Name: Isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come Salispheres o Monostrati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Scopri l'isolamento di cellule epiteliali salivari umane per coltura in vitro come salispere o monostrati. Questo metodo avanzato permette di studiare la replicazione virale in modelli cellulari primari più vicini alle condizioni in vivo.

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Ringraziamo James P. Bridges per aver fornito indicazioni significative sulle metodologie necessarie per la coltura delle cellule primarie. Matthew J. Beucler è stato sostenuto da National Institutes of Health Training Grant T32-ES007250. Questo lavoro è stato sostenuto anche dalle sovvenzioni dei National Institutes of Health R01-AI121028 e R21-DE026267 assegnate a William E. Miller.

Questi protocolli e studi sono stati esaminati e approvati dall'Institutional Review Board dell'Università di Cincinnati (federal-wide Assurance #00003152, protocollo IRB 2016-4183). Il tessuto salivare è comunemente resected in molte procedure chirurgiche della testa e del collo e di solito non è coinvolto dal processo maligno. Tipicamente, il tessuto della ghiandola salivava appena resected viene utilizzato entro 2-4 h dopo la rimozione dal paziente (Figura 1A).
1. Preparazione del reagente
<ol><li>
Mezzo di crescita delle cellule epiteliali Bronchiali (BEGM)
	<ol>
<li>Aggiungere componenti dal kit fornito dal produttore (vedere la Tabella dei materiali).</li>
		<li>Lavare ogni tubo una volta con il supporto di base per garantire il trasferimento completo dei componenti. Quindi aggiungere il carbone spogliato siero bovino fetale per fare una concentrazione finale di 4% siero.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Buffer di lisi a i globuli rossi (RBC)
	<ol>
<li>Per fare 10,15 g di NH4Cl, 5,0 g di NaHCO3e 0,186 g di acido etilenediaminetracetico (EDTA) e portare fino a un volume finale di 200 mL utilizzando dH2O. Quindi filtrare sterilizzare e conservare a 4 gradi centigradi.</li>
		<li>Diluire ad una concentrazione di lavoro di 1x in sterile dH2O prima dell'uso.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Soluzione di dissociazione
	<ol>
<li>A una bottiglia da 100 mL di soluzione dispasi (vedi la Tabella dei Materiali) aggiungere 0,15 g di collagenana tipo III. Dopo che il collagenasi si è completamente dissolto, il filtro sterilizza la nuova soluzione e l'aliquota. Conservare a -20 gradi centigradi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Digestione dei tessuti
<ol><li>Utilizzando una piastra di coltura tissutale di 100 mm, meccanicamente mimizzare il tessuto in pezzi fini di dimensioni da1-2mm utilizzando forbici sezionanti e pinze chirurgiche sterilizzate dall'autoclave . Il tessuto connettivo tra i pezzi deve essere tagliato per garantire una corretta separazione e facilità in ulteriori passi.</li>
	<li>Aggiungere 6 mL della soluzione dispasi/collagenasi al tessuto macinato. Quindi incubare a 37 gradi centigradi per circa 30 min a 1 h.</li>
	<li>Interrompere il tessuto per pipetta con una pipetta sierologica da 5 mL 15-20 volte.</li>
	<li>Incubare a 37 gradi centigradi per altri 30 min a 1 h.</li>
	<li>Ripetere i passaggi 2.3 e 2.4 due-tre più volte o fino a quando il tessuto assomiglia a un liquame e può facilmente passare attraverso l'apertura della pipetta (Figura 1D). NOT:</</c3> La dimensione iniziale del campione di tessuto e come la finezza della mincing del tessuto determinerà quante volte è necessario ripetere i passaggi 2.3 e 2.4. Tipicamente, riceviamo tessuto di circa 1 cm x 1 cm di dimensione. Inoltre, è possibile monitorare la dissociazione dei tessuti utilizzando un microscopio standard di coltura dei tessuti invertiti per monitorare il progresso della dissociazione cellulare dal tessuto. Piccoli gruppi di cellule sono ideali per la crescita iniziale delle cellule salivari come salisfere.</li>
</ol>3. Rivestimenti pozzi con matrice di membrana seminterrato
NOTA: La matrice della membrana del seminterrato (BMM) deve essere scongelata durante la notte a 4 gradi centigradi il giorno prima dell'uso. Una volta scongelato, la BMM deve essere mantenuta costantemente sul ghiaccio o a 4 gradi centigradi in quanto si solidificherà rapidamente (cioè formerà un gel) a temperature più calde. Inoltre, è necessario prestare attenzione se i campioni sono stati raffreddati sul ghiaccio prima della placcatura su BMM, poiché i campioni freddi "si sciolgono" il BMM e espongono le cellule al piatto di plastica.
<ol><li>Lentamente pipetta BMM (vedi la Tabella dei Materiali) in ogni pozzo da rivestire. Distribuire uniformemente e lentamente il BMM sul pozzo. NOTA: Generalmente, usiamo 500 L per ogni pozzo di una piastra a sei pozzetti, ma questo volume può essere regolato per l'uso su altre varianti di piastre come 12-bene o 24-bene, o come desiderato per idrogel più spessi o più sottili.</li>
	<li>Incubare le piastre rivestite a 37 gradi centigradi per almeno 15 minuti prima dell'uso per consentire al tempo BMM di solidificare.</li>
</ol>4. Filtraggio di tessuto non digerito, lisi RBC e placcatura cellulare
<ol><li>Trasferire l'omogenea del tessuto dalla fase 2,5 a un tubo conico da 15 mL. Lavare la piastra una volta con 6 mL di fosfato gassato salina (DPBS) per trasferire le cellule rimanenti.</li>
	<li>Filtrare l'omociclolo in un tubo conico da 50 mL attraverso un colino a cellule di maglia in nylon da 70 m per rimuovere il tessuto non digerito. Centrifuga cellule tese per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Diluire 10x Buffer di lisi RBC in sterile dH2O per fare una soluzione di lavoro 1x.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Quindi riavviare il pellet cellulare in 10 mL di 1x buffer di lisi RBC. Incubare per 5 min a 37 gradi centigradi.</li>
	<li>Aggiungere 20-25 mL di DPBS per neutralizzare il buffer di lisi RBC e ridurre al minimo la lisi delle cellule salivari. Centrifuga per 5 min a 500 x g. NOTA: Dopo il trattamento con buffer di lisi RBC, il pellet cellulare deve essere bianco. Il colore rosso nel pellet indica che non tutti i RBC sono stati completamente lised. Ripetere i passaggi da 4.4 a 4.5 se necessario per la lisi completa di tutti i RBC.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere il pellet in 1-2 mL di BEGM per bene quindi posizionare le celle risospese su pozzetti rivestiti BMM. Incubare a 37 gradi centigradi.</li>
	<li>Una volta placcate su BMM, le cellule si formeranno in strutture sferiche o "salispheres" in un periodo di 2-3 giorni. Le cellule possono essere mantenute come salisphere per circa 5-7 giorni prima che il BMM inizi a degradarsi permettendo alle cellule di accedere e aderire alla plastica e crescere come un monostrato.</li>
</ol>5. Sottolanza delle salisfere e manutenzione su BMM
<ol><li>Aspirati i supporti dai pozzi, quindi aggiungere 1 mL di soluzione dispasi/collagenase ad ogni pozzo e incubare a 37 s per 15 min o fino a quando BMM è per lo più sciolto.</li>
	<li>Trasferire le cellule in un tubo conico da 15 mL e lavare i pozzi una volta con DPBS per ottenere le cellule rimanenti. Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere il pellet in 2 mL di trypsin poi incubare a 37 s per 15 min.</li>
	<li>Neutralizzare la trypsin utilizzando qualsiasi supporto completo contenente 10% siero. Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere le cellule in DPBS per rimuovere supporti residui, trypsin e siero. Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere in BEGM e placare le celle risospese su piatti di coltura rivestiti BMM solidificati. Le cellule sospese possono anche essere placcate direttamente sulla coltura cellulare trattata piatti per la proliferazione come un monostrato. Per ulteriori informazioni sulla crescita delle cellule salivari come monostrato, vedere la sezione 6. Le cellule coltivate su BMM o su plastica devono essere alimentate con BEGM fresco ogni 2-3 giorni.</li>
	<li>Coltura le cellule in un'incubatrice umidificata mantenuto a 37 gradi centigradi con 5% DI CO2.</li>
</ol>6. Sotturazione delle salisfere su piatti di coltura dei tessuti plastici trattati
NOTA: Se si mantengono le cellule come un monostrato sulla plastica, iniziare da questo passaggio. Il seguente protocollo si applica alle cellule che crescono in un piatto da 100 mm.
<ol><li>Aspirare i media. Lavare una volta con DPBS per rimuovere i supporti residui.</li>
	<li>Aggiungere 2 mL di trypsin quindi incubare a 37 gradi centigradi per 15 min, o fino a quando le cellule si sono completamente staccate.</li>
	<li>Neutralizzare la trypsin usando 4 mL di qualsiasi supporto completo contenente 10% siero. Trasferire le cellule in un tubo conico da 15 mL.</li>
	<li>Lavare la piastra una volta con circa 5 mL di DPBS per raccogliere le cellule rimanenti. Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere le celle in 6-10 mL di DPBS per rimuovere i supporti residui.</li>
	<li>Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il supernatante e risospendere in BEGM. Piatto di cellule su piatti di coltura di tessuto plastico trattati. Alimentazione con BEGM fresco ogni 2-3 giorni.</li>
	<li>Coltura le cellule in un'incubatrice umidificata mantenuto a 37 gradi centigradi con 5% DI CO2.</li>
</ol>7. Crioconservazione delle cellule
NOTA: La crioconservazione delle cellule può essere effettuata da una singola sospensione cellulare proveniente da cellule coltivate salisphere o monostrato.
<ol><li>Contare le celle su un ematocitometro per calcolare la quantità totale di cellule presenti.</li>
	<li>Centrifuga per 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirare il super-attuoso. Risospendere il pellet in BEGM con il 10% di zolfo dimetilo (DMSO). La concentrazione delle cellule deve essere da 2 x 106 cellule/mL a 10 x 106 cellule/mL.</li>
	<li>Cellule aliquote in sterili tubi di stoccaggio criogenici. Mettere i tubi in un rack di schiuma isolante e incubare a -80 gradi durante la notte per congelare lentamente le cellule.</li>
	<li>Il giorno successivo, posizionare i tubi in azoto liquido per lo stoccaggio a lungo termine. NOTA: Le cellule devono essere rapidamente scongelate a 37 gradi centigradi. Al momento dello scongelamento, le celle devono essere incollate a 500 x g e il supporto contenente DMSO deve essere rimosso prima della placcatura.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non segnalano nulla da rivelare.

La disfunzione salivare rappresenta una preoccupazione per la qualità della vita per coloro che soffrono di sindrome di Sjagren e per coloro che sono sottoposti a radioterapia per tumori adiacenti alle ghiandole salivari3,4,5, 16. Una terapia proposta per il trattamento di questi pazienti è quella di far crescere cellule staminali salivari funzionali o organoidi in vitro, che possono quindi es...

Nei mammiferi le ghiandole salivari sono organizzate in 3 coppie di principali ghiandole salivari: le ghiandole parotide, submandibolali e sublinguali. Esiste anche una serie di ghiandole minori situate sulla lingua e sparse in tutta la cavità orale1. Le principali ghiandole sono responsabili del volume sfuso di saliva prodotta2. Oltre a fornire protezione antimicrobica attraverso fattori secreti, la saliva è importante nel processo di masticazione e lubrificazione del cibo mentre passa attraverso l'esofago2. Come tale, disfunzione ghiandola salivare rappresenta un problema medico in cui i malati che non sono in grado di produrre abbastanza saliva sono più inclini a malattie in via di sviluppo come cavità dentali o candidiasi orale3. Inoltre, la riduzione della saliva comporta una maggiore difficoltà a mangiare e digerire il cibo avendo un impatto significativo sulla qualità della vita.
La disfunzione della ghiandola salivare si riscontra principalmente in pazienti affetti dalla sindrome di Sjagren, un disturbo autoimmune, o in pazienti con cancro alla testa e al collo che hanno subito una terapia di irradiola3,4,5 6. Gli acini di segreteria danneggiati all'interno delle ghiandole a seguito dell'autoimmunità o della radioterapia non subiscono l'auto-rinnovamento, il che si traduce in un paziente che vive con danni irreversibili6. Lo studio delle ghiandole salivari ha anche raccolto l'attenzione o i ricercatori interessati ai meccanismi della patogenesi virale. Alcuni patogeni, come il citomegalovirus umano (HCMV), si replicano persistentemente all'interno delle ghiandole salivari, che poi consente la trasmissione del virus nascente a un nuovo ospite tramite saliva7,8. Pertanto, vi è una necessità insoddisfatta di sviluppare modelli robusti e riproducibili in vitro di tessuto ghiandola salivare per affrontare e comprendere una vasta gamma di problemi medici.
Diversi modelli del sistema di ghiandola salivare murine sono stati utilizzati come punto di partenza per comprendere e caratterizzare le diverse cellule epiteliali che formano le ghiandole salivari9,10. Esistono differenze ovvie e principali tra le ghiandole salivari umane e murine11. In particolare la ghiandola parotide umana è più grande rispetto alla ghiandola submandibolare, mentre il topo submandibolare e parotide sono molto simili nella dimensione1,2,11. Sebbene esistano linee di cellule submandibolali umane immortalate, ci sono grandi preoccupazioni che le cellule immortalate non mantengano accuratamente il fenotipo del tessuto primario e le preoccupazioni secondarie che le cellule immortalate non sono effettivamente derivate da salivare epitelio stesso12. Per questi motivi c'è un interesse e la necessità di studiare il tessuto salivare primario dall'uomo.
Qui descriviamo un protocollo per isolare le cellule epiteliali primarie dalle ghiandole salivari umane per la coltura dei tessuti. Il nostro protocollo si basa sulle opere di Pringle et al. e Tran et al. con modifiche apportate per semplificare generalmente le loro procedure13,14. In primo luogo, mentre il protocollo di Tran et al.richiede una lunga incubazione di cinque ore per digerire ezigmaticamente il tessuto salivare, il nostro protocollo modificato ha avuto successo con un minimo di incubazione di un'ora, simile a quella di Pringle et al. In secondo luogo, usiamo diversi enzimi per la digestione tissutale, in particolare non usiamo la trypsin come viene utilizzato nel protocollo originale di Tran et al., ma usiamo invece una miscela di dispasi e collagenase. Preferiamo evitare la trypsinnelle nei passaggi di digestione iniziali come un recente studio ha suggerito che la digestione iniziale del tessuto salivare da trypsin risultati in ridotta vitalità cellulare, forse dalla perdita di una popolazione di cellule staminali rare15. Infine, procupiamo le salisfere sulla superficie della matrice della membrana seminterrato (BMM) utilizzando un supporto disponibile in commercio originariamente formulato per la propagazione delle cellule epiteliali bronchiali. Il nostro protocollo può essere utilizzato per isolare le cellule salivari dalle ghiandole parotide, submandibolare e sublinguali. Queste cellule esprimono amilasi salivare e altri geni salivari specifici che indicano che mantengono unfenotipo simile a quello delle cellule epiteliali acinari 7 . Abbiamo generato con successo colture salivari da >50 campioni primari di tessuto umano utilizzando questa metodologia. Inoltre, le cellule salivari primarie possono essere facilmente crioconservate per l'uso in un secondo momento.

<table><tbody><tr><td>Piastre di coltura da 100 mm</td><td>Thermo Scientific</td><td>172931</td><td></td></tr><tr><td>Provette coniche da 15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>Provette coniche da 50 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>Terreni di crescita delle cellule epiteliali bronchiali</td><td>Lonza</td><td>CC-3171</td><td>Aggiungere il kit di proiettili secondo le istruzioni del produttore. Integrare con 20 ml di siero strippato al carbone.</td></tr><tr><td>Filtro cellulare 70 &; micro; m rete di nylon</td><td>Fisher</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino spogliato al carbone</td><td>Gibco</td><td>12676-029</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi tipo III</td><td>Worthington</td><td>LS004182</td><td>Store a 4 &deg;C.</td></tr><tr><td>Tubo criogenico</td><td>Fisher</td><td>5000-0020</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Cell Applications</td><td>07923</td><td>Sciogliere la collagenasi per ottenere uno stock dello 0,15% (p/v). Filtrare, sterilizzare, quindi conservare a -20 °C.</td></tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td>Fisher</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco</td><td>Corning</td><td>55-031-PC</td><td></td></tr><tr><td>General Chemicals</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PathClear Estratto di membrana basale</td><td>Cultrex</td><td>3432-005-01</td><td>Scongelare a 4 &deg; C almeno 24 ore prima dell'uso. Maneggiare sempre con ghiaccio.</td></tr><tr><td>Piastre di coltura a sei pozzetti</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinze chirurgiche</td><td>Fisher</td><td>22-079-742</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di tripsina-EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come salispheres o monostrati

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

Le ghiandole salivari sono un sito di notevole interesse per i ricercatori interessati a molteplici aspetti della malattia umana. Uno degli obiettivi dei ricercatori è quello di ripristinare la funzione delle ghiandole danneggiate dalle terapie radiologiche o a causa di patologie associate alla sindrome di Sjàgren. Un secondo obiettivo dei ricercatori è quello di definire i meccanismi con cui i virus si replicano all'interno del tessuto ghiandolare dove possono quindi ottenere l'accesso a fluidi salivari importanti per la trasmissione orizzontale. Questi obiettivi evidenziano la necessità di un modello di ghiandola salivare in vitro robusto e accessibile che possa essere utilizzato dai ricercatori interessati alle suddette aree di ricerca. Qui discutiamo di un semplice protocollo per isolare le cellule epiteliali dalle ghiandole salivari umane e propagarle in vitro. Il nostro protocollo può essere ulteriormente ottimizzato per soddisfare le esigenze dei singoli studi. In breve, il tessuto salivare è separati meccanicamente ed enzimaticamente per isolare singole cellule o piccoli ammassi di cellule. La selezione per le cellule epiteliali avviene placcando su una matrice di membrana seminterrato in presenza di media ottimizzati per promuovere la crescita delle cellule epiteliali. Queste colture risultanti possono essere mantenute come cluster tridimensionali, definite "salispheres", o coltivate come un monostrato su piatti di coltura dei tessuti plastici trattati. Questo protocollo si traduce nella crescita di una popolazione eterogenea di cellule principalmente epiteliali che possono essere propagate per 5-8 passaggi (15-20 raddoppi della popolazione) prima di sottoporsi alla senescenza cellulare.

Due-tre giorni dopo la placcatura delle cellule dal tessuto digerito su BMM, le cellule formeranno facilmente piccoli cluster che continueranno ad espandersi fino a 15-20 cellule per cluster (Figura 2A). I detriti cellulari e le cellule morte staccate sono tipicamente visti e dovrebbero essere rimossi aspirando e reintegrandosi con supporti freschi. Le cellule continueranno a proliferare come salifere per circa 3-10 giorni, o finché lo strato BMM rimane intat...

Presentiamo un metodo per isolare e coltivare cellule epiteliali derivate dalla ghiandola umana primaria. Queste cellule presentano modelli di espressione genica coerenti con loro di origine epiteliale salivari e possono essere coltivate come salisfere su matrici di membrana seminterrato derivate da cellule tumorali Engelbreth-Holm-Swarm o come monostrati su piatti di coltura trattati.

Isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come Salispheres o Monostrati

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...

Generare modelli cellulari primari o strutture organoidi è la chiave per rispondere a molte domande contemporanee in biologia. Ad esempio, siamo interessati da un bel po 'di tempo ai meccanismi utilizzati dai virus umani per facilitare la replicazione nella ghiandola salivare in quanto è un sito importante per la trasmissione orizzontale. Lo sviluppo del sistema basato sulla salisfera descritto in questo protocollo è un progresso cruciale nella nostra ricerca di rispondere a questo tipo di domande.Questa tecnica ci consente di generare cellule primarie da una varietà di diversi campioni di pazienti. I modelli cellulari ricordano più la situazione di tipo in vivo in quanto le cellule non sono modellate o trasformate come molti tipi di cellule comunemente usati per esperimenti in vitro. Abbiamo usato questo protocollo per generare cellule simili dalla ghiandola submandibolare primaria del topo e il protocollo sarebbe probabilmente utile per altri organi con strutture cellulari simili.Entro due o quattro ore dalla rimozione dal paziente, su una piastra di coltura, utilizzare forbici sterilizzate autoclavate e forcelle chirurgiche per tritare il tessuto della ghiandola salivare in pezz

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Immunologia e Infezioni

Un protocollo ottimizzato per l'isolamento di cellule staminali dalla ghiandola salivare del mouse è descritto. Il metodo impiega digestione enzimatica e meccanica, e permette l'isolamento di salispheres contenenti cellule con caratteristiche di cellule staminali.

Isolamento di cellule staminali del mouse ghiandole salivari

Un semplice metodo è descritto per analizzare gli effetti di fibroblasti su tessuti associati cellule epiteliali. La combinazione di questo metodo e tridimensionale coltura tissutale può facilitare l'analisi di cellule dopo l'isolamento da 3D. La tecnica è applicabile a celle di varia potenziale maligno, consentendo studio sistematico di effetti di tumore-associato stroma sulle cellule tumorali.

Isolamento di cellule epiteliali mammarie da tridimensionale Mixed-cell Spheroid Co-cultura

Questo video presenta il protocollo per la coltura delle salisfere, gli sferoidi tridimensionali derivati dalle ghiandole salivari. Le salisfere possono essere ulteriormente utilizzate per valutare l'impatto del cancro della testa e del collo sulla produzione di saliva dalle ghiandole salivari dei pazienti umani affetti.

Coltura di salisfere dal tessuto delle ghiandole salivari: un metodo per sviluppare salisfere da cellule epiteliali derivate dalle ghiandole salivari umane

Una tecnica per manipolare geneticamente le cellule epiteliali in...

Modificazione genetica e ricombinazione delle Culture organo ghiandola salivare

L'uso di colture organotipiche tridimensionali per visualizzare la morfologia e i marcatori funzionali delle ghiandole salivari può fornire nuove intuizioni sui meccanismi del danno tissutale dopo la radiazione. Qui di seguito è riportato un protocollo per sezioni, colture, irraggiamento, macchia e immagini di 50 – 90 μm di spessore di sezione della ghiandola salivare prima e dopo l'esposizione alle radiazioni ionizzanti.

Trattamento radiante delle colture organotipiche da ghiandole salivari Sottomandibulari e parotidi modelli chiave in vivo caratteristiche

La ghiandola lacrimale (LG) ha due tipi di cellule che esprimono α-liscio muscolo actina (αSMA): cellule miepiteliali (MECs) e pericytes. I MECs sono di origine ectodermica, trovati in molti tessuti ghiandolari, mentre i periciti sono cellule muscolari lisce vascolari di origine endodermica. Questo protocollo isola i MECs e i periciti di murine LGs.

Isolamento delle cellule Miepiteliali da adulti murina lacrimale e ghiandole sottomandibolari

Qui presentiamo un metodo modificato per l'isolamento e la coltura di cellule epiteliali gengivali umane aggiungendo l'inibitore della roccia, Y-27632, al metodo tradizionale. Questo metodo è più semplice, richiede meno tempo, migliora le proprietà delle cellule staminali e produce un numero maggiore di cellule epiteliali ad alto potenziale sia per il laboratorio che per le applicazioni cliniche.

Isolamento e coltura di cellule epiteliali gengivali umane primarie utilizzando Y-27632

Il follicolo dentale contiene una popolazione epiteliale e cellule mesenchimali. La popolazione epiteliale è stata selezionata dalla popolazione eterogenea di cellule follicolari dentali fornendo un terreno di coltura distinto. Le cellule epiteliali sopravvissero e formarono colonie in un mezzo privo di siero.

Isolamento delle cellule epiteliali dal follicolo dentale umano

L'imaging immunofluorescente è limitato dalla capacità di osservare processi biologici complessi e dipendenti dal tempo in una singola istantanea nel tempo. Questo studio delinea un approccio di imaging dal vivo condotto su fette di ghiandola sottomandibolare di topo tagliate con precisione. Questo approccio consente l'osservazione in tempo reale delle interazioni cellula-cellula durante l'omeostasi e i processi di rigenerazione e riparazione.

Interrogazione delle interazioni cellula-cellula nella ghiandola salivare tramite imaging di cellule vive ex vivo

Il presente studio riporta un protocollo più semplice, rapido ed economico per isolare e far crescere in modo efficiente le cellule epiteliali mammarie umane primarie (HMEC) da piccole quantità di tessuto mammario. Questo protocollo è adatto per la produzione rapida di HMEC primari sia per applicazioni di laboratorio che cliniche.

Isolamento e coltura di cellule epiteliali mammarie umane primarie

Scopri l'isolamento di cellule epiteliali salivari umane per coltura in vitro come salispere o monostrati. Questo metodo avanzato permette di studiare la replicazione virale in modelli cellulari primari più vicini alle condizioni in vivo.

Isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come Salispheres o Monostrati (Video) | JoVE Journal

Isolamento delle cellule epiteliali salivari dalle ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come Salispheres o Monostrati

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