Induzione e punteggio della malattia di Graft-Versus-Host in un modello di Murine Xenogeneico e quantificazione delle cellule T umane nei tessuti del topo utilizzando pcR digitale

Questo protocollo descrive come indurre la malattia xenograft-versus-host, o xenoGVHD, e come accecare e standardizzare il punteggio clinico per garantire risultati coerenti. Il modello xenoGVHD fornisce un metodo in vivo per testare le terapie immunosoppressive contro le cellule T umane piuttosto che murine, migliorando la traduzione di questi studi in clinica. A dimostrare la procedura sarà Amara Seng, una studentessa laureata del mio laboratorio.

Un giorno prima dell'iniezione, posizionare topi di scid gamma diabetica da otto a 12 settimane, non obesi, o NSG, in una gabbia di torta sterilizzata e irradiare i topi in una fonte di cesio-137 con una dose totale di 150 centigray, con una rotazione lenta per garantire un'irradiazione uniforme. Quindi, metti i topi in gabbie pulite in un armadietto sterile per la biosicurezza durante la notte. La mattina seguente, raccogliere abbastanza sangue umano sano da isolare 1,1 per 10 alle sette cellule mononucleari del sangue periferico, o PBBC, per topo, e diluire il sangue eparinato in un volume uguale del 2% di siero bovino fetale, o FBS, in PBS.