Name: Identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Impara a identificare e dissezionare i diversi depositi di tessuto adiposo nel topo, inclusi BAT, WAT sottocutaneo, viscerale e popliteo. Questo protocollo standardizzato facilita analisi istologiche e di espressione genica.

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O.A.M. è supportato da sovvenzioni NIH DK062876 e DK092759; D.P.B. è supportato dal programma di formazione per gli scienziati medici dell'Università del Michigan (T32GM007863), dal programma di formazione dell'Università del Michigan in Organogenesi (T32HD007605), dalla borsa di studio per il merito di Rackham e dalla Tylenol Future Care Fellowship.

<ol><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li>
<li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+lineages%3A+tracing+back+the+origins+of+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li>
<li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SnapShot%3A+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li>
<li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li>
<li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+Beige+Fat%3A+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li>
<li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li>
<li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Adipose+Tissue+Atlas%3A+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099(2014).</li>
<li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+regulation%2C+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li>
<li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+Adipose+Tissue%3A+Trimming+the+Fat%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li>
<li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+white+adipose+tissue%3A+a+new+component+of+the+thermogenic+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li>
<li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+Adipocytes%3A+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li>
<li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li>
<li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+Fat%3A+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li>
<li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li>
<li>Kloppenburg, A. I. -F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis%3A+the+infrapatellar+fat+pad%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research & Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li>
<li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization%2C+Identification%2C+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174(2014).</li>
<li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li>
<li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li>
<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes%2C+and+Essential+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li>
<li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808(2015).</li>
<li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li>
<li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084(2013).</li>
<li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+%28IMAT%29+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230(2015).</li>
<li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li>
<li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones%3A+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128(2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Poiché l'importanza delle diverse caratteristiche molecolari e funzionali dei cluster di adipociti discreti è sempre più riconosciuta, è fondamentale che i ricercatori all'interno del campo identifichino uniformemente ed estincano depositi adiposi per ulteriori analisi. Ad oggi, esistono pochi protocolli per la localizzazione standardizzata e l'isolamento della vasta gamma di depositi adiposi del topo. I metodi pubblicati in precedenza si concentrano principalmente su uno o due depositi e mancano dei dettagli necessari p...

I tessuti adipose svolgono un ruolo fondamentale nell'omeostasi di tutto il corpo, compreso lo stoccaggio e il rilascio di energia in risposta alle esigenze locali e globali, alla termoregolazione e alla secrezione di adipochine per regolare l'equilibrio energetico, il metabolismo e le risposte immunitarie1 , 2. Gli adipociti sono distribuiti in tutto il corpo in depositi discreti, e in alcuni casi svolgono ruoli specializzati all'interno dei loro microambienti3,4,5. Storicamente, lo studio del tessuto adiposo si è centrato sul tessuto adiposo bianco (WAT), e il suo ruolo nel mantenimento dell'energia omeostasi. La maggior parte degli adipociti sono distribuiti in tutto il corpo in depositi WAT sottocutanei e viscerali. Le caratteristiche di questi depositi sono importanti per la suscettibilità differenziale alle malattie metaboliche. Gli adipociti sottocutanei, situati sotto la pelle, sono stati associati a effetti metabolici protettivi5. Gli adipociti viscerali, che circondano gli organi vitali e sono contenuti all'interno dei depositi gonadi, perirenali, retroperitoneali, omentali e pericardiali, sono comunemente legati a disturbi metabolici, tra cui il diabete di tipo 2 e le malattie cardiovascolari2 . Anche i tessuti adiposi bruni (BAT) sono stati studiati a fondo. Gli adipociti marroni e marroni esprimono la proteina disaccoppiamento 1 (UCP1) e svolgono un ruolo importante nella termostasi adattiva e nell'omeostasi del glucosio6,7. Gli adipociti bruni classici sono contenuti nel deposito BAT interscapular8. Grappoli di adipociti bruni si trovano anche in altri luoghi, tra cui supraclavicolari, infra/subscapular, cervicale, paravertebrali e depositi periaortici8,9.
Oltre alla loro posizione nei principali depositi WAT e BAT, gli adipociti esistono in nicchie discrete in tutto il corpo4, dove possono svolgere funzioni specializzate all'interno dei loro rispettivi microambienti. Ad esempio, il tessuto adiposo del midollo osseo (BMAT) funge da serbatoio lipidico, è una fonte importante di adipologina circolante e interagisce strettamente con osteoblasti, osteoclasti e cellule ematopoietiche10,11. Gli adipociti dermici contribuiscono a processi diffusi, tra cui la guarigione delle ferite, la risposta immunitaria, la termoregolazione e la crescita del follicolo pilifero12,13. Inoltre, gli adipociti epicardici possono produrre diverse adipochine e chemiochine che esercitano effetti locali e sistemici sullo sviluppo e la progressione della malattia coronarica14. L'espansione del WAT inter/intramuscolare è stata positivamente correlata con una maggiore adiposità, resistenza all'insulina sistemica, e diminuzione della forza muscolare e della mobilità15. Inoltre, gli adipociti poplyali servono come serbatoio lipidico per l'espansione linfatica durante l'infezione16. Mentre i ruoli specifici di diversi depositi articolari sono generalmente sconosciuti, il deposito di Hoffa (infrapatellar) all'interno del ginocchio è ora pensato per contribuire alle patologie, tra cui dolore al ginocchio anteriore e osteoartrite17.
Mentre le differenze regionali nel carattere e nella funzione degli adipociti sono oggetto di intenso studio, il campo è attualmente limitato dalla mancanza di un protocollo standardizzato per l'identificazione e la dissezione di diversi depositi di topi. I metodi pubblicati in precedenza hanno tipicamente descritto l'isolamento di uno o due depositi specifici e non hanno il livello di dettaglio richiesto per l'escissione uniforme18,19. Il protocollo descritto in questo manoscritto fornisce una guida completa per le posizioni anatomiche specifiche e le fasi di isolamento di molti diversi depositi adiposi del topo. Anche se i depositi WAT sono l'obiettivo principale di questo manoscritto, l'escissione di BAT interscapular è anche descritta in dettaglio. I tessuti Adipose ascisi utilizzando questo protocollo possono essere utilizzati per un'ampia varietà di endpoint sperimentali, tra cui studi sulle espiante, istologia e analisi dell'espressione genica.
L'obiettivo di questo manoscritto è quello di fornire agli investigatori un protocollo dettagliato per identificare e isolare in modo chiaro e preciso sia i depositi adiposi del topo prominenti che quelli meno studiati (Figura 1). Questa risorsa faciliterà un'indagine più completa delle caratteristiche dello sviluppo, molecolari e funzionali degli adipociti all'interno di nicchie diverse.
<img alt="Diagramma anatomico dei roditori che mostra le posizioni del tessuto adiposo; i dettagli includono pericardico, omentale, WAT." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: Rappresentazione schematica dei depositi adiposi del topo sezionati in questo protocollo. Questa immagine è stata adattata da Bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table><tbody><tr><td>Formalina tamponata neutra al 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-110-869</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 24 pozzetti, non trattate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3738</td><td></td></tr><tr><td>etanolo al 70% (diluito dal 95%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-226</td><td></td></tr><tr><td>Pinza da dissezione con punte curve</td><td>VWR</td><td>89259-946</td><td></td></tr><tr><td>Padella da dissezione</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td></td><td></td>629004</tr><tr><td>Forbici da dissezione (punta affilata/smussata)</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Spugne di garza</td><td>Vitality Medical</td><td>2634</td><td>Curity 4 pollici x 4 pollici spugna di garza, 12 strati</td></tr><tr><td>Handi-Pins per dissezione</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>629132</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per iride (diritte)</td><td>VWR</td><td>470018-890</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>VetOne</td><td></td><td></td>501017</tr><tr><td>Bisturi</td><td>VWR</td><td>100499-578</td><td>Manico per bisturi in piuma con lama, monouso</td></tr></tbody></table>

identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

I tessuti adipose sono organi complessi con una vasta gamma di funzioni, tra cui lo stoccaggio e la mobilitazione dell'energia in risposta alle esigenze locali e globali, il disaccoppiamento del metabolismo per generare calore e la secrezione di adipochine per regolare l'omeostasi di tutto il corpo e risposte immunitarie. La ricerca emergente sta identificando importanti differenze regionali nei profili di sviluppo, molecolari e funzionali degli adipociti situati in depositi discreti in tutto il corpo. Diverse proprietà dei depositi sono rilevanti dal punto di vista medico poiché le malattie metaboliche spesso dimostrano effetti specifici del deposito. Questo protocollo fornirà agli sperimentatori una dettagliata guida anatomica dell'atlante e di dissezione per l'identificazione e l'escissione riproducibili e accurate di diversi tessuti adipose del topo. La dissezione standardizzata dei depositi adipose discreti consentirà di confrontare dettagliatamente le loro caratteristiche molecolari e metaboliche e i contributi agli stati patologici locali e sistemici in varie condizioni nutrizionali e ambientali.

L'identificazione e l'isolamento di vari depositi adipose del topo possono essere raggiunti utilizzando il protocollo descritto in precedenza. Le posizioni anatomiche lorde dei depositi sottocutanei (A, E-F), marrone (B), viscerali (C, D, G-J) e popliteal (K) sono mostrate nella Figura 2.
<img alt="Immagini di dissezione anatomica; Marcatura degli organi interni, studio della biologia educativa, mor...

Gli adipociti esistono in depositi discreti e hanno ruoli diversi all'interno dei loro microambienti unici. Poiché vengono scoperte le differenze regionali nel carattere e nella funzione degli adipociti, l'identificazione standardizzata e l'isolamento dei depositi sono fondamentali per l'avanzamento del campo. Qui, vi presentiamo un protocollo dettagliato per l'escissione di vari depositi adiposi del topo.

Identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Una metodologia standardizzata per identificare e sezionare i depositi adiposi in tutto il corpo è fondamentale per lo studio delle differenze nel carattere e nella funzione degli adipociti all'interno di nicchie anatomiche discrete. Il principale vantaggio di questa tecnica è che è un metodo affidabile e accurato per identificare ed eccitare depositi di adiposi di roditori comuni e meno studiati. Per l'identificazione e l'isolamento della BAT interscapulare, utilizzare le forbici dell'iride per tagliare orizzontalmente lungo il bordo inferiore del tessuto sottocutaneo anteriore di un topo eutanasiato seguendo il bordo naturale del deposito.Effettuare due incisioni verticali lungo i bordi laterali del deposito seguendo i bordi naturali del tessuto. Utilizzare le forcelle per capovolgere attentamente il deposito per rivelare il tessuto adiposo marrone interscapulare a forma di farfalla incorporato nel tessuto adiposo bianco. Quindi sezionare attentamente il BAT lontano dalla WAT circostante.Conservare i tessuti adiposi in contenitori appropriati per l'analisi a valle. Per l'identificazione e l'isolamento della WAT sottocutanea posteriore, posizionare il mouse in posizione supina e fissare gli arti dell'animale. Utilizzare le flessioni per sollevare la pelle alla base dello sterno e fare un'incisione cutanea di un millimetro.Inserire una lama delle forbici dell'iride nel taglio e fare un'incisione della pelle della linea mediana da quattro a cinque centimetri a partire dalla base dello sterno e salendo alla base della coda. Successivamente, fare due incisioni orizzontali di un centimetro nella parte superiore dell'incisione verticale iniziale che si estende lateralmente dalla linea mediana. Utilizzare le forcep per sbucciare con cura la pelle dalla cavità peritoneale, utilizzare la gamba per localizzare la WAT sottocutanea posteriore che dovrebbe rimanere associata alla pelle.Pin la pelle tesa e asportare completamente il deposito triangolare inguinale WAT dalla base dell'arto posteriore ventralmente attraverso l'inguine. Per l'identificazione e l'isolamento del deposito WAT viscerale, utilizzare le pinze per sollevare la sottile parete della cavità peritoneale alla base dello sterno e fare un'incisione di un millimetro nel tessuto tendato. Inserire una lama delle forbici dell'iride nel taglio e fare un'incisione verticale discendente da quattro a cinque centimetri dalla parte superiore della cavità peritoneale al retto.Fare due incisioni orizzontali di un centimetro nella parte superiore e inferiore dell'incisione verticale che si estende lateralmente dalla linea mediana e utilizzare le forcep per sbucciare il peritoneo per esporre il contenuto della cavità addominale. Quindi inchiodare il peritoneo teso alla padella di dissezione per raccogliere i depositi WAT contenuti all'interno della cavità peritoneale. Per l'identificazione e l'isolamento della WAT gonadale viscerale, individuare le gonadi e utilizzare le pinze per sollevare la WAT gonadale associata, quindi utilizzare le forbici dell'iride per asportare con cura il WAT dalle gonadi.Per asportare il deposito perirenale, localizzare il rene e utilizzare le forcelle per sollevare il tessuto renale. Tirare il rene verso la linea mediana per vedere una chiara divisione tra i depositi perirenali e retroperitoneali e asportare la WAT direttamente associata ai reni. Quindi rimuovere le ghiandole surrenali situate sopra i reni dalla WAT.Per l'identificazione e l'isolamento wat retroperitoneale, sollevare nuovamente il rene alla linea mediana e utilizzare le forbici dell'iride per sezionare attentamente il WAT retroperitoneale dalla parete peritoneale posteriore. Per isolare la WAT poplitea, posizionare la rotula contro la padella di dissezione facendo attenzione che la fossa poplitea nella parte posteriore del ginocchio sia rivolta verso l'alto. Utilizzare le forbici dell'iride per rimuovere con cura la pelle dalla base dell'arto posteriore al piede.Usa le forbici dell'iride per fare un taglio al bordo inferiore delle teste mediali e laterale del muscolo gastrocnemio, usa le forcep per sollevare il muscolo per rivelare il deposito pompite triangolare. Quindi usa le forbici dell'iride per asportare il deposito lungo i bordi dei tessuti naturali. Qui vengono mostrate le posizioni anatomiche lorde dei depositi sottocutanei, marroni, viscerali e poplitei del topo.Le caratteristiche istologiche dei depositi di adiposo subcutaneo, marrone, viscerale, popliteale, costitutivo e regolato del midollo, intramuscolari e infrapatellari possono essere valutate mediante protocolli standard di colorazione ematossilina ed eosina. I tessuti adiposi isolati usando questo protocollo possono essere utilizzati per un'ampia varietà di endpoint sperimentali tra cui analisi istologiche, studi molecolari e analisi dell'espressione genica e proteica. La standardizzazione sul campo dell'identificazione di diversi depositi di adiposi ci aiuterà senza dubbio a comprendere meglio le loro caratteristiche molecolari e metaboliche e i loro contributi differenziali agli stati patologici locali e sistematici.

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In questo video, dimostriamo la procedura chirurgica per isolare il tessuto adiposo bianco sottocutaneo e il tessuto adiposo bruno interscapolare da un topo appena nato.

Raccolta del deposito adiposo bianco e marrone dal cucciolo di topo: una procedura chirurgica per raccogliere il tessuto adiposo bianco e il tessuto adiposo bruno dal cucciolo di topo

Grazie al collegamento drastica e negativa tra obesità e altre patologie concomitanti, la ricerca sul adiposo giochi di ruolo nella malattia e la salute generale è garantito. Presentiamo un protocollo per l'isolamento e l'escissione di depositi adiposi consentano lo studio della adiposo usare in situ e metodi in vitro.

Localizzazione, identificazione, e l&#39;escissione dei Depositi Murine adipose

Il tessuto adiposo (AT) può influenzare l'omeostasi di tutto il corpo, quindi è importante comprendere i meccanismi molecolari della differenziazione e della funzione degli adipociti. Forniamo un protocollo per ottenere nuove informazioni su questi processi analizzando l'omeostasi degli adipociti, la differenziazione e l'esposizione all'ipossia come modello per l'apoptosi indotta degli adipociti.

Meccanismo di regolazione dei numeri adipociti in organismi adulti attraverso la differenziazione e l&#39;apoptosi omeostasi

Lo scopo di questa carta è di presentare una procedura dettagliata per raccogliere diversi tessuti adiposi bianchi dai topi, trattare i campioni di grasso ed estrarre RNA.

Accumulazione del tessuto adiposo del mouse ed elaborazione per l'analisi del RNA

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Qui, descriviamo un metodo semplice, economico e veloce per risolvere la struttura 3D del tessuto adiposo bianco e topo umano utilizzando una combinazione di marcatori per visualizzare vascolatura, nuclei, cellule immunitarie, neuroni e proteine del mantello di goccia lipidi mediante imaging fluorescente.

Esplorazione della struttura dei tessuti adiposa mediante la compensazione methylsalicylate e l'imaging 3D

Questo rapporto descrive un protocollo per l'isolamento simultaneo dei preadipociti primari marroni e bianchi dai topi appena nati. Le cellule isolate possono essere coltivate in coltura e indotte a differenziarsi in adipociti bianchi e marroni completamente maturi. Il metodo consente la caratterizzazione genetica, molecolare e funzionale delle cellule adipose primarie in coltura.

Isolamento e differenziazione dei preadipociti bianchi e marroni primari dai topi appena nati

Questo protocollo descrive un metodo per la dissezione dei depositi adiposi di topo e l'isolamento e la digestione delle rispettive arterie per liberare e quindi identificare la popolazione di cellule endoteliali. Le cellule appena isolate utilizzate nelle applicazioni a valle faranno progredire la comprensione della biologia delle cellule vascolari e dei meccanismi della disfunzione vascolare.

Isolamento e identificazione di cellule endoteliali vascolari da depositi adiposi distinti per applicazioni a valle

I preadipociti sono isolati dalla frazione vascolare stromale del tessuto adiposo bruno interscapolare di topi neonati e differenziati in cellule che accumulano goccioline lipidiche, esprimono marcatori molecolari e mostrano la morfologia mitocondriale degli adipociti bruni maturi. Queste cellule vengono ulteriormente analizzate mediante immunofluorescenza e microscopia elettronica a trasmissione.

Differenziazione e imaging di adipociti marroni dalla frazione vascolare stromale del tessuto adiposo interscapolare da topi neonati

In questo articolo, forniamo una procedura pratica per la dissezione e l'esecuzione di analisi istologiche e di espressione genica del tessuto adiposo bruno sopraclavicolare murino.

Dissezione, elaborazione istologica e analisi dell'espressione genica del tessuto adiposo bruno sopraclavicolare murino

Le dimensioni e la fragilità degli adipociti maturi hanno limitato le tecniche e gli strumenti disponibili per il loro studio e isolamento. Qui viene descritto un protocollo per l'isolamento di adipociti murini maturi, che può essere facilmente adattato a diversi depositi adiposi e diete di topi.

Isolamento e coltura di adipociti murini primari da topi magri e obesi

Impara a identificare e dissezionare i diversi depositi di tessuto adiposo nel topo, inclusi BAT, WAT sottocutaneo, viscerale e popliteo. Questo protocollo standardizzato facilita analisi istologiche e di espressione genica.

Identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse

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