Name: Intramucosa inoculazione delle cellule di Carcinoma di cellule Squamous nei topi per profilatura Immune tumore e valutazione della risposta di trattamento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Impara l'inoculazione intramucosa di cellule di carcinoma squamoso nei topi per studiare il microambiente tumorale e la resistenza alle terapie. Questo modello ortotopico riproduce le caratteristiche cliniche e istopatologiche della malattia umana.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Animale tutte le procedure sono state eseguite in conformità con un approvato istituzionale animale cura e uso Comitato (IACUC) protocollo della University of Colorado Denver (protocollo n. 00250).
1. tumore coltura cellulare
Nota: B4B8 e LY2 linee cellulari sono state utilizzate per generare tumori HNSCC ortotopico: B4B8 cellule del tumore sono stata derivate da cheratinociti della mucosa cancerogeno-trasformate (da topi BALB/C)11. LY2 cellule del tumore sono state derivate dalle metastasi di linfonodo di un12,di linea (Pam 212) del keratinocyte spontaneamente trasformata BALB/C13. Entrambe le linee cellulari sono state gentilmente concesse da Dr. Nadarajah Vigneswaran (UTHealth, Houston, TX, USA).
<ol><li>Uso Dulbecco per volta medium (DMEM) F/12 di Eagle completato con 10% siero bovino fetale (FBS) e 1% reagente antimicrobica per la manutenzione di linea cellulare. Mantenere queste linee cellulari in una sterile incubatore a 37 ° C e 5% CO2. Le cellule devono essere utilizzate per l'inoculazione prima superiore a 15 passaggi.</li>
	<li>Piastra di 2 x 106 a 4 x 106 cellule in matracci di cultura cellulare2 175 cm. Nota: Garantire le cellule sono meno di 90% confluenti per evitare di indurre una risposta allo stress.</li>
	<li>Quando le cellule sono 70% confluenti (~ 48 h), togliere il matraccio dall'incubatrice e lavare le cellule 3 x con freddo tampone fosfato salino (PBS).</li>
	<li>Staccare le cellule dal pallone utilizzando 0,25% tripsina, abbastanza per coprire la superficie della piastra.<ol>
<li>Per effettuare questa operazione, dispensare 4 mL di tripsina in un pallone da2 175 cm contenente il 70% di cellule confluenti. Incubare le cellule con tripsina per 3 – 4 minuti nell'incubatrice di coltura cellulare a 37 ° C e 5% CO2.</li>
		<li>Visualizzare le cellule al microscopio per garantire il distacco delle cellule.</li>
		<li>Aggiungere 12 mL di DMEM F/12 supporti contenenti FBS per neutralizzare l'attività della tripsina.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aspirare la sospensione cellulare e metterlo in una provetta conica da 50 mL.</li>
	<li>Agitare la provetta contenente le cellule capovolgendo la x-4 3 x.</li>
	<li>Facoltativamente, mescolare un'aliquota di 10 µ l di sospensione cellulare con 10 µ l di tripan blu in una provetta da microcentrifuga e contare le celle utilizzando un emocitometro. Determinare la vitalità cellulare sottraendo il numero di celle di Trypan-blu-positivo dal numero totale delle cellule e dividere per il numero totale di cellule.</li>
	<li>Centrifugare la sospensione cellulare a 300 x g per 5 min a 4 ° C.</li>
	<li>Risospendere le cellule in DMEM privo di siero e senza antibiotico ad un volume adatto affinché 1 x 106 cellule sono presenti in 50 µ l di media. Nota: Basato sull'aggressività di linea cellulare in vivo (determinato empiricamente), 1 x 106 cellule per sito di inoculo per topo è stato ritenuto appropriato per le cellule B4B8 e LY2.</li>
	<li>Collocare il flaconcino contenente la sospensione cellulare su ghiaccio.</li>
	<li>Inserire la matrice della membrana basale pre-scongelati sul ghiaccio. Nota: La matrice della membrana basale è stata scongelata durante la notte a 4 ° C.</li>
</ol>2. cellula iniezione nei topi
<ol><li>Preparare una miscela 1:1 della matrice della membrana di cellule: seminterrato (50 µ l).</li>
	<li>Aggiungere le celle prima; poi, gradualmente dispensare la matrice della membrana basale. Evitare di introdurre bolle d'aria. Assicurare che la miscela è fatta immediatamente prima dell'iniezione degli animali. Aggiunta di cellule alla matrice della membrana basale per un periodo prolungato di tempo può comportare nella cella ambientando la miscela di matrice, che rende la miscela difficile da scuotere rigorosamente. Ciò causerà una considerevole variabilità nel formato di tumore fra i topi.</li>
	<li>Mescolare delicatamente. Garantire tutti i passaggi che coinvolgono matrice vengono eseguiti sul ghiaccio. Matrice della membrana basale polimerizzerà a temperatura ambiente.</li>
	<li>Preparare siringhe per inoculazione.</li>
	<li>Caricare siringhe da insulina 0,5 mL (23 G) con 100 µ l della soluzione di matrice di membrana cellulare/seminterrato.</li>
	<li>Tenere le siringhe sul ghiaccio per evitare una polimerizzazione di matrice della membrana dello scantinato.</li>
	<li>Anestetizzare topi inserendoli in una camera con isoflurano e ossigeno (2,5%).</li>
	<li>Assicurarsi che i topi sono anestetizzati prima di eseguire l'iniezione (assicurando una mancanza di risposta a un pizzico di punta).</li>
	<li>Inserire l'ago nella regione buccale destra o sinistra. Questo avviene attraverso lo spazio aperto disponibile su entrambi i lati della bocca.</li>
	<li>Accertarsi che la linguetta del mouse non è nel modo. Nota: È facile a ficcare la lingua, che si tradurrà in tumori di lingua. Se necessario, spostare la linguetta sul lato opposto.</li>
	<li>Tenere la siringa parallelo alla regione buccale mentre all'interno della cavità orale.</li>
	<li>Quando si è pronti a iniettare, tirare indietro la siringa e inserire lentamente la siringa con un'angolazione di 10°.</li>
	<li>Iniettare 100 µ l della sospensione di matrice di membrana cellulare/seminterrato per un periodo di 5 s.</li>
	<li>Tenere la siringa in posizione per un ulteriore 5 s affinché tutto il materiale viene iniettato. Nota: Per topi di controllo nontumor-cuscinetto, iniettare una miscela dei media privo di siero e matrice (come descritto sopra) senza le cellule del tumore.</li>
	<li>Estrarre delicatamente la siringa.</li>
	<li>Continuare la procedura di cui sopra con i topi restanti.</li>
	<li>Consentire per 1 settimana fino a quando i tumori cominciano ad apparire grossolanamente (50 – 200 mm3 per le cellule B4B8 e LY2).</li>
</ol>3. Mouse monitoraggio
<ol><li>Eseguire la prima misurazione utilizzando pinze a 1 settimana dopo l'iniezione di cellule del tumore. Al fine di calcolare il volume del tumore usando pinze esterne, determinare il più grande diametro longitudinale (lunghezza) e il più grande diametro trasversa (larghezza) e utilizzare le modificate in formula ellissoidali14,15. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59195/59195eq1.jpg">
</li>
	<li>Continuare a eseguire misurazioni regolari pinza per volume del tumore (x-2 1x a settimana a intervalli regolari).</li>
	<li>Misurare il peso dell'animale per valutare gli effetti della crescita del tumore sull'alimentazione.</li>
</ol>4. tumori di raccolta
<ol><li>Quando viene raggiunto l'endpoint sperimentale, eutanasia degli animali mediante misure adeguate (ad es., CO2 asfissia, decapitazione o dislocazione cervicale). Nota: In questo studio, l'endpoint è stato raggiunto se i topi divennero moribondi (con una perdita di peso &gt; 15% del loro peso iniziale, una mancanza di governare, cachessia) e/o se le dimensioni del tumore ha raggiunto 1.000 mm3.</li>
	<li>
Iniziare la dissezione animale creando una lunga incisione attraverso la linea mediana nella regione del collo.
	<ol>
<li>Utilizzare forcipe smussato per afferrare la pelle e forbici per tagliare la pelle affilate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inserire le forbici delicatamente sotto la pelle che copre il tumore e creare sacche d'aria spingendo le forbici attraverso e nella pelle.</li>
	<li>Una volta che la pelle è sufficientemente distaccata dal tumore, identificare il linfonodo drenante (DLNs) ed asportare loro per evitare che il tessuto del tumore confuso dalla presenza di linfonodi. Nota: Tumori di grandi dimensioni possono raggiungere e/o coprire il DLN. A seconda del tipo di analisi viene eseguita, l'isolamento dei linfonodi intatti è essenziale per evitare gli schizzi delle cellule immunitarie nel tumore, che si tradurrà in distorsione dei risultati di analisi.</li>
	<li>Tagliare i bordi del tumore fino a quando si stacca l'intero volume.</li>
</ol>5. tumore elaborazione per applicazioni a valle
<ol><li>Per l'esame istologico a valle, è possibile posizionare i tumori in formalina al 10% a temperatura ambiente. Per evitare overfixation, sostituire la formalina con etanolo al 70%. Per l'analisi di citometria a flusso, è necessario elaborare i tumori come descritto di seguito. Nota: Il tessuto può essere mantenuto in formalina per 72 h prima overfixation può diventare problematico per alcuni tipi di colorazione.</li>
	<li>Tagliare il tumore in 1-2 mm-dimensioni pezzi usando una lama di rasoio sterile o forbici affilate.</li>
	<li>Mettere i pezzi di taglio del tumore in una provetta conica da 50 mL con collagenasi III (4.250 unità per esempio), dnasi I (0,1 mg / campione) e inibitore della tripsina (1 mg per campione).</li>
	<li>Incubare a 37 ° C per 30 min con agitazione ogni 10 min. Nota: I campioni possono essere inseriti in un sacchetto richiudibile, sterilizzati con 90% di etanolo e collocato in un'incubatrice di coltura cellulare.</li>
	<li>Dopo 30 min, aggiungere 20 mL di Hank equilibrata soluzione salina (HBSS) e spin a 300 x g per 5 min. Nota: HBSS è composto di cloruro di potassio, cloruro di sodio, bicarbonato di sodio, sodio fosfato bibasico, sodio fosfato monobasico e glucosio.</li>
	<li>Eliminare il supernatante e risospendere il pellet in 2 – 3 mL di tampone di lisi di globuli rossi (RBC). Pipettare rigorosamente. Nota: Buffer di lisi RBC è composto di cloruro di ammonio, bicarbonato di sodio e disodico.</li>
	<li>Incubare per 2 min a temperatura ambiente. Nota: Incubazione più lungo può essere tossico per altre popolazioni cellulari.</li>
	<li>Aggiungere 20 mL di HBSS per neutralizzare l'effetto di tampone di lisi.</li>
	<li>Centrifugare a 300 x g per 5 min e scartare il surnatante.</li>
	<li>Risospendere il pellet in 10 mL di HBSS.</li>
	<li>Filtrare la soluzione attraverso un restrainer di nylon 70 µm e centrifugare a 300 x g per 5 min, scartare il surnatante.</li>
	<li>Ripetere i passaggi da 5,8 – 5,10 e passare la sospensione cellulare attraverso un dispositivo di ritenuta nylon 40 µm per garantire che eventuali detriti aggiuntivo viene rimosso dalla sospensione.</li>
</ol>6. cella macchiatura e acquisizione dati
<ol><li>Risospendere il pellet cellulare in 1 mL di HBSS.</li>
	<li>Contare le celle utilizzando un emocitometro o un contatore di cellule automatizzato, come descritto al punto 1.7</li>
	<li>
Determinare il numero totale delle cellule e la concentrazione appropriata per la colorazione. Nota: la concentrazione cellulare ideale per la colorazione di citometria a flusso è 1 milione di cellule. Ad esempio, se la colorazione viene eseguita in una piastra a 96 pozzetti e ci sono 10 milioni di cellule, risospendere il campione in 1 mL e piastra 100 µ l per 1 milione cellule per pozzetto.</li>
	<li>
Aggiungere blocco Fc (CD16/CD32) ad una concentrazione di 1: 100 per impedire il legame di nonantigen specifico delle immunoglobuline ai recettori FcγIII e FcγII. Incubare per 5 min a temperatura ambiente.
	<ol>
<li>Centrifugare e risospendere il pellet cellulare in 100 µ l di tampone di colorazione cellulare di citometria a flusso (composto contenente 5% FBS, EDTA 2% e 1% di soluzione salina HEPES).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Eseguire la superficie cellulare colorazione secondo le istruzioni fornite dal fornitore (aggiungendo ogni anticorpo la diluizione appropriata). Incubare per 60 min a temperatura ambiente.
	<ol>
<li>Centrifugare e risospendere il pellet cellulare in 100 µ l di HBSS. Ripetere 2x per sbarazzarsi dell'anticorpo in eccesso.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Eseguire gli esempi su un citometro a flusso appropriato.
	<ol>
<li>Se l'analisi di marcatori intracellulari (ad es., foxp3), eseguire permeabilizzazione delle cellule e la macchiatura secondo le istruzioni del fornitore.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+trends+in+incidence+rates+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers.</a> Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).</li>
<li>Ang, K. K., Sturgis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+as+a+marker+of+the+natural+history+and+response+to+therapy+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus as a marker of the natural history and response to therapy of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Seminars in Radiation Oncology. 22 (2), 128-142 (2012).</li>
<li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Eighth+Edition+AJCC+Cancer+Staging+Manual%3A+Continuing+to+build+a+bridge+from+a+population-based+to+a+more+%26%2334%3Bpersonalized%26%2334%3B+approach+to+cancer+staging%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">The Eighth Edition AJCC Cancer Staging Manual: Continuing to build a bridge from a population-based to a more &#34;personalized&#34; approach to cancer staging.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (2), 93-99 (2017).</li>
<li>Salley, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+carcinogenesis+in+the+cheek+pouch+of+the+Syrian+hamster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental carcinogenesis in the cheek pouch of the Syrian hamster.</a> Journal of Dental Research. 33 (2), 253-262 (1954).</li>
<li>Morris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+experimental+carcinogensis+in+the+hamster+cheek+pouch%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Factors influencing experimental carcinogensis in the hamster cheek pouch.</a> Journal of Dental Research. 40, 3-15 (1961).</li>
<li>MacDonald, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+epithelial+dysplasia+in+hamster+cheek+pouch+carcinogenesis+and+human+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of epithelial dysplasia in hamster cheek pouch carcinogenesis and human oral mucosa.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 10 (3), 186-191 (1981).</li>
<li>Hawkins, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4NQO+carcinogenesis%3A+a+mouse+model+of+oral+cavity+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Head+%26+Neck%22%5BJournal%5D)">4NQO carcinogenesis: a mouse model of oral cavity squamous cell carcinoma.</a> Head & Neck. 16 (5), 424-432 (1994).</li>
<li>Tang, X. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10 (1 Pt 1), 301-313 (2004).</li>
<li>Vered, M., Yarom, N., Dayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4NQO+oral+carcinogenesis%3A+animal+models%2C+molecular+markers+and+future+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">4NQO oral carcinogenesis: animal models, molecular markers and future expectations.</a> Oral Oncology. 41 (4), 337-339 (2005).</li>
<li>Bornstein, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smad4+loss+in+mice+causes+spontaneous+head+and+neck+cancer+with+increased+genomic+instability+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Smad4 loss in mice causes spontaneous head and neck cancer with increased genomic instability and inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (11), 3408-3419 (2009).</li>
<li>Thomas, G. R., Chen, Z., Oechsli, M. N., Hendler, F. J., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+expression+of+CD80+is+a+marker+for+increased+tumorigenicity+in+a+new+murine+model+of+oral+squamous-cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decreased expression of CD80 is a marker for increased tumorigenicity in a new murine model of oral squamous-cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 82 (3), 377-384 (1999).</li>
<li>Yuspa, S. H., Hawley-Nelson, P., Koehler, B., Stanley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+transformation+markers+in+differentiating+epidermal+cell+lines+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A survey of transformation markers in differentiating epidermal cell lines in culture.</a> Cancer Research. 40 (12), 4694-4703 (1980).</li>
<li>Chen, Z., Smith, C. W., Kiel, D., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+variants+derived+following+in+vivo+tumor+progression+of+an+in+vitro+transformed+squamous+cell+carcinoma+line+acquire+a+differential+growth+advantage+requiring+tumor-host+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Metastatic variants derived following in vivo tumor progression of an in vitro transformed squamous cell carcinoma line acquire a differential growth advantage requiring tumor-host interaction.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 15 (5), 527-537 (1997).</li>
<li>Euhus, D. M., Hudd, C., LaRegina, M. C., Johnson, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+measurement+in+the+nude+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor measurement in the nude mouse.</a> Journal of Surgical Oncology. 31 (4), 229-234 (1986).</li>
<li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+%28nude%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemotherapy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li>
<li>Yushkevich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((User-guided+3D+active+contour+segmentation+of+anatomical+structures%3A+significantly+improved+efficiency+and+reliability%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">User-guided 3D active contour segmentation of anatomical structures: significantly improved efficiency and reliability.</a> NeuroImage. 31 (3), 1116-1128 (2006).</li>
<li>Dutta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+tumour+necrosis%2C+tumour+proliferation%2C+local+and+systemic+inflammation%2C+microvessel+density+and+survival+in+patients+undergoing+potentially+curative+resection+of+oesophageal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Britisch+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">The relationship between tumour necrosis, tumour proliferation, local and systemic inflammation, microvessel density and survival in patients undergoing potentially curative resection of oesophageal adenocarcinoma.</a> Britisch Journal of Cancer. 106 (4), 702-710 (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+lines+and+human+tumors%3A+a+rational+approach+to+preclinical+model+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human tumors: a rational approach to preclinical model selection.</a> Molecular Cancer Research. 12 (4), 571-582 (2014).</li>
<li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li>
<li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionizing+radiation+sensitizes+tumors+to+PD-L1+immune+checkpoint+blockade+in+orthotopic+murine+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22OncoImmunology%22%5BJournal%5D)">Ionizing radiation sensitizes tumors to PD-L1 immune checkpoint blockade in orthotopic murine head and neck squamous cell carcinoma.</a> OncoImmunology. 6 (10), e1356153(2017).</li>
<li>Ferris, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+evaluations+of+nivolumab+%28nivo%29+versus+investigator%E2%80%99s+choice+%28IC%29+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+%28R%2FM%29+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+%28SCCHN%29%3A+CheckMate+141%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Further evaluations of nivolumab (nivo) versus investigator’s choice (IC) chemotherapy for recurrent or metastatic (R/M) squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN): CheckMate 141.</a> Journal of Clinical Oncology. 34, (2016).</li>
<li>Ferris, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+for+Recurrent+Squamous-Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab for Recurrent Squamous-Cell Carcinoma of the Head and Neck.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1856-1867 (2016).</li>
<li>Harrington, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+standard%2C+single-agent+therapy+of+investigator%27s+choice+in+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+%28CheckMate+141%29%3A+health-related+quality-of-life+results+from+a+randomised%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus standard, single-agent therapy of investigator's choice in recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (CheckMate 141): health-related quality-of-life results from a randomised, phase 3 trial.</a> The Lancet Oncology. 18 (8), 1104-1115 (2017).</li>
<li>Kiyota, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+open-label%2C+Phase+III+clinical+trial+of+nivolumab+vs.+therapy+of+investigator%27s+choice+in+recurrent+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck%3A+A+subanalysis+of+Asian+patients+versus+the+global+population+in+checkmate+141%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">A randomized, open-label, Phase III clinical trial of nivolumab vs. therapy of investigator's choice in recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck: A subanalysis of Asian patients versus the global population in checkmate 141.</a> Oral Oncology. 73, 138-146 (2017).</li>
<li>Ling, D. C., Bakkenist, C. J., Ferris, R. L., Clump, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Immunotherapy+in+Head+and+Neck+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Role of Immunotherapy in Head and Neck Cancer.</a> Seminars in Radiation Oncology. 28 (1), 12-16 (2018).</li>
<li>Perri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+Biological+bases+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Head+%26+Neck%22%5BJournal%5D)">Radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma: Biological bases and therapeutic implications.</a> Head & Neck. 37 (5), 763-770 (2015).</li>
<li>Yamamoto, V. N., Thylur, D. S., Bauschard, M., Schmale, I., Sinha, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Overcoming radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 63, 44-51 (2016).</li>
<li>Bonner, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+cetuximab+for+locoregionally+advanced+head+and+neck+cancer%3A+5-year+survival+data+from+a+phase+3+randomised+trial%2C+and+relation+between+cetuximab-induced+rash+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus cetuximab for locoregionally advanced head and neck cancer: 5-year survival data from a phase 3 randomised trial, and relation between cetuximab-induced rash and survival.</a> The Lancet Oncology. 11 (1), 21-28 (2010).</li>
<li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+EphB4-Ephrin-B2+Signaling+Enhances+Response+to+Cetuximab-Radiation+Therapy+in+Head+and+Neck+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Inhibition of EphB4-Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to Cetuximab-Radiation Therapy in Head and Neck Cancers.</a> Clinical Cancer Research. 24 (18), 4539-4550 (2018).</li>
<li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792(2016).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+radiation+and+immunotherapy%3A+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li>
<li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Rigorosa analisi e caratterizzazione del microambiente tumorale rappresentano una strategia importante per comprendere i meccanismi di sviluppo del tumore, la progressione e la metastasi e per lo sviluppo di terapie efficaci. Cancro del collo e della testa è una malattia complessa che può avere origine da sedi anatomiche multiple all'interno della regione del collo e della testa. Dei principali ostacoli alla comprensione dei meccanismi di malattia e migliorare la terapia è stata una mancanza di linee cellulari murine del...

HNSCC è la malignità quinto più comune a livello mondiale, con oltre 600.000 pazienti diagnosticati ogni anno1. Malgrado il trattamento aggressivo che coinvolgono la chemioterapia e la radioterapia (RT), la sopravvivenza globale (OS) per i pazienti HNSCC senza infezione umana di papillomavirus (HPV) rimane inferiore al 50% dopo 5 anni2. Questo è in gran parte attribuito a un microambiente tumorale altamente complesse come i tumori possono provenire da diverse sedi anatomiche distinte all'interno della regione testa e del collo, tra cui la mucosa orale, lingua, pavimento della bocca, cavità nasale, cavità orale, faringe, orofaringe e ipofaringe. Inoltre, la regione del collo e della testa è altamente vascolarizzata e contiene quasi la metà di tutti i linfonodi nel corpo3. Maggior parte degli studi che studiano la biologia dei tumori testa e collo si basano su modelli di tumore della regione di fianco. Tali modelli in grado di offrire comprensione nei meccanismi intrinseci del tumore, ma la mancanza del microenvironment del nativo di testa e del collo possa influenzare notevolmente il potenziale traslazionale di tali risultati. Un metodo che è stato utilizzato per indurre tumori orali è attraverso l'esposizione all'agente cancerogeno 9,10-dimetil-1,2-benzanthracene (DMBA)4. Tuttavia, questo metodo è associato con un processo lungo, induce i tumori in ratti e criceti, ma non nei topi, e i tumori risultanti non possiedono molte delle caratteristiche istologiche di differenziata SCCs5,6. L'introduzione del carcinogen4-nitroquinoline 1-ossido (4-NQO), un derivato chinolonico solubile in acqua, ha provocato tumori orali del mouse quando applicato per via orale, ma anche sofferto di lunghi tempi di esposizione (16 settimane) e un numero limitato di prendere tasso all'interno e tra i lotti di topi7,8,9. Al fine di sviluppare modelli clinicamente rilevanti, diversi gruppi utilizzati modelli geneticamente ingegnerizzati che coinvolgono la manipolazione dei driver oncogeni o geni soppressori del tumore, tra cui TP53, TGFB, KRAS, HRA e SMAD410. Questi modelli possono offrire comprensione nei tumori con geni noti driver ma non ricapitolare la complessa eterogeneità di HNSCCs umano.
In questo lavoro, dimostriamo la possibilità di effettuazione di un'inoculazione intramucosal delle cellule di carcinoma di cellule squamous nei topi. Cellule inoculate sviluppano in tumori aggressivi entro 1 settimana dall'iniezione. Simile a HNSCCs umana, i tumori riprodurrsi per metastasi ai linfonodi regionali. Ci caratterizzano le caratteristiche istologiche e cliniche della malattia e consentono di comprendere il microambiente tumorale immuni. Proponiamo che questo modello ortotopico di HNSCC ha applicazioni nella biologia del cancro, immunologia dei tumori e studi preclinici. Meccanismi di evasione immune, progressione del tumore, resistenza al trattamento e le metastasi rappresentano aree di rilevanza clinica che possono essere affrontate utilizzando il modello proposto.

<table><tbody><tr><td>Collagenasi III</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td></td><td></td>LS004183</tr><tr><td>DNasi I</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td></td><td></td>LS006328</tr><tr><td>Blocco Fc (CD16/32)</td><td>BD Biosciences</td><td>553141</td><td>&nbsp; Clone 2.4G2&nbsp;</td></tr><tr><td>tampone di colorazione per citometria a flusso</td><td>eBioscience</td><td>00-4222-26</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14175079</td><td>senza calcio, senza magnesio, senza fenorosso</td></tr><tr><td>Citometro di massa Helois</td><td>Fluidigm</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel matrice di membrana</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CB-40234B</td><td></td></tr><tr><td>Scanner MRI</td><td>Bruker</td><td>NA</td><td>7.4 Tesla</td></tr><tr><td>Tampone di lisi RBC</td><td>BioLegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della tripsina</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td></td><td></td>LS002830</tr></tbody></table>

intramucosa inoculazione delle cellule di carcinoma di cellule squamous nei topi per profilatura immune tumore e valutazione della risposta di trattamento

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Carcinoma di cellule squamous di testa e del collo (HNSCC) è una malattia debilitante e mortale con un'alta prevalenza di ricorrenza e di guasto di trattamento. Per sviluppare meglio le strategie terapeutiche, fattori microambientali del tumore di comprensione che contribuiscono alla resistenza del trattamento è importante. Dei principali ostacoli alla comprensione dei meccanismi di malattia e migliorare la terapia è stata una mancanza di linee murine che ricordano la natura aggressiva e metastatica della HNSCCs umana. Inoltre, una maggioranza di modelli murini impiegano impianti sottocutanei di tumori che mancano importanti caratteristiche fisiologiche della regione testa e collo, compreso alta densità vascolare, vasto sistema vascolare linfatico e flora residente della mucosa. Lo scopo di questo studio è di sviluppare e caratterizzare un modello ortotopico di HNSCC. Ci avvaliamo di due linee cellulari murine geneticamente distinte e tumori stabiliti nel mucosa orale dei topi. Ottimizziamo i metodi di digestione tumore collagenosi-basato per il recupero ottimo delle singole cellule dai tumori stabiliti. I dati presentati qui indicano che i topi sviluppano tumori altamente vascularized che riprodurrsi per metastasi ai linfonodi regionali. Massa di citometria multiparametrica unicellulare dimostra la presenza di diverse popolazioni immunitarie con cellule mieloidi che rappresentano la maggioranza di tutte le cellule immunitarie. Il modello proposto in questo studio ha applicazioni nella biologia del cancro, immunologia dei tumori e sviluppo preclinico di approcci terapeutici. La somiglianza del modello ortotopico alle caratteristiche cliniche della malattia umana fornirà uno strumento per la traduzione avanzata e migliorare i risultati pazienti.

La valutazione in vitro di proliferazione delle cellule LY2 e B4B8 hanno dimostrato che entrambe le linee cellulari hanno simili tempi di raddoppiamento (21 e 23 h, rispettivamente). In vivo, entrambe le linee cellulari formano una massa unica, visibile e palpabile entro 1 settimana dall'inoculazione (Figura 1A). In topi che sopportano i tumori LY2, la mascella è stata spostata da 3 settimane a causa del carico del tumore (Figura 1A</stro...

Qui presentiamo un metodo riproducibile per lo sviluppo di un modello murino ortotopico di carcinoma di cellule squamous testa e del collo. I tumori dimostrano clinicamente rilevanti caratteristiche istopatologiche della malattia, compreso necrosi, differenziazione difficile, le metastasi nodali e infiltrazione immune. Topi del tumore-cuscinetto sviluppano sintomi clinicamente rilevanti tra cui disfagia, spostamento mascella e la perdita di peso.

Intramucosa inoculazione delle cellule di Carcinoma di cellule Squamous nei topi per profilatura Immune tumore e valutazione della risposta di trattamento

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

I tumori della regione della testa e del collo stanno diventando sempre più diffusi. Tuttavia, c'è una comprensione limitata del microambiente tumorale e dei meccanismi di resistenza al trattamento in questa regione. Questa tecnica può essere utilizzata per ricapitolare il microambiente nativo dei tumori testa/collo in modo accessibile e produce manifestazioni cliniche simili a quelle osservate nell'uomo.Quando la coltura delle cellule tumorali ha raggiunto il 70% di confluenza, lavare le cellule tre volte con PBS freddo per lavaggio e attaccare le cellule con abbastanza 0,25% di tripside per coprire la superficie inferiore del pallone di coltura. Dopo tre o quattro minuti nell'incubatore di coltura cellulare, confermare il distacco al microscopio leggero e neutralizzare la tripina con 12 millilitri di mezzo DMEM F12, integrato con siero bovino fetale. Trasferire la sospensione cellulare in un tubo conico da 50 millilitri e mescolare le cellule da tre a quattro volte per inversione.Quindi raccogliere le cellule per centrifugazione e sospendere di nuovo il pellet nel siero e dmem privo di antibiotici a una volta 10 alla sesta cellule tumorali per 50 microlitri di media concentrazione sul ghiaccio. Immediatamente prima dell'iniezione, mescolare le cellule a una o una sospensione delle cellule tumorali al rapporto della matrice della membrana basale sul ghiaccio. Caricare una siringa da 0,5 millilitri dotata di un ago calibro 23 con 100 microlitri di cellule per animale ricevente.Posizionare le siringhe sul ghiaccio e confermare una mancanza di risposta al dito del dito in un topo anestetizzato. Successivamente, inserire l'ago nella regione buccale destra o sinistra attraverso lo spazio aperto disponibile su entrambi i lati della bocca mantenendo la siringa parallela alla regione del buccale mentre si trova all'interno della cavità orale per facilitare l'iniezione dell'intero volume di 100 microliter della sospensione della matrice della membrana basale cellulare per un periodo di cinque secondi. Mantenere la siringa in posizione per altri cinque secondi per assicurarsi che tutto il materiale sia stato iniettato prima di ritirare delicatamente la siringa.I tumori diventeranno grossolanamente visibili tra circa una settimana. Una settimana dopo l'iniezione, utilizzare le pinze per misurare la lunghezza e la larghezza di ogni tumore per determinare il volume tumorale da una a due volte a settimana. E misurare il peso di ogni animale per valutare gli effetti della crescita tumorale sull'alimentazione.All'endpoint sperimentale appropriato, utilizzare forbici affilate e forcep smussate per fare un'incisione cutanea attraverso la linea mediana nel collo. E inserire delicatamente le forbici sotto la pelle che coprono il tumore per creare sacche d'aria spingendo le forbici attraverso e nella pelle. Una volta che la pelle è sufficientemente staccata dal tumore, asportare i linfonodi drenante per evitare che il tessuto tumorale sia confuso dalla presenza di tessuto linfatico e tagliare i bordi del tumore fino a quando l'intero volume non viene staccato.Per elaborare il tumore per l'analisi a valle, tagliare il tumore in pezzi di dimensioni da uno a due millimetri e posizionare i pezzi in un tubo conico da 50 millilitri contenente collagenasi tre, DNA uno e inibitore della tripparina. Dopo aver incubato i pezzi tumorali a 37 gradi Celsius per 30 minuti, con scuotimento ogni 10 minuti, aggiungere 20 millilitri di HBSS al tubo e passare la sospensione contenente i pezzi tumorali attraverso un colino di nylon pour da 70 micrometri. Utilizzare uno stantuffo per siringhe da cinque millilitri per schiacciare i pezzi tumorali nel colino e aggiungere altri 10 millilitri di HBSS attraverso il colino.Spingi giù le cellule per centrifugazione. Sospendere il pellet in due o tre millilitri di tampone dilisi dei globuli rossi con pipettazione rigorosa, neutralizzando lalisi con 20 millilitri di HBSS fresco dopo due minuti a temperatura ambiente. Quindi sospendere di nuovo le cellule in altri 20 millilitri di HBSS per un'altra centrifugazione e filtrare le cellule attraverso un filtro di versamento di 40 micrometri per rimuovere eventuali detriti finali dalla sospensione della cellula tumorale.I tumori LY2 crescono ad un tasso più elevato, rispetto ai tumori B4B8. E i topi che mostrano uno spostamento della mascella sviluppano rapidamente la perdita di peso, a causa della disfagia. La sopravvivenza mediana nei topi LY2 è anche meno della metà di quella osservata per i topi che portano tumore B4B8.La risonanza magnetica dei topi portanti di tumore mostra tumori ben delimitati che si estendono nello strato interno della mucosa buccale, ma non nella lingua o in altri organi vicini. L'esame istologico indica che tutti i topi portanti di tumore LY2 sviluppano carcinoma a cellule squamose scarsamente differenziato, mentre i topi che portano tumori B4B8 sviluppano carcinoma a cellule squamose moderatamente differenziato. Tutti i topi portanti di tumore LY2 hanno anche necrosi istologicamente confermata, con la maggior parte che dimostra necrosi da moderata a grave.In questo esperimento rappresentativo, un tumore LY2 è stato raccolto e lavorato tre settimane dopo l'iniezione di cellule tumorali della regione buccale, come dimostrato. Le cellule immunitarie positive al CD45 rappresentavano il 7,3% della popolazione totale di cellule tumorali. Le cellule mieloidi positive al CD11b rappresentavano il 37,8% di tutte le cellule positive del CD45, la maggior parte delle quali erano determinate come macrofagi F480-positivi, con piccole popolazioni di neutrofili e cellule soppressori derivate da mieloidi osservate.Le cellule T comprendevano il 15,9% della popolazione di cellule immunitarie positiva al CD45, il 53,4% delle quali erano cellule T regolatorie foxp3 positive cd4. Le cellule killer naturali comprendevano meno del 2% di tutte le cellule positive del CD45. È importante praticare l'iniezione al fine di sviluppare fiducia e comfort nel tenere l'ago e il topo ricevente e nell'esporre la bocca dell'animale.Una volta eseguita con successo la procedura, possono essere eseguiti esperimenti che comportano la valutazione della risposta tumorale alla terapia o la valutazione dei fattori intrinseci e microambientali del tumore. Questa tecnica ha spianato la strada alla progettazione di uno studio clinico avviato da investigatori, valutando gli effetti della combinazione della radioterapia con la terapia anti-PL1 nei pazienti con cancro alla testa e al collo.

intramucosal-inoculation-squamous-cell-carcinoma-cells-mice-for-tumor

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Una panoramica completa delle tecniche coinvolte nella generazione di un modello murino di cancro orale e monitoraggio quantitativo di invasione tumorale all'interno della lingua attraverso multi-fotone microscopia di cellule marcate è presentato. Questo sistema può essere utilizzato come piattaforma utile per la valutazione molecolare e di efficacia dei farmaci anti-invasiva composti.

Multi-fotone Imaging di invasione delle cellule tumorali in un modello di mouse ortotopico di carcinoma orale a cellule squamose

In questo video, sviluppiamo un modello murino ortotopico di cancro della testa e del collo mediante inoculazione intramucosa della linea cellulare di carcinoma a cellule squamose. Il topo portatore di tumore mostrerebbe somiglianze con i sintomi clinicamente rilevanti della malattia umana e può quindi essere utilizzato per studiare la progressione del cancro e scoprire nuove strategie terapeutiche.

Inoculazione intramucosa di cellule tumorali in modello murino: una procedura per stabilire un modello murino di cancro ortotopico della testa e del collo

Questo video mostra un test di vaccinazione contro i tumori basato su cellule. Un topo, iniettato per via intradermica con cellule di melanoma B16-F10 per la formazione del tumore, viene vaccinato con cellule B16-F10 che secernono citochina Flt3L vicino al tumore sviluppato. Il Flt3L secreto dal vaccino promuove la maturazione e la proliferazione delle cellule dendritiche che poi presentano antigeni tumorali alle cellule T nei linfonodi, innescando una risposta immunitaria antitumorale mirata.

Impianto tumorale e iniezione di un vaccino antitumorale in un modello murino

Un N-butil-N-(4-idrossibutil) nitrosamine indotta modello di cancro alla vescica è stato sviluppato in mucina umano 1 (MUC1) topi transgenici per la fine del controllo MUC1-diretto immunoterapia. Dopo la somministrazione di un vaccino peptidico MUC1-mirata, una risposta di linfociti T citotossici per MUC1 è stata confermata misurando i livelli sierici di citochine e l'attività delle cellule T specifiche.

Induzione di Invasive Transitional cellulare Bladder Carcinoma in immunitario intatto umani MUC1 topi transgenici: un modello di sviluppo Immunoterapia

Questo protocollo descrive la generazione di tumori della vescica ortotopico murini in femmine C57BL 6J e il monitoraggio della crescita tumorale /.

Un tumore modello murino ortotopico della vescica e del tumore Detection System

Qui, presentiamo un protocollo di trapianto tumorale per la caratterizzazione di linfociti infiltrati tumorali intrinseci e periferici derivati dal tumore in un modello di tumore murino. Il tracciamento specifico dell'afflusso di cellule immunitarie derivate dal ricevente con citometria a flusso rivela la dinamica dei cambiamenti fenotipici e funzionali di queste cellule durante le risposte immunitarie antitumorali.

Trapianto di tumore per valutare la dinamica delle cellule T CD8+ infiltranti il tumore nei topi

La traduzione dei risultati della microscopia intravitale è messa a dura prova dalla sua penetrazione a bassa profondità nei tessuti. Qui descriviamo un modello murino a camera a finestra dorsale che consente la co-registrazione della microscopia intravitale e delle modalità di imaging clinicamente applicabili (ad es. TC, MRI) per la correlazione spaziale diretta, semplificando potenzialmente la traduzione clinica dei risultati della microscopia intravitale.

Un modello murino tumorale della camera della finestra delle pliche cutanee dorsali per la microscopia intravitale combinata e la risonanza magnetica nella ricerca traslazionale sul cancro

Questo studio si concentra sull'induzione sottocutanea in vivo di cellule tumorali colorettali luminescenti in un modello murino e sulla successiva misurazione della luminescenza utilizzando un sistema di imaging. La procedura mira a stabilire un modello di crescita tumorale riproducibile per il monitoraggio in tempo reale e la valutazione terapeutica.

Iniezione sottocutanea di cellule tumorali del colon-retto umano in topi nudi atimici per valutare l'efficacia antitumorale

Qui viene mostrato un metodo unico per resezionare chirurgicamente tumori carcinoma squamoso orale stabiliti nella cavità orale.

Modello di resezione tumorale rilevante per traduzione per modelli preclinici di murina di carcinoma squamoso orale

Con il crescente interesse per l'immunoterapia intratumorale, è essenziale selezionare modelli tumorali accessibili e pratici. I tumori sottocutanei sono facili da stabilire ma difficili da visualizzare e manipolare. In questo protocollo, descriviamo metodi per generare tumori intradermici che offrono una migliore visibilità e accessibilità.

Impianto di tumori intradermici come modello robusto per studi di immunoterapia intratumorale sul cancro delle murine

Impara l'inoculazione intramucosa di cellule di carcinoma squamoso nei topi per studiare il microambiente tumorale e la resistenza alle terapie. Questo modello ortotopico riproduce le caratteristiche cliniche e istopatologiche della malattia umana.

Intramucosa inoculazione delle cellule di Carcinoma di cellule Squamous nei topi per profilatura Immune tumore e valutazione della risposta di trattamento (Video) | JoVE Journal

Intramucosa inoculazione delle cellule di Carcinoma di cellule Squamous nei topi per profilatura Immune tumore e valutazione della risposta di trattamento

Esplora altri video