Name: Robust osufilazione modello di Murine Periodontitis per la valutazione dei neutrofili orali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Scopri il modello di periodontite murina indotta da legatura per studiare i neutrofili orali. Questa tecnica aumenta il volume dei tessuti gengivali infiammati disponibili per l'analisi, riducendo l'uso di animali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

J. W. C. è supportato dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR). Gli autori desiderano ringraziare la dott.ssa Chunxiang Sun per la sua assistenza nell'esecuzione della colorazione blu trypan.

Tutti gli studi murine rispettavano i pertinenti regolamenti etici e sono stati approvati dall'Università di Toronto Animal Care Committee e dal Research Ethics Board (Protocollo 20011930).
1. Installazione della legatura
NOTA: Questa è una procedura chirurgica non sterile che può essere eseguita in una sala operatoria standard. L'uso di animali privi di germi (non qui trattato) impone la manipolazione all'interno di un armadio di biosicurezza, l'uso di strumenti sterili e l'inoculazione della cavità orale con patogeni parodontali per causare le manifestazioni cliniche della parodontite.
<ol><li>Somministrare l'anestesia intraperitoneale a 8-12 topi C57BL/6 maschi di una settimana, che dovrebbero essere acclimatati alla loro struttura abitativa, utilizzando un ago ipodermico sterile da 0,5" G e una siringa da 1 mL secondo le linee guida approvate del comitato di cura e di utilizzo degli animali (IACUC). NOTA: Una combinazione di anestetici chetamina (100 mg/kg) e xylazina (10 mg/kg) induce rapidamente e in modo affidabile il livello appropriato di anestesia per tutta la durata della procedura.</li>
	<li>Valutare la profondità anestetica prima e ogni 15 minuti durante la procedura, come evidenziato dalla perdita del riflesso del pedale.</li>
	<li>Posizionare il mouse su una piattaforma chirurgica riscaldata (Figura 1A). Stabilizzare la mascella e mandibole in posizione aperta utilizzando elastici e sostenere il collo con un rotolo di cotone per aiutare a mantenere la mascella in un orientamento più orizzontale (Figura 1B). Coprire il corpo e la coda dell'animale per mitigare la perdita di calore durante la procedura.</li>
	<li>Posizionare il microscopio chirurgico all'ingrandimento e all'illuminazione desiderati (se non montato direttamente al microscopio) sopra la cavità orale per la visualizzazione della dentizione. Mentre l'ingrandimento desiderato dipende dall'operatore, la visualizzazione ottimale della cavità orale si ottiene a 16x.</li>
	<li>Installare una sutura sterile di seta intrecciata 5-0 intorno al primo (M1) e al secondo (M2) molari mascellanti all'interno del solco gengivale utilizzando pinze scheggiate. NOTA: suture di seta intrecciate di un misuratore più piccolo possono essere utilizzate per facilitare un'installazione più rapida e ridurre la possibilità di danni ai tessuti molli iatrogenici.<ol>
<li>Posizionare la coda distale della sutura sul lato palatale della dentizione e inserire il segmento prossimale tra il contatto di M2 e M3 (Figura 2A).</li>
		<li>Avvolgere la sutura intorno alla superficie buccaliale di M2 e inserirla tra il contatto di M1 e M2. Assicurarsi che entrambe le estremità della sutura siano tirate strettamente per guidare la sutura nel solco gengivale e rimuovere tutto il margine di flessibilità (Figura 2B).</li>
		<li>Avvolgere il segmento di sutura prossimale intorno a M1, sotto la sua altezza di contorno, e inserirlo tra il contatto di M1 e M2. Tirare la coda prossimale della sutura ermeticamente per guidare la sutura nel solco gengivale e rimuovere tutto il allentamento (Figura 2C). NOTA: Se si osserva resistenza quando si inserisce la sutura tra M1 e M2 o M2 e M3, il contatto potrebbe essere leggermente aperto utilizzando un esploratore dentale standard.</li>
		<li>Legare le estremità della sutura con un nodo di chirurgo e tagliare le code il più corto possibile. Collocare il nodo nell'embrasure gingivale tra M1 e M2 sul lato palatale della dentizione mascellare (Figura 2D). NOTA: i passaggi da 1.4.1– 1.4.4 possono essere ripetuti sul lato contralaterale, se necessario.</li>
		<li>Sterilizzare gli strumenti chirurgici in uno sterilizzatore di perline di vetro caldo tra ogni soggetto animale. INFORMATIVA: Le punte delle pinze sono estremamente affilate e possono facilmente causare traumi orali e sanguinamento significativo. Preparare piccoli segmenti di garza per rimuovere il sangue dalla cavità orale e applicare pressione alle ferite sanguinanti attivamente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dopo l'installazione di legatura, rimuovere il mouse dall'apparato chirurgico, posizionare in una gabbia pulita sotto una lampada termica e monitorare fino a quando non completamente recuperato.</li>
	<li>Ospita singolarmente ogni topo con l'adeguato arricchimento ambientale e consenti l'accesso al libitum all'acqua filtrata e al manicomio di cibo in un ambiente controllato dalla temperatura e dall'umidità (ciclo scuro di 12 ore di luce/12 h) per 7-11 giorni. NOTA: La chow del purè riduce le forze necessarie per la masticazione riducendo così il dolore associato all'alimentazione e aiuta a prevenire la perdita prematura della legatura installata.</li>
</ol>2. Raccolta di campioni
<ol><li>Topi eutanasi secondo le linee guida Approvate IACUC. NOTA: l'eutanasia individuale che utilizza una cameraco2 seguita da lussazione cervicale è il metodo preferito per questo protocollo. Questo può essere modificato a seconda di esperimenti che richiedono la raccolta di tessuti aggiuntivi.</li>
	<li>Utilizzando una pipetta, sciacquare immediatamente la cavità orale con 100 gradi l di salina sterilizzata 4C 1x priva di fosfato (PBS) senza calcio e magnesio per 10 s.</li>
	<li>Ripetere il passaggio 2.2 2x e posizionare ogni risciacquo in una singola provetta sterile in polipropilene conico da 15 ml.</li>
	<li>Trasferire il contenuto in una provetta sterile in polipropilene conico da 50 ml eseguendoli attraverso un filtro a rete di nylon da 40 m.</li>
	<li>Trasferire questi contenuti in una nuova provetta sterile in polipropilene conico da 15 mL. NOTA: il trasferimento finale del campione su un tubo più piccolo consente la migliore visualizzazione del pellet cellulare nei passaggi imminenti.<ol>
<li>Se lo si desidera, rimuovere la legatura molare (s) e mettere in 300 L di sterilizzato 1x PBS (4 gradi C, senza calcio e magnesio) in un separato 15 mL conico polipropilene sterile test camera. Agitare delicatamente e rimuovere la sutura dal tubo. Questo campione viene trattato in modo identico al campione di risciacquo orale da questo punto in avanti.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aggiungere 33,3 litri di paraformaldeide (PFA) del 16% per facilitare la fissazione del campione.</li>
	<li>Vorticare i campioni immediatamente e incubare sul ghiaccio per 15 min.</li>
	<li>Riempire il tubo a 15 mL con 1x PBS per diluire PFA, quindi centrifugare a 1000 x g e 4 gradi C per 5 min.</li>
	<li>Aspirare il supernatante e risospendere il pellet in 1 mL di buffer di smistamento cellulare attivato a fluorescenza (FACS) a 4 gradi centigradi. Contare le celle su un emocitometro o un contatore cellulare automatizzato.</li>
	<li>Centrifugare nuovamente il campione a 1000 RCF e 4 gradi centigradi per 5 min.</li>
	<li>Aspirare il supernatante e risospendere il pellet in un volume appropriato di buffer FACS per una concentrazione finale di 0,5–1,0 x 106 celle/50 l di buffer FACS.</li>
</ol>3. Colorazione anticorpale per l'analisi citometrica del flusso
NOTA: Etichettare e raffreddare tutti i tubi FACS necessari prima dell'uso.
<ol><li>Aggiungete 1 - L di siero di ratto e 2 -L di anticorpo IgG anti-topo a 50 l del campione, vortice immediatamente, e blocco sul ghiaccio per 20 min.</li>
	<li>Aggiungere gli anticorpi appropriati ad ogni campione, vortice immediatamente, e incubare sul ghiaccio per 30 min al buio. NOTA: la selezione e i volumi degli anticorpi dipendono da esperimenti pilota di ottimizzazione preliminari su misura per questa tecnica specifica.</li>
	<li>Lavare i campioni con 1 mL di tampone FACS, vortice brevemente e centrifugando per 5 min a 1000 x g e 4 gradi centigradi. Ripetere questo passaggio 2x.</li>
	<li>Risospendere i campioni in 250 , l di tampone FACS, tubi di copertura con pellicola di paraffina, avvolgere in un foglio di alluminio, e tenere a 4 gradi centigradi fino all'analisi. NOTA: È ideale analizzare i campioni entro poche ore dal completamento del protocollo a causa della perdita di segnale fluorescente durante lunghi periodi di conservazione. Tuttavia, i campioni possono essere analizzati 2-3 giorni dopo, se assolutamente necessario.</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L'elemento più critico associato all'uso del modello di parodontite indotta dalla legatura murina è centrato intorno alla ritenzione della legatura fino al momento del sacrificio o della rimozione intenzionale. La legatura biofilm-retentiva installata è in grado di indurre una significativa perdita di altezza ossea alveolare in appena 6 giorni, plateauing tra il periodo di 11-16 giorni39. La decisione di sacrificare i soggetti animali prima del periodo massimo di perdita ossea, rendendo questo mod...

La malattia parodontale (PD) è una condizione osteolitica associata a una significativa morbilità dell'ospite e onere economico, che si manifesta con infiammazione gengivale e perdita sia dell'attaccamento dei tessuti molli che del supporto osseo per la dentizione interessata1,2,3,4. Questo processo è regolato dalle interazioni tra il microbiota orale e il sistema immunitario innato dell'ospite. È anche associato con esacerbazione di altre malattie infiammatorie sistemiche tra cui il diabete, malattie cardiovascolari, e il cancro5,6,7,8. Storicamente, è stato ipotizzato che la patogenesi della PD dipende da grandi quantità di batteri specifici come Porphyromonas gingivalis9. Tuttavia, prove recenti suggeriscono che la componente microbica della PD è mediata dal biofilm dentale. Il biofilm è una comunità organizzata e complessa di numerosi microrganismi che possono esistere in sani stati simbiotici e distruttivi disbiotici10,11. Il biofilm orale normalmente offre resistenza all'ospite impedendo la creazione di foci di batteri patogeni e promuove la struttura e la funzione del tessuto gengivale ideale attraverso la regolazione della risposta immunitaria dell'ospite12,13. Le perturbazioni della relazione equilibriosa tra gli organismi commensali all'interno della cavità orale e il sistema immunitario ospite possono portare ad alterazioni dell'omeostasi dei tessuti, con conseguente disbatteriosi e sviluppo del segno distintivo delle comparse cliniche e radiografiche di PD5,10,12,13,14.
È interessante notare che la creazione di una disbatteriosi orale, sebbene necessaria per l'avvio della PD, non è sufficiente per guidare la PD in tutti gli individui, eludendo verso la capacità della risposta immunitaria dell'ospite di sovvertire la transizione del microbiota tra stati simbiotici e disbiotici15. Questo pone un particolare riflettore sui mezzi attraverso i quali la PD influenza uno dei principali caratteri del sistema immunitario innato, vale a dire il granulocito polimorfonucleare (PMN), o neutrofilo, da prospettive locali e sistemiche16,17.
Nell'uomo, le PNN vengono reclutate dalla circolazione ad un tasso di 2 x 106 cellule/h nei tessuti connettivi parodontali sani, dove sono la popolazione di leucociti predominante. Qui, vengono successivamente espulsi dal solco gengivale nella cavità orale come componente del liquido crevicolare gengivale. In presenza della PD, la neutrofilia si manifesta all'interno della circolazione e della cavità orale, dove queste cellule eftori possiedono un fenotipo iperinfiammatorio che porta alla suddetta distruzione del parontium17,18,19,20,21,22. Pertanto, comprendere il ruolo delle PMN nella PD e in altre condizioni infiammatorie sistemiche è della massima importanza.
Anche se è ampiamente riconosciuto che le malattie croniche sono reciprocamente legate alla PD, i meccanismi sottostanti devono ancora essere chiariti, contribuendo a difficoltà nella gestione di queste condizioni sistemiche morbose e potenzialmente fatali. Diversi modelli animali sperimentali, ciascuno con vantaggi e svantaggi unici, sono stati utilizzati per studiare la fisiopatologia del PD23,24. Concentrandosi in particolare sui modelli murini, ci sono una varietà di protocolli attraverso i quali lo studio della PD è facilitato; tuttavia, essi possiedono diverse carenze tecniche e fisiologiche25,26,27,28,29,30,31.
In primo luogo, il modello di topo gavage orale richiede numerose inoculazioni orali di patogeni parodontali umani per generare infiammazione gengivale e perdita ossea. Inoltre, è generalmente preceduto da un periodo di trattamento antibiotico per sovvertire la flora orale murinacommensale 25. Questo modello spesso richiede una formazione specializzata per eseguire in modo sicuro il gavage orale, utilizza solo una piccola frazione di patogeni parodontali dal più complesso microbioma orale umano e richiede diversi mesi per stabilire la perdita ossea alveolare.
Al contrario, i modelli murini indotti chimicamente utilizzano la consegna orale di acido solforico trinitrobenzene (TNBS) o sodio solfato dextran (DSS), agenti comunemente utilizzati nella creazione di modelli murini di colite per un periodo di diversi mesi per indurre la perdita ossea periodoontale26. Sono disponibili modelli a base di ascesso intraorale ed extraorale, che coinvolgono rispettivamente gli incisivi murini e i tessuti del dorsum e il calvario. Nel modello precedente di ascesso, vengono somministrate diverse iniezioni di batteri, creando ascessi gingivali multipli e una carenza di perdita ossea alveolare, limitando il loro uso nello studio della PD. Questi ultimi modelli di ascesso sono significativamente più adatti allo studio della virulenza batterica, dell'infiammazione e del riassorbimento osseo in siti al di fuori della cavità orale, che elimina la valutazione del paroto e del microbioma orale27,28,29,30,31.
Utilizzando il modello indotto dalla legatura della parodontite, una sutura di seta intrecciata è stata comunemente installata ciferenzialmente intorno al secondo molare. In alternativa, è possibile inserire un singolo segmento lineare di materiale di sutura tra il primo e il secondo molari32,33. L'obiettivo del posizionamento della legatura è quello di facilitare l'accumulo batterico e generare disbiosi all'interno del sulci gengivale, con conseguente infiammazione del tessuto parodontale e distruzione dei tessuti che compongono il parodonto. In particolare, questo modello è in grado di produrre significativamente più perdita ossea alveolare rispetto al modello di gavage orale più comunemente usato34. A complicare ulteriormente l'uso del modello di gavage orale è la resistenza naturale da parte di diversi ceppi di topi (cioè C57BL/6) allo sviluppo della perdita ossea alveolare. Questo è anche problematico, in quanto questo ceppo è il più frequentemente utilizzato nella ricerca animale a base di murini35.
Le procedure esistenti descritte da Marchesan et al. e Abe e Hajishengallis sono state ideate per semplificare l'atto tecnico di collocare la legatura33,36. Purtroppo, il primo protocollo richiede attrezzature specializzate stampate in 3D e possiede il potenziale per la perdita prematura delle legature, aumentando così l'uso degli animali e i costi associati al tempo aggiuntivo trascorso in sala operatoria. Inoltre, entrambi i protocolli generano solo piccole regioni del parodonto malato disponibili per uno studio.
I vantaggi che si trovano con questa tecnica sono radicati nello studio simultaneo della disbiosi orale e dell'immunologia che governano il parodonto, l'utilizzo di animali a basso costo con diversi background genetici e semplici pratiche abitative e allevamento. Come tale, gli obiettivi dovrebbero essere di massimizzare i volumi di tessuto malato e, nel tentativo di praticare i principi di riduzione della ricerca animale, ridurre il consumo di animali a un livello il più basso possibile. Ciò richiede che tutti gli animali siano in grado di essere inclusi nelle analisi sperimentali37. Tuttavia, va notato che non importa quale modello animale della malattia parodontale viene utilizzato, non esiste un singolo modello che comprenda ogni elemento della fisiopatologia della PD.
Questo nuovo protocollo impiega il posizionamento di una legatura intorno a più denti molari mascellare utilizzando strumentazione e materiali che si trovano all'interno della maggior parte dei laboratori. Permette una quantità sufficiente di tempo per installare facilmente e con sicurezza una legatura che è improbabile che si amvulsi prematuramente. Infine, poiché le PMN coordinano la distruzione del parodonto nella PD, viene presentata anche una nuova metodologia per recuperare i neutrofili orali in modo analogo agli esseri umani.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-topo F4/80</td><td>BioLegend</td><td>123131</td><td>BV421, clone BM8</td></tr><tr><td>Anti-topo Ly6G Anticorpo</td><td>BD</td><td>560602</td><td>PerCP-Cy5.5, clone 1A8</td></tr><tr><td>C57BL/6 topi maschi</td><td>Charles River</td><td></td> da <td>8 a 12 settimane di età</td></tr><tr><td></td><td>FroggaBio</td><td>TB15-500</td><td>15 mL</td></tr><tr><td>provetta da centrifuga conica</td><td>FroggaBio</td><td>TB50-500</td><td>50 ml</td></tr><tr><td>FACS Buffer</td><td>Multiplo</td><td></td><td>1% BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)</td></tr><tr><td>FACSDiva</td><td>BD</td><td></td><td>v8.0.1</td></tr><tr><td>Fibre-Lite</td><td>Dolan-Jenner</td><td></td><td>Modello 180</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>Tree Star</td><td></td><td>v10.0.8r1</td></tr> Pompa per terapia <tr><td>del calore</td><td>Hallowell</td><td></td><td>HTP-1500</td></tr><tr><td>Sterilizzatore per perline di vetro caldo</td><td>Microscopia elettronica Sciences</td><td>66118-10</td><td>Germinatore 500</td></tr><tr><td>Forbici dell'iride</td><td>Almedic</td><td>7602-A8-684</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td> pura <td>Vetochinolo</td><td></td><td>100mg/mL</td></tr><tr><td>LSRFortessa</td><td>BD</td><td></td><td>X-20</td></tr><tr><td>Siero di topo</td><td>Sigma</td><td>M5905-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Filtro a rete di nylon</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-547</td><td>40 & micro; m</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>16% (p/v),</td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato</td> senza metanolo <td>Sigma</td><td>D1408-500ML</td><td>senza CaCl2 e MgCl2, 10</td></tr><tr><td>siringhe monouso in plastica</td><td>BD</td><td>309659</td><td>1 ml di</td></tr><tr><td>siero di ratto</td><td>Sigma</td><td>R9759-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Sutura</td> <td>in setaCovidien</td><td>SS652</td><td>C13 USP 5-0</td></tr><tr><td>Pinze per schegge</td><td>Almedic</td><td>7726-A10-700</td> <td># 1</td></tr><tr><td>Pinze per schegge</td><td>Almedic</td><td>7727-A10-704</td> <td># 5</td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione stereo</td><td>Carl Zeiss</td><td>28865</td><td>Photo-Zusatz</td></tr><tr><td>Ago ipodemico sterile</td><td>BD</td><td>305111</td><td>26G x 1/2"</td></tr> <tr><td>Siringa</td><td>BD</td><td>309659</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Rompun</td><td></td><td>20mg/mL</td></tr></tbody></table>

robust osufilazione modello di murine periodontitis per la valutazione dei neutrofili orali

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

I principali vantaggi dello studio della fisiopatologia della malattia parodontale utilizzando modelli murini sono la riduzione del costo degli animali, la gamma di ceppi geneticamente modificati, il gran numero di analisi che possono essere eseguite su tessuti molli e duri raccolti. Tuttavia, molti di questi sistemi sono oggetto di critiche procedurali. In alternativa, può essere impiegato il modello di malattia parodontale indotta dalla legatura, guidata dallo sviluppo localizzato e dalla ritenzione di un microbioma orale disbiotico, che è rapidamente indotto e relativamente affidabile. Purtroppo, le varianti del protocollo di parodontite murina indotta dalla legatura sono isolate nelle regioni focali del parodonto e soggette ad avulsione prematura della legatura installata. Questo riduce al minimo la quantità di tessuto disponibile per le analisi successive e aumenta il numero di animali necessari per lo studio. Questo protocollo descrive le manipolazioni precise necessarie per inserire legature molare estese con una migliore ritenzione e l'uso di una nuova tecnica di risciacquo per recuperare i neutrofili orali nei topi con un approccio alternativo che mitiga i suddetti sfide tecniche.

Vengono forniti dati relativi alla citometria di flusso rappresentativo proveniente da campioni di risciacquo orale di un'ingenua (Figura 3A) e infiammata (Figura 3B) di cavità orale che si trovano secondaria mente alla parodontite indotta dalla legatura. Viene inoltre illustrato il ripristino di PMN da una legatura installata (Figura 3C). Le tensioni del canale del citometro di flu...

Questo articolo presenta un protocollo per stabilire un modello di parodontite indotta da legatura di parodontite murina che coinvolge molari maxillari multipli, con conseguente aree più grandi del tessuto gengivale e dell'osso coinvolti per l'analisi successiva, nonché l'uso ridotto degli animali. Viene descritta anche una tecnica per valutare i neutrofili orali in modo analogo ai soggetti umani.

Robust osufilazione modello di Murine Periodontitis per la valutazione dei neutrofili orali

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

Il protocollo qui descritto fornisce agli investigatori un metodo per studiare i neutrofili orali all'interno di un modello animale indotto dalla legatura della malattia parodontale in modo analogo ai partecipanti umani. Il principale vantaggio di questa tecnica è evidenziato dall'aumento del volume di tessuti gengivali infiammati disponibili per l'analisi successiva, che riduce l'uso degli animali. La nostra capacità di recuperare le legature rivestite di biofilm da intorno ai denti consente la simulazione di un trattamento efficace di una malattia parodontale localizzata.L'uso di questo modello potrebbe essere applicato nello studio degli effetti sistemici della parodontite in un modello animale, a causa dell'aumento delle aree dei tessuti gengivali infiammati. Si consiglia vivamente di familiarizzare con l'uso di strumenti microchirurgici e microscopi a dissezione, nonché di legare i nodi del chirurgo prima di maneggiare soggetti animali vivi. La dimostrazione visiva di questa tecnica è fondamentale per ridurre la lunghezza della curva di apprendimento necessaria per ottenere un posizionamento competente della legatura.A dimostrare la procedura sarà Jeff Chadwig, uno studente la

robust-ligature-induced-model-murine-periodontitis-for-evaluation

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Modelli animali hanno dimostrato di essere strumenti preziosi nella definizione di accoglienza e patogeni meccanismi specifici che contribuiscono allo sviluppo di infiammazione cronica. Qui si descrive un modello murino di infezione orale con il patogeno umano Porphyromonas gingivalis e le metodologie di dettaglio per valutare la progressione di infiammazione nei siti locali e sistemiche.

Un modello di topo per patogeni indotta infiammazione cronica a siti locali e sistemici

In questo studio, un modello di ratto di induzione della parodontite è presentato attraverso una combinazione di legatura ritentiva e iniezioni ripetitive di lipopolisaccaride derivato da Porphyromonas gingivalis, per 14 giorni intorno ai primi molari mascellari. Le tecniche di legatura e iniezione di LPS sono state efficaci nell'indurre la peridontite, con conseguente perdita ossea alveolare e infiammazione.

Induzione della parodontite attraverso una combinazione di legatura e iniezione di lipopolisaccaridi in un modello di ratto

Questo è un rapporto su un modello sperimentale di perimplantite indotta da legatura nei topi. Descriviamo tutte le fasi chirurgiche, dalla gestione pre e post-operatoria degli animali, alle estrazioni, al posizionamento dell'impianto e alla perimplantite indotta dalla legatura.

Modello sperimentale di perimplantite indotta da legatura nei topi

Questo studio descrive un metodo di legatura in nylon 6-0 modificato per indurre la parodontite nei topi, che è altamente riproducibile e rappresenta un'alternativa per i ricercatori per studiare la malattia parodontale dal suo sviluppo alle sue conseguenze patologiche.

Modello murino di parodontite avanzata indotta da legatura di nylon nel secondo molare superiore

In questo video, dimostriamo la procedura di CD40-attivazione e l'espansione delle cellule B da splenociti murini di C57BL / 6 topi, che può essere utilizzato come modello di una cellula presentanti l'antigene (APC) per studiare l'induzione di immunità.

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

Biofilm formato sulla superficie dei denti sono molto complesse ed esposte a continue sfide innata ed esogeni ambientali, che modulano la loro architettura, fisiologia e trascrittoma. Abbiamo sviluppato una serie di strumenti per esaminare la composizione, l'organizzazione strutturale e di espressione genica dei biofilm orali, che possono essere adattati ad altre aree di ricerca biofilm.

Una analitica Tool-box per la valutazione completa biochimici, strutturali e trascrittoma di biofilm orale mediata da Mutans Streptococchi

Questo protocollo descrive un test qRT-PCR ad alto rendimento per l'analisi delle firme di espressione dell'IFN di tipo I e III. Il test discrimina le differenze di una singola coppia di basi tra i trascritti altamente simili di questi geni. Grazie all'assemblaggio in batch e al pipettaggio robotizzato, i saggi sono coerenti e riproducibili.

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR test per la determinazione di espressione Profili di tipo I e III interferone sottotipi

Il protocollo descrive intubating zebrafish adulto con un biologico; quindi di dissezione e preparando l'intestino per citometria, microscopia confocale e qPCR. Questo metodo consente la somministrazione di composti bioattivi per monitorare l'assorbimento intestinale e lo stimolo immune locale evocato. È rilevante per il test la dinamica intestinale di profilassi orale.

Intubazione orale di Zebrafish adulto: un modello per valutare l'assorbimento intestinale di sostanze bioattive

Qui forniamo protocolli dettagliati per la somministrazione orale di antibiotici ai topi, raccolta di campioni di feci, estrazione del DNA e quantificazione di batteri fecali di qPCR.

Analisi di basati su reazione a catena della polimerasi quantitativa del Microbiota intestinale murina dopo il trattamento antibiotico orale

Qui, forniamo un protocollo dettagliato per un modello di somministrazione orale utilizzando larve di Galleria mellonella e come caratterizzare indotto risposte immunitarie innate. Usando questo protocollo, i ricercatori senza esperienza pratica sarà in grado di utilizzare la mellonella g. alimentazione forzata di metodo.

Un modello di amministrazione orale Galleria mellonella a risposte immunitarie Innate Study Commensal-Induced

Scopri il modello di periodontite murina indotta da legatura per studiare i neutrofili orali. Questa tecnica aumenta il volume dei tessuti gengivali infiammati disponibili per l'analisi, riducendo l'uso di animali.

Robust osufilazione modello di Murine Periodontitis per la valutazione dei neutrofili orali

Esplora altri video