di vaccini profilattici contro patogeni intracellulari, come pure i vaccini terapeutici del cancro.

Rapida In Vivo valutazione della funzionalità di generazione i linfociti T citotossici di adiuvante per lo sviluppo di vaccini

Un approccio è descritto per la rilevazione in tempo reale della risposta immunitaria innata di ferite cutanee e Staphylococcus aureus infezione dei topi. Di confronto LysM-EGFP topi (che possiedono i neutrofili fluorescenti) con un LysM-EGFP incrociate topo immunodeficiente, abbiamo anticipato la nostra comprensione dell'infezione e lo sviluppo di approcci per combattere l'infezione.

Un modello di topo per valutare risposta immunitaria innata per infezione da Staphylococcus aureus

Questo documento descrive i protocolli di valutazione della risposta Tfh e GC B nel modello di topo di infezione da virus influenzale.

Valutazione delle cellule di aiuto follicolare T e della risposta del centro germinale durante l'infezione da virus influenzale A nei topi

Qui, presentiamo un metodo efficace ed efficiente per le iniezioni di vene della coda dei roditori utilizzando un dispositivo di riscaldamento / contenimento dal design unico. Semplificando l'avvio di processi di vasodilatazione e contenimento, questo protocollo consente iniezioni endovenose accurate e tempestive di grandi gruppi di animali con un disagio minimo.

Un dispositivo di riscaldamento / contenimento contemporaneo per iniezioni efficienti della vena della coda in un modello di sepsi fungina murina

Il presente protocollo prepara e valuta le proprietà fisiche, la risposta immunitaria e l'effetto protettivo in vivo di un nuovo vaccino adiuvante nanoemulsione.

Valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro l'infezione da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA)

Scopri come valutare le risposte immunitarie e l'efficacia dei vaccini nei topi con questo protocollo in vivo. Il metodo consente di misurare il carico batterico e le reazioni ospite in tempo reale.

Valutazione delle risposte ospite-patogeno e l'efficacia del vaccino nei topi

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