Basso costo protocollo di analisi dell'impronta e appendere casella Test per topi applicato lo Stress cronico ritenuta

Il nostro protocollo che utilizza l'analisi dell'andatura è molto utile per determinare se i motori del mouse dei disturbi del movimento imitano il sintomo del paziente con disturbo dell'andatura. Quindi, l'analisi dell'andatura nella prova di carico dello stress può essere eseguita facilmente e senza attrezzature costose, per rilevare alcuni fenotipi motori nei topi, senza effetti spontanei. Prima di iniziare il test comportamentale, registrare il peso di ogni mouse e utilizzare una penna di marcatura per etichettare ogni coda.

Quando tutti gli animali sono stati pesati e contrassegnati, posizionare i topi nella stanza sperimentale per almeno 30 minuti e impostare una scatola sospesa chiara, 25 per 25 per 40 centimetri, con un coperchio in rete girevole, sulla panchina del laboratorio. Quando i topi si sono acclimatati, posizionare un mouse al centro del coperchio della rete e capovolgere accuratamente il coperchio. Quindi, misura la latenza di caduta del mouse dal coperchio della rete, prima di riportare il mouse nella sua gabbia domestica.

Una volta che tutti i topi sono stati testati, posizionare un pezzo di carta bianca da 9,9 per 42 centimetri sul banco di laboratorio e posizionare una scatola di obiettivi scuri all'estremità distale della carta. Posizionare altre scatole, approssimativamente della stessa lunghezza della carta, su entrambi i lati della pista per evitare la fuga. E aggiungere inchiostro nero e rosso per separare 35 millilitri piastre di Petri.

Per addestrare i topi per l'analisi, posizionare un mouse all'estremità prossimale della carta, rivolto verso la scatola degli obiettivi, e lasciare che il mouse cammini dall'estremità prossimale della carta alla scatola degli obiettivi. Quando il mouse raggiunge la scatola, scruffare delicatamente l'animale, infilando la schiena e la coda tra la palla del pollice e le altre dita, per limitare il movimento degli arti posteriori. E immergere i fondi degli arti anteriori in inchiostro rosso, e la parte inferiore degli arti posteriori in inchiostro nero.

Quindi, riposizionare immediatamente il mouse sull'estremità prossimale della carta, rivolto verso la scatola degli obiettivi, e lasciare che il mouse cammini dall'estremità prossimale alla scatola degli obiettivi. Dopo aver asciugato ad aria la carta stampata a piedi, utilizzare un righello per ottenere tre misurazioni della lunghezza della falcata, misurando le distanze tra le stesse parti delle impronte delle zampe. Della larghezza della base anteriore, disegnando una linea tra impronte anteriori consecutive, uguali e misurando la lunghezza della linea verticale dal pad dell'ingombro anteriore, alla linea tracciata tra le impronte.

E della larghezza della base posteriore, disegnando una linea tra impronte posteriori destra consecutive e misurando la lunghezza della linea verticale dal pad dell'ingombro posteriore sinistro, alla linea tracciata tra le altre impronte destra. Per la sovrapposizione, misurare la distanza tra i cuscinetti delle impronte anteriori e posteriori. Per preparare un tubo di ritenuta, utilizzare un trapano quadrato per realizzare fori di 16 due millimetri in un tubo da 50 millilitri lungo i segni di scala e sul retro di ogni segno di scala.

Tagliare la punta del tubo per fare un foro di cinque millimetri, per respirare, e fare un foro di quattro millimetri nel tappo del tubo, per la coda. Per la prova di carico dello stress, scruffare un topo e posizionare prima l'animale nella testa del tubo di contenimento, con gli arti anteriori delicatamente confinati. Passare la coda attraverso il foro nel cappuccio prima di tappare il tubo.

E posizionare il mouse sulla parte superiore della panca per due ore a temperatura ambiente. Alla fine del periodo di carico dello stress, rimuovere il mouse dal tubo e riportare l'animale nella sua gabbia di casa. Come osservato in queste figure rappresentative, eterozigoti topi modello di distonia a esordio rapido Parkinsonismo, dimostrano lunghezze del passo della parte posteriore e posteriore significativamente più corte, rispetto ai loro compagni di lettiera di tipo selvaggio a quattro settimane di età.

Stress eterozigote distonia ad esordio rapido Parkinsonismo modello topi, mostrano anche lunghezze del passo significativamente più brevi di entrambi gli arti rispetto a quelle dei compagni di lettiera stressati di tipo selvatico a otto settimane di età. Le asimmetrie delle lunghezze del passo di entrambi gli arti non sono significativamente diverse, in nessun gruppo di topi, a qualsiasi età. Anche la base anteriore e le sovrapposizioni di entrambi gli arti sono simili, in tutti i gruppi, a tutte le età.

La base posteriore è significativamente più ampia in questi topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote stressati, rispetto a quella osservata negli animali di tipo selvatico a 10 settimane di età, indicando che lo stress causa deficit motori nei topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote. Non si osservano differenze significative nel tempo di sospensione, tra tipo selvaggio e mutante, negli animali di quattro o 10 settimane. A 12 settimane di età, tuttavia, il tempo di sospensione dei topi di tipo selvatico da stress è significativamente più lungo di quello degli altri animali, suggerendo che il deficit motorio nei topi modello di distonia a esordio rapido eterozigote, è distinguibile dai topi di tipo selvatico mediante test di ritenuta negli animali più anziani.

Posizionare il mouse sulla carta immediatamente dopo che il mouse appende i fondi degli arti nell'inchiostro per evitare che l'inchiostro si asciughi prima del test di camminata. Ulteriori test per le caratteristiche emotive, come campo aperto, plus-laze elevato e test di nuoto intero, possono essere eseguiti per rispondere se l'anomalia dell'andatura deriva solo da deficit motorio. Il nostro protocollo può essere utilizzato per esplorare la suscettibilità allo stress, modificando il numero e la durata del carico di stress e confrontando i fenotipi del motore tra le varie condizioni di carico.

Il nostro protocollo può essere utilizzato per esplorare la suscettibilità allo stress modificando il numero e la durata dei carichi di sollecitazione e confrontando i fenotipi del motore tra le varie condizioni di carico.