Metodi funzionali e fisiologici per valutare la rigenerazione mediana del nervo nel ratto

Usando il nervo mediano del ratto, è possibile replicare adeguatamente le lesioni nervose periferiche nell'uomo. Clinicamente, la maggior parte di queste lesioni si verifica, negli arti superiori che dà supporto all'uso di questo modello sperimentale. In questo articolo mostreremo come produrre diversi tipi di lesioni nervose mediane nel ratto.

Inoltre, illustreremo come valutare il recupero funzionale di questo nervo usando diversi test. Il nervo mediano ha origine dai segmenti del midollo spinale da C6 a T1. Il nervo mediano è evidenziato in verde. In questo video, le tende chirurgiche non vengono utilizzate per scopi dimostrativi.

Si prega di includere un drappo durante l'esecuzione dell'intervento chirurgico. La pelle nell'aspetto mediale del braccio destro e della regione pettorale viene incisa fino al piano delle fasce profonde. I vasi sanguinanti sono accuratamente legati.

Successivamente, la fascia brachiale viene accuratamente tagliata, facendo attenzione a non danneggiare le strutture vascolari e nervose, nell'aspetto mediale del braccio. Un paio di forbici è aperto senza mezzi termini sotto, l'inserimento terminale del muscolo pettorale maggiore, al fine di stuzzicare questo muscolo, lontano dall'arteria e dalla vena ascellare sottostante, così come dai rami terminali del plesso brachiale. L'inserimento del muscolo pettorale maggiore, viene quindi diviso con un cautery elettrico.

Il muscolo pettorale minore viene quindi esposto e tagliato. Il nervo mediale viene quindi sezionato senza mezzi termini dai vasi brachiali e dal nervo ulnare fino alla regione del gomito. È ora possibile osservare, i diversi rami terminali del plesso brachiale, vale a dire la mediana, l'ulnare, il radiale, l'ascellare e i nervi muscolocutanei.

Con il nervo mediano esposto e isolato possono essere indotte diverse lesioni meccaniche. Un gruppo di Sham può essere creato, sezionando solo il nervo mediano. Nel gruppo di schiacciamento, il nervo mediano viene compresso, usando forcep di microchirurgia per 15 secondi.

Il gruppo di escissione deriva dalla rimozione di un segmento lungo 10 millimetri del nervo mediano. Il ceppo prossimale del nervo mediano è legato con l'8-0 sutura di nylon per prevenire la crescita assonale. In alternativa, è possibile ruotare il segmento accisa di 180 gradi e usarlo come innesto nervoso autologo.

In questo caso, i ceppi prossimali e distale della sezione nel nervo mediale vengono suturati all'innesto nervoso usando 10-0 punti di nylon. La fisioterapia fa parte dello standard di cura dei pazienti che si riprendono da lesioni nervose periferiche. Esistono diverse strategie per fornire fisioterapia post-operatoria ai ratti, che sono state sottoposte a lesioni nervose mediane.

È importante scegliere i giovani ratti e consentire loro di avere contatti con gli strumenti fisioterapici prima dell'intervento chirurgico. Ciò garantisce un adattamento più semplice e veloce alle impostazioni dell'esercizio. Inoltre, gli strumenti di fisioterapia dovrebbero consentire ai ratti di avere un certo grado di libertà e idealmente consentire loro di eseguire movimenti fini con le fronte.

Esistono diversi modi per eseguire la fisioterapia. Ad esempio, è possibile utilizzare singole sfere. Metti il topo all'interno della sfera e poi mettilo in una stanza con pochi ostacoli.

Lascia che esplori la stanza per mezz'ora. Fallo una volta al giorno. I ratti possono anche essere alloggiati in gabbie individuali.

Con ruote da corsa incorporate. In questo modo, i ratti possono esercitare, quanto vogliono e quando lo vogliono. Un'altra possibilità è accomodante, i ratti in gruppi in gabbie più grandi.

Personalizza le gabbie utilizzando pelli, corde, ruote da corsa e altri elementi di arricchimento ambientale. Ciò consente loro un'ampia libertà di movimento, in accordo con il loro naturale comportamento esplorativo e consente ai ratti di familiarizzare, con alcuni degli elementi presenti, nei test funzionali. Prima di eseguire i test funzionali, familiarizzare i ratti con i dolcetti alimentari che hai scelto di usare come rinforzo positivo.

Condurre i test la sera, quando i ratti sono naturalmente più attivi. Inizia con un test di presa. Posizionare il topo sulla griglia e sollevarlo dalla coda lasciandolo afferrare la griglia.

Quando il topo è in grado di afferrare la griglia, con una forza simile con entrambe le sopracciglia. Significa che il nervo mediano funziona e il test di presa è considerato positivo. Se non è in grado di afferrare la griglia con la zampa ferita, il test di presa è considerato negativo.

Per il test pin prick, posiziona il topo sulla piattaforma e attendi alcuni minuti fino a quando le attività esplorative e di toelettatura principali non si placano. Inizia quando il topo è fermo e in piedi sulle fronte. Con l'aiuto dello specchio, inserisci i capelli Von Frey attraverso la rete per colpire l'aspetto palmare della ara anteriore.

Ripeti questo cinque volte su ogni bip, in alternativa, aspettando alcuni secondi dopo ogni valutazione. Segnare la risposta di ritiro come segue, zero per nessuna risposta di prelievo, se il topo rimuove lentamente la zampa dal filamento e due se il topo risponde rapidamente allo stimolo e rimuove la zampa o lecca la zampa. Posizionare il topo nella parte inferiore della scala e toccare delicatamente la coda del topo.

Avvia il timer una volta che il topo inizia a camminare e fermarlo una volta che i suoi muso attraversano l'ingresso delle scatole. Registrare l'ora e ripetere il test tre volte. Metti il topo sul fondo della corda e convincilo a arrampicarlo toccando delicatamente la coda.

Considera valido il test se l'animale non lo fa, esita durante il compito o smette di arrampicarsi. Avvia il timer una volta che l'animale inizia l'arrampicata e fermalo nel momento in cui il muso del topo attraversa l'ingresso della piattaforma. Dare al topo uno spuntino dopo l'esecuzione, le attività correttamente e consentirlo, alcuni minuti di riposo prima di ripeterlo.

Posizionare un pezzo di carta grafica sul pavimento dei corridoi. Quindi, afferrare il topo per la coda e lasciarlo tenere il pennello da pittura, impregnato di blu di metilene. Mettilo all'ingresso del corridoio per farlo camminare all'interno della scatola.

Rimuovere la carta grafica dal pavimento dei corridoi e ripetere i test fino ad ottenere un'impressione buona e rappresentativa di entrambe le avagrafie. Dalle stampe ottenute, selezionarne una con una buona stampa di sopracciglia successive e misurare i seguenti parametri. Lunghezza di stampa, diffusione delle dita, diffusione intermedia delle dita e fattore di posizione.

Infine misurare la distanza tra il secondo dito di due stampe successive, la lunghezza del passo. Per eseguire la valutazione termografica, posizionare un pezzo di colla a doppio lato sulla spugna. Posizionare il topo su di esso e incollare le sopracciglia come mostrato.

Attendere un minuto per dissipare lo scambio di calore dalla manipolazione delle zampe del topo. Afferrare la fotocamera con un angolo di 90 gradi e a circa 30 centimetri di distanza dai ratti. Fai due acquisizioni.

In primo luogo, un termogramma per tutto il corpo, quindi, approssimando la fotocamera alla parte superiore del corpo del topo, crea il secondo. Dal termogramma ottenuto, troviamo una regione di interesse corrispondente all'area palmare delle supe. Misurare i valori medi, minimi e massimi di temperatura di quell'area su entrambe le zampe e calcolare le differenze di temperatura.

Per eseguire la seguente valutazione, esporre il nervo mediano su entrambi i lati come spiegato in precedenza. Inizia posizionando il topo sulla schiena e metti l'elettrodo appena mostrato nella pelle. Gli elettrodi di terra sulla coscia del topo e gli elettrodi di stimolazione e registrazione, sull'arto superiore sinistro.

Mettere un elettrodo di registrazione, sulla pancia muscolare del sublimis flexor digitorum, e gli elettrodi di stimolazione, approssimativamente nel nervo mediano. Inizia l'acquisizione con un'ampiezza di stimolo di 10 millivolt e aumentala gradualmente, in passi da 10 millivolt fino a raggiungere due volt. Durante l'acquisizione, registrare l'ampiezza stimolo per la prima flessione visibile delle dita.

Questa è la soglia di stimolazione del motore. L'ampiezza minima dello stimolo, necessaria per ottenere un potenziale di azione muscolare composta, C.M.A.P.is una soglia di stimolazione neurologica. Infine, selezionate un C.M.A.P rappresentativo, in risposta a uno stimolo supramaximale e misurate i seguenti parametri, Latenza, Ampiezza e Durata.

Per eseguire la valutazione della forza di flessione, in primo luogo passare un ciclo di sutura di seta cinque o sei attraverso l'area palmare di ogni ara anteriore e lasciarlo con cinque centimetri di lunghezza. Posizionare il topo sulla schiena. Inizia con la bip sinistra, aggancia la linea di sutura nel gancio del dinamometro e allinea la forepaw con il dinamometro, senza mettere troppa tensione sul gancio.

Tenere gli elettrodi Stimolanti, approssimativamente nel nervo mediano. Regola l'ampiezza dello stimolo a 1,5 volt e registra la forza istantanea per 30 secondi. Dal plottaggio ottenuto, analizzare i valori di forza massima, minima e media e l'area sotto la curva.

Il Flexor carpi radialis, innervato dal nervo mediano, viene rimosso bilateralmente e pesato in una scala di precisione. Per quanto riguarda alcuni risultati rappresentativi, nel test di presa, la percentuale di ratti con una risposta positiva, è più alta nel gruppo Sham e aumenta gradualmente nel tempo, nei ratti del gruppo Nerve Graft. I risultati dei test di Pin Prick sono più alti, nel gruppo Sham rispetto a quelli dei gruppi Graft o Excision.

La velocità del topo nel test ladder running, è più alta nel gruppo Sham, rispetto a quella del topo sottoposto a lesione mediale da laboratorio. Tra gli accendini, il tempo di correre la scala, tende a diminuire nel tempo parando il recupero del nervo mediano. Analogamente a quanto osservato nel ladder running test, il tempo che i ratti prendono per scalare la corda, è inferiore nel gruppo Sham, rispetto ai gruppi in cui il nervo mediano è ferito.

La velocità del ratto, in questo test, aumenta nei ratti, in cui un nervo mediano è autorizzato a riprendersi. Come mostrato in questi grafici a barre, l'analisi dei ratti che camminano, tende a mostrare cambiamenti nella morfologia delle impronte delle zampe. Questi cambiamenti sono spesso più pronunciati, nelle lesioni da schiacciamento che nelle lesioni nervose segmentali.

Questo grafico mostra che la termografia sembra essere, uno strumento utile per cercare le differenze di temperatura, tra le avambraccio nei primi 30 giorni dopo l'intervento chirurgico. Queste differenze di temperatura sono più evidenti, nei ratti con il nervo mediano più gravemente ferito, come in quelli del gruppo di escissione. La forza di flessione del ratto è direttamente correlata, con il grado di recupero nervoso.

Essere più vicini alla normalità quando il recupero è massimo, come si può vedere in questi grafici a barre confrontando la forza, in entrambe le zampe nei gruppi escissione e innesto nervoso. Per quanto riguarda l'elettroeuromiografia, si possono osservare vari modelli. Un normale potenziale .M.A.P., è tipico di un topo del gruppo Sham.

Mentre la forma polifasica C.M.A.P.is associata, con un grado variabile di lesione del nervo mediano, come accade nella schiacciamento e nei gruppi di innesto nervoso. Nel gruppo dell'Escissione, non c.M.A.P.L'onda e la morfologia del Flexor carpi radialis dipendono dal recupero nervoso mediano. Queste due immagini mostrano questi muscoli, nei gruppi Sham ed Excision.

Come mostrato in questo articolo, il nervo mediano del ratto è un comodo modello di lesione e riparazione del nervo periferico. Sono disponibili più strategie standardizzate per valutare il recupero motorio e sensoriale. Molti di questi non sono invasivi, consentendo la valutazione giornaliera.

Infine, le impostazioni fisioterapiche sperimentali, possono simulare il recupero nel contesto clinico, facilitando la stipula dei risultati per la specie umana.