Name: מחקר על חילוף החומרים של שישה קוטלי חרקים מערכתית החדש הוקמה התא תרבות ההשעיה נגזר תה (Camellia Sinensis L.) עלים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: חקור את מטבוליזם הקוטלנים בשושנת התה Camellia sinensis באמצעות תרבית תאים תלויה. שיטה זו מאפשרת לחקור את התנהגות הקוטלנים בצמחים בצורה מבוקרת ויעילה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי תוכנית פיתוח מפתח & לאומי (2016YFD0200900) של סין, הקרן הלאומית המדעית הטבעית של סין (No. 31772076 ו-No. 31270728), סין פוסט דוקטורט הקרן (2018M630700), ואת הקרן הפתוחה של מפתח המעבדה לביולוגיה של צמח התה וניצול (SKLTOF20180111).

1. התרבות שלנו תה
הערה: העלים הסטריליים נגזרו מתוך שורות מחוץ לתחום שפותחו לראשונה בקבוצת המחקר17. כל ההליכים עד לסעיף 5 בוצעו במכסה זרימה סטרילית, למעט זמן התרבות בחממה.
<ol><li>כוונן את ה-pH של שתי המדיות (מורראשיג ו-Skoog [MS] המדיום הבזאלי ו-B5 בינוני נוזלי של גאמבורג) עד 5.8 לפני האוטוקלינג (121 ° c, 20 דקות).</li>
	<li>חותכים לאורך הווריד האמצעי של עלה סטרילי באמצעות מספריים, ולאחר מכן לחלק כל חצי לחתיכות קטנות של כ 0.3 ס"מ x 0.3 ס"מ צלחת פטרי.</li>
	<li>מניחים את explants סטרילי (חתיכות עלה קטן) אל מדיה MS בסיס המכיל את ההורמונים צמח 2, 4-D (1.0 mg L-1) ו-KT (0.1 mg l-1). שישה explants ניתן להציב בבקבוקון 300 mL המכיל 100 mL של מדיה בסיס MS.</li>
	<li>התרבות של העלה למעלה בטמפרטורה מתמדת של 25 ° c בחשכה. לאחר 28 ימים, בחר את הדור הראשון של יבלות המושרה ולהעביר בקבוקון טרי (תת-תרבות). לרכוש את השיחה רופף ומשוחרר לאחר 3-4 ל -4 תרבויות.</li>
</ol>2. התליה של תא תה
<ol><li>חותכים את היבלות הנמרצת, הפריכים והרופפים מהמדיום המוצק לחתיכות קטנות (טווח כאן 0.5-2 מ"מ) באמצעות להב כירורגי סטרילי בתנאים סטריליים.</li>
	<li>שוקלים בערך 3 גר'. מהחלקים הקטנים של הקריאה מניחים את הטלפון לתוך בקבוקון 150 mL המכיל 20 מ ל של B5 מדיה נוזלית בתוספת 2, 4-D (1.0 mg L-1) ו-KT (0.1 mg l-1).</li>
	<li>תרבות תא נוזלי מושעה בטמפרטורה קבועה (25 ± 1 ° c) באינקובטור רועד ב 120 סל ד בחושך.</li>
	<li>לאחר 7 עד 10 ימים של culturing, להסיר את מבחנות התרבות ולתת להם לעמוד כמה דקות.</li>
	<li>לקחת את כל supernatant כמו חומר הזרע עבור תת-תרבות למדיום טרי (יחס התרבות של התלוי האם נוזל מדיום טרי נע בין 1:1 ו 1:2). , הסר את הזירז. יבלות גדולות</li>
	<li>השג את התרבות הסופית ההשעיה התא הסופי לאחר 3 על 4 מחזורי תת-תרבות של 28 ימים כל אחד.</li>
</ol>3. היכולת של טריפנקסיל כלוריד של הכדאיות התאית
<ol><li>להרוג מדגם של תאים חיים ב 100 ° c עבור 10 דקות כמו תא בקרה לפני כתמים הכדאיות.</li>
	<li>צנטריפוגה את כל התרבות ההשעיה התא עבור 8 דקות ב 6000 x g. הסר את הסופרנטנט לפני השעיית התאים ב-2.5 mL של מאגר מלוחים באגירה פוספט (pH 7.3), ונער אותו עבור 1 דקות ביד.</li>
	<li>הוסף 2.5 מ"ל של 0.4% triphenyl כלוריד (TTC) הפתרון ולטלטל ביד שוב.</li>
	<li>מודאת התערובת עבור 1 h באינקובטור עומד (30 ° c).</li>
</ol>4. טיפול ודיגום תרבויות תה התליה עם קוטלי חרקים
<ol><li>להוסיף סדרת מחלקים של 400 μl של מסנן-הפתרון מלאי מעוקר (500 μg-1) של ארבעה neonicotinoids (thiamethoxam, מרחאמפריד, imidacloprid, ו imidacloprid) או שני זרחנים (מתודיטה ו omethoate) לתוך התרבויות התא ההשעיה, בהתאמה. הערה: אם המטרה היא להשוות התנהגויות xenobiotic יוטי, להשתמש באותה אצווה אמא של השעיות התא כדי לבדוק את תרכובות שונות.</li>
	<li>התרבות דגימות של השעיות תא עם קוטלי חרקים בטמפרטורה קבועה (25 ± 1 ° c) וטלטול מהירות החממה (120 rpm). קח את הדגימות (ראה שלב 4.3 או 4.4) על 0, 3, 5 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 ו-75 ימים.</li>
	<li>כדי לבדוק מדגם המכיל neonicotinoid, להסיר את 1 mL של התרבות התא הומוגנית, למקם אותו לתוך שפופרת הצנטריפוגה פלסטיק 1.5 mL, וצנטריפוגה ב 4000 x g עבור 2 דקות.<ol>
<li>להעביר את הסופרנטנים דרך ממברנה מסנן 0.22-μm בגודל הנקבוביות לפני ניתוח על ידי ביצועים גבוהים נוזלי כרומטוגרפיה-אולטרה סגול (כדיקות-UV) וביצועים גבוהים ביותר כרומטוגרפיה נוזלית-המוט פי ארבעה של הטיסה (חברת התעופה-QTOF) מסה ספקטרומטריה (טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>כדי לבדוק מדגם המכיל זרחן, להסיר את ה500 μl סדרת מחלקים של תרבות התא ומקום לתוך שפופרת צנטריפוגה של 35 ml או שפופרת הצנטריפוגה מפלסטיק ל 1.5 ml (להכין את המדגם האחרון כמו זה של neonicotinoid).<ol>
<li>הוסף 0.1 g של נתרן כלוריד ו 5 מ ל של אצטון/אתיל אצטט (3:7, v/v) לתוך שפופרת הצנטריפוגה של ה35 mL של דגימות μL 500.</li>
		<li>מערבולת התערובות עבור 1 דקות, ולאחר מכן לאפשר להם לנוח 10 דקות.</li>
		<li>קח 2.5 mL של supernatant לתוך 10 מ"ל זכוכית שפופרת והתנדפה ליובש באמצעות מאייד חנקן ב 40 ° c.</li>
		<li>לפזר את שאריות עם 1 מ ל אצטון, מערבולת עבור 1 דקות, להעביר אותו דרך ממברנה מסנן 0.22-μm לפני ניתוח על ידי גז כרומטוגרפיה-הלהבה גלאי פוטומטרי (GC-FPD).</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. הכנת לדוגמא של צמח תה שלם עם קוטלי חרקים
הערה: משפט צמח תה שלמים נערך במערכת ידרופוני באמצעות שתילי תה גדל ב 50 mL של פתרון תזונתי (30 NH4+, 10 לא3-, 3.1PO 4-, 40 K+, 20 Ca2 +, 25 מ"ג2 +, 0.35 Fe2 +, 0.1 B 3 +, 1.0 Mn2 +, 0.1 zn2 +, 0.025 Cu2 +, 0.05 מו+, ו 10 אל3 +, ב mg L-1)18. חממה ניסיונית היתה תחת מחזור אור כהה (12 h של אור ו 12 h של חושך) ב 20 ° c באוניברסיטה החקלאית אנחווי.
<ol><li>לשים 5 צמחים בסיר פלסטיק 4 L עבור 15 ימים.</li>
	<li>הוסף 0 עמודים לדקה (בקרה) או 100 עמודים לדקה של thiamethoxam או מתועד לסירים פלסטיים, בהתאמה.</li>
	<li>הכינו את דגימת הצמחים השלמה על פי השיטה הקודמת, למעט הטבילה19, ולאחר מכן לנתח עם ספקטרומטר מסה לספקטרום מסה מדויק.</li>
</ol>6. ניתוח כלי הנגינה
<ol><li>
ניתוח האבחון של התנהגות המטבולית של neonicotinoids
	<ol>
<li>השתמש ב-בדיקות-UV (טבלת חומרים) כדי לזהות את התוכן ואת מוצרי חילוף החומרים של thiamethoxam ו מרחאמפריד באורך גל של 254 ננומטר, ו imidacloprid ו imidacloprid ב 270 ננומטר בדגימות מסעיף 4.3. הערה: החלת המבחון-UV הייתה זהה למחקר הקודם19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
GC ניתוח של התנהגות מטבולית של זרחן
	<ol>
<li>לזהות את תוכן המיתוקות והמיתוקות בדגימות מסעיף 4.4 על-ידי כללי השימוש ב-GC-FPD באמצעות עמודת כיראאל (טבלת חומרים).</li>
		<li>השתמשו בחנקן כגז המוביל וקבעו את קצב הזרימה ב-1.0 mL min-1.</li>
		<li>הגדר את הטמפרטורה ההתחלתית ל-120 ° c, והחזק אותו במשך 5 דקות. הגדל את הטמפרטורה ל-150 ° c ב-30 ° c מינימום-1 והחזק 3 דקות. הגדלה ל-170 ° c ב -10 ° c מינימום-1 והחזיקו מעמד 7 דקות. לבסוף לעלות ל 210 ° c ב 30 ° c מינימום1 ולאחר מכן להחזיק 5 דקות.</li>
		<li>הגדר את טמפרטורת ההזרקה ל-200 ° צ' במצב ללא שורשים; הגדר את טמפרטורת הגלאי ל-250 ° c.</li>
		<li>הגדר את אמצעי האחסון להזרקה ל-1 μL.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
החברה לניתוח מטבוליטים קוטל חרקים בתרבית תאים
	<ol>
<li>לזהות את מטבוליטים של קוטלי החרקים בתרבות התא (דגימות מסעיף 4.3) באמצעות ה-סי18 c-QTOF עם עמודה (טבלת חומרים).</li>
		<li>הגדר את קצב הזרימה ל-0.2 mL min-1. הגדר את אמצעי האחסון להזרקה ל-10 μL.</li>
		<li>לדגימות שטופלו על-ידי neonicotinoid, הגדר את השלב הנייד ההתחלתי ל-85% A (5 מילימטר אמוניום) ו -15% B (acetonitrile). מעל 10 דקות, להגדיל את שלב הנייד B כדי 38% ולחזור 15% מעל 1 דקות, להחזיק עבור 9 דקות.</li>
		<li>עבור הדגימות האנטי-זרחתית, הגדר את השלב הנייד ההתחלתי ל-55% A (0.1% החומצה פורמית) ו-45% B (acetonitrile). מעל 5 דקות, להגדיל את השלב הנייד B כדי 70%, ואז לחזור 45% של B על 0.5 דקות, החזק עבור 2.5 min.</li>
		<li>הגדר את פרמטרי הפעולה של QTOF כדלקמן: טמפרטורת הדלק, 325 ° c; ייבוש גז (חנקן), 10 L min-1; גז נדן טמפרטורה, 350 ° צ'; גז מעטפת זרם, 11 L min-1; מתח נימי, 4000 V; מתח זרבובית, 1000 V; מ100 V לחומרי הדברה מneonicotinoid או 110 V לקוטלי חרקים מזרחן; מתח מזרן, 65 V; פועל במצב יון חיובי.</li>
		<li>הגדר את המכשיר לספקטרום הסריקה המלאה והיעד MS/MS מצב.</li>
		<li>עיבוד הנתונים באמצעות כלי מסה מדויקים; להסיק את מטבוליטים ללא מוצרים סטנדרטיים מתוך ביאור ms/ms, כמו גם את הספרות12,15,20,21,22.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בדיקת מטבוליטיס של קוטל חרקים בתמצית צמח שלם
	<ol>
<li>זיהוי מטבוליטים של קוטלי החרקים בתמצית צמחים שלמה בעזרת הספקטרומטר המסה של הבנק הגדול (שולחן חומרים).</li>
		<li>הגדר את הפרמטרים של הספקטרומטר המסה (טבלת חומרים) כדלקמן: לחץ גז נדן, 35 arb; טמפרטורת הדלק, 300 ° c; מתח זרבובית, 3.5 KV; טמפרטורת נימי, 350 ° c.</li>
		<li>הגדר את התוכניות הללו כמוצג לעיל (שלבים 6.3.3 ו-6.3.4) לניתוח של התרבות התאית.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tentative+identification%2C+quantitation%2C+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh%2C+green%2C+and+white+teas+using+UPLC%2FDAD%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li>
<li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+green%2C+white%2C+black%2C+Oolong%2C+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li>
<li>Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green%2C+yellow+and+black+tea+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+and+Biological+Technologies+in+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li>
<li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+Nonsystemic+Behavior+of+the+Pesticide+Ferbam+on+Tea+Leaves+by+Engineered+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles.</a> Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).</li>
<li>Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+C-14-Ethion+insecticide+in+the+presence+of+deltamethrin+and+dimilin+pesticides+in+cotton+seeds+and+oils%2C+removal+of+ethion+residues+in+oils%2C+and+bioavailability+of+its+bound+residues+to+experimental+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).</li>
<li>Fang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+Dynamics+and+Dietary+Risk+Assessments+of+Two+Neonicotinoid+Insecticides+during+Lonicerajaponica+Planting%2C+Drying%2C+and+Tea+Brewing+Processes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food%22%5BJournal%5D)">Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes.</a> Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).</li>
<li>Pan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissipation+pattern%2C+processing+factors%2C+and+safety+evaluation+for+dimethoate+and+its+metabolite+%28omethoate%29+in+tea+%28Camellia+sinensis%29%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis).</a> PloS One. 10 (9), e0138309(2015).</li>
<li>Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+intoxication+with+omethoate%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Legal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fatal intoxication with omethoate.</a> International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).</li>
<li>Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Residues+of+acephate+and+its+metabolite+methamidophos+in%2Fon+mango+fruit+%28Mangifera+indica+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Environmental+Contamination+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.).</a> Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).</li>
<li>Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradation+of+acephate+using+a+developed+bacterial+consortium+and+toxicological+analysis+using+earthworms+%28Lumbricus+terrestris%29+as+a+model+animal%5BTitle%5D)+AND+%22International+Biodeterioration+%26+Biodegradation%22%5BJournal%5D)">Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal.</a> International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).</li>
<li>Ford, K. A., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolism+and+pharmacokinetics+of+seven+neonicotinoid+insecticides+in+spinach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).</li>
<li>Frear, D. S., Swanson, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+cisanilide+%28cis-2%2C5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide%29+by+Excised+Leaves+and+Cell+Suspension+Cultures+of+Carrot+and+Cotton%5BTitle%5D)+AND+%22Pesticide+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).</li>
<li>Sandermann, H. Jr, Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+plant+cell+cultures+to+study+the+metabolism+of+environmental+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicology+and+Environmental+Safety%22%5BJournal%5D)">Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).</li>
<li>Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolite+profiling+of+the+insecticide+thiamethoxam+in+plant+and+cell+suspension+culture+of+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).</li>
<li>Lichtner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloem+mobility+of+crop+protection+products%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phloem mobility of crop protection products.</a> Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shoot+basal+ends+as+novel+explants+for+in+vitro+plantlet+regeneration+in+an+elite+clone+of+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Horticultural+Science+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea.</a> Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).</li>
<li>Meng, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+Translocation%2C+Metabolism%2C+and+Distribution+of+Glyphosate+in+Nontarget+Tea+Plant+%28Camellia+sinensis+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L).</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+Extraction+Method+for+Determination+of+Neonicotinoid+Residues+in+Tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).</li>
<li>Karmakar, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence%2C+metabolism+and+safety+evaluation+of+thiamethoxam+in+tomato+crop%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop.</a> Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).</li>
<li>Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Dimethoate+and+Metabolites+Following+Foliar+Application+to+Plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).</li>
<li>Lucier, G. W., Menzer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+of+oxidative+metabolites+of+dimethoate+formed+in+rats%2C+liver+microsomes%2C+and+bean+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).</li>
<li>Yang, G. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYang%2C+GW+%22Construction+of+Camellia+sinensis+Cell+Suspension+Culture+and+Primary+Study+on+Kineties%22">Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties</a>. , College of Food Science and Nutrition Engineering. China Agricultural University. (2004).</li>
<li>Jiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Metabolic+Behaviors+of+Six+Systemic+Insecticides+in+a+Newly+Established+Cell+Suspension+Culture+Derived+from+Tea+%28L.%29+Leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).</li>
<li>Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation%2C+growth+and+cryopreservation+of+plant+cell+suspension+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures.</a> Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).</li>
<li>Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+plant+growth+regulators+on+cell+growth+and+ginsenoside+saponin+production+by+suspension+cultures+of+Panax+quinquefolium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium.</a> Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).</li>
<li>Grover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoterpenoids+and+aroma+compounds+from+cell+suspension+cultures+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%2C+Tissue+and+Organ+Culture%22%5BJournal%5D)">Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).</li>
<li>Lei, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Agricultural+Science+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li>
<li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Guihaia%22%5BJournal%5D)">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li>
<li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotic+Metabolism+in+Plants%3A+In+vitro+Tissue%2C+Organ%2C+and+Isolated+Cell+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Symposium+Series%22%5BJournal%5D)">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

מאמר זה מציג את התהליך המפורט של הקמת מודל של חילוף חומרים של חומרי הדברה ברקמת צמח תה, כולל הבחירה של explants, קביעת הכדאיות של התא, והקמת תרבות תא תה ההשעיה עם מטבולית גבוהה פעילות. חלקים כלשהם של רקמת הצמח יכול לשמש כדי ליזום יבלות בסביבה מחוטאת25. עלי תה נבחרו עבור חניכה יבלות במחקר זה, לא רק בגלל שהוא משאיר נוטים להיות מזוהמים פחות חלקים מתחת לקרקע, אבל גם בגלל שהם החלק האכיל של היבול ואת היעד העיקרי של יישום חומרי הדברה.
במחקר זה, שיעור אינדוקציה מעמד הצמיחה של י...

תה הוא אחד המשקאות הלא אלכוהוליים הנפוצים ביותר בעולם1,2. תה מופק מן העלים וניצנים של Camellia סיננסיס וודי צמחי תה מגודלים במטעים עצומים ורגישים מזיקים חרקים רבים3,4. בדרך כלל משתמשים בחומרי הדברה זרחניים ובneonicotinoid, כמו קוטלי חרקים מערכתית5 כדי להגן על צמחי תה ממזיקים כגון ויטנפלאס, העלים, ומינים שחדוניים6,7. לאחר היישום, חומרי הדברה אלה נספגים או ממוקמים בתוך הצמח. בתוך הצמח, קוטלי חרקים מערכתית אלה עשויים להשתנות באמצעות הידרוליזה, חמצון או הפחתת תגובות על ידי אנזימים צמח. מוצרי טרנספורמציה אלה יכולים להיות יותר קוטביים ורעילים פחות מאשר תרכובות האב. עם זאת, עבור חלק מהזרחן, הביו-פעילות של מוצרים מסוימים גבוהה יותר. לדוגמה, acephate הוא מטבוליזם לתוך מתיאמאמאופטות2 הרעילים יותר8,9, ומתועד לתוך omethoate10,11. מחקרים מטבוליים צמחיים חשובים ולכן לקביעת גורלם של חומרי הדברה בתוך צמח12.
תרביות רקמות הצמח הוכחו להיות פלטפורמה שימושית לחקירת חילוף החומרים של חומרי הדברה, עם מטבוליטים מזוהה דומה לאלה שנמצאו צמחים שלמים13,14,15. השימוש בתרביות רקמות, בעיקר בתרבויות ההשעיה של התא, יש מספר יתרונות. ראשית, ניסויים יכולים להתבצע ללא מיקרואורגניזמים, ובכך הימנעות הפרעות של שינוי הדברה או השפלה על ידי חיידקים. שנית, תרבות הרקמה מספקת חומרים עקביים לשימוש בכל עת. שלישית, מטבוליטים קל יותר לחלץ מתרבויות רקמה מאשר צמחים שלמים, ותרבויות רקמה לעתים קרובות יש פחות תרכובות interring והמורכבות הנמוכה של תרכובות. לבסוף, תרבויות רקמה יכול לשמש יותר בקלות כדי להשוות סדרה של חומרי הדברה מטבוליזם בניסוי אחד16.
במחקר זה, השעיית תא נגזר העלים של שתילי תה סטרילי מבוגרים הוקמה בהצלחה. התרבות ההשעיה של תא התה הייתה משמשת להשוואת התנהגויות הפיזור של שישה קוטלי חרקים מערכתית.
פרוטוקול זה מפורט נועד לספק מספר הדרכה כך החוקרים יכולים להקים מפעל התרבות הצמח פלטפורמה שימושי לחקר גורלם של מטבולית של xenobiotics לתה.

<table><tbody><tr><td>אצטמיפריד (99.8%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>46717</td><td>מס' CAS: 135410-20-7</td></tr><tr><td>אצטוניטריל (CAN, 99.9%)</td><td>טדיה</td><td>AS1122-801</td><td>מס' CAS: 75-05-8</td></tr><tr><td>אגר</td><td>סולארביו מדע & טכנולוגיה</td><td>A8190</td><td>CAS מס': 9002-18-0</td></tr><tr><td>Clothianidin (99.8%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>525</td><td>CAS מס': 210880-92-5</td></tr><tr><td>Dimethoate (98.5%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>109217</td><td>CAS מס': 60-51-5</td></tr><tr><td>Imidacloprid (99.8%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>91029</td><td>CAS No: 138261-41-3</td></tr><tr><td>Imidaclothiz (99.5%)</td><td>Toronto Research Chemical</td><td>I275000</td><td>CAS No: 105843-36-5</td></tr><tr><td>קינטין (KT, >98.0%)</td><td>Solarbio מדע & טכנולוגיה</td><td>K8010</td><td>CAS מס': 525-79-1</td></tr><tr><td>Omethoate (98.5%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>105491</td><td>CAS מס': 1113-02-6</td></tr><tr><td>פוליוויניל פוליפירולידון (PVPP)</td> <td>Solarbio Science & טכנולוגיה</td><td>P8070</td><td>CAS מס': 25249-54-1</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>טוקריס ביוסיינס</td><td>5511</td><td>CAS מס': 57-50-1</td></tr><tr><td>תיאמטוקסם (99.8%)</td><td>ד"ר ארנסטורפר</td><td>20625</td><td>CAS מס': 153719-23-4</td></tr><tr><td>Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)</td><td>Solarbio Science & טכנולוגיה</td><td>T8170</td><td>CAS מס': 298-96-4</td></tr><tr><td>2,4-Dichlorophenoxyacetic חומצה (2,4-D, >98.0%)</td><td>Guangzhou Saiguo Biotech</td><td>D8100</td><td>CAS No: 94-75-7</td></tr><tr><td>עמודה כיראלית</td><td>Agilent CYCLOSIL-B</td><td>112-6632</td><td>עמודת כרומטוגרפיה (30 מ' ופעמים; 0.25 מ"מ ופעמים; 0.25 &mu; m)</td></tr> <tr><td>כרומטוגרפיה של גז (GC)</td> <td>Shimadu</td><td>2010-Plus</td><td>בשילוב עם גלאי פוטומטרי להבה (FPD) &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC)</td><td>Agilent</td><td>1260</td><td>בשילוב עם גלאי אולטרה סגול (UV)</td></tr><tr><td>עמודת HSS T3 C18</td><td>עמודת</td><td></td><td>כרומטוגרפיה 186003539 מים (100 מ"מ ופעמים; 2.1 מ"מ ופעמים; 1.8 &mu; m)</td></tr> <tr><td>כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC)</td><td>Agilent</td><td>1290-6545</td><td>ספקטרומטר מסה מרובע טנדם (QTOF)</td></tr><tr><td>כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC)</td><td>Thermo Scientific</td><td>Ultimate 3000-Q פוקוס אקטיבי</td><td>מחובר לספקטרומטר מסה של Orbitrap</td></tr></tbody></table>

מחקר על חילוף החומרים של שישה קוטלי חרקים מערכתית החדש הוקמה התא תרבות ההשעיה נגזר תה (camellia sinensis l.) עלים

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

פלטפורמה לחקר חילוף החומרים קוטל חרקים באמצעות רקמות מבחנה של צמח תה פותחה. עלים של שתילי תה סטרילי המושרה כדי ליצור שיחה רופפת על מורראשיג ' ו Skoog (MS) בסיס מדיה עם הורמוני הצמח 2, 4-diלורוophenאוקסיאנפנול חומצה (2, 4-D, 1.0 mg L-1) ו kinetin (KT, 0.1 mg l-1). Callus נוצר לאחר 3 או 4 סיבובים של subculturing, כל אחד נמשך 28 ימים. יבלות משוחרר (כ 3 גרם) היה לאחר מכן מחוסן לתוך מדיה נוזלי B5 המכיל את אותו הורמוני צמח היה תרבותי באינקובטור רועד (120 rpm) בחושך ב 25 ± 1 ° c. לאחר 3 שלוש ארבע תרבויות, השעיית תא נגזר מעלה תה הוקמה ביחס תת-תרבות החל בין 1:1 ו 1:2 (אמא ההשעיה נוזל: בינוני טרי). באמצעות פלטפורמה זו, שישה קוטלי חרקים (5 μg mL-1 כל thiamethoxam, imidacloprid, מרחאמפריד, imidacloprid, מתודיטה, ו-omethoate) נוספו לתרבות ההשעיה של התה הנגזר של התא. מעקב אחר חילוף החומרים של הקוטלי חרקים באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית וכרומטוגרפיה של גז. כדי לאמת את התועלת של תרבות תא תה ההשעיה, מטבוליטים של thiamethoxan ו diמתואט הקיימים בתרביות תאים מטופלים וצמחים שלמים הושוו באמצעות ספקטרומטר מסה. בתרבויות תה מטופלים, שבעה מטבוליטים של טימאמתוסן ושני מטבוליטים של דימיואט נמצאו, בעוד שבצמחים שלמים שטופלו, רק שני מטבוליטים של תיאמטוקסאם ואחד מדיותוטה נמצאו. השימוש בתא מושעה באופן מפושט את ניתוח חילוף החומרים לעומת שימוש בצמחי תה שלמים, במיוחד עבור מטריצה קשה כגון תה.

האינדוקציה של יבלות מעלים שנקטפו מן השדה הגדלים עצי תה ומעלים שנקטח מתוך שתילי תה גדל בתוך מבחנה בסביבה סטרילית הושווה על ידי מדידת זיהום, בראונינג, ו אינדוקציה לאחר 28 ימים של טיפוח על MS מדיה ( איור 1A). צמיחה callus הוקלטה ב 20, 37, 62 ו 90 ימים של תרבות (איור 1B). הקריאה הנגזרת מן העלים מחוץ לתחום הגדילה הראתה צמיחה נמרצת יותר מאשר הקריאה שנגזר מעלי השדה הגדלים במשך כל 90 הימים של הטיפוח-תרגול. הקריאה מהעלים הסטריליים הייתה צ...

עבודה זו מציגה פרוטוקול להקמת תרבות ההשעיה התא נגזר תה (Camellia סיננסיס L.) עלים כי ניתן להשתמש כדי ללמוד את חילוף החומרים של תרכובות חיצוניות, כי ניתן לקחת על ידי המפעל כולו, כגון הדברה.

מחקר על חילוף החומרים של שישה קוטלי חרקים מערכתית החדש הוקמה התא תרבות ההשעיה נגזר תה (Camellia Sinensis L.) עלים

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

תה הוא אחד המשקאות הפופולריים ביותר ברחבי העולם. חומרי הדברה משמשים לעתים כדי להגן על צמחי תה מפני מזיקים. כמה חומרי הדברה מערכתיים עשויים להיעשות על ידי אנזימים בעץ התה.ולאחר מכן משולב באמצעות חמצון, הידרוליזה, או הפחתת תגובות. תרבות השעיה של תאי צמחים יכולות לשמש, בקלות, כדי לחקור את התנהגות חילוף החומרים של חומרי הדברה. לשיטה זו יש מספר יתרונות.ראשית, ניתן להפעיל אותו בתנאים של מיקרואורגניזמים חופשיים, ובכך למנוע את ההפרעה של השפלת חומרי ההדברה הנגרמת על ידי מיקרואורגניזמים. שנית, הוא יכול לספק לנו חומר קבוע בכל עת. לבסוף, זה יכול לשמש גם בקלות כדי להשוות תיאוריות של התנהגות חומרי הדברה בניסוי אחד.במחקר זה, אנו קובעים תרבויות השעיה תא תה מצבים משתנים של עלי תה. מצב התרבויות האופטימליות של השעיות תאים שימש אז להשוואת התנהגות ההתפוגגות של שישה חומרי הדברה. ניסוי זה יתבצע על ידי ג'יאו ויינג וגה גואקין.אלה צמחי התה הסטריליים שלנו שעובדים כמקור לתה. חותכים לאורך הכנף האמצעית של עלה סטרילי באמצעות מספריים. ואז, לחלק כל חצי לחתיכות קטנות של כ 0.3 פעמים 0.3 ס"מ בצלחת פטרי.מניחים את המזיקים הסטריליים על גבי מדיום חזותי של MS המכיל 2, 4-D ו- KT. שישה explants ניתן להציב בבקבוק 300 מיליליטר. תרבות העלה מתפוצץ בטמפרטורה קבועה של 25 מעלות צלזיוס בחושך. לאחר 28 ימים, בחר את הדור הראשון של callus המושרה ולאחר מכן להעביר בקבוק טרי.לרכוש את callus רופף ומשתנה לאחר שלוש עד ארבע תת תתי תתי. חותכים את הגדולים, יבלות משתנות ומשוחררות מהמדיום המוצק לחתיכות קטנות באמצעות להב כירורגי סטרילי בתנאים סטריליים. אנחנו בערך שלושה גרם של חתיכות קטנות של קאלוס.מקם את ה Callus לתוך B5 המכיל 2, 4-D ו KT. תרבות השעיית התא הנוזלי בטמפרטורה קבועה באינקובטור הרועד בחושך. לאחר שבעה עד עשרה ימים של פולחן, להסיר את בקבוק התרבות, ולהשאיר אותם לעמוד במשך כמה דקות. קח את העל-טבעי כמעים כאן יאלץ את התרבות למדיום טרי.הסר את היבלות הגדולות המזרזות. השג את תרבות השעיית התאים המטופחת הסופית לאחר ארבעה עד שלושה מחזורי תת-תרבות של 28 ימים כל אחד. שמור מדגם של תאים חיים ב 100 מעלות צלזיוס במשך עשר דקות כתם תא הבקרה לפני כתמי הכדאיות.צנטריפוגה כל תרבות ההשעיה התא במשך שמונה דקות ב 6, 000 G.Remove את supernatant לפני השעיית התאים לתוך 5 מיליליטר של חיץ PBS וללחוץ אותו במשך דקה אחת ביד. הוסף 2.5 מיליליטר של פתרון TTC וללחוץ ביד שוב. דוגרים את התערובת במשך שעה באינקובטור עומד ב 13 מעלות צלזיוס.הוסף aliquot של ארבע מאות microliters על התצוגה כדי לעקר את פתרון המניות של כל neonicotinoids Thiamethoxam, Acetimoprid, Imidacloprid, ו Imideproxase. הכל לשלב הראשון האורגני. דימתואט ו omethoate לתוך תרבויות השעיית התא בהתאמה.דגימות תרבות של השעיות תאים עם קוטלי חרקים בטמפרטורה קבועה, ומהירות אינקובטור רועדת. קח את הדגימות בימים שונים. כדי לבדוק את המדגם המכיל neonicotinoid, להסיר aliquot 1 מיליליטר של תרבות התא הומוגנית.מניחים אותו לתוך צינור צנטריפוגה פלסטיק 1.5 מיליליטר, וצנטריפוגה אותו ב 4, 000 G במשך שתי דקות. העבר את העל-טבעי דרך קרום מסנן מיקרומטר 0.22 לפני ניתוח על-ידי HPLC-UV ו- UPLC QTOF. כדי לבדוק את הדגימה, המשך בשלב הראשון האורגני.הסר aliquot 500 microliter של תרבות התא וממקום לתוך צינור צנטריפוגה 35 מיליליטר או צינור צנטריפוגה פלסטיק 1.5 מיליליטר. הוסף 0.1 גרם של נתרן כלורי וחמישה מיליליטר לחלץ ממס לתוך צינור צנטריפוגה 35 מיליליטר של 500 דגימות microliter. מערבולת את התערובת לדקה אחת.ואז לאפשר להם לנוח במשך 10 דקות. קח 2.5 מיליליטר של על טבעי לתוך צינור זכוכית 10 מיליליטר להתאדות כמעט יובש באמצעות אידוי חנקן ב 14 מעלות צלזיוס. ממיסים את השאריות עם אצטון מיליליטר אחד.מערבולת למשך דקה אחת, להעביר אותו דרך קרום מסנן מיקרומטר 0.22 לפני ניתוח על ידי GC-FPD. שים חמישה צמחים בארבעה סירי פלסטיק ליטר במשך חמישה עשר ימים. הוסף אפס מיקרוגרם למיליליטר או 100 מיקרוגרם למיליליטר של Thiamethoxam או dimethoaxe לתוך סירי פלסטיק, בהתאמה.הכן את דגימת הצמח שלם על פי השיטה הקודמת, למעט השרייה מראש ולאחר מכן לנתח על ידי ספקטרומטריית מסה Orbitrap. השתמש HPLCUV כדי לזהות את התוכן ואת המוצרים המטבוליים של Thiamethoxam ו Acetimoprid באורך גל של 254 ננומטר, של Imidacloprid ו Imideproxase ב 270 ננומטר. זהה את התוכן של דימתוט ו omethoate על ידי GC-FPD באמצעות עמודה צינורית.לזהות את המטבוליטים של קוטלי חרקים בתרבות התא באמצעות QTOF UPRC עם טור פחמן-18. לזהות את המטבוליטים של קוטלי חרקים בתמצית צמח הבדיקה באמצעות ספקטרומטריית מסת UPLC Orbitrap. ה callus של צמח סטרילי אחד יש זיהום נמוך יותר השחמה אבל אינדקטיביות גבוהה יותר כי זה של callus מעלי תה הרים.ה callus נגזר עלים סטריליים היה תמיד צהבהב בהיר, בעוד callus נגזר עלים הרים היה לבן עם כתמים חומים. כאשר ריכוז KT היה 0.1 מיליגרם לליטר, callus היה צהבהב בצבע רופף במרקם. קצב הגידול של קאלוס היה הגבוה ביותר, עד 61.5% כאשר הריכוז של 2, 4-D היה מיליגרם אחד לליטר עם ריכוז של KT היה 0.5 מיליגרם לליטר.נתוני הצמיחה של callus היה הטוב ביותר ואת קצב הצמיחה של callus היה הגבוה ביותר הגיע 46.9%לכן, השילוב הטוב ביותר של צמח homent היה מיליגרם אחד לליטר של 2, 4-D ו 0.1 מיליגרם לליטר של KT לצמיחה callus תה. ה Callus כיסה לחלוטין את העלים על ידי תת תרבות הרביעית, וכאשר מחזור תת תרבות היה 28 ימים. ה Callus גדל במרץ עם צבע צהבהב ומרקם רופף ללא השחמה.לאחר השוואת הנתונים ברוטו של callus ואת הצבע של השעיית התא, המדיום נוזלי B5 היה מתאים יותר לתרבות השעיית התא. ערך ה- OD של תרבות המתלים של התא שימש לייצוג כמות צמיחת התאים. במהלך 75 ימי הטיפוח, היחס של 15 גרם לכל 40 מיליליטר היה בעל ערך OD גבוה משמעותית מזה של שני היחסים האחרים.כדאיות התא בתוך תרבות ההשעיה של תא התה נבדקה על ידי כתמי TTC. תרכובת TTC חסרת צבע ניתן להמיר formadin אדום על ידי דהידרוגנאז במיטוכונדריה של תאים חיים, אבל הצבע לא ניתן לשנות בתאים מתים. וזה כל התהליך של הקמת תרבות השעיית תא תה.זהו המחקר ההשוואתי הראשון של חילוף החומרים של חומרי הדברה שונים בתה באמצעות טכניקת תרבות השעיית תא. זוהו מספר מטבוליטים של חומרי הדברה, וחלקם נחקרו עוד יותר בצמחי תה שמורים. שיטה חדשה זו יכולה לשמש כמודל למחקרים מטבוליים חומרי הדברה בתה או צמחים אחרים.

study-on-metabolism-six-systemic-insecticides-newly-established-cell

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

כתב יד זה מדגים ודן בשימוש בטכניקות סקר הרגישות חומרי הדברה לזהות התנגדות לפנות וחומרי הדברה מזיקים arthropod מערכתי.

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

כתב יד זה מתאר כיצד ניתן לכמת ביעילות את שיעורי חילוף החומרים של קוטלי עשבים עם עלים שנכרתו מעשב דיקו, ובכך להפחית את השונות ולהסיר כל השפעות מבלבלות אפשריות של ספיגת קוטלי עשבים או טרנסלוקציה שנצפית בדרך כלל במבחני צמח שלם.

מדידת מחירים של קוטל העשבים מטבוליזם בעשבי Dicot עם Assay נכרת עלה

ערכות דברה לעתים קרובות ממוקדות נגד חרקים בוגרים, ולא בשלבים בשלים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת הדברה נגד ביצי פשפש מיטה עם השוואה לשלב פשפש מיטת nymphal הראשון. פרוטוקולים אלה יכולים להיות מותאמים עבור וחרקים אחרים להעריך יעילות דברה בשלבי חיים לא למבוגרים.

שיטה להערכת יעילות הדברה נגד פשפש מיטה,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, ביצים ראשית Instars

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר בית carboxylesterase לעוף חלבונים במבחנה עם מערכת ביטוי תא חרקים baculovirus מתווכת, מאוחר יותר פונקציונלית לאפיין את תפקידיהם פרמתרין חילוף חומרים, ובכך, היוועצות pyrethroid התנגדותם מבוססת תא MTT assay, במבחנה מטבולית מחקרים.

אפיון פונקציונלי Carboxylesterases הבית בקוטלי חרקים עמידים בזבובים, דומסטיקה זבוב

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לחקור את ההעדפה להתגלמות של הזחלים בוגרים של Ectropis grisescens בתגובה בקרקע גורמים (למשל, סוג המצע ותוכן לחות) באמצעות בחירה bioassays. אנו מציגים גם פרוטוקול של bioassays לא-הבחירה כדי לקבוע את הגורמים המשפיעים על ההתנהגויות להתגלמות, שאירים של א grisescens.

הבחירה ו- Bioassays לא-הבחירה ללמוד את העדפה להתגלמות והצלחה הופעתה של Ectropis grisescens

הפרוטוקול הנוכחי מסביר שיטה להזנת אספקה מזוהמת בחומרי הדברה לזחלי הדבורים הבודדות, אוסמיה חופרת. ההליך בוחן את הרעילות האקולוגית של חומר ההדברה לזחלי הדבורים הבודדות.

הערכת ההשפעה של חומרי הדברה על הזחלים של הדבורים הבודדות

שיטה המשתמשת בפירות קפה ירוקים (GFs) פותחה כדי לבחון את הרעילות של קוטלי חרקים נגד בור פירות יער הקפה (CBB). קוטלי חרקים או חומרים רעילים יושמו על GFs מחוטאים לפני או אחרי התפשטות CBB. הוערכו תמותת חרקים, דחייה ויכולת רבייה, בנוסף לפרמטרים אחרים.

מתודולוגיה לבדיקת סוכני בקרה וקוטלי חרקים כנגד היפותנאמוס של ברי ברי הקפה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה ויעילה לזיהוי מטבוליטים של 2,4-דיברומופנול בצמחים.

הבהרת חילוף החומרים של 2,4-דיברומופנול בצמחים

פרוטוקול זה מתאר את בדיקת ההזנה המחייבת להעריך את ההשפעה הרעילה, פוטנציאלית, של פיטוכימיקל על זחלי החרקים הלפידופטרניים. זוהי בדיקה ביולוגית של חרקים בעלת יכולת הרחבה גבוהה, שקל לייעל את המינון התת-קטלני והקטלני, את פעילות ההרתעה ואת ההשפעה הפיזיולוגית. זה יכול לשמש להקרנת קוטלי חרקים ידידותיים לסביבה.

פיתוח מערכת בדיקת האכלה להערכת ההשפעה קוטלת החרקים של פיטוכימיקלים על Helicoverpa armigera

הפרוטוקול מתאר שיטה חדשה להערכת ציטוטוקסיות אינטגרלית של מטבוליטים של חומרי הדברה טריאזולים בצמחים.

הערכת ציטוטוקסיות של מטבוליטים של חומרי הדברה טריאזולים טיפוסיים בצמחים

חקור את מטבוליזם הקוטלנים בשושנת התה Camellia sinensis באמצעות תרבית תאים תלויה. שיטה זו מאפשרת לחקור את התנהגות הקוטלנים בצמחים בצורה מבוקרת ויעילה.

מחקר על חילוף החומרים של שישה קוטלי חרקים מערכתית החדש הוקמה התא תרבות ההשעיה נגזר תה (Camellia Sinensis L.) עלים

גלה סרטונים נוספים