Incorporazione di una procedura di biopsia del fegato Survivable in topi, per valutare la risoluzione di steatoepatite Non alcolica (NASH)

Questa procedura di biopsia epatica vivibile nei topi con steatoepatite analcolica, o NASH, consente sia l'esclusione di animali che non hanno NASH sia la misurazione accurata delle risposte agli interventi. Questa procedura imita da vicino il design dello studio clinico per studi NASH che confrontano la patologia post-versus pre-trattamento del fegato e consente una valutazione più accurata dell'efficacia del farmaco. Esporre il lobo del fegato può essere impegnativo all'inizio.

Esercitati prima a esporre il tessuto con il dito o un applicatore con punta di cotone per trovare la soluzione migliore per te. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del piedi, fare un'incisione cutanea addominale longitudinale da uno a due centimetri immediatamente cacida al processo xifoide e leggermente sul lato sinistro del topo anestetizzato. Utilizzare forcelle e forbici per sezionare contundente la pelle fino a quando la parete addominale non è esposta e il fegato può essere visualizzato sotto il tessuto muscolare.

Utilizzando una lama di bisturi sterile, fare un'incisione da uno a due centimetri nella parete addominale per esporre il lobo laterale sinistro del fegato e posizionare un batuffolo di cotone sterile sotto il lobo laterale sinistro per estrarre delicatamente la porzione da esporre attraverso l'incisione. Posizionare un pezzo di garza sterile imbevuto di salina sotto il lobo esposto e utilizzare forbici sterili per asportare un pezzo di tessuto a forma di cuneo da 30 a 50 milligrammi dal fegato estratto. Tagliare un pezzo di spugna compressa di gelatina assorbibile di dimensioni simili al cuneo del fegato e utilizzare forcep sterili per inserire la spugna nella porzione tagliata del fegato.

Tenere la spugna in posizione con le forcep fino a quando la gelatina aderisce alla superficie del fegato e l'emostasi si ottiene prima di posizionare la biopsia epatica in un contenitore appropriato per la sua analisi a valle. Riportare delicatamente il fegato nella cavità addominale, facendo attenzione a non disturbare la spugna e, iniziando e terminando con un nodo quadrato completo, suturare la parete addominale con 5-0 suture assorbibili rivestite. Quindi, chiudere la pelle con clip avvolte di sette millimetri, confermando una chiusura completa dopo il posizionamento, e riportare il mouse in una gabbia pulita su una superficie riscaldata con monitoraggio fino al pieno recupero.

In questo esperimento rappresentativo, 118 topi sono stati biopsiati dopo 29 settimane con una dieta personalizzata ricca di grassi, fruttosio e colesterolo per indurre nash. Il livello di fibrosi e steatosi è stato quindi valutato per ogni biopsia. I topi sono stati esclusi dallo studio sulla base di fibrosi bassa o alta e perdita di peso anomala o guarigione delle ferite, e i topi rimanenti sono stati trattati con veicolo o il liraglutide agonista del recettore del peptide-1 simile al glucagone per sei settimane.

Nei gruppi trattati con veicoli, un topo ha mostrato un aumento della fibrosi e quattro topi hanno dimostrato un aumento del punteggio di attività nash. Il trattamento con liraglutide è stato associato a un miglioramento generale della fibrosi, con il 17% del gruppo di trattamento in miglioramento e l'83% rimasto invariato. Allo stesso modo, il trattamento con liraglutide ha migliorato il punteggio complessivo di NASH, con il 66% del gruppo che ha mostrato un punteggio di attività NASH migliorato e il 33% è rimasto invariato.

Inoltre, il trattamento con liraglutide ha migliorato l'infiammazione, con il 75% del gruppo che ha un punteggio di infiammazione inferiore dopo il trattamento, mentre gli animali trattati con veicoli hanno sperimentato un aumento dell'infiammazione. La steatosi non è stata influenzata dal trattamento agonista, rimanendo invariata in entrambi i gruppi prima e dopo l'intervento. Fai attenzione a non danneggiare estroppo il pezzo di fegato asportato per assicurarti che possa essere analizzato in modo appropriato per le tue esigenze.

Questa procedura può essere utilizzata per imitare i progetti di studi clinici confrontando gli effetti pre e post-trattamento di nuove terapie sui fegati NASH.