Name: Misurazione altamente sensibile della permeabilità glomerare nei topi con Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Scopri come misurare la permeabilità glomerare nei topi con un tracciante fluorescente sensibile. Questo protocollo consente analisi urinarie ripetute con volumi minimi per la ricerca nefrologica.

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Gli autori ringraziano Christina Schwandt, Blanka Duvnjak e Nicola Kuhr per l'eccezionale assistenza tecnica e il dottor Dennis Sohn per il suo aiuto nella scansione della fluorescenza. Questa ricerca è stata sostenuta da una sovvenzione della Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SFB 612 TP B18 a L.C.R. e L.S. Il funder non ha avuto alcun ruolo nella progettazione dello studio, nella raccolta e nell'analisi dei dati, nella decisione di pubblicazione o nella preparazione del manoscritto.

Le indagini sono state condotte secondo le linee guida delineate nella Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (US National Institutes of Health Publication No. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati effettuati in conformità con le pertinenti approvazioni istituzionali (governo statale Landesamt f'r Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] numero di riferimento 84-02.04.2012.A397).
1. Preparazione di strumenti, soluzioni e attrezzature
<ol><li>Ricostituire il cloruro di sodio sterile (NaCl) allo 0,9% di cloruro di sodio sterile (NaCl) a una concentrazione finale di 10 mg/mL (cioè 100 mg in 10 mL di NaCl).</li>
	<li>Diallyze soluzione FITC-polysucrosi 70 per rimuovere le molecole FITC gratuite durante la notte a 4 gradi centigradi (taglio del peso molecolare [MWCO] a 10.000). Utilizzare 1 L dello 0,9% di NaCl sterile per 10 mL di FITC-polysucrose 70 in costante agitazione. Proteggere dalla luce. Aliquota la dialisce FITC-polysucrose 70 e conservarla a -20 gradi centigradi.</li>
	<li>Per il FITC-polisucrose 70 bolus, aggiungere la soluzione 4 -L L di 10 mg/mL FITC-polysucrose 70 a 996 - L dello 0,9% NaCl (la concentrazione finale di FITC-polisucrosi 70: 40 g/mL).</li>
	<li>Per la soluzione di infusione equilibrata, aggiungere 20 -L di una soluzione da 10 mg/mL FITC-polysucrose 70 a 9,98 mL dello 0,9% sterile NaCl, con una concentrazione finale di 20g/mL.</li>
	<li>Per la soluzione sperimentale, aggiungere farmaci o sostanze alla soluzione di infusione (ad esempio, per l'angiotensina II [Ang II] [100 ng/kg/min] per un topo da 25 g, aggiungere 3 L di Ang II di una soluzione da 1 mM).</li>
	<li>Per l'intervento, preparare un rasoio, due morsetti chirurgici, un paio di forbici chirurgiche, due pinzette, due pinzette sottili, un paio di forbici fini e tamponi. Preparare due fili di seta da 10 cm (da 4-0 a 6-0) per le procedure di ligazione.</li>
	<li>Per il posizionamento di un catetere venoso centrale, preparare una siringa da 10 mL con un ago da 21 G. Posizionare la punta dell'ago in un catetere lungo 30 cm (con un diametro interno [ID] di 0,58 mm). Collegare il catetere da 0,58 mm a un catetere di 10 cm (con ID di 0,28 mm). Tagliare la punta del catetere più piccolo obliquo per creare una punta affilata che viene introdotta nella vena giugulare.</li>
	<li>Preparare l'anestesia (ad esempio, anestesia intraperitoneale ketamina, 100 mg/kg di peso corporeo e xilazina, 5 mg/kg di peso corporeo).</li>
	<li>Preparare un angiocate da 22 G scartando l'ago e segnando il catetere di 1 cm dalla punta. Preriscaldare la piastra di riscaldamento a 37 gradi centigradi.</li>
	<li>Preparare un dispositivo di pressione sanguigna e cambiare la membrana di misurazione della pressione sanguigna, se necessario.</li>
</ol>2. Fase di preparazione
<ol><li>Catetere urinario NOTA: La sezione 2.1 segue il protocollo descritto da Reis etal. Figura 1 e Figura supplementare 1 Mostra il posizionamento di un catetere urinario nei topi femminili.<ol>
<li>Anestesizzare il topo con ketamina/xylazina (vedere il punto 1.8). Utilizzare il test del pizzico di dita dei immi per confermare l'anestesia corretta. Per mantenere l'anestesia, ripetere l'anestesia (ad esempio, con la metà del dosaggio) dopo 60 min. L'anestesia corretta è confermata se il test del pizzico della dita non si traducono in ritiro riflesso. NOTA: in questo protocollo vengono utilizzati mouse FVB femminili.</li>
		<li>Posizionare il mouse in recumbency dorsale su un pad di riscaldamento a 37 gradi centigradi. Stringere l'addome inferiore e trovare l'ostium uretrale (ad esempio, al microscopio).</li>
		<li>Utilizzare la parte plastica del catetere di un angiocater da 22 G e lubrificarla con gel xilocaina. Introdurlo con attenzione 3 mm nell'ostio uretrale parallelamente all'asse uretrale distale (Figura 1A).</li>
		<li>Ruotare la parte superiore dell'angiocatere di 180 gradi mantenendo la punta all'interno dell'ostio uretrale e mantenendo l'asse dell'uretra (Figura 1B).</li>
		<li>Introdurre il catetere 7 mm più avanti nel mouse in modo che sia posizionato all'interno della vescica (Figura 1C). Non forzare il catetere oltre la resistenza. Correggere la posizione del catetere fin dall'inizio se si avverte resistenza. Prendere nota che se la posizione del catetere urinario è corretta, l'urina potrebbe già apparire all'interno del catetere.</li>
		<li>Posizionare un tubo marrone di 1,5 ml sopra la parte superiore dell'angiocater per raccogliere l'urina. Applicare 1 mL di 0,9% NaCl sottocutaneamente per migliorare la produzione di urina.</li>
	</ol></li>
	<li>Catetere venoso centrale
	<ol>
<li>Rasare il collo del mouse e posizionarlo in recumbency con la testa verso il chirurgo. Hyperestendere la testa del mouse con un nastro.</li>
		<li>Disinfettare il collo con il 70% di isopropanolo. Fare una piccola incisione cutanea (5 mm) sotto la mascella, utilizzando una pinzetta e un paio di forbici. Tagliare la pelle di circa 1 cm nella direzione dello sterno fino a raggiungere il centro dello sterno.</li>
		<li>Sezionare attentamente la pelle sul lato destro del collo, utilizzando un paio di forbici. Fare un'incisione rettangolare della pelle sul lato destro del mouse per esporre il tessuto molle del collo. Usa un paio di forbici e una pinzetta. Fissare i lembi della pelle con due morsetti. NOTA: La vena giugulare corre lungo il lato sinistro della ghiandola tiroidea o è leggermente coperta dal lobo destro della ghiandola tiroidea. Dopo questo passaggio, utilizzare un microscopio per l'intervento chirurgico.</li>
		<li>Esporre con attenzione la vena giugulare mediante preparazione smussata, utilizzando la punta della pinzetta fine. Evitare lesioni arami di vena. NOTA: Potrebbe essere necessario rimuovere i tessuti con forbici fini. Fare attenzione quando si utilizzano le forbici per rimuovere il tessuto in quanto aumenta il rischio di sanguinamento.</li>
		<li>Posizionare e chiudere una legatura con un filo di seta (da 4-0 a 6-0) nella parte distale della vena giugulare visibile (verso la testa del topo). Mettere la tensione sulla legatura fissando il filo di seta con un nastro adesivo per garantire una leggera tensione sulla vena giugulare. Preparare una legatura intorno alla parte prossimale della vena giugulare.</li>
		<li>Riempire il catetere con la soluzione di infusione di conquistimento (vedere il punto 1.4) e fissare il catetere con un nastro in modo che il catetere sia allineante la vena giugulare. Controllo delle bolle per evitare l'embolia dell'aria.</li>
		<li>Sollevare la vena giugulare con pinzette sottili sul sito di inserimento (il sito di inserimento è 1–2 mm proximal della legatura). Allineare il tubo parallelo alla vena giugulare. Forare la vena giugulare, puntando al lume, e inserire per circa 2-4 mm, parallelamente all'asse della vena giugulare. Evitare movimenti vivaci.</li>
		<li>Chiudere la legatura per fissare il catetere. Controllo della tenuta della legatura esaminando attentamente il microscopio. Mettere un tampb umido sul sito di chirurgia.</li>
	</ol></li>
	<li>Misurazione della pressione sanguigna
	<ol>
<li>Posizionare il polsino di coda nella parte inferiore della coda del mouse mentre il mouse giace in recumbency dorsale. Avviare le misurazioni e ripeterle 10 volte per punto temporale. Costruire una media dalle misurazioni.</li>
		<li>Regolare la posizione del polsino della coda se le misurazioni della pressione sanguigna non sembrano corrette e vengono prodotti dati falsi.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Fase di equilibratore
<ol><li>Cambiare il tubo di raccolta urinaria prima dell'inizio della fase di equilibratura e posizionarlo sul ghiaccio.</li>
	<li>Introdurre una siringa da 10 mL riempita con soluzione di fase di equilibraton FITC (vedi punto 1.4) con un ago da 21 G e il catetere più grande (con un ID di 0,58 mm) e posizionarlo nella pompa della siringa.</li>
	<li>Piegare un tampone e metterlo intorno al catetere della piccola nave (con id di 0,28 mm) che viene introdotto nella vena giugulare. Posare il catetere all'interno del tampone. Mettere un morsetto sopra il tampone per abolire il flusso sanguigno retrogrado o l'embolia dell'aria. Collegare un ago da 27 G con una siringa da 1 mL riempita con il bolo FITC fino alla fine del catetere a piccola nave.</li>
	<li>Aprire il morsetto e applicare il bolus FITC (100 l). Chiudere nuovamente il morsetto e collegare il catetere più grande con il catetere più piccolo. Avviare la pompa della siringa con 0,008 mL/min (0,480 mL/h). Continuare l'infusione per 60 min.</li>
</ol>4. Fase sperimentale
NOTA: In questa fase, l'effetto dei farmaci sulla permselettività glomerare può essere studiato.
<ol><li>Cambiare il tubo urinario (punto temporale 0 min) ad un altro tubo marrone da 1,5 ml. Mettere un tampone intorno al catetere della piccola nave e chiudere un morsetto come indicato al punto 3.3.</li>
	<li>Scollegare il catetere grande dal catetere della piccola nave. Modificare le siringhe per le soluzioni di fase sperimentale (vedere il passaggio 1.5). Lasciare correre la pompa di infusione in modo che il grande catetere sia riempito con la soluzione equilibration.</li>
	<li>Ricollegare i cateteri evitando l'embolia dell'aria e riaprire il morsetto. Avviare la pompa della siringa a 0,008 mL/min.</li>
	<li>Continuare a far funzionare la pompa della siringa per 60 min e raccogliere l'urina all'interno del tubo urinario in seguito (urina 60 min). Posizionare il tubo delle urine sul ghiaccio.</li>
	<li>Sacrificare il topo dalla lussazione cervicale durante l'anestesia. Prima dello smaltimento il topo viene osservato per 5 minuti per assicurarsi che sia morto.</li>
</ol>5. Analisi dell'urina
<ol><li>
Misurazione della fluorescenza
	<ol>
<li>Scongelare la piscina urinaria e diluirla 1:10 con salina tampone fosfato (PBS). NOTA: La piscina urinaria è una pozza di urina che è stata raccolta da topi sani in una raccolta di urina 12-24 h in una gabbia metabolica.</li>
		<li>Preparare gli standard per la misurazione della fluorescenza. Prendete 10 tubi marroni da 1,5 mL ed etichettateli per il vuoto (1:10 diluito pool di urina) e le seguenti 70 concentrazioni DI FITC-polysucrose (0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 e 160 g/mL).</li>
		<li>Pipet 246 - L di pozza di urina diluita in un tubo marrone da 1,5 ml e aggiungete 4 -L della concentrazione di scorte FITC-polysucrose 70 (vedi passo 1.1) per ottenere una concentrazione finale di 160 g/mL FITC-polysucrose 70. Pipet 100 L della pozza di urina diluita in tutti gli altri tubi.</li>
		<li>Diluire 1:2 con la pipa 100 l del tubo FITC-polysucrose 70 da 160 g/mL nel tubo 80 g/mL e continuare con le altre concentrazioni. Assicurare una corretta miscela delle concentrazioni diluite (ad esempio, vorticendo il tubo prima di continuare).</li>
		<li>Diluire i campioni di urina di topo (0 min, 60 min) 1:10 con piscina urinaria diluita.</li>
		<li>Pipetta 5 - L di ogni concentrazione standard di FITC-polysucrose 70 e dei campioni di urina di topo come triplicati in una piastra nera di 384 pozze. Centrifugare la piastra a 1.000 x g per 15 s per evitare bolle.</li>
		<li>Analizzare la piastra 384-po in un lettore di lamiere. Eseguire l'eccitazione a 496 nm e misurare la fluorescenza a 525 nm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Misurazione della creatinina
	<ol>
<li>Seguire le istruzioni del produttore. In breve, preparate gli standard di creatinina diluindo 10 L della soluzione standard di 100 m di creatinina con 990 tamponi di assaggio creatinina per preparare una soluzione standard da 1 mM.</li>
		<li>Aggiungere 0, 2, 4, 6, 8 e 10 L della soluzione standard di 1 mM creatinina in una piastra di 96 pozze per generare rispettivamente gli standard 0, 2, 4, 6, 8 e 10 nmol/well. Aggiungere il tampone di assaggio creatinina in ogni pozzo per portare il volume a 50.L.</li>
		<li>Preparare le miscele di reazione aggiungendo un buffer di 42-44 gradi di assaggio di creatinina, 2 l di creatina, 2 anni di creatinina, 2 -L di miscela di enzimi creatinina e 2 -L di sonda creatinina. Per il vuoto, utilizzare 44 l di buffer di asina creatinina, 2 litri di creatina, 2 l di miscela di enzimi creatinina e 1-2 di sonda di creatinina.</li>
		<li>Aggiungere 50 l del mix di reazione appropriato ad ogni pozzo nella piastra 96-well e incubarlo per 60 min su uno shaker orizzontale a 37 gradi centigradi. Proteggere la piastra dalla luce durante l'incubazione. Misurare l'assorbimento a 570 nm su un lettore di lamiere.</li>
		<li>Calcolare le concentrazioni di creatinina sottraendo il valore vuoto da tutte le letture. Il risultato avrà l'unità nanomole/microlitro. Moltiplicare la concentrazione di creatinina per il peso molecolare della creatinina (113.12 ng/nmol) per ricevere l'unità nanogrammi/microlitro.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. Analisi dei dati
<ol><li>Calcolare la concentrazione di urina FITC-polysucrose 70 dalla curva standard.</li>
	<li>Fare riferimento al FITC-polysucrose 70 concentrazioni di urina alle concentrazioni di creatinina nel campione di urina rappresentativo.</li>
	<li>Fare riferimento ai campioni di urina 60 min per urina 0 min campioni di controlli e topi trattati.</li>
</ol>

<ol><li>Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+estimated+glomerular+filtration+rate+and+albuminuria+with+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+general+population+cohorts%3A+a+collaborative+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis.</a> Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).</li>
<li>Mori, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+of+Total+Nephron+Albumin+Filtration+and+Reabsorption+in+Diabetic+Nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).</li>
<li>Amsellem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cubilin+is+essential+for+albumin+reabsorption+in+the+renal+proximal+tubule%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).</li>
<li>Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+dynamic+changes+in+glomerular+permeability+to+macromolecules+during+systemic+angiotensin+II+%28ANG+II%29+infusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).</li>
<li>Grande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unaltered+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+caveolin-1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).</li>
<li>Jeansson, M., Haraldsson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+size+and+charge+selectivity+in+the+mouse+after+exposure+to+glucosaminoglycan-degrading+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).</li>
<li>Reis, L. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+features+of+the+urethra+and+urinary+bladder+catheterization+in+female+mice+and+rats.+An+essential+translational+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).</li>
<li>Konigshausen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+increases+glomerular+permeability+by+beta-arrestin+mediated+nephrin+endocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis.</a> Scientific Reports. 6, 39513(2016).</li>
<li>Venturoli, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ficoll+and+dextran+vs.+globular+proteins+as+probes+for+testing+glomerular+permselectivity%3A+effects+of+molecular+size%2C+shape%2C+charge%2C+and+deformability%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).</li>
<li>Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+molecular+configuration+on+the+passage+of+macromolecules+across+the+glomerular+capillary+wall%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall.</a> The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).</li>
<li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction%3A+Effects+of+Tempol%2C+NOS-%2C+RhoA-+and+Rac-1-inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).</li>
<li>Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+synthase+inhibition+causes+acute+increases+in+glomerular+permeability+in+vivo%2C+dependent+upon+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).</li>
<li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+reactive+oxygen+species+%28ROS%29-dependent+effects+of+IL-1beta%2C+TNF-alpha%2C+and+IL-6+on+the+glomerular+filtration+barrier+%28GFB%29+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).</li>
<li>Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic%2C+size-selective+effects+of+protamine+sulfate+and+hyaluronidase+on+the+rat+glomerular+filtration+barrier+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).</li>
<li>Sverrisson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+fetal+hemoglobin+induces+increases+in+glomerular+permeability%3A+inhibition+with+alpha1-microglobulin+and+tempol%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).</li>
<li>Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats+following+laparotomy+and+muscle+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).</li>
<li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+and+sustained+increases+in+glomerular+permeability+following+ANP+infusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).</li>
<li>Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+hyperglycemia+induces+rapid%2C+reversible+increases+in+glomerular+permeability+in+nondiabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).</li>
<li>Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+early+endotoxemia+and+dextran-induced+anaphylaxis+on+the+size+selectivity+of+the+glomerular+filtration+barrier+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).</li>
<li>Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+renal+ischemia-reperfusion+reduces+charge+and+size+selectivity+of+the+glomerular+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).</li>
<li>Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+hyperpermeability+after+acute+unilateral+ureteral+obstruction%3A+effects+of+Tempol%2C+NOS%2C+RhoA%2C+and+Rac-1+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).</li>
<li>Rosengren, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transvascular+protein+transport+in+mice+lacking+endothelial+caveolae%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).</li>
<li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).</li>
<li>Eisner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+contribution+of+tubular+secretion+to+creatinine+clearance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice.</a> Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il metodo presentato consente allo sperimentatore di testare la permeabilità glomerare nei topi in modo molto sensibile utilizzando un tracciante. Con questo metodo, aumenti a breve termine nella permeabilità glomerare possono essere diagnosticati utilizzando solo piccole quantità di urina. I passaggi più critici per padroneggiare con successo questa tecnica sono 1) lo sviluppo di competenze manuali nella chirurgia del mouse, soprattutto nella concanulazione di una vena centrale, 2) ponendo il catetere urinario senza dan...

I difetti funzionali o strutturali all'interno della barriera di filtrazione glomeulare aumentano la permeabilità glomerare all'albumina, con conseguente individuazione dell'albumina nelle urine (albuminuria). Albuminuria predice l'esito cardiovascolare ed è un marcatore importante per lesioni glomeriule1. Anche bassi livelli di albuminuria, che si trovano all'interno della gamma normale, sono associati ad un aumento del rischio cardiovascolare1.
In condizioni fisiologiche, l'albumina viene filtrata attraverso il glomerulus ed è quasi completamente riassorbita nel sistema tubolare2,3. Nei topi, il rilevamento dell'albumina nelle urine è di solito eseguita da un saggio immunosorbent legato agli enzimi (ELISA) da 24 h di raccolta delle urine. Se si usa l'urina di una raccolta di urina di 24 ore o di un'urina spot, piccole differenze nelle concentrazioni di albumine possono essere perse a causa di problemi di sensibilità all'analisi. La maggior parte dei ricercatori, quindi, utilizza modelli animali in cui l'albuminuria è indotta da robuste lesioni renali a causa di tossine, farmaci e chirurgia renale.
Pertanto, la scoperta di un metodo sensibile per rilevare piccoli e transitori cambiamenti nella permeabilità glomerare è molto importante per il campo. Rippe et al. hanno presentato un modello di ratto per testare la permeabilità glomerare applicando un tracciante fluorescente, vale a dire FITC-polysucrose 70 (cioè FITC-Ficoll 70), con le dimensioni dell'albumina4. L'applicazione tracer consente di testare le modifiche a breve termine nella permeabilità glomerare (in pochi minuti) ed è molto sensibile4. Due studi hanno utilizzato il metodo del tracciante nei topi5,6. Nonostante i suoi benefici, questo metodo, purtroppo, ha svantaggi: è tecnicamente molto complesso, radioattivo e invasivo. Ulteriori analisi delle urine viene effettuata solo utilizzando la filtrazione in gel o l'esclusione delle dimensioni HPLC5,6.
All'interno di questo documento, presentiamo un metodo alternativo, sensibile, non radioattivo e veloce per misurare la permeabilità glomerare nei topi utilizzando fluorescentmente etichettato FITC-polysucrose 70. Con l'introduzione di un catetere transuretrale, la raccolta delle urine è meno invasiva della puntura della vescica, dell'uretrotomia e dell'applicazione del catetere soprapubico e consente la raccolta delle urine almeno ogni 30 min. lettore di piastre fluorescenti. Le concentrazioni di traccianti nelle urine sono normalizzate alle concentrazioni di creatinina nelle urine utilizzando un saggio di creatinina enzimatico.
Pertanto, questo nuovo metodo offre uno strumento sensibile per studiare le lesioni più precoci glomerari con una maggiore permeabilità glomerare.

<table><tbody><tr><td>Motic SMZ168 BL</td><td>Motic</td><td>microscopio SMZ168BL</td><td>per chirurgia del topo</td></tr><tr><td>KL1500LCD</td><td>Pulch e Lorenz microscopia</td><td>150500</td><td>luce per chirurgia del topo</td></tr><tr><td>Microfederschere</td><td>Braun, Aesculap</td><td>FD100R</td><td>forbici fini</td></tr><tr><td>Durotip Feine Scheren</td><td>Braun, Aesculap</td><td>BC210R</td><td>per taglio collo</td></tr><tr><td>Anatomische Pinzette</td><td>Braun, Aesculap</td><td>BD215R</td><td>per chirurgia&nbsp;</td></tr><tr><td>Pr&auml; parierklemme</td><td>Aesculap</td><td>BJ008R</td><td>per chirurgia&nbsp;</td></tr><tr><td>Seraflex</td><td>Serag Wiessner</td><td>IC108000</td><td>filo di seta</td></tr><tr><td>Ketamina 10%</td><td>Anestesia</td> <td>Medistar</td><td></td></tr><tr><td>Rompun (Xylazin) 2%</td><td>Anestesia</td> <td>Bayer</td><td></td></tr><tr><td>Tubo in polietilene a foro fine ID 0,28 mm OD 0,61 mm</td><td>Portex</td><td>800/100/100</td><td>Catetere</td></tr><tr><td>Tubo in polietilene a foro fine ID 0,58 mm OD 0,96 mm</td><td>Catetere</td> <td>Portex</td><td>800/100/200</td></tr><tr><td>Harvard apparatus 11 Plus</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-2209</td><td>pompa a siringa</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard</td><td>BD</td><td>381823</td><td>&nbsp; catetere urinario</td></tr><tr><td>Rivelatore multimodale DTX 880</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>plate</td></tr> reader <tr><td>384 pozzetti micropiastra</td><td>Nunc</td><td>262260</td><td>384 pozzetti platte</td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio della creatinina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MAK080</td><td>per misurare la concentrazione di creatinina</td></tr><tr><td>96 pozzetti piastra</td><td>Nunc</td><td>260836</td><td>per il dosaggio della creatinina&nbsp;</td></tr><tr><td>Polisuccroso marcato FITC 70</td><td>TBD Consulenza</td><td>FP70</td><td>FITC-ficoll</td></tr><tr><td>Angiotensina II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td>utilizzato per testare la permeabilità glomerulare</td></tr><tr><td>BP-98A</td><td>Softron</td><td></td><td>per la misurazione della pressione sanguigna</td></tr><tr><td>OTS 40.3040</td><td>Medite</td><td>01-4005-00</td><td>piastra riscaldante per chirurgia del topo</td></tr><tr><td>Instillagel 6mL</td><td>Farco-Pharma GmbH</td><td></td><td>per catetere urinario</td></tr><tr><td>Exacta</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>shaver</td></tr></tbody></table>

misurazione altamente sensibile della permeabilità glomerare nei topi con fluorescein isothiocyanate-polysucrose 70

Highly Sensitive Measurement of Glomerular Permeability in Mice with Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

La perdita di albumina nelle urine (albuminuria) predice l'esito cardiovascolare. In condizioni fisiologiche, piccole quantità di albumina vengono filtrate dal glomerulus e riassorbite nel sistema tubolare fino al raggiungimento del limite di assorbimento. I primi aumenti nella filtrazione dell'albumina patologica possono, quindi, essere persi analizzando l'albuminuria. Pertanto, l'uso di traccianti per testare la permselettività glomerare appare vantaggioso. Fluorescentemente etichettato tracer fluoresceinisociocionanato (FITC)-polisucrosi (cioè FITC-Ficoll), può essere utilizzato per studiare la permselettività glomerare. Le molecole di fitC-polisucrosi vengono liberamente filtrate dal glomerulus ma non riassorbite nel sistema tubolare. Nei topi e nei ratti, la polisucrosi FITC è stata studiata in modelli di permeabilità glomerare utilizzando procedure tecnicamente complesse (ad esempio, misurazioni radioattive, cromatografia liquida ad alte prestazioni [HPLC], filtrazione del gel). Abbiamo modificato e facilitato un protocollo basato su tracciante FITC-polysucrosi per testare precoce e piccoli aumenti della permeabilità glomerare al polidiagnosi DI FITC 70 (dimensioni dell'albumina) nei topi. Questo metodo consente analisi ripetitive delle urine con piccoli volumi di urina (5 o L). Questo protocollo contiene informazioni su come il tracciante FITC-polysucrose 70 viene applicato per via endovenosa e l'urina viene raccolta attraverso un semplice catetere urinario. L'urina viene analizzata tramite un lettore di piastra di fluorescenza e normalizzata in un marcatore di concentrazione delle urine (creatinina), evitando così procedure tecnicamente complesse.

Come illustrato nella Figura 2, il metodo per testare la permeabilità glomerare nei topi è costruito in tre fasi. La prima fase è chiamata fase di preparazione, in cui sono posizionati un catetere urinario e un catetere venoso centrale. La seconda fase è chiamata fase di equilibratione, a partire da un'iniezione di bolus endovenosa di FITC-polysucrose 70 e seguita dalla continua infusione di FITC-polysucrose 70 per 60 min. L'ultima fase è chiamata fase sperim...

Qui, presentiamo un protocollo per testare la permeabilità glomerare nei topi utilizzando un tracciante altamente sensibile e non radioattivo. Questo metodo consente analisi ripetitive delle urine con piccoli volumi di urina.

Misurazione altamente sensibile della permeabilità glomerare nei topi con Fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

The loss of albumin in urine (albuminuria) predicts cardiovascular outcome. Under physiological conditions, small amounts of albumin are filtered by the ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della nefrologia sul ruolo della permeabilità glomerulare nella malattia renale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che piccoli e transitori aumenti della permeabilità glomerulare vengono rilevati utilizzando un tracciante etichettato con piombo fluorescente. Dopo l'anestesia, posizionare un catetere urinario nel topo femmina.Posizionare il mouse in recumbency dorsale. Stringi l'addome inferiore e trova l'ostio uretrale. Ottenere la parte plastica del catetere di un angiocatetere da 22 G e lubrificarla con gel di xilocaina.Utilizzare l'indice sinistro per posizionare un'attenta tensione sull'addome inferiore e introdurre il catetere di tre millimetri nell'ostio uretrale mentre si corre parallela all'asse uretrale distale. Girare la parte superiore dell'angiocatetere di 180 gradi mantenendo la punta all'interno dell'ostium uretrale e mantenendo l'asse dell'uretra. Quindi, introdurre il catetere sette millimetri più avanti nel topo in modo che sia posto all'interno della vescica.Posizionare un tubo marrone da 1,5 millilitri sopra la parte superiore dell'angiocatetere per raccogliere l'urina. Applicare un millilitro dello 0,9% di cloruro di sodio per via sottocutanea per migliorare la produzione di urina. Radere il collo del topo e posizionarlo in recumbency con la testa verso il chirurgo.Iper estendere la testa del mouse con un nastro adesivo. Disinfettare il collo con il 70% di isopropanolo. Usando una pinzetta e un paio di forbici fai un'incisione cutanea di cinque millimetri sotto la mascella.Tagliare la pelle di circa un centimetro nella direzione dello sterno fino a raggiungere il centro dello sterno. Usa un paio di forbici. Sezionare con cura la pelle sul lato destro del collo.Fai un'incisione rettangolare della pelle a destra per esporre il tessuto molle del collo. Fare attenzione a non danneggiare la vena giugulare. Utilizzare un paio di forbici e una pinzetta per fissare i lembi della pelle con due morsetti.Usando la punta della pinzetta fine, esporre con cura la vena giugulare con una preparazione smussata. Se necessario, rimuovere il tessuto con forbici fini. Evitare lesioni ai rami delle vene.Posizionare e chiudere una legatura con un filo di seta nella parte distale della vena giugulare visibile che si trova verso la testa del topo. Fissare il filo di seta con un nastro adesivo per mettere tensione sulla legatura. Ciò garantisce una leggera tensione sulla vena giugulare.Preparare una legatura intorno alla parte prossimale della vena giugulare. Successivamente, riempire il catetere con la soluzione di equilibrazione e fusione. Fissare il catetere con un nastro in modo che il catetere allinei la vena giugulare.Controllo delle bolle per evitare l'embolia dell'aria. Sollevare la vena giugulare con pinzette fini nel luogo di inserimento. Allineare il tubo parallelo alla vena giugulare e forare la vena giugulare mirando al lume.Inserire per circa due o quattro millimetri paralleli all'asse della vena giugulare. Evitare movimenti vivaci. Chiudere la legatura per fissare il catetere.Controllare la tenuta della legatura visualizzando attentamente attraverso il microscopio. Metti un tampone umido sul luogo dell'intervento. Posizionare il polsino della coda nella parte inferiore della coda del topo mentre il mouse giace in recumbency dorsale.Avviare le misurazioni e ripeterle dieci volte per punto di tempo. Se le misurazioni della pressione sanguigna non sembrano corrette e vengono prodotti dati falsi, regolare la posizione del polsino della coda. Prima della fase di equilibrazione, cambiare il tubo di raccolta urinario e posizionarlo sul ghiaccio.Piegare un tampone e metterlo intorno al catetere del piccolo vaso che viene introdotto nella vena giugulare. Posizionare un morsetto sul tampone per abolire il flusso sanguigno retrogrado o l'embolia dell'aria. Collegare un ago da 27 G con una siringa millilitro riempita con il bolo FITC fino all'estremità del catetere del piccolo vaso.Aprire il morsetto e applicare il bolo FITC da 100 microliter. Chiudere nuovamente il morsetto e collegare il catetere più grande con il catetere più piccolo. Riaprire il morsetto e avviare la pompa della siringa con una portata di 0,008 millilitri al minuto.Continuare l'infusione per 60 minuti. In questa fase, vengono studiati i farmaci efficaci sulla selettività glomerulare del perm. Cambiare il punto di tempo del tubo urinario zero minuto in un altro tubo marrone da 1,5 millilitri.Mettere un tampone attorno al catetere del piccolo recipiente e scollegare il grande catetere dal catetere del piccolo vaso. Riempire la siringa con la soluzione sperimentale di fase. Posizionarlo nella pompa della siringa e lasciare funzionare la pompa per infusione in modo che il catetere di grandi dimensioni sia riempito con la soluzione di fase sperimentale.Ricollegare i cateteri evitando l'embolia dell'aria e riaprire il morsetto. Avviare la pompa della siringa alla portata di 0,008 millilitri al minuto. Continuare a eseguire la pompa della siringa per 60 minuti e raccogliere l'urina all'interno del tubo urinario in seguito.Posizionare il tubo delle urine sul ghiaccio. In questo studio, la scansione a fluorescenza dell'urina nativa del topo mostra un picco a 395 nanometri. Il polisucrose FITC 70 ad una concentrazione di 40 microgrammi per millilitro nelle urine del topo mostra una fluorescenza massima a 525 nanometri.L'urina di topo non disturba la misurazione della fluorescenza della polisucrose FITC 70. Al ricovero di 525 nanometri aumentando le concentrazioni di polisucrose FITC 70 mostra un aumento dell'intensità di fluorescenza. Questo metodo è anche in grado di rilevare differenze nella permeabilità glomerulare.Le colonne bianche rappresentano i livelli di polisucrose FITC 70 prima dell'inizio della stimolazione dell'angiotensina II nella fase sperimentale. Dopo dosaggi per 60 minuti, la permeabilità glomerulare è aumentata rispetto al gruppo di controllo. angiotensina II lavare fuori diminuzione permeabilità glomerulare.I livelli di polisucrose 70 FITC sono diminuiti dopo altri 60 minuti di stimolazione dell'angiotensina II o 60 minuti di lavaggio dell'angiotensina II. L'aumento della permeabilità glomerulare dovuto all'angiotensina II potrebbe essere bloccato da un bloccante del recettore dell'angiotensina II. La pressione sanguigna monitorata con il metodo del polsino della coda non mostrava differenze significative tra il controllo e i gruppi trattati con angiotensina II.Durante il tentativo di questa procedura è importante evitare l'embolia dell'aria quando si cambiano le soluzioni per infusione.

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