Angiografia di fluorescenza per la valutazione dell'aneurisma perfusione e patriera arteriosa dei genitori nei modelli di aneurisma per ratti e conigli
24 luglio 2019
Presentiamo un protocollo per valutare in modo efficiente la perfusione di aneurisma e la patenza del recipiente dell'aneurisma laterale in ratti e conigli, utilizzando l'angiografia videoatologa (FVA) a fluorescenza a base di fluorescenza. Con un valore predittivo positivo del 92,6%, si tratta di un metodo semplice ma molto efficace ed economico senza attrezzature speciali richieste.
Questo metodo è una tecnica affidabile e facile per visualizzare il flusso sanguigno in tempo reale in aneurismi e vasi e può essere utilizzato in diversi modelli animali. Il vantaggio principale di questa tecnica è che facilita la visualizzazione del flusso sanguigno durante l'intervento chirurgico senza richiedere dispositivi costosi o interventi chirurgici estesi. Prima di iniziare la procedura, utilizzare il nastro nero per fissare un filtro passa banda verde per fungere da filtro di eccitazione su una torcia elettrica.
E controlla che la torcia emetta solo luce blu. Dotare la fotocamera di un filtro passa banda verde per funzionare come filtro della luce di emissione. Ora solo il via libera dovrebbe essere in grado di passare.
Quindi, disinfettare lo spazio di lavoro con una soluzione disinfettante e coprire il tavolo con tende sterili per prevenire la contaminazione. Per eseguire l'angiografia video di fluoresceina o L'FVA in un coniglio confermare che l'animale anestetizzato non risponde allo stimolo del dolore prima di posizionare il coniglio in posizione supina. Radere il collo intorno al muscolo sternocleidomastoico.
Focalizzare la fotocamera sull'arteria sezionata e utilizzare un foglio di alluminio per coprire una siringa da cinque millilitri contenente 100 milligrammi / millilitro di sodio fluoresceina. Spegnere il più possibile le luci e iniettare 0,3 millilitri/chilogrammo di fluoresceina di sodio per via endovenosa nella porta di iniezione del catetere. Successivamente, sciacquare la siringa con 0,5 millilitri di soluzione salina per assicurarsi che tutto il colorante sia stato iniettato.
E illuminare immediatamente il campo chirurgico con la torcia modificata. Non appena la luce è accesa inizia a filmare con la fotocamera modificata. Il flusso sanguigno dovrebbe essere visibile entro pochi secondi dall'iniezione.
Per l'analisi macroscopica del vaso dopo che l'angiografia ha risentito gli aneurismi e il complesso dell'arteria genitore negli animali di follow-up, o eseguire la conferma visiva del flusso osservando il riempimento dell'aneurisma e / o bypassare dopo la rimozione delle clip temporanee. In questo studio rappresentativo, l'FVA è stato in grado di essere eseguito in otto conigli su 10. Dei 16 aneurismi identificati negli otto conigli, due aneurismi hanno dimostrato una perfusione persistente dell'arteria madre, mentre l'FVA ha identificato cinque casi con perfusione residua.
14 aneurismi di coniglio non presentavano perfusione residua macroscopicamente, mentre 11 sono stati successivamente rilevati utilizzando l'FVA. La perfusione residua è stata osservata macroscopicamente in 23 ratti su 48 e gli altri 25 ratti non hanno mostrato segni macroscopici di perfusione residua. 22 dei 23 aneurismi senza perfusione macroscopica sono stati poi confermati utilizzando L'FVA.
Complessivamente, 25 casi combinati di conigli e ratti su 27 potrebbero essere confermati, con un valore predittivo positivo del 92,6% un tasso di sensibilità del 100% e una specificità del 94,1%Le cose più importanti quando si tenta questa procedura sono sezionare correttamente i vasi e lavorare in una stanza buia quando si somministra e si visualizza la fluoresceina. Questa procedura può essere utilizzata in qualsiasi modello animale per valutare il flusso sanguigno in qualsiasi vaso visibile.
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici
Panoramica
Questo articolo presenta un protocollo per la valutazione della perfusione dell'aneurisma e della pervietà vascolare mediante angiografia video fluoresceinica (FVA) in modelli animali (ratti e conigli). Il metodo si distingue per un elevato valore predittivo positivo pari al 92,6% ed è caratterizzato da semplicità ed economicità, non richiedendo attrezzature speciali.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Biologia vascolare
- Immagini a fluorescenza
Sfondo
- Le aneurismi rappresentano una sfida clinica significativa in termini di valutazione della perfusione.
- I metodi esistenti possono richiedere apparecchiature costose e procedure chirurgiche estese.
- La videocineangiografia con fluoresceina offre una soluzione per la visualizzazione in tempo reale.
- La versatilità della tecnica in diversi modelli animali è degna di nota.
Scopo dello studio
- Sviluppare un metodo affidabile per la visualizzazione del flusso sanguigno negli aneurismi.
- Valutare la pervietà dei vasi senza la necessità di apparecchiature costose.
- Fornire un protocollo semplice che possa essere ampiamente implementato nella ricerca.
Metodi Utilizzati
- La fluorangiografia video (FVA) è stata la piattaforma principale utilizzata.
- Gli animali impiegati includevano ratti e conigli, con una valutazione specifica del flusso ematico durante e dopo l'intervento chirurgico.
- Non sono stati menzionati flussi di lavoro multi-omici.
- La procedura prevedeva l'anestesia degli animali, la preparazione del sito chirurgico, l'iniezione di fluoresceina sodica e l'uso di un sistema di telecamera modificato.
- I passaggi chiave includevano l'assicurazione di una luce minima durante la visualizzazione e un temporizzazione precisa nell'acquisizione delle immagini dopo l'iniezione.
Risultati principali
- Il metodo ha permesso di visualizzare con successo il flusso sanguigno in 8 conigli su 10 e ha identificato casi di perfusione residua significativa.
- Di 16 aneurismi valutati, 11 sono stati rilevati mediante FVA e non erano stati osservati macroscopicamente.
- In ratti, la perfusione residua è stata confermata in 22 aneurismi su 23 senza segni macroscopici visibili.
- Nel complesso, in 25 casi su 27 totali è stata osservata conferma della perfusione mediante FVA.
Conclusioni
- Questa procedura dimostra un'elevata capacità di valutare efficacemente il flusso ematico nell'aneurisma.
- L'applicazione della FVA facilita la visualizzazione chirurgica in tempo reale e la valutazione dello stato di perfusione.
- Le implicazioni riguardano un miglioramento delle tecniche di comprensione e valutazione delle condizioni vascolari in ambito di ricerca.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Contenuto
La fluorangiografia video (FVA) fornisce un metodo a basso costo e privo di apparecchiature per la valutazione in tempo reale della perfusione dell'aneurisma e della pervietà dell'arteria madre in modelli preclinici. L'elevata sensibilità e specificità supportano un rilevamento affidabile della perfusione residua, consentendo l'identificazione precoce di un'occlusione incompleta nei modelli di aneurisma. Questa capacità facilita la riduzione del rischio meccanicistico degli interventi vascolari offrendo un parametro quantitativo e riproducibile per la valutazione preclinica dell'efficacia dei dispositivi e delle tecniche chirurgiche.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Convalida del Target
- Valore scientifico: Consente l'analisi di ipotesi terapeutiche mediante la visualizzazione della dinamica del flusso ematico in modelli di aneurisma.
- Valore operativo: Supporta la validazione funzionale di bersagli attraverso una valutazione diretta e in tempo reale della perfusione, senza ricorrere a costose apparecchiature di imaging.
Sviluppo di screening e saggi
- Valore scientifico: Fornisce risultati quantitativi di perfusione binari (presente/assente) che possono essere standardizzati tra diversi studi.
- Valore operativo: Facilita la prontezza del saggio mediante semplice iniezione di fluoresceina e un apparato modificato a base di torcia elettrica/fotocamera, promuovendo la riproducibilità.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Valore scientifico: Collega la scoperta alla validazione preclinica confermando l'occlusione dell'aneurisma e l'integrità dell'arteria madre in ratti e conigli.
- Valore operativo: Fornisce una metrica di perfusione traslabile, allineata agli endpoint clinici per la valutazione del trattamento dell'aneurisma.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
L'FVA si inserisce nel percorso di scoperta, dalla validazione iniziale del modello alla valutazione preclinica, offrendo un'analisi basata sulla perfusione che orienta le decisioni di avanzamento o interruzione prima dell'ottimizzazione del capostazione.
- Biologia della scoperta: Supporta la verifica delle ipotesi rivelando la perfusione residua che potrebbe indicare un fallimento del trattamento nei modelli di aneurisma.
- Screening: Permette una valutazione standardizzata e riproducibile della pervietà vascolare su più animali e in diversi punti temporali.
- Analisi: Genera risultati chiari sulla perfusione (macroscopici e confermati mediante FVA) che consentono il confronto tra gruppi di controllo e gruppi sottoposti a intervento.
- Ricerca traslazionale: Collega i dati preclinici sulla perfusione alla rilevanza clinica, validando l'occlusione in modelli di aneurisma anatomicamente rilevanti.
- Riutilizzo aziendale: Rappresenta una tecnica indipendente dalla piattaforma e facilmente accessibile, applicabile in diversi programmi di ricerca vascolare.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva nei modelli di aneurisma rilevando la perfusione non visibile all'ispezione macroscopica.
- Valore operativo: Richiede soltanto fluoresceina sodica, una torcia e filtri per fotocamera, consentendo un utilizzo a basso costo e ad alta produttività.
- Valore strategico: Riduce il rischio biologico nei programmi preclinici migliorando l'accuratezza della valutazione dell'occlusione.
- Impatto sul portafoglio: Favorisce la priorizzazione degli interventi sugli aneurismi in base al rischio, basandosi su esiti di perfusione validati.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze specialistiche nella dissezione vascolare microchirurgica e nella gestione del modello di aneurisma.
- Necessita di un ambiente oscurato e di una torcia modificata con filtri di eccitazione blu e di emissione verde.
- Richiede la standardizzazione della dose di fluoresceina (0.3 mL/kg) e della flush con soluzione salina per ottenere un segnale costante.
- Implica considerazioni di adattamento relative alle dimensioni vascolari diverse e all’anatomia specifica per specie.
- È limitata ai vasi superficiali o accessibili a causa della dipendenza dalla penetrazione della luce esterna.
