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DOI: 10.3791/59481-v
Vanessa Gil1,2,3,4, José Antonio Del Río1,2,3,4
1Molecular and Cellular Neurobiotechnology, Institute for Bioengineering of Catalonia (IBEC), The Barcelona Institute of Science and Technology (BIST),Parc Científic de Barcelona, 2Department of Cell Biology, Physiology, and Immunology,Universitat de Barcelona, 3Center for Networked Biomedical Research on Neurodegenerative Diseases (CIBERNED), 4Institute of Neuroscience,University of Barcelona
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study provides a method for analyzing the behavior of growing axons in three-dimensional matrices that simulate their natural development. The protocol focuses on understanding axonal guidance and neuronal migration during neurodevelopment, enabling researchers to observe the influence of specific molecules.
Qui, forniamo un metodo per analizzare il comportamento degli assoni in crescita in matrici 3D, imitando il loro sviluppo naturale.
Questo metodo è utile per analizzare il ruolo di alcune molecole nella guida assonale e nella migrazione neuronale durante lo sviluppo del neuro sistema. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'analisi dei risultati è rapida e semplice e non richiede software complesso che implicherebbe molta formazione per i ricercatori. A dimostrare la procedura sarà Mirian Segura-Feliu, un tecnico del nostro laboratorio e me stesso.
Per iniziare la piastra 200,000 cellule COS-1 in 35 millimetri piastre di Petri e incubare con mezzo di coltura completo in un incubatore di coltura cellulare al fine di leggere la confluenza dal 70 all'80% durante la notte. Il giorno seguente, per trasfetto le cellule COS-1 con il DNA che codifica per la molecola candidata usando il metodo di trasfezione a base di liposoma. Mescolare prima 250 microlitri di mezzo privo di siero e da uno a 2 microgrammi di DNA in un tubo di centrifuga da 1,5 millilitri e incubare a temperatura ambiente per cinque minuti.
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