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Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni
Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni
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JoVE Journal Cancer Research
Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni

Full Text
9,554 Views
09:06 min
December 13, 2019

DOI: 10.3791/60357-v

Wen-Yang Hu1, Dan-Ping Hu1, Lishi Xie1, Lynn A. Birch1, Gail S. Prins1,2,3

1Department of Urology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 2Department of Pathology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 3University of Illinois Cancer Center, College of Medicine,University of Illinois at Chicago

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Utilizzando le cellule epiteliali primarie umane, riportiamo un nuovo metodo privo di biomarcatori di caratterizzazione funzionale delle cellule staminali da un saggio di ritenzione di etichette basato su sferoidi. Viene descritto un protocollo passo-passo per l'etichettatura delle celle 2D BrdU, CFSE o Far Red; formazione di sferoidi tridimensionali; l'identificazione delle cellule staminali di conservazione dell'etichetta mediante immunocitochimica; e l'isolamento da parte della FACS.

L'isolamento delle cellule staminali rimane una sfida importante a causa del co-isolamento delle cellule progenitrici utilizzando i metodi attuali. Abbiamo sviluppato un nuovo saggio privo di biomarcatori per isolare le cellule staminali quiescenti dai progenitori misti. Il principale vantaggio di questo saggio di ritenzione delle etichette a base di sferoidi, può espandere e isolare le cellule staminali vive dai loro progenitori figli da FACS utilizzando l'etichettatura CFSE o Far Red.

Mentre le terapie convenzionali debellano la maggior parte delle cellule tumorali della prostata, le cellule staminali tumorali rimangono dovute alla resistenza terapeutica, guidando così la progressione della malattia. L'isolamento cellulare simile a quello delle staminali consentirà l'identificazione di nuovi geni che possono essere corresponso terapeuticamente per un'efficace remissione delle malattie. Il nostro test di ritenzione di etichette è applicabile per il normale isolamento delle cellule staminali da vari tessuti e cellule e per la ricerca sulle cellule staminali tumorali.

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