Name: Perfusione e inflazione del polmone del topo per listologia tumorale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-06T15:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 24 s
Description: Impara la perfusione e l'inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale. Questo metodo permette di esaminare la patologia polmonare e valutare le metastasi con precisione.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

La ricerca riportata in questa pubblicazione è stata supportata dal National Center for Advancing Translational Sciences con il premio UL1TR003096 (MDE), National Heart, Lung, and Blood Institute Predoctoral Fellowship in Lung Diseases Training Program 5T32HL134640 (MLD).

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università dell'Alabama a Birmingham.
1. Protocollo sperimentale
<ol></ol>

<ol><li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R., Structure, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li>
<li>Vasilescu, D. M., Knudsen, L., Ochs, M., Weibel, E. R., Hoffman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+murine+lung+preparation+for+detailed+structural+evaluation+via+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Optimized murine lung preparation for detailed structural evaluation via micro-computed tomography.</a> Journal of Applied Physiology. 112 (1), 159-166 (2012).</li>
<li>Blumler, P., Acosta, R. H., Thomas-Semm, A., Reuss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fixation+for+the+preservation+of+air+spaces%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Lung+Research%22%5BJournal%5D)">Lung fixation for the preservation of air spaces.</a> Experimental Lung Research. 30 (1), 73-82 (2004).</li>
<li>Oldmixon, E. H., Suzuki, S., Butler, J. P., Hoppin, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+dehydration+fixes+elastin+and+preserves+lung+air-space+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Perfusion dehydration fixes elastin and preserves lung air-space dimensions.</a> Journal of Applied Physiology. 58 (1), 105-113 (1985).</li>
<li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), 843-851 (2010).</li>
<li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li>
<li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).</li>
<li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+10%25+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage.+A+comparison+of+eleven+laboratory+species%5BTitle%5D)+AND+%22American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage. A comparison of eleven laboratory species.</a> American Review of Respiratory Disease. 132 (5), 1078-1083 (1985).</li>
<li>Edmonds, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-31+initiates+lung+tumorigenesis+and+promotes+mutant+KRAS-driven+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-31 initiates lung tumorigenesis and promotes mutant KRAS-driven lung cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (1), 349-364 (2016).</li>
<li>Zhao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wogonin+suppresses+melanoma+cell+B16-F10+invasion+and+migration+by+inhibiting+Ras-medicated+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Wogonin suppresses melanoma cell B16-F10 invasion and migration by inhibiting Ras-medicated pathways.</a> PLoS One. 9 (9), 106458(2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

La procedura sopra descritta per la perfusione, l'inflazione e la fissazione dei polmoni del topo è ideale per una preparazione rapida ed efficiente dei polmoni del topo per l'istologia del tumore polmonare e l'analisi della patologia. La procedura non richiede alcuna attrezzatura speciale e può essere eseguita in meno di 6 minuti per mouse. La procedura non richiede un volume fisso per l'inflazione né una pressione fluida costante. Poiché questa procedura non è standardizzata, non è raccomandata per coloro che desideran...

Esistono una varietà di modelli di topo di oncogenesi polmonare e metastasi tumorale al polmone che vanno dai complessi GEMM ai modelli indotti da cancerogeni ai modelli sigeneici e xenograftici, dove le cellule tumorali vengono iniettate tramite intracardiaco, intratoracico, vena di coda o altri metodi per stabilire tumori all'interno del polmone. Tutti questi modelli condividono la comune necessità di valutazione istologica dell'istologia e della patologia polmonare. Pertanto, è necessario avere un metodo robusto ma rapido per eseguire necropsie di topi mentre si perfondono i polmoni per rimuovere il sangue in eccesso e gonfiare e fissare i polmoni per visualizzare chiaramente l'architettura polmonare. La velocità è un componente critico di questa procedura in quanto potrebbe essere necessario raccogliere i polmoni da dozzine di topi in un singolo momento. Questa procedura può essere eseguita in meno di 6 minuti per mouse.
Sebbene questa procedura sia più che sufficiente per valutare l'istologia tumorale, non è raccomandata per coloro che desiderano eseguire misurazioni stereologiche o morfometriche dei polmoni. Tali misurazioni richiedono che l'inflazione polmonare sia standardizzata, così come il calcolo della superficie assoluta del polmone, del volume assoluto e delle dimensioni alveolari e delnumero 1. Questo metodo non è ottimale anche per alcuni approcci di imaging. Ad esempio, l'imaging dei polmoni tramite μCT per l'analisi morfometrica ex vivo richiede che i polmoni rimangano riempiti d'aria2. Quando la conservazione degli spazi e delle dimensioni dell'aria è la preoccupazione principale, si consiglia di fissare i polmoni con tecniche di disidratazioneperfusione 3,4. Una delle maggiori preoccupazioni di questo modello è il potenziale di rupturing delle pareti alveolari, che ne diminuisce l'uso negli studi sull'enfisema; tuttavia, la procedura raccomandata per la fissazione dei polmoni per lo studio dell'enfisema è ancora abbastanza simile, in quanto si raccomanda di fissare i polmoni per instillazione intratracheale del 10% di formalina (simile al protocollo qui descritto) sotto pressione costante del fluido o mediante fissazione in situ5.
Il vantaggio della procedura descritta qui è che non richiede una pressione costante del fluido, ma gonfia i polmoni fino a quando non si sono completamente espansi, diminuendo così il tempo necessario per la procedura. La procedura qui descritta assomiglia molto ai metodi raccomandati da un armamentario della Society of Toxicologic Pathology, dove è stato formato un sottocomitato per raccomandare i migliori metodi di fissazione polmonare per gli studi tossicologici. La maggior parte degli scienziati all'interno di questa sottocommissione ha raccomandato di fissare i polmoni mediante instillazione intratracheale con una siringa, anche se c'erano raccomandazioni variabili sul tempo in cui il polmone è stato lasciato nelfissatore 6. Pertanto, mentre esistono una varietà di metodi di inflazione polmonare e fissazione, il metodo descritto nel presente documento è proposto come metodo ottimale per gonfiare e fissare rapidamente i polmoni per la valutazione istologica del tumore a valle.

<table><tbody><tr><td>Formalina tamponata al 10%</td><td>Fisher</td><td>23-245685</td><td></td></tr><tr><td>Ago da 22 G</td><td>BD</td><td>305155</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 3 ml</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>Decon</td><td>2405</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Apparecchio di Harvard</td><td>72-8595</td><td></td></tr><tr><td>Eparina</td><td>Fisher</td><td>H19</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato ( PBS)</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-8428</td><td></td></tr></tbody></table>

perfusione e inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale

Perfusion and Inflation of the Mouse Lung for Tumor Histology

La capacità di valutare l'istologia polmonare è fondamentale per i campi della ricerca sul cancro ai polmoni e della metastasi tumorale. È altrettanto importante eseguire necrosi in modo rapido ed efficiente dagli studi senza sacrificare la qualità dei tessuti acquistati. L'obiettivo di questo protocollo è quello di presentare un metodo per perfondere, gonfiare e fissare rapidamente i polmoni del topo per l'analisi istologica a valle. Questo metodo non standardizza l'inflazione polmonare; pertanto, non richiede procedure o attrezzature speciali e invece infonde semplicemente fissativo direttamente attraverso la trachea che segue la perfusione attraverso il cuore. Ciò consente una stima sufficiente delle dimensioni del tumore, dell'istologia e del punteggio. Ciò consente anche la raccolta di tessuto congelato prima della fissazione del tessuto polmonare. Questo metodo è limitato in quanto non consente una successiva quantificazione morfometrica del polmone; tuttavia, è più che sufficiente per l'analisi del tumore polmonare da modelli di topi geneticamente modificati (GEMM), modelli sigeneici, così come studi sul tumore allo xenografto e sulla metastasi.

Il protocollo di cui sopra consente una rapida perfusione, inflazione e fissazione dei polmoni del topo. Le cifre che seguono rappresentano l'importanza di ogni fase. La figura 1 raffigura i polmoni macchiati H&amp;E che sono stati perfusi con PBS e polmoni in cui la fase di perfusione è stata saltata o i polmoni non sono riusciti a perfondersi correttamente. Come mostrato, l'eccesso di sangue nei polmoni scarsamente perfusi crea un'istologia non ideale e può rendere difficile osservare appi...

Lo scopo di questo metodo è quello di presentare un metodo semplice ed efficiente per la perfusione, l'inflazione e la fissazione dei polmoni del topo per l'esame della patologia tumorale polmonare e la valutazione delle metastasi al polmone.

Perfusione e inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale

The ability to evaluate lung histology is critical for the fields of lung cancer research and cancer metastasis. It is equally important to perform ...

A dimostrare la procedura sarà Mackenzie Davenport, una studentessa laureata dell'Edmonds Laboratory. Dopo l'eutanasia del topo, usa le forbici chirurgiche per praticare un'incisione orizzontale da 3,5 a cinque millimetri al centro del basso addome. Quindi, inserisci le forbici chirurgiche nell'incisione e taglia verticalmente lungo la linea mediana centrale fino a poco sotto il collo del topo.Tirare indietro la pelle con le dita e ispezionare i linfonodi ascellari. Usa le forbici chirurgiche per praticare un'incisione laterale di 3,5 millimetri per aprire la cavità addominale. Quindi tagliare in direzione interna fino alla parte inferiore del torace.Ispezionare gli organi nella cavità addominale come il fegato, la milza e i reni. Con la parte piatta delle forbici chirurgiche muovi il fegato per esporre il diaframma. Ispezionare il diaframma per la crescita del tumore o metastasi, quindi tagliare delicatamente il diaframma sul lato destro dell'operatore, lasciandolo espandere.Tagliare il diaframma da destra a sinistra per esporre la cavità toracica e i polmoni, facendo attenzione a non tagliare i polmoni. Tagliare attraverso l'estremità laterale della gabbia toracica sinistra per i

perfusion-and-inflation-of-the-mouse-lung-for-tumor-histology

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Il nuovo protocollo riportato nel presente studio permette la rilevazione selettiva delle metastasi polmonari con una risoluzione singola cellula nei topi...

Una migliore visualizzazione delle metastasi polmonari a risoluzione singola cella in Mouse di combinata<em&gt; In-situ</emPerfusione&gt; del tessuto polmonare e X-Gal colorazione del<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged cellule tumorali

Questo video descrive l'inflazione dell'inchiostro di china, un metodo di colorazione, per quantificare i noduli tumorali nei polmoni di topo portatori di tumore. Dopo la colorazione, i polmoni vengono fissati nella soluzione di Fekete per osservare i noduli tumorali nei polmoni.

Inflazione dell'inchiostro di India: un metodo di colorazione per visualizzare i noduli tumorali

Questo video descrive un metodo di preparazione dei polmoni per l'imaging dal vivo ex vivo per studiare le interazioni tra cellule tumorali e cellule stromali, utilizzando l'agarosio per l'inflazione. Nel protocollo del campione, la procedura di inflazione dell'agarosio viene descritta prima di osservare le interazioni cellulari vive.

Inflazione dell'agarosio polmonare intero: un metodo per preparare i polmoni per l'imaging dal vivo ex vivo

L'obiettivo di questo lavoro è quello di descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l'analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Vi presentiamo 3 protocolli modo semplice e affidabile per effettuare instillazioni polmone, la fissazione, e misurazioni del volume polmonare.

Instillazione e fissaggio Metodi utili in mouse Lung Cancer Research

La superficie interna polmonare (ISA) è un criterio critico per valutare la morfologia polmonare e la fisiologia delle malattie polmonari e della rigenerazione alveolare indotta da lesioni. Qui descriviamo un metodo standardizzato che può ridurre al minimo la polarizzazione di misura per ISA sia nei modelli di polmonite polmonare sia nei modelli di protesi.

Un metodo standardizzato per la misurazione della superficie interna polmonare tramite la polmonite e l&#39;impianto di protesi

Descriviamo un metodo per migliorare in modo significativo orthotopic engraftment delle cellule di cancro del polmone nei polmoni murini di pre-condizionamento delle vie aeree con la ferita. Questo approccio può essere applicato anche per studiare le interazioni stroma all'interno del microambiente polmonare, la disseminazione metastatica, la co-morbidità, cancro del polmone, e per generare in modo più efficiente paziente derivato xenotrapianti.

Pre-condizionamento delle vie aeree dei topi con bleomicina aumenta l'efficienza di Orthotopic del polmone cancro Engraftment delle cellule

In questo protocollo, descriviamo come utilizzare [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose tomografia a emissione di positroni e la tomografia computata (18F-FDG PET/CT) imaging per misurare la risposta metabolica del tumore per la terapia mirata MLN0128 in un  Kras/Lkb1 topo mutante modello di cancro ai polmoni e accoppiato con autoradiografia ex vivo ad alta risoluzione e l'istologia quantitativa di imaging.

Utilizzando 18F-FDG PET/CT Imaging e l'istologia quantitativa per misurare i cambiamenti dinamici nel metabolismo del glucosio in modelli murini di cancro ai polmoni

Viene presentato un metodo per il gonfiaggio dell'aria con perfusione-fissazione vascolare dei polmoni che preserva la posizione delle cellule all'interno delle vie aeree, degli alveoli e dell'interstizio per le analisi struttura-funzione. La pressione costante delle vie aeree viene mantenuta con una camera di gonfiaggio dell'aria mentre il fissativo viene perfuso attraverso il ventricolo destro. I polmoni vengono elaborati per studi istologici.

Gonfiaggio dell'aria dei polmoni murini con perfusione-fissazione vascolare

Il presente protocollo descrive la preparazione e l'utilizzo di fette polmonari tagliate con precisione dal topo per valutare la contrattilità delle vie aeree e della muscolatura liscia arteriosa intrapolmonare in un ambiente quasi in vivo .

Utilizzo della fetta polmonare tagliata con precisione per studiare la regolazione contrattile delle vie aeree e della muscolatura liscia arteriosa intrapolmonare

Qui, presentiamo un protocollo per l'imaging intravitale del polmone sinistro del topo trapiantato utilizzando la microscopia a due fotoni. Questo rappresenta uno strumento prezioso per studiare le dinamiche e le interazioni cellulari in tempo reale dopo il trapianto di polmone murino.

Microscopia intravitale a due fotoni del polmone di topo trapiantato

Una delle principali sfide nello sviluppo di nuove terapie per il cancro del polmone include la modellazione del microambiente tumorale man mano che la malattia regionale progredisce verso la malattia metastatica. Qui, descriviamo un metodo semplice per stabilire un modello singenico ortotopico del cancro del polmone che consente il monitoraggio in vivo della malattia nel tempo.

Un metodo minimamente invasivo per la generazione di un modello murino ortotopico singenico di carcinoma polmonare

Impara la perfusione e l'inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale. Questo metodo permette di esaminare la patologia polmonare e valutare le metastasi con precisione.

Perfusione e inflazione del polmone del topo per l'istologia tumorale

Esplora altri video