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DOI: 10.3791/59043-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol enables the imaging and quantification of lung-homing human immune cells in a mouse model of allergic inflammation. It provides insights into T cell lung homing under in vivo inflammatory conditions.
Il protocollo introdotto qui permette la caratterizzazione della capacità polmonare homing dei linfociti primari umani sotto condizioni infiammatorie in vivo. Infiltrazione polmonare delle cellule immuni umane passivamente trasferite in un modello murino di infiammazione allergica può essere imaged e quantificato mediante microscopia a fluorescenza di luce-foglio di tessuto polmonare chimicamente deselezionata.
La nostra tecnica consente l'imaging preciso delle cellule immunitarie umane accumulate dai polmoni in condizioni infiammatorie in vivo fornendo informazioni entusiasmanti sul processo di homing polmonare delle cellule T. Questo protocollo supporta la ricerca traslazionale sull'homing polmonare a cellule T e può quindi aiutare nell'identificazione di nuovi obiettivi per una terapia ottimizzata di malattie polmonari infiammatorie o allergiche. In particolare, la capacità di considerare l'influenza delle proprietà delle cellule immunitarie specifiche della malattia, dell'organizzazione del tessuto polmonare e dell'ambiente infiammatorio sull'homing polmonare delle cellule T rende questo metodo altamente vantaggioso.
Nel complesso, la nostra tecnica è di alto valore per la ricerca immunologica nel campo delle malattie polmonari infiammatorie croniche, che sono spesso guidate da un accumulo di tessuto travolgente di cellule immunitarie attivate. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del piedi in un mouse C57 nero 6J di almeno 16 grammi, di sei settimane, usato un micropipetto per consegnare lentamente 10 microlitri di soluzione di papaina preparata al momento in una narice del mouse una volta al giorno per tre giorni consecutivi. Il giorno dopo l'ultima somministrazione di papaina, strato 10 millilitri di mezzo Ficoll sotto sangue periferico umano da un volontario sano pre-diluito ad un rapporto uno o due in PBS per la separazione del gradiente di densità per centrifugazione.
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