Name: Monitoraggio in tempo reale della migrazione delle cellule del Glioma umano sulle coculture di Asse-Olgon-Oligodendroce (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Scopri un sistema di co-cultura ex vivo per studiare in tempo reale la migrazione delle cellule del glioma umano e le loro interazioni con gli assoni. Questo metodo facilita l'analisi dei meccanismi cellulari e il test di efficacia dei farmaci in vitro.

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Questo lavoro è stato supportato da fondi interni del Dipartimento di Neurochirurgia, Brown University a N.T.

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<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+stem+cells+derived+from+glioblastomas+cultured+in+bFGF+and+EGF+more+closely+mirror+the+phenotype+and+genotype+of+primary+tumors+than+do+serum-cultured+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines.</a> Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).</li>
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<li>Tapinos, N., Ohnishi, M., Rambukkana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB2+receptor+tyrosine+kinase+signaling+mediates+early+demyelination+induced+by+leprosy+bacilli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">ErbB2 receptor tyrosine kinase signaling mediates early demyelination induced by leprosy bacilli.</a> Nature Medicine. 12 (8), 961-966 (2006).</li>
<li>Chan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NGF+controls+axonal+receptivity+to+myelination+by+Schwann+cells+or+oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NGF controls axonal receptivity to myelination by Schwann cells or oligodendrocytes.</a> Neuron. 43 (2), 183-191 (2004).</li>
<li>Dugas, J. C., Tai, Y. C., Speed, T. P., Ngai, J., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+oligodendrocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of oligodendrocyte differentiation.</a> Journal of Neuroscience. 26 (43), 10967-10983 (2006).</li>
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<li>Merz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures+of+human+glioblastoma+reveal+different+susceptibilities+to+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures of human glioblastoma reveal different susceptibilities to treatments.</a> Neuro-Oncology. 15 (6), 670-681 (2013).</li>
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<li>Aubert, M., Badoual, M., Christov, C., Grammaticos, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+glioma+cell+migration+on+collagen+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">A model for glioma cell migration on collagen and astrocytes.</a> Journal of the Royal Society Interface. 5 (18), 75-83 (2008).</li>
<li>Jia, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+three-dimensional+collagen+scaffolds+on+the+expression+profiles+and+biological+functions+of+glioma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Effects of three-dimensional collagen scaffolds on the expression profiles and biological functions of glioma cells.</a> International Journal of Oncology. 52 (6), 1787-1800 (2018).</li>
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<li>Gritsenko, P., Leenders, W., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulating+in+vivo-like+plasticity+of+glioma+cell+invasion+along+blood+vessels+and+in+astrocyte-rich+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Recapitulating in vivo-like plasticity of glioma cell invasion along blood vessels and in astrocyte-rich stroma.</a> Histochemistry and Cell Biology. 148 (4), 395-406 (2017).</li>
<li>Gritsenko, P. G., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+adhesion+systems+mediate+glioma+cell+invasion+in+complex+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Adaptive adhesion systems mediate glioma cell invasion in complex environments.</a> Journal of Cell Science. 131 (15), (2018).</li>
<li>Kaur, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-11%2C+a+marker+of+the+mesenchymal+phenotype%2C+regulates+glioblastoma+cell+migration+and+survival+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cadherin-11, a marker of the mesenchymal phenotype, regulates glioblastoma cell migration and survival in vivo.</a> Molecular Cancer Research. 10 (3), 293-304 (2012).</li>
<li>Rao, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+white+matter+tract+topography+using+core-shell+electrospun+nanofibers+to+examine+migration+of+malignant+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Mimicking white matter tract topography using core-shell electrospun nanofibers to examine migration of malignant brain tumors.</a> Biomaterials. 34 (21), 5181-5190 (2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+hydrogel+is+suitable+for+targeted+investigation+of+amoeboid+migration+of+glioma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional hydrogel is suitable for targeted investigation of amoeboid migration of glioma cells.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (1), 250-256 (2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Gli studi di migrazione per hGC possono essere eseguiti utilizzando sistemi camera Boyden o saggi scratch. Tuttavia, mentre questi esperimenti non riescono a fornire alcuna informazione per quanto riguarda le interazioni delle cellule tumorali con altri tessuti circostanti, l'attuale sistema può ricapitolare le interazioni GC con fibre mielinate e non mielinate. Inoltre, per studiare la formazione tumorale e la migrazione all'estremità, le colture di fette organotipiche del cervello dei roditori o l'impianto in vivo di c...

Il glioblastoma è uno dei tumori più aggressivi e letali del cervello umano. L'attuale standard di cura comprende la resezione chirurgica del tumore seguita da radiazione1 più la somministrazione concomitante e adiuvante di temozolomide2. Anche con questo approccio multiterapeutico, la recidiva tumorale è inevitabile3. Ciò è in parte dovuto alla natura migratoria estesa delle cellule tumorali, che invadono il parenchyma cerebrale creando più proiezioni simili a dita all'interno del cervello4 che rendono improbabile la resezione completa.
Negli ultimi anni, è diventato evidente che l'aggressività del glioblastoma è dovuta, in parte, alla presenza di una popolazione di cellule staminali tumorali all'interno della massa tumorale5,6, che presentano un alto potenziale migratorio7,8, resistenza alla chemioterapia e radiazioni9,10 e la capacità di formare tumori secondari11. Le GSC sono in grado di ricapitolare i tumori originali del policlonale quando lo xenotrapianto viene ai topi nudi5.
Nonostante la ricchezza di conoscenze sul background genetico dei glioblastomi, gli studi sulla migrazione delle cellule glioma (GC) sono attualmente ostacolati dalla mancanza di modelli di migrazione in vitro o in vivo efficienti. In particolare, mentre le interazioni glioma-assonali modulate da fattori cellulari e ambientali sono una componente fondamentale dell'invasione del glioma, a nostra conoscenza non esiste attualmente un sistema sperimentale con la capacità di modellare queste interazioni12,13,14. Per affrontare questa carenza, abbiamo sviluppato un sistema di coltura ex vivo di hGC primari co-coltivati con fibre purificate di assoni-oligodendrociti che si traduce in un'espressione elevata di marcatori tumorali differenziati, nonché un'estesa migrazione e interazione di hGC con fibre mielinate e non mielinated. Questa piattaforma ex vivo, grazie al suo layout compartimentato, è adatta per testare gli effetti di nuove terapie sui modelli di migrazione hGC.

<table><tbody><tr><td>Piatto di coltura in sospensione da 100 mm</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>2.5S NGF</td><td>ENVIGO</td><td>B.5025</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di coltura in sospensione da 60 mm</td><td>Corning</td><td>430589</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di idrossido di ammonio</td><td>Fisher Scientific</td><td>A669-500</td><td>concentrato</td></tr> senza <tr><td>animali EGF umano ricombinante</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FGF-basico umano ricombinante senza animali (154 a.a.)</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Anti-A2B5 MicroBeads, umano, topo, ratto</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-392</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotico-Antimicotico (100X)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>AutoMACS Soluzione di risciacquo (PBS, pH 7.2)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>B27 Integratore</td><td>Thermo Fisher</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>B27 Integratore, meno vitamina A</td><td>Thermo Fisher</td><td>12587001</td><td></td></tr><tr><td>Piastra batteriologica</td><td>BD Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Biotina</td><td>Sigma</td><td>B4639</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Campenot Camera</td><td>Tyler Research</td><td>CAMP-10</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per colture cellulari</td><td>Corning</td><td>430165</td><td>35 mm X 10</td></tr> <tr><td>mmFiltro cellulare</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td>70 uM, Filtro cellulare in nylon</td></tr><tr><td></td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>30 uM, Nylon</td></tr><tr><td>Collagenasi/Dispasi</td><td>Roche</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Rat Collagen I</td><td>Trevigen</td><td>3440-100-01</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucosio</td><td>Sigma</td><td>G5146</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fisher</td><td>10313021</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>D7291</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Grasso per alto vuoto</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-635-5D</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinze</td><td>Roboz</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>E16 Gravida temporizzata Sprague Dawley Rat</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>Sigma</td><td>E7510</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.02</td><td></td></tr><tr><td>FUDR</td><td>Sigma</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Integratore</td><td>Thermo Fisher</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F-12 Mix di nutrienti</td><td>Thermo Fisher</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fisher</td><td>14175095</td><td></td></tr><tr><td>Pinze emostatiche</td><td>Roboz</td><td>RS-7035</td><td></td></tr><tr><td>Eparina sale sodico, 0,2% in PBS</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>07980</td><td></td></tr><tr><td>Ago ipodermico, 18G</td><td>BD</td><td>511097</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-transferrina-Selenio G</td><td>Thermo Fisher</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteina</td><td>Sigma</td><td>C7477</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutammina</td><td>Thermo Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz's L-15 Medium</td><td>Thermo Fisher</td><td>11415064</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione madre MACS BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Thermo Fisher</td><td>1190081</td><td></td></tr><tr><td>Mg2SO4</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Separatore MiniMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Colonne MS più tubi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-301</td><td></td></tr><tr><td>NAC</td><td>Sigma</td><td>A8199</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal Medium</td><td>Thermo Fisher</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A</td><td>Medium Thermo Fisher</td><td>10888022</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td></td><td></td> <td>ordinarie</td></tr><tr><td>P2 Sprague Dawley Rat Pups</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>LS003126</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>Pin Rake</td><td>Tyler Research</td><td>CAMP-PR</td><td></td></tr><tr><td>Progesterone</td><td>Sigma</td><td>P8783</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase Reagente di dissociazione cellulare</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td>A1110501</tr><tr><td>Applicatore di grasso per sirina</td><td>Tyler Research</td><td>CAMP-GLSS</td><td></td></tr><tr><td>Transferrina</td><td>Sigma</td><td>T2036</td><td></td></tr><tr><td>Uridina</td><td>Sigma</td><td>U3003</td><td></td></tr></tbody></table>

monitoraggio in tempo reale della migrazione delle cellule del glioma umano sulle coculture di asse-olgon-oligodendroce

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

Il glioblastoma è uno dei tumori umani più aggressivi a causa dell'estensiva eterogeneità cellulare e delle proprietà migratorie degli HCC. Per comprendere meglio i meccanismi molecolari alla base della migrazione delle cellule glioma, è essenziale la capacità di studiare l'interazione tra HG e assoni all'interno del microambiente tumorale. Per modellare questa interazione cellulare, abbiamo sviluppato un sistema di coltura mista costituito da hGC e gangli della radice dorsale (DRG) co-culture asson-oligodendrocite. Le culture DRG sono state selezionate perché possono essere isolate in modo efficiente e possono formare le proiezioni lunghe ed estese che sono ideali per studi di migrazione di questo tipo. Gli oligodendrociti purificati sono stati poi aggiunti agli assoni DRG di ratti purificati e indotti in mielinati. Dopo aver confermato la formazione di mielina compatta, gli hGC sono stati finalmente aggiunti alla co-coltura e le loro interazioni con gli assoni DRG e gli oligodendrociti sono state monitorate in tempo reale utilizzando la microscopia time-lapse. In queste condizioni, gli HGC formano strutture aggregate simili a tumori che esprimono GFAP e Ki67, migrano lungo tracce assonali mielinate e non mielinate e interagiscono con questi assoni attraverso la formazione di pseudopodi. Il nostro sistema di co-cultura ex vivo può essere utilizzato per identificare nuovi meccanismi cellulari e molecolari di migrazione hGC e potrebbe potenzialmente essere utilizzato per test di efficacia dei farmaci in vitro.

Per studiare l'interazione degli hGC con gli assoni, abbiamo generato assoni DRG purificati come descritto in precedenza15,16,17,18. Questi assoni DRG purificati sono stati poi seminati con hCC, che formavano strutture simili a tumori GFAP/Ki67 integrate all'interno della rete assonale, mentre i singoli HMC migrarono in associazione o tra gli assoni (Figura 2). Per determinare ...

Qui presentiamo un sistema di coltura motrice mista ex-vivo per lo studio della migrazione delle cellule glioma umane (hGC) in tempo reale. Questo modello fornisce la capacità di osservare le interazioni tra hGC e assoni mielinati e non mielinati all'interno di una camera compartimentata.

Monitoraggio in tempo reale della migrazione delle cellule del Glioma umano sulle coculture di Asse-Olgon-Oligodendroce

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Questo sistema di cocoltura ex vivo può essere utilizzato per identificare nuovi meccanismi cellulari e molecolari della migrazione cellulare del glioma umano e potrebbe potenzialmente essere utilizzato per test di efficacia dei farmaci in vitro. Il principale vantaggio di questa tecnica è la capacità di studiare le interazioni tra cellule di glioblastoma umano e assoni in tempo reale. A dimostrare la procedura sarà John Zepecki, uno studente laureato del mio laboratorio.Per assemblare piatti di coltura compartimentati, diluire la soluzione di collagene a 500 microgrammi per millilitro in acqua distillata sterile e mescolare accuratamente. Con una pipetta di trasferimento sterile, riempire un piatto di coltura di 35 millimetri con due millilitri della soluzione di collagene diluita. Quindi inclinare leggermente il piatto e rimuovere la soluzione lasciando dietro di sé un sottile film di collagene.Distribuire la soluzione nel prossimo piatto da 35 millimetri. Ripeti questo processo, aggiungendo più soluzione di collagene se necessario fino a quando tutti i piatti non sono stati rivestiti. Per polimerizzare il collagene, in una cappa a flusso laminare, tamponi di garza bagnati con tr

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In questo protocollo, abbiamo descritto un nuovo metodo per studiare l'influenza delle eterogeneità delle cellule gliali sulla crescita degli assoni con...

Studio gliali eterogeneità Influenza sulla crescita cellulare Axon Utilizzando un nuovo metodo co-coltura

Lapse imaging momento della coltura di tessuti 3D permette di studiare il comportamento migratorio delle singole cellule gangliari provenienti da primato in reazione ad estrarre proteine ​​frazionato dalla corteccia cerebrale.

Il comportamento migratorio di cellule generate in Culture Eminenza gangliari

Questo studio descrive le procedure di creazione di un nuovo assone neuronale e (astro) glia co-coltura piattaforma. In questo sistema di co-coltura, la manipolazione di interazione diretta tra un singolo assone (e singole cellule gliali) diventa possibile, consentendo l'analisi meccanicistica del neurone reciproco segnalazione gliali.

Analisi Imaging di Neuron Interaction Glia in Platform Cultura Microfluidic (MCP) a base di Axon neurone e glia co-cultura di sistema

In questo video, dimostriamo la procedura per lo sviluppo di un modello di invasione di cellule tumorali perineurali in vitro mediante la co-coltura del ganglio della radice dorsale del topo e di cellule tumorali neurotropiche. Il modello può essere utilizzato per condurre saggi sul cancro, producendo risultati rapidi e riproducibili.

Definizione di un modello di co-coltura tridimensionale dei gangli della radice dorsale murina e delle cellule tumorali: un modello in vitro per studiare l'invasione delle cellule tumorali perineurali

Questo video descrive un test di co-coltura di cellule di glioblastoma su neuroni microstrutturati, che imitano l'invasione dei tratti neuronali mielinizzati da parte delle cellule staminali del glioblastoma mentre migrano sui neuroni negli spazi peritumorali. Questo test può aiutare ad analizzare gli effetti dei farmaci farmacologici che inibiscono la migrazione delle cellule di glioblastoma sui neuroni in un glioma.

Co-coltura di cellule di glioblastoma su neuroni modellati: una tecnica per monitorare la migrazione delle cellule di glioblastoma sui neuroni dell'ippocampo di ratto in vitro

Questo video dimostra la costruzione di un sistema di coltura cellulare a tre compartimenti utilizzando collagene e grasso non reattivo. Questo sistema viene utilizzato per osservare le interazioni tra le cellule di glioma e gli assoni in tempo reale.

Preparazione di piastre di coltura compartimentate rivestite di collagene per colture cellulari neuronali

Questo articolo video mostra l'uso dei gangli della radice dorsale (DRG)/modello di cellule tumorali nell'adenocarcinoma duttale pancreatico.

In Vitro Modellazione di cancerose Neural Invasion: La dorsale della radice Ganglio Modello

I modelli attuali ex vivo di glioblastoma (GBM) non sono ottimizzati per studi fisiologicamente rilevanti di invasione tumorale umana. Qui presentiamo un protocollo per la generazione e la manutenzione di culture organiche di fetta da tessuti freschi umani GBM. Viene fornita una descrizione della microscopia a tempo trascorso e tecniche quantitative di analisi delle migrazioni di cellule.

Un modello di cultura organica fetta di Glioblastoma umano per lo studio della migrazione delle cellule tumorali e degli effetti specifici del paziente di farmaci antiinvasivi

Qui, descriviamo le tecniche di imaging di cellule vive per misurare quantitativamente la migrazione e l'invasione delle cellule staminali tumorali di glioblastoma del cervello nel corso del tempo e sotto condizioni multiple di trattamento.

Analisi Live Cell Imaging Studio Glioblastoma cerebrale tumore cellule staminali migrazione e invasione

Qui presentiamo un saggio di co-coltura facile da usare per analizzare la migrazione del glioblastoma (GBM) sui neuroni modellati. Abbiamo sviluppato una macro nel software FiJi per una facile quantificazione della migrazione cellulare GBM sui neuroni, e abbiamo osservato che i neuroni modificano la capacità invasiva delle cellule GBM.

Co-coltura di cellule simili a staminali di glioblastoma su neuroni modellati per studiare la migrazione e le interazioni cellulari

Questo studio presenta un protocollo di immunocitochimica delle cellule 3D vive applicato ad una linea cellulare di glioma diffuso pediatrico della linea mediana, utile per studiare in tempo reale l'espressione delle proteine sulla membrana plasmatica durante processi dinamici come l'invasione e la migrazione delle cellule 3D.

Saggi di immunocitochimica delle cellule 3D del glioma diffuso della linea mediana pediatrica

Scopri un sistema di co-cultura ex vivo per studiare in tempo reale la migrazione delle cellule del glioma umano e le loro interazioni con gli assoni. Questo metodo facilita l'analisi dei meccanismi cellulari e il test di efficacia dei farmaci in vitro.

Monitoraggio in tempo reale della migrazione delle cellule del Glioma umano sulle coculture di Asse-Olgon-Oligodendroce

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