Name: Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Scopri il trapianto renale ortotopico nel ratto con un approccio chirurgico semplificato che migliora la perfusione del rene donatore e riduce il tempo di reperfusione. Questo metodo aumenta la riproducibilità e il successo del trapianto.

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Questo lavoro è stato finanziato da un generoso dono della tenuta di famiglia Bombeck.

Lewis (RT11) e Dark Agouti (da) (RT1Aa) ratti sono stati acquistati da venditori commerciali (vedere la tabella dei materiali). Questi ceppi completamente non corrispondenti a MHC sono spesso usati per studiare il rigetto acuto dell'alloinnesto renale. Tutti gli animali sono stati alloggiati e mantenuti secondo le linee guida nazionali degli istituti di salute (NIH) in una struttura specifica priva di agenti patogeni presso la Johns Hopkins University. Tutte le procedure sono state approvate dal Comitato istituzionale per l'assistenza e l'uso degli animali.
1. procedura di donatore
<ol><li>Preparare e sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici da utilizzare in questa procedura come mezzo di sterilizzazione e utilizzare guanti sterili monouso per prevenire complicazioni infettive.</li>
	<li>Anestetizzare il ratto donatore con l'inalazione di isoflurano (induzione al 3% – 4% e mantenimento all'1% – 2%) per il resto della procedura. Dare a tutti gli animali donatori e riceventi la buprenorfina preemptive per via sottocutanea a 0,1 mg/kg di peso corporeo per l'analgesia.</li>
	<li>Ora, posizionare il ratto in una posizione supina e immobilizzare gli arti con nastro adesivo sterile.</li>
	<li>Utilizzare un tagliatore meccanico per rimuovere i capelli dalla zona addominale.<ol>
<li>Applicare un lubrificante per gli occhi e utilizzare garza sterile imbevuta di povidone-iodio, seguita da garza imbevuta di alcool isopropilico, per sterilizzare il campo chirurgico.</li>
		<li>Prima della prima incisione, assicurarsi che il ratto sia adeguatamente anestetizzato controllando l'assenza del riflesso di astinenza della punta.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzando le forbici, iniziare facendo una grande linea mediana longitudinale della pelle e l'incisione del muscolo dalla sinfisi pube al xiphoid, ed entrare nella cavità peritoneale.</li>
	<li>Inserire due retrattori su entrambi i lati della parete addominale al fine di esporre la cavità intra-addominale.</li>
	<li>Coprire l'intestino con una garza sterile umida e spostarla sul lato destro dell'addome, esponendo l'aorta, la vena cava e il rene sinistro. Applicare 1 mL di soluzione salina preriscaldata con una siringa da 1 CC per mantenere l'intestino e gli organi addominali umidi e a una temperatura normale.<ol>
<li>Applicare una seconda garza umida per coprire e mobilitare lo stomaco e la milza craniale al rene e una piccola garza umida per coprire il rene esposto (Figura 1a).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzare pinze di dissezione microchirurgica per isolare e mobilitare l'arteria renale sinistra e la vena dal tessuto connettivo e l'altro. Isolare la vena renale sinistra cauterizzando la vena gonadica sinistra e isolare l'arteria renale sinistra cauterizzando l'arteria surrenale. Dopo di che, mobilitare l'aorta e vena cava superiore e inferiore del pedicolo renale sinistro dissezione del tessuto connettivo con pinze dissezione (Figura 1B).</li>
	<li>Dividere e mobilitare l'uretere dal tessuto connettivo utilizzando pinze dissezione, e fare un'incisione diagonale a una lunghezza di 2 cm misurata dalla pelvi renale, utilizzando microforbici. Inserire un polsino in poliammide (vedere tabella dei materiali) a metà strada nell'uretere e fissare il polsino posizionando un nodo con 8-0 sutura di seta (Figura 1C). Nota: è importante non rimuovere tutto il grasso e il tessuto connettivo dall'uretere, in quanto forniscono protezione contro l'ostruzione causata da aderenze, e la loro rimozione può causare necrosi ureterale. Prestare particolare attenzione alla conservazione della nave che fornisce ossigeno all'uretere.</li>
	<li>Mobilizzare il rene sinistro separandolo dal grasso perinefrico utilizzando pinze dissezione o microforbici. Lasci la capsula adiposa del rene attaccata e usi quel sito per maneggiare il rene.<ol>
<li>Esporre la vena cava inferiore.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Somministrare 200 unità di eparina utilizzando una siringa con un ago da 27 G attraverso la vena del pene. Esercitare pressione sul sito di iniezione con un batuffolo di cotone per almeno 1 min per prevenire il sanguinamento.</li>
	<li>Identificare la vena del portale (PV) e la vena cava inferiore (IVC) (Figura 1D). Sciacquare il rene iniettando 50 mL di soluzione salina fredda miscelata con 500 unità di eparina nella vena portale utilizzando un ago da 16 G (Figura 1E). Prima del rossore, tagliare la vena cava inferiore a livello infrahepatico e la vena portale caudale al sito di inserimento dell'ago per consentire al sangue di uscire dalla circolazione. Iniziare a sciacquare il rene gradualmente inseguendo la soluzione salina. Osservare un cambiamento di colore del rene dal rosso scuro ad un colore grigio uniforme e pallido (Figura 1F).</li>
	<li>Dopo il rossore, legare l'arteria renale e la vena prossimale all'aorta e alla vena cava e posizionare il rene arrossato in una capsula di Petri in soluzione salina fredda sul ghiaccio. Figura 2 A rappresenta la panoramica schematica della procedura di donatore.</li>
	<li>Una volta che il rene è in soluzione salina fredda, fissare e immobilizzare la maniglia del polsino della vena (vedere la tabella dei materiali) e tirare delicatamente la vena renale attraverso il polsino. Quindi, fissare la vena renale sopra il polsino posizionando tre nodi con sutura di seta a otto zero (Figura 2B). Nota: prestare particolare attenzione all'orientamento della vena, fissandolo in posizione. Le vene ruotate causano un'ostruzione del flusso sanguigno e conducono alla trombosi.</li>
</ol>2. procedura del destinatario
<ol><li>Ripetere i passaggi 1.1 – 1.11 dalla procedura di donatore.</li>
	<li>Posizionare due morsetti atraumatici per microvasi sull'arteria renale sinistra e la vena prossimale all'aorta e alla vena cava (Figura 3a).</li>
	<li>Legare la vena renale ricevente prossimale all'ingresso del rene. Sciacquare la vena renale con una soluzione salina eparinizzata per rimuovere tutto il sangue rimanente dalla nave.</li>
	<li>Far scorrere la vena renale ligata sulla vena renale ammanata precedentemente posizionata nel rene donatore e fissarlo con un 8-0 sutura di seta (Figura 3B). Mantenere lo stesso orientamento posizionale quando si fissano la vena renale sopra il polsino.</li>
	<li>Legare l'uretere a livello del polo inferiore del rene sinistro. Mobilizzare il rene dal grasso perinefrico.</li>
	<li>Legare l'arteria renale prossimale all'ingresso del rene ricevente. Sciacquare con soluzione salina eparinizzata per rimuovere il sangue in eccesso nella nave. Eseguire un'anastomosi end-to-end dell'arteria renale con da 8 a 10 sutura interrotte utilizzando una sutura di nylon 10-0 (Figura 3C). Manovrare l'arteria utilizzando lo strato avventiziale.</li>
	<li>Rimuovere i morsetti del recipiente per riattivare la riperfusione del rene. Iniziare rimuovendo il morsetto sulla vena seguita dal morsetto sull'arteria (Figura 3D). Utilizzare un batuffolo di cotone sterile per esercitare una leggera pressione su tutte le aree che circondano la regione dell'anastomosi. Alcuni minuti dovrebbero essere sufficienti per ottenere un'anastomosi brevettuale.</li>
	<li>Osservare brevemente il rene per valutare la perfusione adeguata. Immediatamente dopo la riperfusione, il rene dovrebbe cambiare colore e ritrovare gradualmente il suo colore rosso scuro naturale dopo pochi minuti (Figura 3E). A volte si osservano la peristalsi visibile dell'uretere e la produzione di urina in loco.</li>
	<li>Terminare inserendo la punta esposta del polsino ureterale nell'uretere ricevente e fissare l'uretere ricevente con un 8-0 sutura di seta (Figura 2C e Figura 3F).</li>
	<li>Al fine di mantenere in posizione il donatore e il ricevente ureteri, legare le estremità di ogni lato dell'uretere l'uno all'altro.</li>
	<li>Facoltativamente, il rene destro può essere nefrectomizzato legando l'arteria renale destra e la vena con una sutura di seta 4-0 e rimuovendo il rene.</li>
	<li>Rimuovere tutte le garza dalla cavità addominale, riportare tutti gli organi alla loro posizione naturale, spruzzare 1 mL di soluzione salina sopra l'intestino per mantenerli umidi e chiudere l'addome utilizzando una sutura assorbibili 4-0 sul muscolo retto e una sutura 4-0 di seta per chiudere la pelle giaceva in modo interrotto.</li>
</ol>3. assistenza postoperatoria
<ol><li>Collocare l'animale in una gabbia pulita con accesso ad acqua e cibo ad libitum e consentire il recupero su un tampone riscaldante di 37 ° c.</li>
	<li>Iniettare 0,1 mg/kg di buprenorfina per via sottocutanea per l'analgesia e monitorare l'animale per il recupero. Ulteriori somministrazione di analgesici può essere necessaria nei prossimi giorni, a seconda dei segni di disagio o dolore. Gli antibiotici non vengono somministrati di routine, poiché le complicanze infettive sono rare.</li>
	<li>Osservare il recupero per 1 – 2 h prima di riportare l'animale alla struttura animale. Ispezionare l'animale 2x – 3x al giorno per le prime 24 ore, seguita da un'ispezione giornaliera. Prestare attenzione ai segni di dolore e angoscia, assunzione orale, e la produzione urinaria.</li>
	<li>Rimuovere i punti 7 – 10 giorni dopo l'operazione.</li>
</ol>

<ol><li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).</li>
<li>Murray, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+%28skin%2C+kidney%2C+heart%29+and+the+plastic+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5), 425-431 (1971).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (6), e238(2007).</li>
<li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+rats%3A+improved+anesthetic+and+surgical+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplant Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li>
<li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e4143(2012).</li>
<li>Lang, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoprivileged+status+of+the+liver+is+controlled+by+Toll-like+receptor+3+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Immunoprivileged status of the liver is controlled by Toll-like receptor 3 signaling.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (9), 2456-2463 (2006).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recruitment+of+host+progenitor+cells+in+rat+liver+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Recruitment of host progenitor cells in rat liver transplants.</a> Hepatology. 49 (2), 587-597 (2009).</li>
<li>Orlando, G., Soker, S., Wood, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operational+tolerance+after+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatolgy%22%5BJournal%5D)">Operational tolerance after liver transplantation.</a> Journal of Hepatolgy. 50 (6), 1247-1257 (2009).</li>
<li>Lodhi, S. A., Lamb, K. E., Meier-Kriesche, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid+organ+allograft+survival+improvement+in+the+United+States%3A+the+long-term+does+not+mirror+the+dramatic+short-term+success%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Solid organ allograft survival improvement in the United States: the long-term does not mirror the dramatic short-term success.</a> American Journal of Transplantation. 11 (6), 1226-1235 (2011).</li>
<li>Engels, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+cancer+risk+among+US+solid+organ+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Spectrum of cancer risk among US solid organ transplant recipients.</a> Journal of the American Medical Association. 306 (17), 1891-1901 (2011).</li>
<li>Kasiske, B. L., Snyder, J. J., Gilbertson, D., Matas, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+after+kidney+transplantation+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus after kidney transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 3 (2), 178-185 (2003).</li>
<li>de Mattos, A. M., Olyaei, A. J., Bennett, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephrotoxicity+of+immunosuppressive+drugs%3A+long-term+consequences+and+challenges+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Kidney+Diseases%22%5BJournal%5D)">Nephrotoxicity of immunosuppressive drugs: long-term consequences and challenges for the future.</a> American Journal of Kidney Diseases. 35 (2), 333-346 (2000).</li>
<li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell-Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression%3A+A+Study+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell-Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: A Study in Rats.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2055-2065 (2016).</li>
<li>Shrestha, B., Haylor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+rat+models+of+chronic+allograft+nephropathy%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nephrology+and+Renovascular+Disease%22%5BJournal%5D)">Experimental rat models of chronic allograft nephropathy: a review.</a> International Journal of Nephrology and Renovascular Disease. 7, 315-322 (2014).</li>
<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+transplantation+of+kidney+allografts+in+sensitized+rats+after+syngeneic+hematopoietic+stem+cell+transplantation+and+fludarabine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Successful transplantation of kidney allografts in sensitized rats after syngeneic hematopoietic stem cell transplantation and fludarabine.</a> American Journal of Transplantation. 14 (10), 2375-2383 (2014).</li>
<li>Grau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Complex-Type+Deposits+in+the+Fischer-344+to+Lewis+Rat+Model+of+Renal+Transplantation+and+a+Subset+of+Human+Transplant+Glomerulopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immune Complex-Type Deposits in the Fischer-344 to Lewis Rat Model of Renal Transplantation and a Subset of Human Transplant Glomerulopathy.</a> Transplantation. 100 (5), 1004-1014 (2016).</li>
<li>Vogelbacher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bortezomib+and+sirolimus+inhibit+the+chronic+active+antibody-mediated+rejection+in+experimental+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Bortezomib and sirolimus inhibit the chronic active antibody-mediated rejection in experimental renal transplantation in the rat.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (11), 3764-3773 (2010).</li>
<li>Fisher, B., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+surgical+techniques+in+research%2C+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li>
<li>Mahabir, R. N., Guttmann, R. D., Lindquist, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+transplantation+in+the+inbred+rat.+X.+A+model+of+%22weak+histoincompatibility%22+by+major+locus+matching%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Renal transplantation in the inbred rat. X. A model of "weak histoincompatibility" by major locus matching.</a> Transplantation. 8 (4), 369-378 (1969).</li>
<li>Wang, J. J., Hockenheimer, S., Bickerstaff, A. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+renal+transplantation+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine renal transplantation procedure.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1150(2009).</li>
<li>Bickerstaff, A. A., Wang, J. J., Pelletier, R. P., Orosz, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+renal+allografts%3A+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li>
<li>Silber, S. J., Crudop, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplantation+in+inbred+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Kidney transplantation in inbred rats.</a> American Journal of Surgery. 125 (5), 551-553 (1973).</li>
<li>D'Silva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+kidney+transplantation+update+with+special+reference+to+vesical+calculi%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Rat kidney transplantation update with special reference to vesical calculi.</a> Microsurgery. 11 (2), 169-176 (1990).</li>
<li>Yin, M., Booster, M. H., Bogaard, A. E. J. M., Kootstra, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+to+harvest+two+kidneys+from+one+donor+rat+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A simple technique to harvest two kidneys from one donor rat for transplantation.</a> Lab Animal. 28 (4), 387-390 (1994).</li>
<li>Lopez-Neblina, F., Toledo-Pereyra, L. H., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrarapid+orthotopic+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Ultrarapid orthotopic technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 274-278 (1994).</li>
<li>Blom, D., Orloff, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+more+versatile+and+reliable+method+for+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">A more versatile and reliable method for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 18 (4), 267-269 (1998).</li>
<li>Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+rapid+technique+for+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">New rapid technique for renal transplantation in the rat.</a> Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).</li>
<li>Kline, R., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+osmolality-low+pH+flush+solutions+improve+renal+transplant+function+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Urology+Research%22%5BJournal%5D)">High osmolality-low pH flush solutions improve renal transplant function in rats.</a> Urology Research. 19 (2), 81-86 (1991).</li>
<li>Fray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+by+which+renin+secretion+from+perfused+rat+kidneys+is+stimulated+by+isoprenaline+and+inhibited+by+high+perfusion+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanism by which renin secretion from perfused rat kidneys is stimulated by isoprenaline and inhibited by high perfusion pressure.</a> The Journal of Physiology. 308, 1-13 (1980).</li>
<li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li>
<li>Pahlavan, P. S., Smallegange, C., Adams, M. A., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplantation+procedures+in+rats%3A+assessments%2C+complications%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Kidney transplantation procedures in rats: assessments, complications, and management.</a> Microsurgery. 26 (5), 404-411 (2006).</li>
<li>Savas, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+transplantation+in+the+rat--a+new+simple%2C+non-suture+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Urology+Research%22%5BJournal%5D)">Renal transplantation in the rat--a new simple, non-suture technique.</a> Urology Research. 13 (2), 91-93 (1985).</li>
<li>Fabre, J., Lim, S. H., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+transplantation+in+the+rat%3A+details+of+a+technique%5BTitle%5D)+AND+%22The+Austalian+and+New+Zealand+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Renal transplantation in the rat: details of a technique.</a> The Austalian and New Zealand Journal of Surgery. 41 (1), 69-75 (1971).</li>
<li>Cameron, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Allografts+Induced+by+Short-Term+Treatment+With+Stem+Cell+Mobilizing+Agents+Result+in+Long-Term+Kidney+Transplant+Survival+Without+Immunosuppression%3A+II%2C+Study+in+Miniature+Swine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chimeric Allografts Induced by Short-Term Treatment With Stem Cell Mobilizing Agents Result in Long-Term Kidney Transplant Survival Without Immunosuppression: II, Study in Miniature Swine.</a> American Journal of Transplantation. 16 (7), 2066-2076 (2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

In questo manoscritto, descriviamo in dettaglio il metodo chirurgico per il KT ortotopico nei ratti, comprese tutte le attrezzature necessarie per eseguire questa procedura (Figura 5). Nel 1965, Fisher e Lee pubblicarono il primo rapporto sul KT in ratti, che divenne l'inizio di un emozionante campo investigativo18. Da allora, sono state introdotte molte modifiche per migliorare la riproducibilità di questo modello. Ha servito come un modello animale efficace per stud...

Storicamente, i primi studi di rigetto del trapianto sono stati eseguiti da Brent e Medawar utilizzando trapianti di pelle nei roditori1. Ben presto divenne chiaro che la pelle ha caratteristiche immunologiche distinte, rendendolo un organo altamente immunogenico che è diverso nel rigetto da altri organi solidi vascolarizzati2. Studi di ratto di rigetto di trapianto di organo solido sono abitualmente limitati a cuore, fegato, e trapianti di rene. Anche se ciascuno di questi organi è adatto a studiare il rigetto, ci sono vantaggi e svantaggi per ciascuno di essi. I trapianti cardiaci sono spesso trapiantati nell'addome e anastomosed all'aorta e alla vena cava, con il cuore nativo del ricevente in posizione3. Questo non ricrea le condizioni cliniche umane, anatomiche e fisiologiche. Inoltre, i cuori sono molto sensibili all'ischemia fredda e devono essere riperfuso preferenzialmente entro 1 h al fine di essere in grado di recuperare la loro funzione4. I trapianti di fegato sono generalmente considerati chirurgicamente più impegnativi e sensibili al tempo per eseguire. Dopo aver rimosso il fegato nativo, il fegato donatore deve essere impiantato e riperfuso entro 30 min come i destinatari non possono durare più a lungo senza un fegato funzionante5. L'arteria epatica, la vena del portale e soprattutto la ricostruzione del dotto biliare richiedono abilità chirurgiche raffinate. Oltre alle sfide chirurgiche, il fegato è noto per possedere proprietà tollerogeniche e roditori e gli esseri umani possono diventare operalmente tolleranti6,7,8. Il rene, a differenza degli organi di cui sopra, può essere trapiantato in modo ortotopico, è noto per essere un organo immunogeno con episodi di rigetto coerenti e riproducibili (se non immunosoppressi), e consente tempi prolungati di ischemia fredda di diversi Ore. Questo rende il trapianto di rene di ratto un modello ideale per studiare il rigetto e la tolleranza dell'alloinnesto.
Il trapianto di rene (KT) è la scelta preferita di trattamento per i pazienti con malattia renale allo stadio terminale. Negli ultimi decenni, i risultati di sopravvivenza a breve termine dopo KT sono migliorati drasticamente, ma i risultati di sopravvivenza a lungo termine sono stagnanti9. I regimi immunosoppressori convenzionali restano la terapia standard anti-rigetto. Tuttavia, l'uso cronico di terapie immunosoppressive provoca morbilità e mortalità significative, come nefrotossicità, diabete e neoplasie secondarie10,11,12. Nel lungo termine, il rigetto cronico di anticorpi e cellulari-mediati minaccia la sopravvivenza del trapianto, con limitate opzioni terapeutiche disponibili.
Un obiettivo importante nel trapianto è l'induzione della tolleranza al trapianto al fine di ovviare alla necessità di immunosoppressione cronica. Il modello di ratto KT è uno strumento robusto per indagare il processo di rigetto immunologico e per valutare nuovi approcci all'immunomodulazione e alla tolleranza al trapianto. Il ratto funge anche da modello adatto per lo studio di rigetto acuto e cronico di cellule e anticorpi mediati13,14,15,16,17. Questo modello chirurgico ha dimostrato di essere uno strumento affidabile, riproducibile e conveniente per studiare vari aspetti del rigetto e della tolleranza dell'alloinnesto. Viene spesso utilizzato per testare nuovi protocolli che inducano la tolleranza prima di intraprendere studi costosi e ingombranti su grandi animali. L'esecuzione di KT in ratti richiede un'ampia formazione chirurgica e competenze per raggiungere tassi di sopravvivenza di > 90%. In questo manoscritto e nel video didattico di accompagnamento, forniamo un contorno passo-passo per il KT ortotopico nel ratto, come eseguito con successo per molti anni presso la nostra istituzione.
Prima di iniziare qualsiasi procedura, la selezione del donatore e del destinatario è critica e dipende dalla natura dell'esperimento. Idealmente, i donatori e i riceventi dovrebbero pesare tra 220 – 260 g ed essere tra 8 – 12 settimane di età. Gli animali sotto 220 g hanno arterie di piccolo diametro, vene e ureteri, rendendo l'anastomosi nel ricevente particolarmente impegnativa. Una minore perdita di sangue può causare ipovolemia e portare alla morte in animali più piccoli. Animali più pesanti di 260 g mostrano più grasso intorno ai loro vasi, e l'isolamento della nave richiederà più tempo operativo e aumentare il tempo di ischemia fredda.

<table><tbody><tr><td>Buprenorfina HCL</td><td>Reckitt Benckiser Healthcare UK</td><td>NDC12496-0757-5</td><td></td></tr><tr><td>Pinze da dissezione, curve</td><td>Zhenbang, Cina</td><td></td><td>11 cm Manico piatto&nbsp;</td></tr><tr><td>Iniezione di eparina sodica USP</td><td>Sagent Pharmaceuticals&nbsp;</td><td>NDC25021-400-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro-pinze, dritto, liscio</td><td>Jingzhong, Cina</td><td>WA3010</td><td></td></tr><tr><td>Micro porta aghi</td><td>Jingzhong, Cina</td><td>WA2010</td><td></td></tr><tr><td>Micro morsetti per vasi</td><td>Jingzhong, Cina</td><td>WA40120</td><td></td></tr><tr><td>Micro forbici a molla 1</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>Micro forbici a molla 2</td><td>F.S.T.</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Micro molla sciccor 3</td><td>Zhenbang, Cina</td><td></td><td>8,5 cm Vannas, curvo</td></tr><tr><td>Prograf (Tacrolimus/FK506)</td><td>Astellas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ratti Charles</td><td>River & Taconic Biosciences&nbsp;</td><td>LEW/Crl & DA-M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio</td><td>Wahl</td><td>79600-2101</td><td></td></tr><tr><td>Sutura 4-0</td><td>Ethicon</td><td>J304H</td><td></td></tr><tr><td>Sutura, 4-0&nbsp;</td><td>Sutura Ethicon</td><td>683G</td><td></td></tr><tr><td>, 10-0&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>2820G</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe & Aghi</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thread, 8-0</td><td>Ashaway</td><td>75290</td><td></td></tr><tr><td>Cuffia ureterale</td><td>Microlumen</td><td>160-1</td><td>Tubo in poliammide, Diametro 0,41 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Cuffia venosa</td><td>Intramedic BD</td><td>7441</td><td>PE-200 Tubo in polietilene non radiopaco ID: 1,4 mm, OD: 1,9 mm</td></tr></tbody></table>

trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Il trapianto di rene offre un aumento dei tassi di sopravvivenza e una migliore qualità della vita per i pazienti con malattia renale allo stadio terminale, rispetto a qualsiasi tipo di terapia sostitutiva renale. Nel corso degli ultimi decenni, il modello di trapianto di rene di ratto è stato utilizzato per studiare i fenomeni immunologici di rigetto e tolleranza. Questo modello è diventato uno strumento indispensabile per testare nuovi farmaci e regimi immunomodulatori prima di procedere con costosi studi preclinici su animali di grandi dimensioni.
Questo protocollo fornisce una panoramica dettagliata su come eseguire in modo affidabile il trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo protocollo comprende tre passaggi distintivi che aumentano la probabilità di successo: perfusione del rene donatore da vampate attraverso la vena portale e l'uso di un sistema di polsino per anastomose le vene renali e ureteri, diminuendo così freddo e caldo tempi di ischemia. Utilizzando questa tecnica, abbiamo raggiunto tassi di sopravvivenza oltre i 6 mesi con la normale creatinina sierica negli animali con trapianti renali singenici o tollerante. A seconda dello scopo dello studio, questo modello può essere modificato da trattamenti pre-o post-trapianto per studiare il rigetto acuto, cronico, cellulare o mediato dagli anticorpi. Si tratta di un modello animale riproducibile, affidabile e conveniente per studiare diversi aspetti del trapianto di rene.

Abbiamo eseguito trapianti di rene singenici (n = 5) e allogenico (n = 5). Gli animali con un trapianto syngeneico hanno raggiunto la sopravvivenza a lungo termine senza alcun trattamento immunosoppressivo. Gli animali che hanno ricevuto un trapianto allogenico senza immunosoppressione hanno respinto il loro innesto e hanno ceduto all'insufficienza renale con una sopravvivenza mediana di 8 giorni (Figura 4a). La creatinina sierica media è aumentata modestam...

Lo scopo di questo manoscritto e protocollo è quello di spiegare e dimostrare in dettaglio la procedura chirurgica del trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo metodo è semplificato per ottenere la corretta perfusione del rene donatore e abbreviare il tempo di riperfusione utilizzando la tecnica di anastomosi del polsino venoso e ureterale.

Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Il nostro laboratorio alla Johns Hopkins ha eseguito piccoli trapianti di reni e fegato di animali con oltre due decenni di esperienza. Questo protocollo specifico delinea i passaggi critici necessari per eseguire con successo il trapianto di rene ortotopico nei ratti. Per aumentare la probabilità e la riproducibilità del successo, il nostro protocollo include tre passaggi distintivi, la perfusione del rene donatore attraverso la vena portale e l'uso di un sistema di polsini per anastomosi le vene renali e gli ureteri.A dimostrare questa procedura sarà il Dr.Le Qi, uno studente laureato nel nostro laboratorio. Per iniziare questa procedura, anestetizza il ratto donatore come descritto nel protocollo di testo. Posizionare il topo in posizione supina e immobilizzare gli arti con nastro adesivo sterile.Applicare un lubrificante per gli occhi e sterilizzare il campo chirurgico come descritto nel protocollo di testo. Prima della prima incisione, assicurarsi che il ratto sia adeguatamente anestetizzato controllando l'assenza del riflesso di prelievo del dito del dito. Usando le forbici, inizia facendo una grande incisione longitudinale della pelle e del muscolo dalla sinfisi pubica allo

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Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

Qui, presentiamo un protocollo per studiare l'immunologia del rigetto. Il modello chirurgico presentato riporta un breve tempo operatorio e una tecnica concisa. A seconda della combinazione di ceppo donatore-ricevente, il rene trapiantato può sviluppare rigetto cellulare acuto o danno cronico da allotrapianto, definito da fibrosi interstiziale e atrofia tubulare.

Mouse trapianto renale: Modelli di Allograft Rifiuto

L'obiettivo di questo manoscritto è descrivere i passaggi necessari per eseguire un trapianto di rene in un topo, prestando particolare attenzione ai dettagli dell'anastomosi arteriosa.

Rene Murine Tecnica trapianto

I modelli suini di trapianto di organi forniscono un'importante piattaforma per studiare i meccanismi di conservazione degli organi. Questo articolo descrive un modello eterotopico di autotrapianto di rene suino, che consente di studiare nuovi approcci per migliorare l'esito del trapianto utilizzando innesti renali marginali.

Eterotopico renale Autotrapianto in un modello di suino: un protocollo Step-by-Step

Questo documento fornisce dettagli tecnici per il trapianto di rene assistito da robot da un donatore vivente.

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Un modello semplificato per il trapianto di valvole cardiache eterotopiche nei roditori

Questo protocollo presenta una nuova tecnica chirurgica di trapianto di rene di topo incentrata su una strategia di anastomosi arteriosa modificata. Viene anche presentata una tecnica di sutura vascolare che include un metodo di anastomosi uretere-vescica semplice e più sicuro. Queste modifiche riducono i tempi di operazione e migliorano il tasso di successo della procedura di trapianto di rene di topo.

Una tecnica chirurgica modificata per il trapianto di rene nei topi

Il modello di trapianto renale ortotopico di ratto contribuisce a studiare il meccanismo di rigetto dell'allotrapianto renale. Il modello attuale aumenta la sopravvivenza dei riceventi senza interferenze con l'afflusso di sangue e il reflusso venoso della parte inferiore del corpo utilizzando un'anastomosi end-to-end dell'impianto renale e un metodo "tunnel" end-to-side di anastomosi uretere-vescica.

Un modello di trapianto renale ortotopico di ratto per il rigetto dell'allotrapianto renale

Questo protocollo descrive la perfusione a macchina normotermica ex vivo di un rene di ratto per il successivo trapianto in un ratto ricevente.

Perfusione di Macchine Normothermiche dei Reni di Topo per Trapianto

Scopri il trapianto renale ortotopico nel ratto con un approccio chirurgico semplificato che migliora la perfusione del rene donatore e riduce il tempo di reperfusione. Questo metodo aumenta la riproducibilità e il successo del trapianto.

Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

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