Name: Valutazione degli effetti metabolici del digiuno intermittente isocalorico 2:1 nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Scopri il digiuno intermittente isocalorico 2:1 per studiare obesità e metabolismo glucidico nei topi. Questo metodo riduce la massa grassa e migliora la tolleranza al glucosio indipendentemente dall'apporto calorico.

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K.-H.K è stato sostenuto dalla Heart and Stroke Foundation of Canada Grant-in-Aid (G-18-0022213), dalla J. P. Bickell Foundation e dal fondo di avviamento dell'University of Ottawa Heart Institute; H.-K.S. è stato sostenuto da sovvenzioni del Canadian Institutes of Health Research (PJT-162083), Reuben e Helene Dennis Scholar e Sun Life Financial New Investigator Award for Diabetes Research del Banting & Best Diabetes Centre (BBDC) e delle scienze naturali e Engineering Research Council (NSERC) del Canada (RGPIN-2016-06610). R.Y.K. è stato sostenuto da una borsa di studio dell'Università di Ottawa Cardiology Research Endowment Fund. J.H.L. è stato sostenuto dalla NSERC Doctoral Scholarship e dalla Ontario Graduate Scholarship. Y.O. è stata sostenuta dall'UOHI Endowed Graduate Award e dalla Queen Elizabeth II Graduate Scholarship in Scienza e Tecnologia.

Tutti i metodi e protocolli qui sono stati approvati dai Comitati per la cura degli animali nel The Animal Care and Veterinary Service (ACVS) dell'Università di Ottawa e del Centro di Phenogenomica (TCP) e sono conformi agli standard del Canadian Council on Animal Care. Va notato che tutte le procedure qui descritte dovrebbero essere eseguite sotto l'approvazione istituzionale e governativa, nonché da personale tecnicamente abile. Tutti i topi erano alloggiati in gabbie ventilate standard in ambienti con temperatura e umidità con 12 h/12 h di cicli di luce/scuro (21-22 gradi centigradi, 30%-60% di umidità per l'alloggiamento normale) e libero accesso all'acqua. I topi maschi C57BL/6J e ob/ob sono stati ottenuti dal Jackson Laboratory.
1. 2:1 Isocalorico IF Regimen
<ol><li>Per i modelli di topo di obesità magra e indotta dalla dieta, preparare una dieta normale (17% di grassi, ND) o dieta ad alto contenuto di grassi (45% di grassi, HFD). NOTA: il 60% di HFD può essere utilizzato per indurre una grave obesità indotta dalla dieta; tuttavia, a causa della morbidezza del pellet alimentare, è relativamente difficile misurare con precisione l'assunzione quotidiana di cibo. Un sistema di misurazione continua automatizzato può migliorare la versatilità per più tipi di diete.</li>
	<li>Misurare il peso corporeo della linea di base e la composizione corporea di ogni topo a 7 settimane di età utilizzando una scala e EchoMRI, rispettivamente. NOT:</</c1> Fare riferimento alla sezione 3 per la misurazione della composizione corporea.</li>
	<li>Sulla base del peso corporeo e dei risultati della composizione corporea, dividono casualmente e allo stesso modo i topi maschi C57BL/6J di 7 settimane in due gruppi: ad libitum (AL) e gruppi di digiuno intermittente (IF).</li>
	<li>Mettere da due a tre topi per gabbia e garantire l'accesso gratuito all'acqua potabile. NOT:</</c2> Il numero di topi per gabbia può influenzare il comportamento di assunzione di cibo. Si raccomanda di mantenere lo stesso numero di topi per gabbia in tutti i gruppi durante lo studio.</li>
	<li>Fornire 1 settimana di acclimatamento al nuovo ambiente gabbia e dieta prima di iniziare il regime IF.</li>
	<li>Periodo di digiuno: spostare i topi in una gabbia pulita con biancheria da letto fresca alle 12:00. Non aggiungere cibo per il gruppo IF, fornendo al gruppo AL una quantità ponderata di cibo. NOT:</</c3> Per ogni ciclo di digiuno, è importante modificare le gabbie per entrambi i gruppi AL e IF per garantire che entrambi i gruppi siano esposti alla stessa quantità di tempo di movimentazione.</li>
	<li>Dopo 24 h, misurare i pesi dei topi in entrambi i gruppi e negli avanzi di cibo nelle gabbie AL. NOT:</</c4> Assicurarsi di includere il peso delle briciole di cibo sulla tramoggia alimentare e sul fondo della gabbia, soprattutto quando si utilizza HFD, poiché i topi spesso rimuovono piccoli pellet o frammenti di cibo dalla tramoggia e li tengono vicino ai siti di nidificazione. L'assunzione media di energia per mouse alla fine di ogni ciclo 2:1 (3 giorni) è di circa 35 kcal, equivalente a 10 g per una dieta normale (3,3 kcal/g) e 7 g per HFD (4,73 kcal/g).</li>
	<li>Periodo di alimentazione: fornire una quantità ponderata di cibo alle 12:00 per entrambi i gruppi AL e IF.</li>
	<li>Dopo 48 h di fornire il cibo, misurare il peso del cibo e dei topi rimasti.</li>
	<li>Ripetere i passaggi da 1,6 a 1,10 per la durata dello studio(ad es. 16 settimane).</li>
</ol>2. Gruppo di controllo di alimentazione a coppie (PF)
 NOT:</</c0> Per un esperimento IF in cui si osserva un comportamento di alimentazione alterato in un modello di topo (ad esempio, iperfagia nei topi ob/ob), è necessario disporre di un gruppo di alimentazione di coppia come controllo per un corretto confronto indipendente dalle calorie con IF.
<ol><li>Per il gruppo di controllo PF, scaglionare la pianificazione dell'esperimento in modo che la stessa quantità di cibo utilizzata dal gruppo IF venga offerta al gruppo PF (Figura 2).</li>
	<li>Misurare la quantità di cibo consumato dal gruppo IF per 2 giorni di periodo di rialimentazione.</li>
	<li>Dividere questa quantità di cibo consumato nel gruppo IF in tre proporzioni e fornirlo quotidianamente al gruppo PF alle 12:00 PM. NOT:</</c1> Fornire la stessa quantità di cibo ogni giorno è fondamentale. Nel caso di topi con iperfagia, se i topi alimentati in coppia sono dotati di una quantità di cibo inferiore al loro consumo volontario in una sola volta, probabilmente consumeranno tutto il cibo fornito e saranno effettivamente digiunati. Ciò può quindi impedire un corretto confronto con i topi trattati con IF e confondere il risultato.</li>
	<li>Ripetere i passaggi da 2.1–2.3 per la durata dello studio.</li>
</ol>3. Analisi della composizione corporea
 NOT:</</c0> Poiché l'IF a lungo termine influisce sul peso corporeo nei topi, la composizione corporea può essere misurata a cicli appropriati (ad esempio, ogni 3 o 4 cicli) utilizzando un analizzatore di composizione corporea per quantificare il grasso e la massa magra in topi vivi non anestesizzati.
<ol><li>Accendere l'analizzatore della composizione corporea. NOT:</</c0> Prima di avviare il programma, lasciare la macchina accesa per almeno 2-3 h per riscaldarsi.</li>
	<li>Eseguire un test di sistema sull'analizzatore della composizione corporea per verificarne l'accuratezza della misurazione. Se necessario, calibrare il sistema utilizzando campioni di olio di canola e acqua.</li>
	<li>Misurare il peso corporeo di ogni mouse.</li>
	<li>Posizionare il mouse in un piccolo supporto cilindrico animale.</li>
	<li>Inserire un delimitatore per vincolare il movimento fisico del mouse durante la misurazione e posizionare il supporto nell'analizzatore di composizione del corpo.</li>
	<li>Eseguire il programma di scansione. NOT:</</c1> Ci vogliono circa 90–120 s per analizzare.</li>
	<li>Dopo la misurazione, rimuovere il supporto dall'apparecchiatura e riportare il mouse nella gabbia. NOT:</</c2> Un protocollo più dettagliato può essere trovato in una precedente pubblicazione9.</li>
</ol>4. Test di tolleranza al glucosio e all'insulina
<ol><li>Per il test di tolleranza al glucosio (GTT), misurare il peso corporeo e la composizione corporea di ogni mouse prima di sottoporre al digiuno e contrassegnare la coda con un marcatore permanente per un'indicizzazione facile e rapida.</li>
	<li>Mettere i topi in nuove gabbie senza cibo alle 19:00 per il digiuno notturno. NOT:</</c0> Il digiuno notturno è il protocollo standard, ma a causa della fisiologia del topo (ad esempio, aumento dell'utilizzo del glucosio dopo il digiuno prolungato di10,11), il digiuno più breve (6 h) può essere utilizzato come descritto per l'ITT.</li>
	<li>Dopo il digiuno 14-16 h (9:00 AM nel mattino seguente), misurare il peso corporeo e la composizione corporea di ogni topo e calcolare la quantità di dosaggio del glucosio in base al peso corporeo. NOT:</</c4> Per evitare una sopraelevazione dell'intolleranza al glucosio nei topi obesi, la massa magra ottenuta dall'analisi della composizione corporea può essere utilizzata per calcolare il dosaggio del glucosio12,13.</li>
	<li>Per ogni mouse, tagliare la punta della coda (0,5–1,0 mm) utilizzando forbici chirurgiche pulite. Dopo aver ripulito la prima goccia di sangue, disegna una nuova goccia di sangue dalla coda e misura il livello di glucosio nel sangue del digiuno al basale con il glucometer. NOT:</</c8> Il taglio della coda aggiuntivo non è necessario per ogni misurazione della glicemia durante GTT o ITT. La ferita può essere rinfrescata da abradendola con garza per disegnare una goccia di sangue.</li>
	<li>Sottoporre i topi a un'iniezione intraperitale (i.p.) di glucosio (1 mg/g di peso corporeo). NOT:</</c9> Sulla base dell'obiettivo di un esperimento (adesempio, esaminando gli effetti dell'incretina), la somministrazione orale del glucosio può essere eseguita mediante gavage orale. Il protocollo per orale GTT (OGTT) può essere trovato in un altro studio14.</li>
	<li>Misurare la glicemia dalla coda a 0, 5, 15, 30, 60 e 120 min iniezione post-glucosio.</li>
	<li>Dopo aver terminato la GTT, fornire una quantità sufficiente di cibo.</li>
	<li>Per il test di tolleranza all'insulina (ITT), rimuovere il cibo alle 9:00. NOT:</</c12> Dal momento che sia GTT che ITT sono esperienze che inducono stress per i topi che possono aumentare i livelli di glucosio nel sangue e cambiare la fisiologia, si consiglia di eseguire ITT dopo aver fornito almeno 2-3 giorni di recupero dopo l'esperimento GTT.</li>
	<li>Dopo il digiuno per 6 h (3:00 PM), misurare il glucosio nel sangue di base dalla coda come descritto al passaggio 4.4.</li>
	<li>Soggetti all'iniezione di insulina i.p. (0,65 mU/g di peso corporeo).</li>
	<li>Misurare la glicemia dalla coda a 0, 15, 30, 60, 90 e 120 min di iniezione post-insulina.</li>
	<li>Dopo aver terminato ITT, fornire una quantità sufficiente di cibo.</li>
</ol>5. Calorimetria indiretta
 NOT:</</c0> Il metabolismo energetico dei topi trattati con IF può essere ulteriormente valutato attraverso la calorimetria indiretta su un singolo ciclo di IF. Ciò misurerà il consumo di ossigeno (VO2),la produzione di biossido di carbonio (VCO2),il rapporto di cambio respiratorio (RER) e il calore (kcal/h).
<ol><li>Accendere la potenza del sistema calorimetrico indiretto almeno 2 h prima di eseguire l'esperimento. NOT:</</c0> Questo riscaldamento del sistema è importante per una misurazione accurata.</li>
	<li>Preparare le gabbie con biancheria da letto pulita, riempire le bottiglie d'acqua e aggiungere la quantità pre-pesata di chow alle tramogge di cibo.</li>
	<li>Controllare le condizioni del Drierite e calce soda. Se un indicatore di colore del Drierite appare rosa, che indica che il Drierite ha assorbito una grande quantità di umidità, è necessario sostituire o top con Drierite fresco.</li>
	<li>Calibrare il sistema utilizzando un gas con la composizione specifica (0,5% CO2, 20,5% O2).</li>
	<li>Misurare il peso corporeo e la composizione corporea di ogni mouse, che verrà utilizzato per normalizzare i dati VO2 e VCO2.</li>
	<li>Posizionare delicatamente un mouse per gabbia.</li>
	<li>Assemblare le gabbie metaboliche, posizionarle nella camera ambiente a temperatura controllata e collegarle alle linee di gas e al cavo del sensore di attività.</li>
	<li>Dopo aver impostato il profilo dell'esperimento aggiungendo parametri sperimentali appropriati utilizzando il software, eseguire il programma per la misurazione. Lo scopo della misurazione del primo giorno è quello di fornire un periodo di acclimatazione e misurare il metabolismo energetico di base.</li>
	<li>Alle 12:00 del giorno seguente, sottoporre i topi a 24 h di digiuno rimuovendo cibo e briciole dalla tramoggia e dal fondo della gabbia. Se necessario, sostituire con biancheria da letto pulita.</li>
	<li>Dopo 24 h, aggiungere la quantità pre-pesata di chow alla tramoggia per il periodo di rialimentazione.</li>
	<li>Continuare a misurare per i prossimi 48 h. Controllare regolarmente se il sistema è in esecuzione senza interruzioni hardware o software.</li>
	<li>Dopo aver completato la misurazione, terminare il programma e riportare i topi nelle gabbie originali. Misurare la quantità di cibo residuo per esaminare l'assunzione di cibo.</li>
	<li>Il protocollo dettagliato per la calorimetria indiretta può essere trovato in uno studio precedente9.</li>
</ol>

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<li>Toth, L. A., Trammell, R. A., Ilsley-Woods, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+Between+Housing+Density+and+Ambient+Temperature+in+the+Cage+Environment%3A+Effects+on+Mouse+Physiology+and+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Interactions Between Housing Density and Ambient Temperature in the Cage Environment: Effects on Mouse Physiology and Behavior.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 708-717 (2015).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

È stato ben documentato che SE fornisce effetti benefici sulla salute su varie malattie sia in esseri umani che negli animali8,15,16,17,18,19. I suoi meccanismi alla base, come l'autofagia e il microbioma intestinale, sono stati recentemente chiariti. Il protocollo presentato descrive un regime isocalorico 2:1 IF nei topi per...

Lo stile di vita moderno è associato a un tempo di assunzione giornaliero più lungo e a periodi di digiuno più lunghi1. Ciò contribuisce all'attuale epidemia globale di obesità, con svantaggi metabolici osservati nell'uomo. Il digiuno è stato praticato nel corso della storia umana, e i suoi diversi benefici per la salute includono durata prolungata, ridotto danno ossidativo, e ottimizzata energia omeostasi2,3. Tra i vari modi per praticare il digiuno, la privazione periodica di energia, definita digiuno intermittente (IF), è un metodo dietetico popolare che è ampiamente praticato dalla popolazione generale a causa del suo regime facile e semplice. Recenti studi in modelli preclinici e clinici hanno dimostrato che SE può fornire benefici per la salute paragonabili a prolungati a digiuno prolungato e restrizione calorica, suggerendo che IF può essere una potenziale strategia terapeutica per l'obesità e le malattie metaboliche2,3,4,5.
I regimi IF variano in termini di durata e frequenza del digiuno. Il digiuno alternato del giorno (ad esempio, 1 giorno di alimentazione/1 giorno di digiuno; 1:1 IF) è stato il regime IF più comunemente usato nei roditori per studiare i suoi effetti benefici sulla salute, le malattie cardiovascolari, le malattie neurodegenerative, ecc.2,3. Tuttavia, come mostrato negli studi precedenti6,7, e ulteriormente confermata meccanicamente nella nostra analisi di assunzione di energia8, 1:1 IF risultati in underfeeding ( . a causa della mancanza di tempo di alimentazione sufficiente per compensare la perdita di energia. Questo rende poco chiaro se i benefici per la salute conferiti da 1:1 SE sono mediati da restrizione calorica o modifica dei modelli alimentari. Pertanto, è stato sviluppato un nuovo regime IF che è mostrato qui, che comprende un modello di digiuno di 2 giorni /1 giorno (2:1 IF), che fornisce ai topi il tempo sufficiente per compensare l'assunzione di cibo (99%) e peso corporeo. Questi topi vengono quindi confrontati con un gruppo ad libitum (AL). Questo regime consente l'esame degli effetti dell'IF isocalorico in assenza di riduzione calorica nei topi selvatici.
Al contrario, in un modello murino che mostra un comportamento di alimentazione alterato, l'alimentazione AL potrebbe non essere una condizione di controllo adeguata per confrontare ed esaminare gli effetti di 2:1 IF. Ad esempio, poiché i topi ob/ob (un modello genetico comunemente usato per l'obesità) presentano iperfagia a causa della mancanza di leptina che regola l'appetito e la sazietà, quelli con 2:1 IF presentano un apporto calorico ridotto del 20% rispetto ai topi ob/ob con alimentazione AL. Pertanto, per esaminare e confrontare correttamente gli effetti dell'IF nei topi ob/ob, è necessario impiegare un gruppo di coppia di alimentazione come controllo adeguato.
Nel complesso, viene fornito un protocollo completo per eseguire isocalorico 2:1 IF, compreso l'uso di un controllo di alimentazione di coppia. È inoltre dimostrato che isocalorico 2:1 SE protegge i topi dall'obesità indotta dalla dieta ad alto contenuto di grassi e/o dalla disfunzione metabolica nei topi di tipo selvaggio e ob/ob. Questo protocollo può essere utilizzato per esaminare gli impatti benefici sulla salute di 2:1 IF su varie condizioni patologiche tra cui disturbi neurologici, malattie cardiovascolari e cancro.

<table><tbody><tr><td>Sistema completo di monitoraggio degli animali da laboratorio (CLAMS)</td><td>Columbus Instruments</td><td></td><td>Calorimetro indiretto</td></tr> Soluzione <tr><td>D-(+)-glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td>Per GTT</td></tr><tr><td>EchoMRI 3-in-1</td><td>EchoMRI</td><td>EchoMRI Analisi della composizione corporea 3-in-1</td><td></td></tr><tr><td>Glucometro e strisce</td><td>Bayer</td><td>Contour NEXT</td><td>Questi sono per esperimenti</td></tr> <tr><td>GTT e ITTDieta ad alto contenuto di grassi (45% Kcal% di grassi)</td><td>Research Diets Inc.</td><td>#D12451</td><td>3,3 Kcal/g</td></tr><tr><td>Dieta ad alto contenuto di grassi (60% Kcal% di grassi)</td><td>Research Diets Inc.</td><td>#D12452</td><td>4,73 Kcal/g</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>El Lilly</td><td>Humulin R</td><td>per ITT</td></tr><tr><td>Ceppo di topo: B6. Cg-Lepob/J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>#000632</td><td>Ob/Ob mouse</td></tr><tr><td>Ceppo di topo: C57BL/6J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>#000664</td><td></td></tr><tr><td>Normal chow (17% Kcal% di grassi)</td><td>Harlan</td><td>#2918</td><td></td></tr><tr><td>Scale</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td>Misurazione del peso corporeo e dell'assunzione di cibo</td></tr></tbody></table>

valutazione degli effetti metabolici del digiuno intermittente isocalorico 2:1 nei topi

Assessment of the Metabolic Effects of Isocaloric 2:1 Intermittent Fasting in Mice

Il digiuno intermittente (IF), un intervento dietetico che prevede la restrizione energetica periodica, è stato considerato per fornire numerosi benefici e contrastare le anomalie metaboliche. Finora sono stati documentati diversi tipi di modelli IF con durate variabili di periodi di digiuno e di alimentazione. Tuttavia, interpretare i risultati è impegnativo, poiché molti di questi modelli comportano contributi multifattoriali da strategie di restrizione del tempo e calorie. Ad esempio, il modello di digiuno giornaliero alternativo, spesso utilizzato come regime DI ROditore IF, può provocare l'alimentazione inedito, suggerendo che i benefici per la salute di questo intervento sono probabilmente mediati tramite limiti calorici e cicli di rifornimento di digiuno. Recentemente, è stato dimostrato con successo che 2:1 IF, che comprende 1 giorno di digiuno seguito da 2 giorni di alimentazione, può fornire protezione contro l'obesità indotta dalla dieta e miglioramenti metabolici senza una riduzione dell'apporto calorico complessivo. Presentato qui è un protocollo di questo intervento isocalorico 2:1 SE nei topi. È inoltre descritto un protocollo di alimentazione a coppie (PF) necessario per esaminare un modello murino con comportamenti alimentari alterati, come l'iperfagia. Utilizzando il regime 2:1 IF, è dimostrato che isocalorico IF porta a ridotto aumento di peso corporeo, migliore omeostasi del glucosio, e il dispendio energetico elevato. Pertanto, questo regime può essere utile per studiare gli impatti sulla salute di IF su varie condizioni di malattia.

La figura 1 mostra le analisi di alimentazione dopo il digiuno di 24 h e il confronto tra il digiuno intermittente 1:1 e 2:1. Un periodo di digiuno di 24 h ha comportato una riduzione del peso corporeo del 10%, che è stata completamente recuperata dopo 2 giorni di refeeding (Figura 1A). Un periodo di digiuno di 24 h ha indotto l'iperfagia durante i successivi 2 giorni di refeeding (Figura 1B). Tutta...

L'articolo corrente descrive un protocollo dettagliato per il digiuno intermittente isocalorico 2:1 per proteggere e trattare contro l'obesità e il metabolismo alterato del glucosio nei topi selvatici e ob/ob.

Valutazione degli effetti metabolici del digiuno intermittente isocalorico 2:1 nei topi

Intermittent fasting (IF), a dietary intervention involving periodic energy restriction, has been considered to provide numerous benefits and counteract ...

Due a uno regime di digiuno intermittente comprendono un giorno di digiuno seguito da due giorni di alimentazione che consente di studiare gli effetti degli interventi dietetici che comportano una restrizione periodica dell'energia piuttosto che gli effetti dell'apporto calorico. A differenza del digiuno giornaliero alternativo, che si traduce nell'alimentazione sotto l'alimentazione di due a uno il digiuno intermittente fornisce ai topi abbastanza tempo per compensare completamente la perdita di energia e la riduzione del peso corporeo, che si verificano durante il digiuno. Ciò consente agli scienziati di esaminare gli effetti del digiuno periodico indipendentemente dall'apporto calorico.Il digiuno intermittente da due a uno promuove una serie di benefici contro la dieta utilizzati nell'obesità e nella disfunzione metabolica associata, tra cui l'omeostasi del glucosio compromessa e la malattia epatica grassa. Questo protocollo può essere facilmente adattato a un regime dietetico da cinque a due composto da cinque giorni di alimentazione e due giorni di digiuno o alimentazione limitata nel tempo in cui l'accesso al cibo è limitato a otto ore al giorno. Se si utilizza un modello di mouse, che mostra un comportamento di alimentazione alternativo, come l'iperfagia, l'alimentazione ad libitum potrebbe non essere una condizione di controllo adeguata.In questo caso, sarà necessaria una regola di alimentazione di coppia per esaminare e confrontare gli effetti del digiuno intermittente. Inizia preparando una dieta normale o una dieta ricca di grassi per modelli di topi obesi indotti dalla magra e dalla dieta. Misurare il peso corporeo di base e la composizione di ogni topo C57BL/6J maschio di sette settimane utilizzando rispettivamente una bilancia e EchomRI.In base al peso e alla composizione corporea, i risultati si travidono casualmente e equamente i topi in due gruppi: ad libitum o AL, un digiuno intermittente o gruppi IF. Quindi, posizionare due o tre topi per gabbia assicurando che i topi abbiano libero accesso all'acqua potabile. Lasciare che i topi una settimana si acclimatino al nuovo ambiente della gabbia prima di iniziare il regime IF.Quando sei pronto per iniziare il periodo di digiuno, sposta i topi in una gabbia pulita con biancheria da letto fresca alle 12:00 .m. Fornire una quantità ponderata di cibo al gruppo AL. Nessun cibo per il gruppo IF.Dopo 24 ore, pesare i topi in entrambi i gruppi e il cibo rimasto nelle gabbie di AL. Alle 12:00.m, fornire una quantità ponderata di cibo sia ai gruppi AL che IF.Una volta che il periodo di alimentazione è finito misurare il peso dei topi e il cibo rimasto. Ripetere il ciclo per tutta la durata dello studio. Impostare un gruppo di alimentazione a coppia o controllato con PF per tutta la durata dell'esperimento al fine di garantire un confronto indipendente dalle calorie con IF. Misurare la quantità di cibo consumata dal gruppo IF.Dividilo uniformemente in tre porzioni e fornisci una porzione al giorno al controllo PF. Quando si lavora con animali con comportamenti alimentari alterati, come l'iperfagia, è fondamentale fornire una quantità uguale di cibo ogni giorno al gruppo di controllo alimentato a coppia al fine di impedire ai topi di mangiare il cibo tutto in una volta. Per analizzare la composizione corporea dei topi accendere l'analizzatore di composizione corporea e lasciare la macchina attiva per due o tre ore per riscaldarsi.Prima di utilizzarlo, eseguire un test di sistema per garantire l'accuratezza della misurazione. E se necessario, calibrare il sistema con olio di colza. Misurare il peso corporeo di ogni mouse.Quindi, posizionarlo nel piccolo supporto cilindrico animale. Inserire un delimitatore per vincolare il movimento fisico del mouse durante la misurazione. Posizionare il supporto nell'analizzatore di composizione corporea.Eseguire il programma di scansione, che dovrebbe richiedere da 90 a 120 secondi. Quindi, rimuovere il supporto dall'apparecchiatura. Riposizionare il topo nella gabbia.Condurre un test di tolleranza al glucosio e all'insulina per esaminare gli effetti del digiuno intermittente sull'omeostasi del glucosio. Dopo un digiuno notturno o di sei ore, eseguire un'iniezione intraperitoneale di glucosio o insulina su ciascun topo. Quindi, misurare la glicemia a 0, 5, 15, 30, 60 e 120 minuti dopo l'iniezione usando un glucometro.Per studiare gli effetti del digiuno intermittente sul metabolismo energetico, eseguire la calorimetria indiretta su un singolo ciclo di IF. Dopo che i topi si sono acclimatato al sistema, digiunali rimuovendo cibo e briciole dalla tramoggia e dal fondo della gabbia. Re-introdurre il cibo dopo 24 ore per il periodo di rialimentazione di due giorni. Alla fine del ciclo IF, riporta i topi nella loro gabbia originale e raccogli dati dal programma.I topi che hanno digiunato per 24 ore hanno sperimentato una riduzione fino al 10% del peso corporeo, che è stato completamente recuperato dopo due giorni di rialimentazione. Confrontando l'assunzione di energia da uno a uno e due a uno di digiuno intermittente, si è scoperto che un giorno di periodo di rialimentazione non era sufficiente a compensare il calorico perso che si verificava durante il digiuno. Rispetto all'AL, il trattamento IF ha portato a un aumento del peso corporeo inferiore nei topi di tipo selvatico nutriti con chow normale o dieta ricca di grassi senza differenze significative nell'assunzione di cibo.L'analisi della composizione corporea ha rivelato che IF ha ridotto la massa grassa senza cambiare la massa magra nei topi di tipo selvatico. Gli esperimenti con il controllo dell'alimentazione a coppia hanno confermato che la diminuzione dell'aumento di peso corporeo da parte di IF non era dovuta a un'assunzione alterata di energia nei topi di tipo selvatico. Tuttavia, nel gruppo di controllo geneticamente obeso, ob/ob, i topi alimentati a coppia erano indistinguibili dal gruppo IF nel peso corporeo e nella composizione corporea.Test di tolleranza al glucosio e all'insulina hanno dimostrato che i topi IF a dieta ricca di grassi mostravano un miglioramento significativo dell'omeostasi del glucosio rispetto alla dieta ricca di grassi AL e ai topi alimentati a coppia con dieta ricca di grassi. Nei topi ob/ob, il gruppo IF ha mostrato una gestione significativamente migliorata del glucosio con escursioni di glucosio più piccole rispetto al gruppo di controllo alimentato a coppia con sensibilità all'insulina non influenzata. Un altro effetto metabolico del SE osservato nei topi di tipo selvatico è stato un maggiore consumo di ossigeno indicativo del dispendio energetico specificamente durante il periodo di alimentazione.Il comportamento alimentare dei topi può essere influenzato da fattori ambientali tra cui la densità abitativa. Pertanto, è importante mantenere lo stesso numero di topi alloggiati per gabbia tra i gruppi e nel corso dello studio. Quando si utilizza un nuovo modello di mouse, si consiglia di esaminare il comportamento di alimentazione prima di eseguire un esperimento di digiuno intermittente.Il digiuno intermittente da due a uno isocalorico può essere facilmente applicato ad altri modelli di malattia tra cui diabete, malattie cardiache, aterosclerosi e malattie neurologiche.

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