Name: 세균성 병원체 지방산 을 막 인지질로 통합하는 연구를 위해 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 59 s
Description: 학습하세요 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자를 분리하여 Staphylococcus aureus의 세균성 막에 지방산 통합을 연구하는 방법을. 질량 분석법을 활용한 이 프로토콜은 세균 지질체 연구에 효과적인 접근법을 제공합니다.

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우리는 원고와이 작품의 지원에 대한 비판적 평가에 대한 해머 연구소의 회원들에게 감사드립니다. 콜로라도 의과 대학의 알렉스 호스윌 박사는 친절하게 AH1263을 제공했습니다. 미시간 주립 대학의 크리스 워터스 박사는 시약을 제공했습니다. 이 작품은 미국 심장 협회 보조금 16SDG30170026 및 미시간 주립 대학에 의해 제공 된 창업 기금에 의해 지원되었다.

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S. 아우레우스는 외인성 지방산을 막 인지질27,32,43에통합합니다. 외인성 지방산을 이용한 인지질 합성은 FASII 억제를 우회하지만 또한 막27,32,44의생물물리학적 특성을 변화시킵니다. 그람 양성 병원균의 인지질에 외인성 지방산을 혼입시키는 것은 잘 문서화되어 있지만, 3가지 주요 포도상 구균 인지질 유형각각에 대한 호스트 지방산 저장소의 정체성과 구조적 변이에 대한 간격은 남아 있습니다. 외인성 지방산 혼입으로 인한 결과입니다. 여기에서, 우리는 고용될 수 있는 프로토콜을 기술합니다: i) 닭 계란 노른자, 지방산의 근원에서 LDL 입자를 풍부하게 하고, ii) S...

메티실린 내성 S. 아우레우스(MRSA)는 헬스케어 관련 감염의 주요 원인이며 관련 항생제내성은 상당한 임상적 과제1,2,3이다. 따라서 새로운 치료 전략의 개발이 높은 우선 순위입니다. 그람 양성 병원체에 대한 유망한 치료 전략은 지방산 합성을 억제하는 것입니다, 막 인지질 생산을위한 요구 사항, S. 아우레우스에서,인산 을 포함 (PG),리실 -PG, 및 심장 리핀 4. 박테리아에서, 지방산 생산은 진핵 대응과 상당히 다른지방산 합성 II 통로 (FASII) 5를 통해 발생하며, FASII를 항생제 개발을위한 매력적인 표적으로 만들기5,6 . FASII 억제제는 주로 지방산 탄소 사슬 신장에 필요한 효소인 FabI를 표적으로7. 이 파비 억제제 트리클로산은 소비재 및의료기기 8,9에광범위하게 사용된다. S. 아우레우스 감염 의 치료를 위한 여러 제약 회사에 의해 추가 FabI 억제제가 개발되고 있다10,11, 12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. 그러나, S. 아우레우스를포함한 많은 그람 양성 병원체는 인지질 합성을 위한 외인성 지방산을 청소할 수 있으며, FASII 억제를 우회하여27,28,29. 따라서, FASII 억제제의 임상적 잠재력은 숙주 지방산의 공급원및 병원체가 숙주27,28로부터지방산을 추출하는 메커니즘에 대한 우리의 지식에 상당한 차이로 인해 논의된다. 이러한 격차를 해소하기 위해 지단백질 입자에서 외인성 지방산이 S. 아우레우스의막 인지질에 통합되는 것을 모니터링하는 편견없는 지질 분석 방법을 개발했습니다.
패혈증 동안, 숙주 지단백질 입자는 대부분의 숙주 지방산이 입자(30)와 연관됨에 따라, 혈관 내 숙주유래 지방산의 잠재적인 공급원을 나타낸다. 지단백질은 중성지방과 콜레스테롤 에스테르31의소수성 코어를 둘러싸는 인지질과 단백질로 구성된 친수성 껍질로 구성됩니다. 지단백질의 4개의 주요 종류 - chylomicron, 아주 저밀도 지단백, 고밀도 지단백 및 저밀도 지단백 (LDL)-는 지질 수송 차량으로 호스트에 의해 생성되고, 지방산과 콜레스테롤을 전달합니다 혈관을 통해 세포를 숙주. LDL은 트리글리세라이드와 콜레스테롤 에스테르 를 포함한 에스테르화 지방산이 풍부하다31. 우리는 이전에 고도로 정제된 인간 LDL이 PG 합성을 위한 외인성 지방산의 실행 가능한 근원이다는것을, 따라서 FASII 억제제 우회(32)를 위한 기계장치를 제공한다는 것을 입증했습니다. 인간 LDL을 정화하는 것은 기술적으로 어렵고 시간이 많이 소요될 수 있으며, 정제된 인간 LDL의 상업적 공급원은 일상적으로 사용하거나 대규모 세균 성 스크린을 수행하는 데 엄청나게 비쌉합니다. 이러한 한계를 해결하기 위해 지단백질 입자(33)의 풍부한 공급원인 닭달걀 노른자로부터LDL을 농축하는 절차를 수정했습니다. 우리는 성공적으로 S. 아우레우스32의막에 인간 LDL 파생 된 지방산의 혼입을 모니터링하기 위해 비표적, 고분해능 / 정확한 질량 분석및 탠덤 질량 분석법을 사용했다. 이전에 보고된 방법과는 달리, 이 접근법은 3가지 주요 포도상 구균 인지질 유형에 대해 각각의 개별 지방산 이성미를 정량화할 수 있다. 올레산(18:1)은 S. 아우레우스 인지질29,30,32에쉽게 통합되는 모든 숙주 지단백질 입자 내에 존재하는 불포화 지방산이다. S. 아우레우스는 올레산합성(29)을할 수 없다; 따라서, 인지질 통합 올레산의 양은 포도상 구균 막(29)내에서 숙주 지단백질 유래 지방산의 존재를 확립한다. 이러한 인지질 종은 여기에 기술된 최첨단 질량 분석 법에 의해 식별될 수 있으며, 지방산 공급원의 존재 상태에서 배양된 S. 아우레우스의 막 조성에 대한 전례 없는 분해능을 제공할 가능성이 높습니다. 감염 중 만남.

<table><tbody><tr><td>황산 암모늄</td><td>피셔</td><td>BP212R-1</td><td>&ge; 99.5% 순수</td></tr><tr><td>세포 배양 인큐베이터</td><td>Thermo</td><td>MaxQ 6000</td><td></td></tr><tr><td>Centrafuge</td><td>Thermo</td><td>75-217-420</td><td>Sorvall Legen XTR, 로터 F14-6x250 LE</td></tr><tr><td>Costar 분석 플레이트</td><td>Corning</td><td>3788</td><td>96 웰</td></tr><tr><td>여과지</td><td>Schleicher & Schuell</td><td>597</td><td></td></tr><tr><td>Large chicken egg</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Common store bought egg</td></tr><tr><td>Microplate spectrophotometer</td><td>BioTek</td><td>Epoch 2</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>S. aureus strain AH1263</td><td>N/A</td><td>N/A</td> 콜로라도 대학교 투석 튜빙 Pierce 68700 7,000<td>의 Alex Horswill 제공</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> MWCO</td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Becton, Dickison and Company</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>0.5mm 산화지르코늄 비드</td><td>Next Advance</td><td>ZROB05</td><td></td></tr><tr><td>총알 블렌더</td><td>Next Advance</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>메탄올(LC-MS 등급)</td><td>Fisher</td><td>A4561</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름(시약 등급)</td><td>Fisher</td><td>MCX10559</td><td></td></tr><tr><td>이소프로판올(LC-MS 등급)</td><td>Fisher</td><td>A4611</td><td></td></tr><tr><td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td><td>Avanti 극성 지질</td><td>850345C-25mg</td><td></td></tr><tr><td>암모늄 바이카보네이</td>트 <td>시그마</td><td>9830</td><td>&ge; 99.5% 순수</td></tr><tr><td>포름산암모늄</td><td>Sigma</td><td>70221-25G-F</td><td></td></tr><tr><td>Xcalibur 소프트웨어</td><td>Thermo Scientific</td><td>OPTON-30801</td><td></td></tr><tr><td>LTQ-Orbitrap Velos 질량</td>분석기 <td>Thermo Scientific</td><td></td><td>고해상도/정밀 질량 MS</td></tr><tr><td>Agilent 1260 모세관 HPLC</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SpeedVac 진공 농축기</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

세균성 병원체 지방산 을 막 인지질로 통합하는 연구를 위해 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자의 분리

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

황색포도상구균 및 그밖 그람 양성 병원체는 막 인지질로 환경에서 지방산을 통합합니다. 감염 도중, 외인성 지방산의 대다수는 호스트 지단백질 입자 내의 존재합니다. 불확실성은 숙주 지방산의 저장소와 박테리아가 지단백질 입자에서 지방산을 추출하는 메커니즘에 관해서는 남아 있습니다. 이 작품에서는 닭 달걀 노른자에서 저밀도 지단백 (LDL) 입자를 농축하고 LDL이 S. 아우레우스의지방산 저장소역할을 하는지 여부를 결정하는 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 편견없는 지질 분석과 닭 LDL을 악용, LDL과 박테리아 사이의 상호 작용의 탐구를위한 효과적이고 경제적 인 모델. LDLs에서 외인성 지방산의 S. 아우레우스 통합의 분석은 박테리아의 지방산 조성의 특성화를 가능하게 하는 고분해능/정확한 질량 분광법 및 탠덤 질량 분광법을 사용하여 수행됩니다. LLDLs에 노출시 세균막 지질에서 발생하는 지방산의 새로운 조합의 막과 편견 없는 식별. 이러한 고급 질량 분석 기술은 인지질에 통합된 특정 외인성 지방산을 밝혀지방산 혼입의 비교할 수 없는 관점을 제공합니다. 여기에 설명 된 방법은 다른 세균성 병원체 와 복잡한 지방산의 대체 소스의 연구에 적응할 수 있습니다.

닭 계란 노른자에서 LDL의 농축을위한 프로토콜은 그림1에 도시되어 있습니다. 이 과정은 전체 달걀 노른자를 식염수로 희석시키고 LDL을 함유하는 수용성 또는 혈장 분획으로부터 과립으로 지칭되는 달걀 노른자 고형물을 분리하는 것으로 시작된다(도1)33. 혈장 분획의 LDL 함량은 ~ 30-40 kDa β-livetins의 침전에의해 더욱 농축된다 (도 2)33. 140, 80, 65, 60 및 15 kDa에서 단백질 밴드의 존재는 LDL의아포단백질과 상관관계가 있다 (도 2)33,3...

이 방법은 복잡한 숙주 공급원에서 세균막, 특히 황색포도상구균에외인성 지방산의 통합을 연구하기위한 프레임 워크를 제공합니다. 이를 달성하기 위해, 닭 계란 노른자및 질량 분석법을 활용하는 세균성 인지질의 후속 지방산 프로파일링에서 지단백질 입자의 농축을위한 프로토콜이 설명된다.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

이 프로토콜은 복잡한 숙주 소스에서 세균막, 특히 포도상 구균에 외인성 지방산의 통합을 연구하기위한 프레임 워크를 제공합니다. 이 프로토콜은 닭고기 달걀 노른자에서 분리된 편견없는 지방분석과 지단백 입자를 복합 지방산의 경제적 원천으로 활용하여 지방산이 세균지질에 편입된 정량화합니다. 여기에서 설명하는 질량 분광법 기술은 포도상 구균 지질의 지방산 프로필의 비교할 수 없는 관점을 제공하지만, 다른 세균성 막을 연구하기 위하여 적응될 수 있습니다.이 프로토콜을 수행할 때 LDL 함유 분획을 식별하고 유지하기 위해 각 분별 단계를 수행해야 합니다. 플라즈마 분획에서 암모니아 황산염을 제거하는 것은 LdL의 하류 응용 프로그램에 매우 중요합니다.먼저, 멸균 인산염 완충식식염 30밀리리터로 두 번 달걀 노른자 2개를 세척하여 잔류 알부민을 제거합니다. 멸균 파이펫 끝으로 바이텔린 멤브레인을 뚫고 멤브레인의 내용물을 멸균 50 밀리리터 원심분리관으로 배출합니다. pH 7에 약 24~30밀리리터 또는 17개의 어금니 나트륨 염화나트륨 용액을 달걀 노른자에 넣고 적극적으로 섞습니다.그런 다음 튜브를 흔들 쉐이커에 놓고 섭씨 4도에서 60분 동안 섞습니다. 10°C에서 10도, 000배에서 45분간 달걀 노른자 희석을 원심분리합니다. 상체 플라즈마 분획을 멸균 50 밀리리터 원문 튜브로 옮기고 펠릿 과립 분획을 남깁니다.그리고 원심 분리기 다시. 먼저, 플라즈마 분획을 흔들 셰이커 또는 이와 유사한 장치에 40° 질량 부피 퍼센트 황산암모늄을 60분 동안 혼합합니다. pH를 조정한 후, 혈장 분획을 섭씨 4도, 000시간 g에서 45분간 원심분리합니다.상부 반고체 노란색 분획을 7킬로달톤 모공 크기 투석 튜브로 제거합니다. 튜브에 최소 25%의 여분의 공간을 제공하여 팽창할 수 있도록 합니다. 투석 튜브를 3리터의 초순수수에 두어 밤새 섭씨 3도에서 투석을 하여 황산암모늄을 제거합니다.투석 후, 원심분리는 이전에 설명한 대로 섭씨 4도에서 용액을 원심분리합니다. 상고체 노란색 분획을 멸균 튜브로 조심스럽게 제거하고 섭씨 4도에 보관하십시오. 문화의 하룻밤 배양 후, 2 개의 멸균 250 밀리 리터 당황 플라스크에 500 마이크로 리터를 전송 1 %tryptone 국물의 49.5 밀리리터를 포함하는.섭씨 37도에서 약 4시간 동안 배양하여 중간 단계에 도달합니다. 25 밀리리터 단위로 100밀리리터 배양을 4개의 멸균 50 밀리리터 원심분리기 튜브로 옮기고 4개의 튜브를 10, 000배 g에서 펜틀릿으로 전달합니다. 상체를 제거하고 1 %tryptone 국물의 750 마이크로 리터에서 각 세포 펠릿을 다시 중단합니다.4개의 750 마이크로리터 세포 현탁액을 단일 15 밀리리터 튜브에 결합합니다. 그리고 6개의 멸균 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브로 세포 현탁액의 350 마이크로리터를 알리쿼트. 파이펫을 사용하여 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브에 30 마이크로리터를 추가하여 원하는 최종 농도를 5%이고 4시간 동안 흔들리는 섭씨 37도에서 배양합니다.원심 분리는 2 분 동안 16, 000 배 g에서 섭씨 4도에서 문화를 원심분리합니다. 그리고 세척멸균 인산염 완충식염식염의 330 마이크로리터에서 세포 펠릿을 다시 중단한다. 이 세척을 한 번 더 반복하십시오.빈 튜브의 무게를 빼서 6개의 젖은 세포 펠릿의 무게를 기록합니다. 스냅 드라이 아이스에 셀 펠릿을 동결. 먼저 각 셀 펠릿 위에 5mm 지르코늄 산화물 구슬 한 스쿱을 넣습니다.75%HPLC 급 메탄올740 마이크로리터를 각 튜브에 직접 영하 80도까지 냉각시 넣습니다. 그런 다음 50 마이크로 몰라 디미리스토틸 인스티딜 콜린의 두 마이크로 리터를 내부 표준으로 추가합니다. 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브를 함유한 샘플을 총알 블렌더 조직 균질화기의 사용 가능한 포트에 넣습니다.저속으로 샘플을 균질화합니다. 3분 동안 2~3분 간 설정합니다. 균질성을 위해 샘플을 시각적으로 검사합니다.세포의 덩어리가 보이는 경우, 2 분 단위로 총알 블렌더에서 균질화를 계속합니다. 다음으로 화학 연기 후드의 각 샘플에 270 마이크로리터의 클로로폼을 추가합니다. 30 분 동안 적극적으로 샘플을 소용돌이.원심 분리기는 벤치 상단 원심분리기에서 최소 2, 000배의 최소 30분 동안 샘플을 원심분리합니다. 화학 연기 후드에서 단면 상체를 수집하고 추출 튜브의 바닥에있는 단백질 펠릿을 조심스럽게 피하면서 새로운 테스트 튜브로 옮김하십시오. 이전에 준비된 희석지질 추출물을 적절한 자동 샘플러 바이알로 옮김합니다.유동 분사 기반 분석을 위해 자동 샘플러 바이알을 모세관 유동 응용 분야의 온도 제어 자동 샘플러에 배치합니다. 원고에 따라 HPLC 시스템을 설정합니다. 용액은 HPLC 이송 라인에서 질량 분광계로 방출되어 저유동 34 게이지 금속 바늘이 장착된 전기 분무 이온화 소스를 통해 소개된다.Thermo Tune Plus 계측기 제어 소프트웨어에서 이온화 전압을 4, 000 볼트 및 칼집 가스를 5로 설정합니다. 마찬가지로 모세관 온도를 섭씨 150도로 설정하고 S 렌즈를 정의 스캔 버튼을 50%로 클릭하고 분석기 메뉴에서 FTMS를 선택합니다. 질량 범위 필드를 정상으로 설정하고 해상도 필드에서 100, 000을 선택합니다.검사 유형이 가득 찼습니다. 스캔 범위 메뉴에서 첫 번째 질량 필드에 200을 입력하고 마지막 질량 필드에 2, 000을 입력합니다. 관찰된 질량 정확도를 추가로 정의한 후 총 이온 크로마토그램에서 넓은 피크를 가로질러 신호를 평균합니다.질량 스펙트럼 보기 창에서 엄지 손가락 아이콘을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 스펙트럼 목록을 봅니다. 동일한 메뉴에서 디스플레이 옵션을 선택한 다음 디스플레이 메뉴의 모든 피크 토글 박스를 선택합니다. 보기 창을 닫기 위해 확인 버튼을 클릭합니다.질량 스펙트럼 보기 창에서 엄지 손가락 아이콘을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 내보내기 클립보드 정확한 질량을 선택합니다. 첫 번째 워크시트의 내보낸 데이터 셀 A1을 새 Excel 스프레드시트에 붙여 넣고 원고에 따라 진행합니다. 정확한 질량 기반 지질 식별을 수행하려면 LIMSA 소프트웨어를 엽니다.기본 메뉴에서 스펙트럼 유형 메뉴에서 피크 목록을 선택합니다. 질량 분석 데이터를 획득한 극성에 맞게 양수 모드 또는 음수 모드를 선택합니다. 최대 너비의 절반과 z 창 위에 피크 전체 너비에서 원하는 질량 검색 창을 입력하여 피크 찾기를 찾습니다.이 프로토콜에서, 플라즈마 분획의 LDL 함량은 30~40킬로달톤 베타 레비틴의 강수량에 의해 더욱 농축되었다. 140, 80, 65, 60 및 15 킬로달톤의 단백질 밴드의 존재는 LDL의 배분 단백질과 상관 관계가 있습니다. 트리클로산치료로 는 지방산이 없는 배지에서 포도상 구균의 성장을 억제한다.외인성 지방산 소스로 계란 노른자 플라즈마와 문화를 보충 하는 동안 트리클로산 유도 성장 억제를 극복. 마찬가지로, 농축 된 달걀 노른자 LDL트리클로산 처리 문화의 보충은 성장을 복원. 또한, 달걀 노른자 LDL의 첨가는 이전에 특징지어진 S.aureus 지방산, 보조의 성장을 지원합니다.프리 지방산 함량은 유동 주입 고해상도 정확한 질량 분석법을 사용하여 1%트립톤 국물 또는 닭달걀 노른자 LDL로 측정하였다. 무료 지방산의 최소 한량이 발견되었다. 직교 부분 최소 제곱은 풍부한 포도상 구레나귀 막 인지질의 차별 적 분석을 입증, 치료되지 않은 닭고기 달걀 노른자 LDL 치료 조건의 지방산 조성과 함께, 명확한 클래스 분리를 입증.닭 달걀 노른자에서 LdL의 농축세균병원균과 숙주 지단백질 사이의 상호 작용을 조사하기 위한 복잡한 지방산의 저렴 한 소스를 제공 합니다. 지질 추출물의 제조에 사용되는 클로로폼과 메탄올은 위험합니다. 화학 연기 후드에 이러한 시약을 사용하고 모든 폐기물 스트림을 포함해야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

출처: Armbruster, KM, Meredith, TC 질량 분석법에 의한 구조 결정을 위한 박테리아 지단백질의 농축 및 N-말단 리포펩티드의 제조. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 온열 시 상 분리를 거치는 비이온성 세제를 사용하여 박테리아 지단백질을 농축하는 방법을 보여줍니다. 순차적인 온도 변화와 원심분리 단계를 통해 지단백질은 세제 상으로 선택적으로 분할되는 반면 비지단백질 오염 물질은 제거됩니다. 그런 다음 농축된 지단백질을 침전, 세척 및 다운스트림 응용 분야를 위해 재현탁됩니다.

비이온성 세제 상 분리를 사용한 박테리아 지단백질 농축

그람 음성 박테리아 지질 다당류 (LPS)의 지질 도메인의 분리 및 특성은 세포 표면 항생제 내성의 기반 메커니즘, 세균의 생존과 건강, 어떻게 화학적으로 다양한 지질 분자 종은 차등 호스트 타고난 면역 반응을 조절에 대한 통찰력을 제공합니다.

그람 음성 박테리아에서 분리 및 지질의 화학 특성

1)에서 세포 지질 방울을 분리 효모 세포, 2) 인간의 태반이 제시하는 두 가지 기술. 두 절차의 핵심은 방울을 함유하는 생성 된 부동 층은 쉽게 눈에 의해 시각을 추출하고, 순도에 대한 웨스턴 블롯 분석에 의해 정량화 될 수있는 밀도 구배 원심 분리된다.

세포 지질 방울의 분리 : 효모 세포와 인간의 태반에서 시작 두 정화 기술

Caco-2 세포는 지질 및 지용성 약물/비타민의 장세포세포 수송을 연구하기 위한 시험관 내 모델로 사용할 수 있습니다. 투과성 멤브레인 시스템은 정점과 기저측 구획을 분리하는 반면, 렌티바이러스 발현 시스템은 효과적인 유전자 과발현 방법을 제공합니다. 지단백질의 분리는 TEM에 의해 확인됩니다.

소장에 의해 지질 전송을 연구하기 위해 카코 2 셀을 사용하여

마이크로 RNA는 중요한 조절 역할을하고 다양한 인간 질병에 대한 새로운 치료 대상으로 떠오르고있다. miRNAs의 고밀도 지단백질에 수행되는 것을 도시하고있다. 우리는 빠른 속도로 인간 혈장에서 miRNA의 분석에 적합한 정제 HDL을 분리하는 간단한 방법을 개발했다.

고도로 정제 된 고밀도 지단백질에서의 miRNA의 높은 넣어 관통 분리에 대한 신속하고 단순화 된 방법

비 이온 계면 활성 제 단계 분할 메서드를 사용 하 여 세균성 단백질의 농축 TLR 분석 실험에 직접 사용 또는 다른 응용 프로그램에 대 한 설명 합니다. 추가 단계 구조 특성에 대 한 N 맨끝 tryptic lipopeptides를 준비 하는 질량 분석에 의해 자세히 나와 있습니다.

세균성 단백질 질량 분석에 의하여 구조 결심에 대 한 N 맨끝 Lipopeptides의 준비의 농축

이 프로토콜 지질 작은 물방울 고립과 확고 바인딩과 그물 격리 키트를 사용 하 여 마우스 간에서 정화의 새로운 방법을 설정 합니다.

음 세포 기관이 격리 키트를 사용 하 여 급속 한 지질 작은 물방울 격리 프로토콜

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본 프로토콜은 육계 배아에서 지방 조직으로부터 지방전구세포를 단리하는 간단한 방법을 기술한다. 이 방법은 고수율, 일차 배양 및 지방전구세포의 아디포제닉 분화로 단리를 가능하게 한다. Oil Red O 염색 및 지질/DNA 염색은 분화 배지로 유도된 분리된 세포의 아디포겐 능력을 측정했습니다.

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식이 지질 흡수 및 유미미크론 분비의 생체 내 동역학을 정량화하기 위한 마우스의 흐르는 장간막 림프의 분리

본원에서, 우리는 전체 인간 혈장 또는 혈청에 존재하는 고밀도 지단백질(HDL)에 의해 지질 공여자 입자로부터 특이적으로 제거된 형광 인지질의 양을 측정하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 HDL 기능의 이 지표가 발생 심혈관 질환을 예측한다는 것을 보여주었습니다.

고밀도 지단백질 특이적 인지질 유출 분석

학습하세요 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자를 분리하여 Staphylococcus aureus의 세균성 막에 지방산 통합을 연구하는 방법을. 질량 분석법을 활용한 이 프로토콜은 세균 지질체 연구에 효과적인 접근법을 제공합니다.

세균성 병원체 지방산 을 막 인지질로 통합하는 연구를 위해 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자의 분리

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