Name: Modello di matrice extracellulare tridimensionale dellosso per Osteosarcoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Scopri la preparazione di scaffold decellularizzati per lo studio dell'osteosarcoma in vitro. Questo modello tridimensionale riproduce l'eterogeneità morfologica tumorale e supporta l'analisi della sensibilità ai farmaci.

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Gli autori di valore il supporto di Liuying Chen per la sua assistenza amministrativa e Zhao lungo per la sua eccellente assistenza tecnica durante la costruzione di ponteggi di matrice extracellulare dell'osso. Questo studio è supportato da sovvenzioni dal National Natural Science Foundation of China (31871413).

Uso e cura degli animali sono condotti secondo l'istituti nazionali di salute Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (pubblicazione NIH No. 80-23, riveduta nel 1996), previa approvazione del Comitato etica animale di Sun Yat-sen University.
1. osso preparazione
<ol><li>Ottenere 4 ai topi BALB/c 6-settimana-vecchio (senza sesso-specifico requisito). Eutanasia di un mouse in modo asettico di dislocazione cervicale e tagliato di fresco perone, tibia e femore da un arto posteriore con forbici chirurgiche sterili. Staccare il tessuto epiteliale e quindi rimuovere tanto del tessuto molle possibili utilizzando forbici e pinzette.</li>
	<li>Sciacquare le ossa della gamba con soluzione fisiologica sterile 10 mM tamponato fosfato (PBS) due volte per rimuovere il sangue in un piatto di 6 cm. Immergere le ossa in etanolo di 75% per 3 minuti, poi sciacquare due volte con PBS. Le ossa pulite possono essere memorizzate in una provetta sterile da 50 mL con PBS sterile a-80 ° C per mesi fino a quando richiesto. Nota: PBS utilizzato in tutti i passaggi seguenti ha 10 mM PO43.</li>
</ol>2. osso demineralizzazione e decellularizzati
<ol><li>Scongelare le ossa surgelate a temperatura ambiente e poi congelare di nuovo a-80 ° C per 1 h. soggetti le ossa a più di 2 – 3 cicli di congelamento-scongelamento per la ripartizione del tessuto e lisi cellulare.</li>
	<li>Incubare le ossa in una provetta sterile 50 mL con 0,5 N HCl durante la notte a temperatura ambiente in un agitatore a dondolo piattaforma o orbitale con dondolo/agitazione delicata per garantire una copertura completa e anche delle ossa. Nota: Assicurarsi che le ossa sono interamente immersi durante il movimento nell'acido e non accontentano durante il processo. Il volume di HCl soluzione dovrebbe essere più di dieci volte a quella delle ossa.</li>
	<li>Dopo la decalcificazione, decantare la soluzione di HCl completamente e sciacquare sotto l'acqua corrente per 1 h. Quindi, lavare le ossa due volte per 15min per lavaggio con acqua distillata in un agitatore a dondolo piattaforma o orbitale. Nota: Assicurarsi di rimuovere completamente la soluzione o l'acqua tra un lavaggio e dopo il lavaggio finale con acqua distillata.</li>
	<li>Estrarre i lipidi nelle ossa demineralizzate con una miscela 1:1 di metanolo e cloroformio in una provetta da centrifuga 50ml avvolta con carta stagnola per 1 h a temperatura ambiente10.</li>
	<li>Quindi, trasferimento le ossa in un altro tubo di metanolo avvolto con carta stagnola per 30 min. rimuovere completamente il metanolo e sciacquare con acqua distillata acqua due volte per 15min con agitando delicatamente. Decantare acqua lavaggio finale e procedere con le seguenti operazioni in condizioni sterili. Nota: Durante la fase di estrazione, la luce deve essere evitata per prevenire la decomposizione di cloroformio. La miscela può essere conservata in contenitore resistente alla luce o una provetta da centrifuga avvolto con carta stagnola. Eseguire tutti i trattamenti e lavare passaggi sotto modesta rotazione o movimento.</li>
	<li>Sciacquare le ossa in un piatto di 6cm con PBS sterile per 3 minuti e poi trasferire le ossa in una nuova provetta 50 mL. Aggiungere 40 mL sterile 0,05% tripsina-EDTA (TE) nel tubo e incubare le ossa per 23 h in incubatore a CO2 a 37 ° C18.</li>
	<li>Scartare la soluzione TE e lavare due volte con PBS sterile completati con ampicillina μg/mL 90 e 90 μg/mL kanamicina. Dopo la decantazione finale lavare completamente il PBS, rifornito con 40 mL di PBS sterile. Lavare accuratamente per 24 h a temperatura ambiente con dolce dondolo o agitazione per ammollo antibiotico. Nota: Tutto il PBS sterile utilizzato in questa e le seguenti operazioni contiene 90 μg/mL ampicillina e 90 kanamicina μg/mL. Durante la notte lavaggio sotto rotazione o movimento vengono eseguite per immersione completa lunghi periodi con antibiotici per ottenere una sterilizzazione efficace degli spazi dei pori.</li>
	<li>Rimuovere il PBS e trasferire le ossa in una provetta da centrifuga fresca 50 mL riempita con PBS sterile. Il preparato demineralizzata e decellularizzate ossa sono chiamate matrice ossea extracellulare (BEM) e possono essere memorizzate a 4 ° C per 2 mesi fino a quando richiesto.</li>
</ol>3. semina e coltura delle cellule
<ol><li>Estrarre il BEM dal frigorifero a 4 ° C e immergerlo in etanolo di 75% per 30 s, quindi risciacquare con PBS due volte. Trasferire il BEM su una piastra di coltura cellulare pulito 6-pozzetti. Aggiungere 2 mL di terreno cultura completa (Dulbecco modificato medio/F12 dell'Aquila (DF12) contenente 5% di siero bovino fetale, 90 μg/mL ampicillina e 90 kanamicina μg/mL). Incubare il BEM pernottamento in un incubatore a CO2 a 37 ° C.</li>
	<li>Ottenere linee di cellule umane di OS (MNNG/HOS e MG-63). Sospendere circa 1,0 x 105 OS cellule con 100 μL PBS contenente rosso fenolo come indicatore. Nota: Per meglio monitorare e osservare le cellule multistrate all'interno il modello tridimensionale di BEM, MNNG/HOS e MG-63 sono infettati con vettore lentivirale esprimendo mCherry fluorescente e proteina fluorescente verde (GFP).</li>
	<li>Dopo il BEM è completamente imbevuto nel mezzo, iniettare le cellule OS nelle BEM da epifisi prossimale o distale, quando l'ago raggiunge la cavità midollare del BEM. Incubare il modello OS-BEM per un minimo di 2 h in un umidificata 5% CO2 atmosfera a 37 ° C per garantire le cellule iniettate aderiscano saldamente al BEM. Nota: Pre-riscaldare tutti i media utilizzati per la coltura cellulare. L'incubatore utilizzato per la coltura cellulare ha un umidificata 5% CO2 ambiente a 37 ° C.</li>
	<li>Aggiungere 1 mL di coltura completa nella piastra per rivestire completamente la superficie della cultura BEM pernottamento in un incubatore a CO2 a 37 ° C.</li>
	<li>Trasferire delicatamente il modello OS-BEM in un nuovo pozzo di 6 pozzetti con una pinzetta sterile e terreno di coltura fresco pila 1 mL. Il modello della coltura per 14 giorni in incubatore a CO2 a 37 ° C e aggiornare il terreno di coltura secondo la situazione di proliferazione delle cellule di OS.</li>
	<li>Monitorare lo stato delle cellule e di colore medio sotto il microscopio di fluorescenza invertito durante il processo di cultura. Quando le cellule OS espande alla piastra, trasferire delicatamente il modello OS-BEM a altro di nuovo bene con pinzette sterili. Nota: Il terreno di coltura è rosso brillante a pH 7.4, che è il valore di pH ottimale per la coltura cellulare più mammifero. Se il mezzo si trasforma in giallo arancia o addirittura, aggiornare immediatamente il mezzo per mantenere un ambiente sano per le cellule di OS.</li>
	<li>Trasferire il modello OS-BEM in un nuovo pozzo con pinzette e risciacquare delicatamente con PBS per rimuovere il terreno di coltura. Trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL, quindi fissare con formalina 10% tamponata per identificazione istologica.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.

In generale, OS possono essere classificati come osteoblastica, chondroblastic e ﬁbroblastic i sottotipi a seconda della sua dominante componente istologica. Relativa prognosi dipende non solo dai parametri istologici ma anche sul suo sito anatomico. Può verificarsi all'interno delle ossa (nel intramidollare o vano intracortical), sulle superfici delle ossa e in siti extraosseous19. L'emersione e l'eterogeneità del sistema operativo può essere delucidate come una coniugazione di eventi oncogenici ...

Osteosarcoma (OS) si presenta solitamente in zone, le metafisi delle ossa lunghe, in attiva crescita durante l'adolescenza. Più dell'80% dei siti colpiti da OS hanno preferenza per la metafisi della tibia prossimale e Omero prossimale, nonché sia distale e prossimale di femore, corrispondente alla posizione della crescita piastra1. OS comprende molteplici sottotipi di cellule con proprietà mesenchymal e considerevole diversità nelle caratteristiche istologiche e grado. Evidenze supportano le cellule staminali mesenchimali (MSCs), precursori impegnati osteoblasti e periciti come le cellule di origine2,3,4,5. Queste cellule possono accumularsi le alterazioni genetiche o epigenetiche e dar luogo a OS sotto l'influenza di determinati segnali microambiente osseo. Meccanismi sia intrinseci sia estrinseci causare l'instabilità genomica e l'eterogeneità del sistema operativo, con molteplici fenotipi morfologici e clinici6,7. Per terapie individualizzate o screening di nuovi farmaci, nuovi modelli devono essere generati per contro eterogeneità o altri disordini clinici.
OS è un tumore solido maligno intraosseo. La complessità e l'attività del microambiente elementi circostanti conferire differenze fenotipiche e funzionali sulle cellule OS in posizioni diverse di un tumore. Matrice ossea extracellulare (BEM) fornisce un'impalcatura strutturale e biochimica per deposizione minerale e rimodellamento osseo. La parte organica della matrice extracellulare (ECM) consiste principalmente di tipo I collagene secreto dalle cellule osteoblastic lignaggio, mentre la relativa parte mineralizzate è composto da fosfato di calcio sotto forma di idrossiapatite8. Il ruolo dinamico delle reti di ECM è di regolare adesione cellulare, differenziazione, cross-talk e tessuto funzione manutenzione9.
Demineralizzata idrogeli BEM ed ECM sono stati utilizzati con successo nella coltura delle cellule e possono migliorare la proliferazione delle cellule10,11. Sintetizzato osso-come ECM può regolare la dimensione del pool, le decisioni destino e progressione di lignaggio di MSCs12,13,14. Inoltre, risultati della prova relativa importanza clinica per fornire attività osteogenica di processi cellulari stimolanti durante osso formazione e rigenerazione15,16,17.
In questo articolo, il nostro gruppo costituisce un modello modificato e alternativa favorevole per tridimensionale coltura a lungo termine. Cellule di OS iniettate il BEM tessuto-derivato presentano un fenotipo eterogeneo mesenchymal prontamente rispetto alla plastica culture bidimensionale. BEM derivato da Visualizza site-specific del tessuto omologo relativo vantaggio drammatico come essendo una nicchia nativa per OS cellule in vitro e ha un grande potenziale nella ricerca teorica e clinica di OS. Questa piattaforma BEM caratterizzata è semplice ma efficiente per la ricerca in vitro e può essere prorogata nel modellare i cancri multipli.

<table><tbody><tr><td>Provetta da centrifuga da 15 mL</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga da 50 mL</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura cellulare da 6 cm</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 6 pozzetti</td><td>Greiner</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>C57-BL/6J topo</td><td>Sun Yat-sen Laboratorio universitario Centro</td><td></td><td></td>per animali</tr><tr><td>CO2 incubatore</td><td>SHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico</td><td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr><tr><td>Kanamicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>MG-63</td><td>Accademia cinese delle scienze, Banca</td><td></td> cellulare di Shanghai <td>Linea cellulare di osteosarcoma umano</td></tr><tr><td>MNNG/HOS</td><td>Accademia cinese delle scienze, Banca</td><td></td> cellulare di Shanghai <td>Linea cellulare di osteosarcoma umano</td></tr><tr><td>Fenolo rosso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4633</td><td>Una soluzione di rosso fenolo viene utilizzata come indicatore di pH: il suo colore mostra una transizione graduale dal giallo al rosso nell'intervallo di pH da 6,6 a 8,0.</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501218</td><td></td></tr></tbody></table>

modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per osteosarcoma

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) è il più comune e un tumore altamente aggressivo e primari dell'osso. È caratterizzato da variazioni anatomiche e istologiche assieme alle difficoltà diagnostica o prognostica. OS comprende cellule tumorali genotipico e fenotipico eterogenea. Elementi del microambiente dell'osso sono dimostrati di account per progressione di malattia e di eterogeneità del tumore. Matrice ossea extracellulare (BEM) conserva le matrici microstrutturali e componenti biochimici della matrice extracellulare nativa. Questa nicchia di tessuto-specifica fornisce un'impalcatura favorevole e a lungo termine per proliferazione e semina cellulare di OS. Questo articolo fornisce un protocollo per la preparazione del modello BEM e la sua ulteriore applicazione sperimentale. Le cellule OS possono crescere e differenziarsi in fenotipi più coerenti con la complessità istopatologica di campioni clinici di OS. Il modello consente inoltre la visualizzazione delle diverse morfologie e la loro associazione con alterazioni genetiche e meccanismi di regolazione sottostante. Come omologo umano OS, questo modello di BEM-OS possa essere sviluppato e applicato alla patologia e ricerca clinica del sistema operativo.

Dopo la demineralizzazione e decellularizzati, BEM sembra essere traslucido con maggiore resilienza e tenacia rispetto all'osso del mouse nativi. Un piccolo residuo di muscolo e lo spazio della cavità midollare può essere osservati chiaramente (Figura 1A, B). Per determinare l'effettiva decellularizzazione di BEM, BEM è inclusi in paraffina dopo la fissazione e quindi tagliata in 3 – 5 μm sezioni per la macchiatura dell'hematoxylin-eosina (H &amp; E). La rimozione completa d...

Il modello di matrice extracellulare (BEM) dell'osso per osteosarcoma (OS) è ben consolidata e mostrato qui. Può essere utilizzato come impalcatura adatta per che imita tumore primario crescita in vitro e fornendo un modello ideale per studiare l'eterogeneità istologica e cytogenic del sistema operativo.

Modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per Osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Questo metodo fornisce una strategia efficiente per la preparazione di impalcature funzionali per la ricerca sul tumore osseo. Decellularizzato la matrice extracelonnare ossea, ha mostrato una sierocompatibilità variabile per la sopravvivenza e le attività delle cellule osteosarcoma. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la coltura delle cellule osteosarcoma nella matrice derivata dalle ossa mostra una morfologia altamente eterogenea simile a un'istopatologia clinica dell'osteosarcoma.Il metodo fornisce un modello ideale per indagare lo sviluppo, la progressione della sensibilità farmacologica dei tumori ossei, come l'osteosarcoma, il sarcoma di Ewing e le altre metastasi maligne dei tumori all'osso. Per iniziare, ottenere topi BALB / c di quattro o sei settimane, dopo aver eutanasiato un topo usando forbici chirurgiche sterili, tagliare fibule fresche, tibia e femore da un arto posteriore. Con l'aiuto di pinzette, staccare il tessuto epiteliale e quindi rimuovere il più possibile il tessuto molle.Risciacquare le ossa delle gambe con una soluzione PBS sterile da 10 mM due volte per rimuovere il sangue in un piatto di sei centimetri. Immergere le ossa in un piatto con 75%etanolo per tre minuti, quindi risciacquare con PBS due volte. Conservare le ossa pulite in un tubo di centrifuga sterile da 50 millilitri con tubo PBS sterile a 80 gradi Celsius.Scongelare le ossa congelate a temperatura ambiente e poi congelare di nuovo a 80 gradi Celsius per un'ora. Sottoposere le ossa a più di due cicli di congelamento-disgelo per la lisi cellulare e la rottura dei tessuti. Quindi, posizionare le ossa in un tubo di centrifuga sterile da 50 millilitri riempito con HCl normale 0,5 e incubare durante la notte a temperatura ambiente su uno shaker orbitale con tremori delicati per garantire una copertura completa e uniforme delle ossa.Dopo la decalcificazione, decantare completamente la soluzione di acido cloridrico e sciacquare le ossa sotto l'acqua corrente per un'ora. Quindi, utilizzare acqua distillata per lavare le ossa due volte per 15 minuti per lavaggio su uno shaker orbitale. Decantare completamente la soluzione.Per estrarre i lipidi in ossa demineralizzate, posizionare le ossa in un tubo di centrifuga da 50 millilitri con una miscela 1:1 di metanolo e cloroformio. Avvolgere il tubo con un foglio di stagno per evitare la luce per la prevenzione della decomposizione cloroformio. E metti il tubo su uno shaker orbitale per un'ora.Quindi, utilizzare una pinzetta per trasferire le ossa in un altro tubo di metanolo con lamina di stagno per 30 minuti. Rimuovere completamente il metanolo e lavare con acqua distillata due volte per 15 minuti su uno shaker orbitale. Decantare l'acqua di lavaggio finale e procedere in condizioni sterili.Risciacquare le ossa in un piatto di sei centimetri con PBS sterile per tre minuti. Aggiungere 40 millilitri di soluzione sterile 0,05%TE in un tubo di centrifuga da 50 millilitri e incubare le ossa per 23 ore in un incubatore di anidride carbonica a 37 gradi Celsius. Scartare la soluzione TE e risciacquare due volte con PBS sterile integrato con 90 g/mL di ampicillina e 90 g/mL di kanamicina per 15 minuti ciascuno sullo shaker orbitale.Dopo aver decantato completamente il lavaggio finale, reintegrare nuovamente con 40 millilitri di PBS sterile con antibiotici. Lavare accuratamente per 24 ore a temperatura ambiente con scuotimenti delicati per ottenere un'efficace sterilizzazione degli spazi porosi. Quindi, trasferire le ossa in un tubo di centrifuga da 50 millilitri riempito con PBS sterile con antibiotici.La matrice extracellulare ossea preparata può essere conservata a quattro gradi Celsius per due mesi. Immergere bem in 75% di etanolo in un piatto e agitare delicatamente il piatto a mano per 30 secondi. Quindi risciacquare con PBS per 30 secondi, due volte.Trasferire il BEM su una piastra di coltura cellulare pulita a sei pozzi. Aggiungere due millilitri di mezzo di coltura completo ad ogni pozzo. Incubare il BEM durante la notte in un incubatore di anidride carbonica a 37 gradi Celsius.Ottenere linee cellulari del sistema operativo umano in 100 microlitri di PBS prerifabburato contenenti rosso fenolo indicatore. Utilizzare una pipetta per sospendere le celle del sistema operativo con la concentrazione approssimativa di 1 per 10 al 5°. Dopo che il BEM è completamente imbevuto nel mezzo, dalle epifisi prossimali o distali, perforare l'ago alla cavità midollare di BEM e iniettare cellule del sistema operativo in BEM.Incubare il modello OS-BEM per un minimo di due ore in un'atmosfera umidificata del 5% di anidride carbonica a 37 gradi Celsius per garantire che le cellule iniettate aderiscano saldamente al BEM. Quindi, estrae il piatto dall'incubatrice. Aggiungere un mezzo di coltura millilitro sulla piastra e tenerlo nell'incubatrice durante la notte per rivestire completamente la superficie della coltura BEM.Trasferire delicatamente il modello OS-BEM in un nuovo pozzo di una piastra a sei pozzetti con una pinzetta sterile e rialimentare un mezzo di coltura fresco millilitro. Cultura il modello per 14 giorni nell'incubatore. Durante l'incubazione di 14 giorni, continuare a monitorare il colore medio.Se il mezzo si trasforma in arancione, o anche giallo, aggiornare immediatamente il mezzo scartando metà del vecchio mezzo e aggiungendo un nuovo mezzo per mantenere un ambiente sano per le cellule del sistema operativo. Mantenere lo stato delle cellule di monitoraggio al microscopio a fluorescenza invertita. Quando le celle del sistema operativo si espandono a piastra, trasferire delicatamente il modello OS-BEM in un altro nuovo pozzo con pinzette sterili.Dopo 14 giorni di coltura, sciacquare delicatamente il modello OS-BEM con PBS per rimuovere il mezzo di coltura. Quindi trasferire in un tubo di centrifuga da 15 millilitri e aggiungere la formalina tamponata al 10% da fissare per l'identificazione istologica. Dopo la demineralizzazione e la decellularizzazione, BEM sembra essere traslucido con una maggiore resilienza e tenacia rispetto all'osso nativo del topo.Un piccolo residuo muscolare nello spazio della cavità midollare può essere chiaramente osservato. L'imaging a campo brillante dell'osso nativo e del BEM decellularizzato, mostra la rimozione completa dei nuclei cellulari. La struttura porosa naturale nella disposizione della rete di collagene è ben tenuta nel BEM decellularizzato.Inoltre, la colorazione immunoistochimica per collagene I e collagene IV mostra che i principali componenti della matrice extracellulare sono conservati nella tibia del topo dopo la decellularizzazione. Durante la coltura di 14 giorni, sia il periostio che l'endosteo sono infiltrati dall'espansione delle cellule del sistema operativo. Le cellule del sistema operativo sul BEM decellularizzato mostrano una morfologia altamente eterogenea simile alle caratteristiche citopatologiche di una sezione del sistema operativo.L'analisi immunoistochimica dopo la coltivazione nel modello BEM per 14 giorni mostra grandi vantaggi nelle colture a lungo termine. Inoltre, cellule del sistema operativo e coltura BEM, glicoproteina a matrice ossea altamente espressa, che è specifica per la matrice osteoide. Il modello tridimensionale di questo in vitro è stato utilizzato per dimostrare con successo un'eterogeneità fenotipico e un meccanismo regolatore di differenziazione dell'osteosarcoma.

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Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Nei metodi standard di coltura le cellule sono presi dal loro ambiente fisiologico e cresciute sulla superficie di plastica di un piatto. Per studiare il comportamento delle cellule primarie midollo osseo umano è stato creato un sistema di coltura 3-D in cui le cellule sono coltivate in condizioni riassumono il microambiente nativo del tessuto.

A Three-dimensional Tissue Culture modello per studiare Primario Osso Osseo e le sue Malignità

Le cellule tumorali vengono incorporate in un gel di collagene e poi inserite in un gel di fibrina acellulare per generare un sistema di coltura 3D in cui l'invasività e la formazione di tumori satelliti possono essere monitorate.

Three-Dimensional Cultura Assay per esplorare Cancer Cell invasività e formazione di tumori Satellite

Iniezione diretta di cancro-derivato di vescicole extracellulari (SVE) conduce alla riprogrammazione del midollo osseo, sostenendo la progressione del tumore; Tuttavia, le celle che mediano questo effetto è poco chiaro. Qui, descriviamo un protocollo dettagliato per studiare EV-mediata di cellule staminali tumorali mesenchimali (MSC) interazioni in vivo, rivelando un ruolo cruciale per MSCs EV-educato in metastasi.

Un modello murino preclinico di Osteosarcoma per definire la comunicazione mediata della vescicola extracellulare tra tumore e cellule staminali mesenchimali

Qui, presentiamo un protocollo per la generazione di induced pluripotent Stem Cells (iPSCs) da fibroblasti derivata pazienti di sindrome di Li-Fraumeni (LFS), differenziazione delle iPSCs tramite cellule staminali mesenchimali (MSCs) di osteoblasti e modellazione in vivo tumorigenesi utilizzando osteoblasti derivati paziente LFS.

Modellazione di Osteosarcoma con la sindrome di Li-Fraumeni paziente-derivato indotto Pluripotent Stem Cells

I modelli di metastasi ossee non sviluppano metastasi in modo uniforme o con un'incidenza del 100%. L'iniezione diretta di cellule tumorali intra-ossee può provocare l'embolizzazione del polmone. Presentiamo la nostra tecnica di modellazione dei tumori ossei primari e delle metastasi ossee utilizzando l'impianto di innesto tumorale solido nell'osso, portando a attecchimento e crescita riproducibili.

Modellazione dei tumori ossei primari e delle metastasi ossee con impianto di innesto tumorale solido nell'osso

Questo documento elenca i passaggi necessari per seminare linee cellulari di neuroblastoma su scaffold tridimensionali a base di collagene precedentemente descritti, mantenere la crescita cellulare per un periodo di tempo predeterminato e recuperare scaffold per diverse analisi della crescita cellulare e del comportamento cellulare e applicazioni a valle, adattabili per soddisfare una serie di obiettivi sperimentali.

Modello biomimetico tridimensionale in vitro di neuroblastoma utilizzando scaffold a base di collagene

Il presente protocollo descrive l'iniezione di cellule di osteosarcoma intratibia per generare modelli murini portatori di osteosarcoma ortotopico e lesioni da metastasi polmonari.

Iniezione di cellule di osteosarcoma intratibiale per generare modelli murini di osteosarcoma ortotopico e metastasi polmonari

Qui, descriviamo un sistema microfisiologico standardizzato e facile da implementare che riflette la complessità della struttura in vivo del midollo osseo umano, fornendo un modello pertinente per studiare con precisione una vasta gamma di eventi normali e patologici.

Un modello 3D di midollo osseo umano per studiare le dinamiche e le interazioni tra cellule residenti in contesti fisiologici o tumorali

Il presente protocollo descrive il metodo per stabilire un modello murino di xenotrapianto derivato da paziente (PDX) utilizzando tessuto di osteosarcoma umano.

Istituzione di un modello murino di xenotrapianto derivato da paziente con tessuti di osteosarcoma umano

Proponiamo un protocollo per valutare la rigenerazione ossea a vari livelli gerarchici. Questo approccio multimodale consente un'analisi strutturale su diverse scale di lunghezza, affrontando efficacemente le sfide nella preparazione del campione. Fornisce inoltre un flusso di lavoro affidabile per valutare l'efficacia dei biomateriali nel promuovere la rigenerazione ossea.

Approccio multimodale per valutare la rigenerazione ossea e le prestazioni dell'impalcatura

Questo protocollo descrive la fabbricazione di costrutti ossei 3D utilizzando osteociti umani incorporati in idrogel di gelatina metacrilata (GelMA) integrati con matrice extracellulare decellularizzata. Il metodo è a basso costo, scalabile e compatibile con le apparecchiature di laboratorio di base, offrendo una piattaforma traslazionale per lo studio dei processi delle malattie muscoloscheletriche.

Una piattaforma di coltura ossea 3D che utilizza osteociti umani e matrice extracellulare decellularizzata per la modellazione delle malattie muscoloscheletriche

Scopri la preparazione di scaffold decellularizzati per lo studio dell'osteosarcoma in vitro. Questo modello tridimensionale riproduce l'eterogeneità morfologica tumorale e supporta l'analisi della sensibilità ai farmaci.

Modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per Osteosarcoma

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