Name: Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo langioplastica coronaria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Scopri come le cellule progenitrici coronariche e i biomarcatori solubili predicono eventi cardiovascolari avversi dopo angioplastia. Questo metodo aiuta a stratificare il rischio nei pazienti con malattia coronarica.

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Gli autori ringraziano il sostegno del Programma Istituzionale E015; e PARTES-CONACYT Sectoria-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Questo protocollo soddisfa le linee guida istituzionali del Comitato Etico per la ricerca umana.
1. Angiografia coronaria, ultrasuoni e campionamento del sangue
<ol><li>Richiedere informazioni cliniche e demografiche di base prima dell'intervento coronarica. Raccogliere i dati dell'individuo: età, sesso, stato di fumo attuale, indice di massa corporea (BMI), alta pressione sanguigna, dilipidemia, diabete mellito, farmaci e l'indicazione per l'attuale angiografia coronarica.</li>
	<li>Eseguire l'angiografia coronarica attraverso la cateterizzazione cardiaca utilizzando un approccio radiale. Questa procedura deve essere eseguita sotto una guida alla fluoroscopia nella stanza dell'emodinamica da cardiologi esperti. NOTA: Identificare i recipienti valutabili. Per il presente studio, i vasi valutabili sono stati definiti come arterie con sezioni superiori a 1,5 mm e stenosi di lumen di oltre il 50%.</li>
	<li>Avanzare il catetere ad ultrasuoni intravascolari nella regione di interesse e registrare le immagini. Utilizzare il software appropriato per individuare e misurare la più piccola area luminale.</li>
	<li>Utilizzare un catetere coronarico per raccogliere 10 mL di sangue dalla posizione più vicina alla placca.</li>
	<li>Dopo la dimissione del paziente, programmare valutazioni mediche periodiche per seguire gli endpoint dello studio. Se il contatto telefonico non è possibile o una visita medica viene ritardata di più di 2 mesi, richiedere a una persona autorizzata (precedentemente progettata) di verificare gli endpoint dello studio. NOTA: Si consideri uno dei seguenti un MACE: 1) morte cardiovascolare, 2) nuova infarto miocardico, 3) angina instabile che richiede una visita medica non programmata entro 24 h, 4) resienosi stent come dimostrato da angiografia coronarica, 5 episodi) di scompensato insufficienza cardiaca che richiede attenzione clinica.</li>
</ol>2. Determinazione dei PMC circolanti (Figura 2)
<ol><li>Elaborare il sangue entro 1 h dalla raccolta. Trasferire 6 mL del sangue raccolto su un tubo conico da 15 mL e diluire 1:1 (v/v) con 1x fosfato buffered saline (PBS), pH - 7.4.</li>
	<li>Aggiungere 2 mL di grado di pendenza di densità a tre provette. Trasferire con attenzione tre aliquote di uguale volume di sangue diluito in ogni provetta contenente il mezzo di pendenza di densità. NOTA: Il volume totale del gradiente di densità medio e del sangue diluito non deve superare i tre quarti della capacità massima della provetta.</li>
	<li>Centrifuga a 1.800 x g, 4 gradi centigradi per 30 min. Trasferire la banda all'interfaccia tra gli strati in un nuovo tubo. Aggiungere 2 mL di PBS e centrifuga a 1.800 x g, 4 gradi centigradi per 6 min. Il pellet conterrà i MPC.</li>
	<li>Lavare il pellet più volte. Aspirare la soluzione precedente e risospendere delicatamente il pellet cellulare in PBS fresco. Per i furici successivi, centrifugare a 1.800 x g, 4 C per 2 min. Ripetere il processo 6x.</li>
	<li>Risospendere il pellet cellulare in 1 mL di PBS. Mescolare 20 - L della sospensione cellulare con 0.4% trypan blu, diluito 1:1 (v/v). Applicare una goccia su un emocitometro e contare le cellule non colorate al microscopio luminoso.</li>
	<li>Procedere alla determinazione dei PMC. Etichettare 5 mL tubo di citometria di flusso e fuori aliquota 1 x 106 cellule per tubo. Preparare gli anticorpi di controllo corrispondenti abbinati all'isotipo. Centrifuga a 1.800 x g,4 gradi centigradi per 6 min e scartare il supernatante.</li>
	<li>Aggiungere l'anticorpo primario diluito in 100 gradi di una soluzione di incubazione degli anticorpi costituita da 1x PBS (pH - 7,4), 2 mM di acido etilenediaminetracetraacetica (EDTA) e 0,05% albumina del siero bovino (BSA). Risospendere per 10 s e incubare per 20 min a 4 gradi centigradi, protetto dalla luce. Il protocollo può essere sospeso a questo passo fissando i linfociti nel 4% di paraformaldeide in PBS e conservando campioni fino a 24 h a 4 gradi centigradi. NOTA: le concentrazioni finali degli anticorpi primari utilizzati nel presente protocollo erano CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.</li>
	<li>Centrifuga a 1.800 x g,4 gradi centigradi per 2 min e scartare il supernatante. Risospendere in 500 - L di 1x PBS (pH - 7,4), 2 mM EDTA.</li>
	<li>Eseguire l'analisi della citometria di flusso. Utilizzare anticorpi di controllo associati a isotipi per impostare la colorazione dello sfondo. Quindi, selezionare i linfociti sparsi nella trama FSC/SSC, cercando di escludere i granulociti residui, i detriti cellulari e altre particelle, che di solito si trovano nella parte inferiore, distribuita a sinistra nella trama. Tale distribuzione è considerata al 100%.</li>
	<li>Utilizzare un cancello contenente un elevato numero di cellule con immunofenotipo comune CD45 e CD34. Per gli immunofenotipi doppio positivo, utilizzare un cancello che in precedenza identifica CD45,CD34, con l'aggiunta di KDR (VEGFR-2),CD133,o CD184. Identificare le sottopopolazioni MPC in base ai marcatori di superficie cellulare specifici. Segnalare la percentuale di eventi con cancello.</li>
	<li>Identificare le principali sottopopolazioni di MPC. Nel presente studio i principali immunofenotipi sono stati CD45,CD34,CD33,CD45 , CD184 , CD45,CD34 , CD34,CD34 , CD133,CD184,CD45,CD34,KDR,CD45 , CD45 , CD34 , CD34 , CD133 , e CD45 , CD34,CD14 , KDR , CD14 . NOTA: I marcatori di superficie cellulare utilizzati erano CD45 (linfociti), CD34 (cellule endoteliali e/o vascolari), KDR (VEGFR-2), marcatore di membrana delle cellule endoteliali), CD133 (cellule progenitrici endoteliali) e CD184 (cellule staminali ematopoietiche e cellule endoteliche).</li>
</ol>3. Determinazione dei biomarcatori solubili al plasma
<ol><li>Utilizzare un saggio immunosorbente legato agli enzimi (ELISA) per determinare la concentrazione di SICAM-1 e MMP-9(Figura 3, fila superiore).<ol>
<li>Centrifugare i campioni di sangue a 3.000 x g, temperatura ambiente per 5 min e raccogliere il plasma.</li>
		<li>Etichettare gli standard, i tubi campione e i tubi di controllo. Egli i pozzi pre-rivestiti nella piastra di prova lavando 2x con il buffer di lavaggio fornito nel kit ELISA.</li>
		<li>Trasferire gli standard, i campioni e i controlli nei pozzi. Sigillare e incubare a 37 gradi centigradi per 90 min. NOTA: Non lasciare asciugare completamente i pozzi.</li>
		<li>Eliminare il contenuto e aggiungere l'anticorpo antibio di biotina-rilevamento. Sigillare e incubare a 37 gradi centigradi per 60 min.</li>
		<li>Scartare il contenuto e lavare 3x. Sigillare la placca e incubare in sequenza con soluzione di lavoro streptavidina seguita da substrato tetramethylbenzidine a 37 gradi centigradi per 30 min, protetto dalla luce. Lavare 3volte tra le incubazioni. Quando il colore si sviluppa, aggiungere la soluzione di arresto e leggere l'assorbimento della densità ottica in un lettore ELISA a microplacca.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilizzare un saggio immunomagnetico multiplexing per determinare la concentrazione del fattore di necrosi tumorale alfa (TNF) e dell'interleumina 1 beta (IL-1) (Figura 3, riga inferiore).<ol>
<li>Etichettare gli standard, i tubi campione e i tubi di controllo.</li>
		<li>Vorticare le fiale magnetiche per 30 s. Trasferire la sospensione del tallone a tubi di dimensioni appropriate, e quindi ai pozzi nella piastra di assaggio multiplexing. Il vortice periodico evita la precipitazione delle perline.</li>
		<li>Inserire in modo sicuro la lavapiastra magnetica portatile. Attendere 2 min per le perline di accumularsi sul fondo di ogni pozzo e rapidamente invertire sia la lavatrice a lapiastra magnetica a mano e l'assemblaggio della piastra, su un lavandino o contenitore di rifiuti. Ricordarsi di utilizzare la lavatrice a piastra magnetica portatile per mantenere le perline all'interno dei pozzi.</li>
		<li>Aggiungere 150 l di tampone di lavaggio in ogni pozzo e attendere 30 s per consentire alle perline di accumularsi sul fondo. Eliminare il contenuto come nel passaggio 3.2.3. Quindi, aggiungere 25 l di buffer di asino universale (fornito nel kit) seguito da 25 - L di standard, campioni e controlli preparati.</li>
		<li>Sigillare la piastra e incubare per almeno 60 min a temperatura ambiente, leggera, con agitazione costante a 500 giri/m. In alternativa, incubare durante la notte a 4 gradi centigradi, protetti dalla luce, con agitazione costante a 500 giri/min, se possibile.</li>
		<li>Lavare 2x aggiungendo 150 l di tampone di lavaggio e attendere 30 s. Scartare il contenuto inserendo la lavatrice a mano. Attendere 2 min e invertire su un lavandino o contenitore di rifiuti.</li>
		<li>Incubare in sequenza con 25 l di miscela di anticorpi di rilevamento seguita da 25 - L di soluzione streptavidin-PE a temperatura ambiente per 30 min, sigillato e protetto dalla luce, con agitazione costante a 500 rpm. Lavare 2x tra le incubazioni, come descritto al punto 3.2.6.</li>
		<li>Ottenere le letture. Aggiungere 120 l di buffer di lettura. Sigillare la piastra e incubare 5 min a temperatura ambiente, protetto dalla luce, con agitazione costante a 500 rpm. Eseguire la lettura su un lettore di saggi multiplexing. Regolare i parametri di lettura in base a ciascun analita.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+coronary+artery+disease%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li>
<li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study%3A+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li>
<li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li>
<li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li>
<li>Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon%2C+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li>
<li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+blood+sampling%3A+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment%3F%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li>
<li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li>
<li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+for+Artificial+Internal+Organs+Journal%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li>
<li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy%3A+the+BIOCRT+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline%2C+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01(2019).</li>
<li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790(2010).</li>
<li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li>
<li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

La raccolta di sangue dall'arteria coronaria interessata può essere difficile. A volte, l'arteria coronaria è a malapena accessibile. In questo caso, il campionamento dal seno venoso può essere un'alternativa. Abbiamo eseguito test di convalida confrontando biomarcatori circolanti nell'arteria coronaria contro il seno venoso, senza differenze significative. Tuttavia, le prestazioni dei biomarcatori circolanti sono state convalidate solo per il campionamento coronario. Pertanto, le prestazioni dei biomarcatori ottenuti da...

L'angioplastica coronarica e lo stenting rappresentano una procedura di recupero per i pazienti con malattia coronarica (CAD). Tuttavia, importanti eventi cardiovascolari avversi (MACE), tra cui la morte cardiovascolare, l'infarto miocardico, la restenosi coronarica e gli episodi di angina o insufficienza cardiaca di scompensare, possono verificarsi mesi dopo l'intervento coronarico, spingendo visite non programmate in ospedale. I MACE sono comuni in tutto il mondo e la loro morbi-mortalità è alta1.
La lesione coronarica ischemica induce la risposta vascolare precoce e meccanismi riparativi che coinvolgono la mobilitazione dei MMP a causa della loro capacità di differenziazione e/o del potenziale angio-reparativo, così come la produzione di molecole solubili come molecole di adesione intercellulare (ICAM), metalloproteine a matrice (MMM), e specie reattive dell'ossigeno, che riflette l'adesione cellulare, la rimodellamento dei tessuti e lo stress ossidativo. Anche se caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell'arteria coronaria sono state utilizzate per prevedere i MACE, alcuni studi hanno suggerito che i biomarcatori correlati ai meccanismi di lesione e riparazione che si verificano nell'endotelio coronario potrebbero essere molto utili per l'identificazione precoce e la prognosi di eventi cardiovascolari in pazienti con CAD sottoposti all'angioplastica coronaria2,3,4,5.
Il continuo interesse per la comprensione dei meccanismi alla base delle lesioni e della riparazione CAD ha motivato gli sperimentatori a studiare i biomarcatori circolanti intracoronari, perché il campionamento coronarica riflette più da vicino i danni vascolari e la riparazione6. Tuttavia, la caratterizzazione dei biomarcatori coronarici negli studi sull'uomo è stata scarsa7,8,9. Pertanto, lo scopo del presente studio era descrivere un metodo per determinare la quantità di MPC circolanti coronarici e molecole solubili, riflettendo sia lesioni vascolari che riparazioni, e per mostrare se questi biomarcatori sono associati ai MACE e alla prognosi clinica dei pazienti CAD che hanno subito un'angioplastica coronarica. Questo metodo si basa sull'uso di MPC vascolari circolanti, circolanti e molecole solubili ottenute campionando posizioni più vicine al danno del vaso. Può anche essere utile per studi clinici per l'ischemia degli arti inferiori, ictus, vavulite, trombosi venosa, e altre lesioni che coinvolgono lesioni vascolari e riparazione.

<table><tbody><tr><td>BSA</td><td>Roche</td><td>10735086001</td><td>l'albumina sierica bovina (BSA) come agente tampone, stabilizzante, standard e per miscelazione.</td></tr><tr><td>Perle di calibrazione</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-607</td><td>Le perle di calibrazione MACQuant sono fornite in soluzione acquosa contenente lo 0,05% di azide di sodio. 3,5 ml per un massimo di 100 test</td></tr><tr><td>CD133/1 (AC133)-PE</td><td>Milteny Biotec / MACS</td><td>#130-080-801</td><td>Anticorpo coniugato a R-Ficoeritrina in tampone PBS/EDTA</td></tr><tr><td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-103-798</td><td>Monoclonale, isotipo ricombinante umano IgG1, coniugato</td></tr><tr><td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-601</td><td>Anticorpo coniugato a R-Ficoeritrina in tampone PBS/EDTA</td></tr><tr><td>CD34-FITC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-081-001</td><td>Il clone di anticorpo monoclonale AC136 rileva un epitopo di classe III del CD34</td></tr><tr><td>CD45- VioBlue</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-092-880</td><td>Anticorpo monoclonale CD45,</td></tr><tr><td>provette coniugate</td> umane <td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>#339651</td><td>Provette coniche da centrifuga da 15 ml</td></tr><tr><td>Provette per citometria</td><td>FALCON Corning Brand</td><td>#352052</td> 5 <td>mL Provetta a fondo tondo in polistirene. Stile 12x75. Sterile.</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0729</td><td>Metalli pesanti, (come Pb) < 10 ppm, Fe < 0,01%, As < 1ppm, Insolubili < 0,005%</td></tr><tr><td>Neubauer migliorato</td><td>Senza marca</td><td>Senza numero di catalogo</td><td>Emocitometro per il conteggio delle cellule. (intervallo 0,1000 mm, 0,0025 mm2)</td></tr><tr><td>Provette per la raccolta del sangue K2 EDTA BD</td><td>Vacutainer</td><td>#367863</td><td>Provetta vacutainer in plastica lilla (K2E) 10,8 mg, 6 mL.</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stemcell Technologies</td><td>01-63-12-002-A</td><td>Sterile e controllato sulla presenza di endotossine. Densità: 1,077&plusmn; 0,001g/mL</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>SIGMA-ALDRICH</td>#SZBF0920V <td></td><td>Fissazione di campioni biologici, (polvere, 95%)Trasferimento di</td></tr> <tr><td>pipette 1,3mL</td><td>CRM Globe</td><td>PF1016, PF1015</td><td>La pipetta di trasferimento è uno strumento che facilita il trasferimento di liquidi con maggiore precisione.</td></tr><tr><td>Provette</td><td>KIMBLE CHASE</td><td>45060 13100</td><td>Provette resistenti al calore. DIMENSIONI/TAPPO 13 x 100 mm</td></tr></tbody></table>

cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

I principali eventi cardiovascolari avversi (MACE) influiscono negativamente sulla prognosi cardiovascolare dei pazienti sottoposti a angioplastica coronarica a causa di lesioni ischemiche coronariche. L'entità del danno coronario e i meccanismi di riparazione vascolare sono fattori che influenzano il futuro sviluppo dei MACE. Caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell'arteria coronaria hanno dimostrato informazioni prognostiche per i MACE. Tuttavia, l'uso di biomarcatori circolanti intracoronarici è stato postulato come un metodo conveniente per l'identificazione precoce e la prognosi dei MACE, in quanto riflettono più da vicino meccanismi dinamici che coinvolgono danni coronarici e riparazione. La determinazione dei biomarcatori circolanti coronarici durante l'angioplastica, come il numero di sottopopolazioni di cellule progenitrici mononucleari (PPC) e la concentrazione di molecole solubili che riflettono l'infiammazione, l'adesione cellulare e la riparazione, valutazione degli sviluppi futuri e della prognosi dei MACE 6 mesi dopo l'angioplastica coronarica. Questo metodo è evidenziato dalla sua natura traslazionale e dalle migliori prestazioni rispetto ai biomarcatori periferici circolanti sul sangue per quanto riguarda la previsione dei MACE e il suo effetto sulla prognosi cardiovascolare, che possono essere applicati per la stratificazione del rischio dei pazienti con malattia coronarica in fase di angioplastica.

Coronaria, seno venoso e sangue periferico sono stati raccolti da 52 pazienti sottoposti ad angiografia coronarica (Figura 1) e hanno mostrato un'alta prevalenza di ipertensione e dislipidemia. Al follow-up clinico, 11 (21,1%) I MACE si sono verificati 6 mesi dopo l'angiografia coronarica: morte (n ) e angina che richiedono la frequenza ospedaliera (n . 6), infarto miocardico (n ) e/o prove di insufficienza cardiaca (n . 4).
<p class="jove_content" fo:kee...

Lo sviluppo di importanti eventi cardiovascolari avversi, che influenzano la prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronarica, sono influenzati dall'entità del danno coronarica e dalla riparazione vascolare. L'uso di nuovi biomarcatori cellulari e solubili, reattivi ai danni vascolari e alla riparazione, sono utili per prevedere lo sviluppo di MACE e prognosi.

Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Sebbene l'angioplastica aiuti i pazienti con malattia coronarica, gli eventi cardiovascolari possono ancora verificarsi dopo la procedura. Poiché gli MPC e le molecole solubili sono ottenuti dalla circolazione coronarica, possono essere correlati al grado di danno vascolare e riparazione. L'MPC coronarica e i livelli di mediatore solubili possono quindi essere utilizzati per stimare eventi cardiovascolari e prognosi in pazienti con malattia coronarica sottoposta ad angioplastica coronarica.Gli MPC e le molecole solubili possono anche essere usati per stimare complicazioni e prognosi che si verificano in diverse impostazioni ischemiche, come l'ictus ischimico degli arti ricorrente. A dimostrare la procedura saranno Eduardo Vera-Gomez e Alejandro Hernandez-Patricio, tecnici di laboratorio, e Karen De La Vega-Moreno e Carlos Zamora-Aleman, studenti universitari. Saranno inoltre manifestati Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, studentessa di Master of Science, Alberto Melchor-Lopez, dottorando, e Mario Antonio Tellez-Gonzalez, collaboratore di Master of Science.Entro un'ora dalla raccolta, trasferire sei millilitri del campione di sangue raccolto in un tubo conico da 15 millilitri e dil

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tessuto cardiaco umano alberga popolazioni di cellule precursore perivascolari multipotenti che possono essere adatti per la rigenerazione del miocardio. La tecnica qui descritta permette l'isolamento e la purificazione simultanea di due popolazioni di cellule stromali multipotenti associati con i vasi sanguigni nativi, cioè CD146 + CD34 - periciti e CD34 + CD146 - cellule avventiziale, dal miocardio umano.

Isolamento di perivascolare Multipotent precursori delle cellule popolazioni dal cardiache umane Tissue

Presentiamo tre protocolli nuovi e più efficienti per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte umane in cardiomiociti, cellule endoteliali e cellule muscolari lisce e un metodo di consegna che migliora l'attecchimento delle cellule trapiantate, combinando l'iniezione di cellule con la consegna citochine patch-mediata.

Pluripotenti cellule staminali derivate cellule cardiache per la riparazione del miocardio

cellule progenitrici endoteliali (EPC) sono cruciale coinvolti nella neovascolarizzazione di tessuti ischemici. Questo metodo descrive l'isolamento di EPC umani da sangue periferico, così come l'identificazione della loro potenziale migratorio contro campioni di siero di pazienti chirurgici cardiaci.

L&#39;isolamento di cellule progenitrici endoteliali da volontari sani e il loro potenziale migratori influenzato dal siero campioni dopo cardiochirurgia

Questo protocollo viene illustrata una procedura sicura ed efficace per modificare CD133+ cellule staminali ematopoietiche. L'approccio non-virale, magnetico presentato basato su polyplex può fornire una base per l'ottimizzazione degli effetti terapeutici delle cellule staminali anche per quanto riguarda il monitoraggio del prodotto somministrato cella tramite risonanza magnetica.

Protocollo per il trasferimento di MicroRNA in adulto cellule staminali emopoietiche derivate da midollo osseo per abilitare ingegneria cellulare combinata con il Targeting magnetico

Qui presentiamo un metodo affidabile per riprogrammare i fibroblasti embrionali primari in cardiomiociti funzionali tramite sovraespressione di GATA4, Hand2, Mef2c, Tbx5, miR-1 e miR-133 (GHMT2m) al fianco di inibizione di segnalazione di TGF-β. Il nostro protocollo genera pestaggio cardiomyocytes fin dal post-traduzionali di 7 giorni con fino a 60% efficienza.

Soppressione della segnalazione Pro-fibrotici rafforza fattore-mediata riprogrammazione di fibroblasti embrionali di topo in cardiomiociti indotti

Questo protocollo descrive una tecnica di differenziazione endoteliale di cellule progenitrici cardiache. Si concentra in particolare su come la concentrazione nel siero e la densità di semina delle cellule influenzano il potenziale di differenziazione endoteliale.

Induzione di differenziazione endoteliale in cellule progenitrici cardiache in condizioni di basso del siero

I modelli in vitro di angiogenesi coronarica possono essere utilizzati per la scoperta dei meccanismi cellulari e molecolari dell'angiogenesi coronarica. Le colture in vitro espiante di venosus e tessuti endocardio mostrano una solida crescita in risposta al VEGF-A e mostrano un modello simile di espressione COUP-TFII come in vivo.

Modello in vitro dell'angiogenesi coronarica

L'amputazione degli arti inferiori può verificarsi anche dopo l'angioplastica dei vasi ostruite nell'ischemia degli arti critici (CLI). Le cellule progenitrici mononucleari (MPC) riflettono la riparazione vascolare. Il presente protocollo descrive la quantificazione degli MPC dalla circolazione vicina all'angioplastica e la sua relazione con la disfunzione endoteliale e la previsione dell'amputazione degli arti inferiori.

Previsione dell'amputazione mediante cellule progenitrici mononucleari circolanti locali in pazienti trattati con angioplastica con ischemia degli arti critici

Questo studio presenta un modello suino chirurgico di ischemia miocardica cronica dovuta a stenosi progressiva dell'arteria coronaria, con conseguente compromissione della funzione cardiaca senza infarto. Dopo l'ischemia, gli animali vengono sottoposti a trapianto di bypass aortocoronarico off-pump con posizionamento epicardico di cerotti di collagene carichi di esosomi derivati da cellule staminali. Questa terapia aggiuntiva migliora la funzione miocardica e il recupero.

Modello suino chirurgico di ischemia miocardica cronica trattata con cerotto di collagene carico di esosomi e innesto di bypass aortocoronarico off-pump

Sono stati processati campioni di tessuto di endarterectomia coronarica per isolare singoli nuclei utilizzando un protocollo di dissociazione ottimizzato. L'integrità dei nuclei isolati è stata convalidata attraverso tre approcci complementari: colorazione di esclusione blu di tripano per valutare l'integrità della membrana, microscopia confocale basata su DAPI per confermare la morfologia nucleare e citometria a flusso per quantificare la resa e la purezza nucleare.

Isolamento a nucleo singolo dal tessuto endorerectomico coronarico di pazienti con bypass coronarico

Scopri come le cellule progenitrici coronariche e i biomarcatori solubili predicono eventi cardiovascolari avversi dopo angioplastia. Questo metodo aiuta a stratificare il rischio nei pazienti con malattia coronarica.

Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

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