Name: Preparazione delle scime cromosomiche meiotiche da Spermatociti di pesce zebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Scopri la preparazione di sciami cromosomici meiotici da spermatociti di Danio rerio. Questo metodo consente la visualizzazione dell'architettura cromosomica durante la profase I con microscopia a super risoluzione.

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Ringraziamo Trent Newman e Masuda Sharifi per i commenti sul manoscritto e An Nguyen per aver contribuito a ottimizzare i metodi per diffondere e macchiare i cromosomi dai meiociti del pesce zebra. Questo lavoro è stato supportato da NIH R01 GM079115 assegnato a S.M.B.

<ol><li>Nagaoka, S. I., Hassold, T. J., Hunt, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+aneuploidy%3A+mechanisms+and+new+insights+into+an+age-old+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Human aneuploidy: mechanisms and new insights into an age-old problem.</a> Nature Reviews Genetics. 13, 493-504 (2012).</li>
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<li>Sansam, C. L., Pezza, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connecting+by+breaking+and+repairing%3A+mechanisms+of+DNA+strand+exchange+in+meiotic+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Febs+Journal%22%5BJournal%5D)">Connecting by breaking and repairing: mechanisms of DNA strand exchange in meiotic recombination.</a> Febs Journal. 282, 2444-2457 (2015).</li>
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<li>Dia, F., Strange, T., Liang, J., Hamilton, J., Berkowitz, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Meiotic+Chromosome+Spreads+from+Mouse+Spermatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Spermatocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e55378(2017).</li>
<li>Moens, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+chiasmata+and+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Genome%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: chiasmata and interference.</a> Genome. 49, 205-208 (2006).</li>
<li>Lisachov, A. P., Zadesenets, K. S., Rubtsov, N. B., Borodin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+chromosome+synapsis+and+recombination+in+male+guppies%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Sex chromosome synapsis and recombination in male guppies.</a> Zebrafish. 12 (2), 174-180 (2015).</li>
<li>Ocalewicz, K., Mota-Velasco, J. C., Campos-Ramos, R., Penman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FISH+and+DAPI+staining+of+the+synaptonemal+complex+of+the+Nile+tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+allow+orientation+of+the+unpaired+region+of+bivalent+1+observed+during+early+pachytene%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Research%22%5BJournal%5D)">FISH and DAPI staining of the synaptonemal complex of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) allow orientation of the unpaired region of bivalent 1 observed during early pachytene.</a> Chromosome Research. 17 (6), 773(2009).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Qui descriviamo i metodi per sondare la posizione dei telomeri e delle proteine associate ai cromosomi nella superficie nucleare si diffonde dagli spermatociti isolati dai testicoli dei pesci zebra. Prevediamo che questi metodi saranno applicabili per l'analisi di spermatociti in altre specie teleost con regolazione delle dimensioni dei testicoli.
Mentre solo pochi anticorpi sono stati sollevati per le proteine meiotiche dei pesci zebra, abbiamo avuto successo usando i seguenti anticorpi solle...

La riproduzione sessuale procede attraverso la combinazione di due gameti aploidi, ognuno dei quali trasporta metà del complemento cromosomico di una cellula somatica. La meiosi è una divisione cellulare specializzata che produce gameti aploidi attraverso un ciclo di replicazione del DNA e due cicli successivi di segregazione cromosomica. Nella profase I, i cromosomi omologhi (omologi) devono subire l'abbinamento, la ricombinazione e la sinapsi, quest'ultima caratterizzata dalla formazione del complesso sinatonemale che comprende due assi omologi colmati dal subverso, Sycp1 (Figura 1A,B). La mancata esecuzione corretta di questi processi può portare alla produzione di gameti aneuploidi, che sono una delle principali cause di aborti spontanei in esseri umani1. La nostra conoscenza del coordinamento tra abbinamento, ricombinazione e sinapsi è stata facilitata da studi in una vasta gamma di organismi, come lievito, C. elegans, topo e Drosophila, tra gli altri2. Mentre il processo generale di accoppiamento cromosomico omologato seguito dalla segregazione è ben conservato, la sua dipendenza dalla ricombinazione e dalla sinapsi e l'ordine di questi eventi varia.
La formazione meiotica di rottura a doppio filamento (DSB), che avvia una ricombinazione omologa, si verifica vicino ai telomeri raggruppati nel bouquet durante il leptotene e la sinapsi segue poco dopo3,4. Questa configurazione della formazione e dell'avvio della sinapsi di DSB è anche una caratteristica della meiosi maschile negli esseri umani ma non nel topo5,6,7,8, suggerendo che il pesce zebra può servire come modello per la spermatogenesi umana. Ci sono anche diversi vantaggi pratici dello studio della meiosi del pesce zebra. Sia i maschi che le femmine subiscono gametogenesi durante l'età adulta, le loro gonadi sono facilmente accessibili e centinaia di prole sono generate da una singola croce. Inoltre, gli embrioni sono trasparenti e si sviluppano esternamente, il che facilita la diagnosi precoce di aberrazioni nello sviluppo embrionale a causa di gameti aneuploidi3,9. Svantaggi dell'uso di pesci zebra sono che sono lenti a raggiungere la maturità sessuale (60 giorni) e la quantità di materiale necessaria per gli spread di superficie nucleare deve essere raccolta da 10-20 dollari animali adulti, a seconda delle loro dimensioni.
I preparati meiotici sono uno strumento vitale per studiare la dinamica cromosomica in tutti gli organismi modello, poiché è possibile sondare le firme chiave della dinamica cromosomica meiotica. Nel pesce zebra, gli aspetti chiave della progressione del programma meiotico e dell'organizzazione nucleare sono stati sezionati attraverso la sonda di diffusione della superficie nucleare, indicati qui come si diffonde cromosomica, con anticorpi per il rilevamento immunofluorescenza di proteine e/o acidi nucleici da FISH3,4,9,10,11,12. Infatti, la localizzazione polarizzata dei telomeri raggruppati nel bouquet può essere preservata nella preparazione della diffusione (Figura 1C). Recentemente, abbiamo usato i cromosomi di spermatociti zebrati insieme a metodi di rilevamento della fluorescenza e microscopia a super-risoluzione per chiarire la progressione dettagliata della dinamica dei telomeri di pesce zebra, l'abbinamento cromologo omologoso, la localizzazione delle rotture a doppio filamento e la sinapsi alle transizioni meiotiche chiave3. Qui presentiamo metodi per preparare le crescite cromosomiche dagli spermatociti dei testicoli del pesce zebra e successivamente le macchiamo con sonde fluorescenti di acido nucleico peptide (PNA) a sequenze di telomeri ripetute e rilevamento di immunofluorescenza delle proteine associate al cromosoma.

<table><tbody><tr><td>Provette da centrifuga da 1,5 mL</td><td>Diverse marche commerciali disponibili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rack per provette per microcentrifuga da 1,5 mL</td><td>Diverse marche commerciali disponibili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>16% formaldeide, senza metanolo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>2 mL</td><td>Diverse marche commerciali disponibili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetto in vetro da 24 x 50 mm</td><td>Corning</td><td>2980-245</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti 24 x 60 mm</td><td>VWR International</td><td>16004-312</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga coniche da 50 ml</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>363696</td><td></td></tr><tr><td>Sacchetto per autoclave</td><td>Diverse marche commerciali disponibili</td><td></td><td>Utilizzato per realizzare vetrini coprioggetti in plastica.</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1605-100</td><td>Preparare una soluzione madre da 100 mg/ml in acqua distillata sterile.</td></tr><tr><td>Filtro cellulare, 100 &; micro; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>CF405M capra anti-pollo IgY (H+L), altamente adsorbito in modo incrociato</td><td>Biozio</td><td>203775-500uL</td><td>Utilizzare a 1:1000</td></tr><tr><td>Pollo anti-zfSycp1</td><td>Generato da Burgess lab</td><td>N/A Utilizzare</td><td>a 1:100</td></tr><tr><td>Collagenasi da Clostridium histolyticum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0130-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Barattolo Coplin</td><td>Diversi marche commerciali disponibili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNasi I, grado II dal pancreas bovino</td><td>Roche Diagnostics</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10014CV</td><td></td></tr><tr><td>Dumont No. 5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-30</td><td>Due sono necessari per sezionare i testicoli.</td></tr><tr><td>Eppendorf Tubes, 5 mL</td><td>VWR International</td><td>89429-308</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP228-100</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario IgY (H+L) anti-pollo di capra, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11039</td><td>Utilizzo a 1:1000</td></tr><tr><td>Anticorpo secondario IgY (H+L) di capra, Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11042</td><td>Utilizzo a 1:1000</td></tr><tr><td>Capra anti-hDMC1</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-8973</td><td>Non funziona nelle nostre mani</td></tr><tr><td>Capra anti-coniglio IgG (H+L) anticorpo secondario adsorbito incrociato, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>Utilizzare a 1:1000</td></tr><tr><td>Capra anti-coniglio IgG (H+L) anticorpo secondario adsorbito in modo incrociato, Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>Utilizzare a 1:1000</td></tr><tr><td>Siero</td> <td>di capraSigma-Aldrich</td><td>G9023-10mL</td><td></td></tr><tr><td>Sale sodico di eparina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393-100KU</td><td></td></tr><tr><td>Camera di umidità</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-112-3683</td><td></td></tr><tr><td>Forno di ibridazione</td><td>VWR International</td><td>230401V (Modello 5420)</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore per incubatrice</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Modello classico C25</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimerbly-Clark Professional</td><td>34155</td><td>Utilizzato per la camera di umidità</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Diverse marche commerciali disponibili</td><td></td><td>È sufficiente qualsiasi microscopio standard in grado di ingrandire almeno ~1,65X.</td></tr><tr><td>Vetrini per microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-7</td><td></td></tr><tr><td>Topo anti-cricetoSCP3</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>Non funziona nelle nostre mani</td></tr><tr><td>Topo anti-hMLH1</td><td>BD Biosciences</td><td>550838</td><td>Non funziona nelle nostre mani</td></tr><tr><td>Topo anti-hRPA</td><td>Sigma-Alrich</td><td>MABE285</td><td>Non funziona nelle nostre mani</td></tr><tr><td>Na2HPO4 &middot; 7 H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S373-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td></td></tr><tr><td>Photo-Flo 200 soluzione</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienze 74257</td><td></td></tr><tr><td>Pipette di trasferimento in plastica Diverse</td><td>marche commerciali disponibili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PNA TelC-Alexa647</td><td>PNA Bio Inc</td><td>F1013</td><td>Preparare secondo il produttore .</td></tr><tr><td>PNA TelC-Cy3</td><td>PNA Bio Inc</td><td>F1002</td><td>Preparare secondo le istruzioni del produttore.</td></tr><tr><td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36970</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond Antifade Mountant con DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36971</td><td></td></tr><tr><td>Coniglio anti-hRPA</td><td>Bethyl</td><td>A300-244A</td><td>Utilizzare in 1:300</td></tr><tr><td>Rabbit anti-hSCP3</td><td>Abcam</td><td>ab150292</td><td>Utilizzare in 1:200</td></tr><tr><td>Rabbit anti-hRad51</td><td>GeneTex</td><td>GTX100469</td><td>Utilizzare a 1:300</td></tr><tr><td>Citrato di sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5-500</td><td></td></tr><tr><td>Supercut Forbici, angolo 30°, 10 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-822-353</td><td>Può anche utilizzare qualsiasi paio di piccole forbici.</td></tr><tr><td>Kit Sylgard</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9897184</td><td>Preparare secondo le istruzioni del produttore.</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100</td><td>Diluire in acqua distillata sterile per ottenere una soluzione di lavoro al 20%. Conservare a temperatura ambiente. Triton X-100 forma un precipitato quando diluito in acqua; precipitato si dissolve durante la notte.</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS003708</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della tripsina dall'albume d'uovo di gallina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9253-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td>Diluire in acqua distillata sterile per ottenere una soluzione di lavoro al 20%. Conservare a temperatura ambiente.</td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas - 4 mm (micro forbici)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione delle scime cromosomiche meiotiche da spermatociti di pesce zebra

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Zebrafish Spermatocytes

La meiosi è il processo cellulare chiave necessario per creare gameti aploidi per la riproduzione sessuale. Gli organismi modello sono stati determinanti nella comprensione degli eventi cromosomici che si verificano durante la profase meiotica, tra cui l'accoppiamento, la sinapsi e gli eventi di ricombinazione che garantiscono una corretta segregazione cromosomica. Mentre il topo è stato un modello importante per comprendere i meccanismi molecolari alla base di questi processi, non tutti gli eventi meiotici in questo sistema sono analoghi alla meiosi umana. Recentemente abbiamo dimostrato l'entusiasmante potenziale del pesce zebra come modello di spermatogenesi umana. Qui descriviamo, in dettaglio, i nostri metodi per visualizzare i cromosomi meiotici e le proteine associate nei preparati di diffusione cromosomica. Questi preparati hanno il vantaggio di consentire l'analisi ad alta risoluzione delle strutture cromosomiche. In primo luogo, descriviamo la procedura per la sezionamento dei testicoli da pesci zebra adulti, seguita da dissociazione cellulare, lisi e diffusione dei cromosomi. Successivamente, descriviamo la procedura per rilevare la localizzazione delle proteine cromosomiche meiotiche, mediante rilevamento dell'immunofluorescenza e sequenze di acidi nucleici, mediante fluorescenza nell'ibridazione in situ (FISH). Queste tecniche comprendono un utile insieme di strumenti per l'analisi citologica dell'architettura della cromatina meiotica nel sistema del pesce zebra. I ricercatori della comunità dei pesci zebra dovrebbero essere in grado di padroneggiare rapidamente queste tecniche e incorporarle nelle loro analisi standard della funzione riproduttiva.

Abbiamo delineato un metodo per preparare e visualizzare i preparativi per la diffusione dello spermatocito del pesce zebra. Se eseguita correttamente, la nostra procedura produce nuclei ben diffusi e non sovrapposti. Per recuperare tali nuclei, è importante avere la quantità appropriata di materiale di partenza (cioè testicoli), trattare i testicoli per un periodo di tempo sufficiente nella trypsina e un numero adeguato di trattamenti DNase I. Questi spread possono quindi essere macchiat...

Le creme nucleari sono uno strumento indispensabile per studiare gli eventi cromosomici durante la meiosi. Qui dimostriamo un metodo per preparare e visualizzare cromosomi meiotici durante la profase I dagli spermatociti del pesce zebra.

Preparazione delle scime cromosomiche meiotiche da Spermatociti di pesce zebra

Meiosis is the key cellular process required to create haploid gametes for sexual reproduction. Model organisms have been instrumental in understanding ...

Zebrafish sta emergendo come un eccellente modello di vertebrato per lo studio degli eventi cromosomici della meiosi tra cui l'accoppiamento cromosomico omologo, la sinapsi e la ricombinazione. Questo protocollo di diffusione della superficie nucleare ci ha permesso di visualizzare le caratteristiche chiave dell'architettura del cromosoma meiotico usando la microscopia a super risoluzione. I ricercatori possono aspettarsi centinaia di nuclei ben diffusi per scivolo con meno detriti rispetto ad altri protocolli di diffusione del pesce zebra.La parte tecnicamente più impegnativa di questa procedura è la dissezione dei teste di zebrafish in quanto è in prossimità della pelle ed è anche attaccata ad altri organi. La visualizzazione della procedura di dissezione consentirà ai ricercatori di sapere cosa aspettarsi quando vedono il gonad incorporato nel tessuto dell'animale. Dopo aver eutanasiato il pesce zebra maschio, decapitare un pesce alla volta con piccole forbici e quindi utilizzare micro forbici per tagliare lungo la linea mediana ventrale per esporre la cavità corporea.Mettere il pesce in una piastra di Petri rivestita in silicone e coprire da una piscina poco profonda di 1X PBS.

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Questo è un metodo per la generazione di embrioni di zebrafish gynogenetic diploide (embrioni il cui unico contributo genetico proviene dalla madre), bloccando la seconda divisione meiotica subito dopo la fecondazione con luce ultravioletta-inattivato sperma. Embrioni EP non sono completamente omozigoti per ricombinazione durante la prima divisione meiotica, tuttavia sono omozigoti a tutti i loci che non sono stati separati dalle loro centromero dalla ricombinazione.

Fare Diploide Zebrafish Gynogenetic di Pressure presto

Viene descritto un protocollo per la preparazione di diffusioni cromosomiche vegetali mitotiche di alta qualità con un metodo di goccia veloce all'aria adatto per la rilevazione FISH di sonde di DNA singole e ad alta copia.

Un rapido aria secca cadente Cromosoma Metodo di preparazione adatto per i pesci nelle piante

La mitosi è fondamentale per ogni organismo vivente e i difetti spesso portano al cancro e ai disturbi dello sviluppo. Utilizzando questo protocollo di imaging e il pesce zebra come sistema modello, i ricercatori possono visualizzare la mitosi in un organismo vertebrato vivo e la moltitudine di difetti che si verificano quando i processi mitotici sono difettosi.

Osservando divisione mitotica e Dynamics in un embrione vivo Zebrafish

Un protocollo modificato per la manipolazione ploidia utilizza uno shock termico per indurre una stalla di un ciclo in cytokinesis in embrione precoce. Questo protocollo è illustrato nel zebrafish, ma può essere applicabile ad altre specie.

Manipolazione Ploidia di embrioni di zebrafish con Heat Shock 2 Trattamento

Meiosi sono il processo di sviluppo da cui i gameti sono formate attraverso un singolo ciclo di replicazione del DNA e due successivi turni di segregazione del cromosoma. Meiosi mammiferi possono essere esaminate utilizzando una tecnica per preparare cromosomici meiotica. Qui, noi dimostrare un metodo di preparazione di superficie-diffusione nuclei da spermatociti di mouse.

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Lo scopo principale di questo studio era di adattare l'ago immerso procedura di vitrificazione (NIV) per crioconservare intero zebrafish testicoli. Inoltre, è stata testata la ripetibilità del metodo in cinque zebrafish diversi ceppi.

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Oogenesi nei mammiferi sono noto per essere soggetta a errori, particolarmente dovuto malsegregazione di cromosoma. Questo manoscritto descrive metodi di preparazione di cromatina diffusa per profase mouse, metafase I e II-messa in scena di ovociti. Queste tecniche fondamentali consentono per lo studio della cromatina-proteine e morfologia del cromosoma in tutto mammiferi oogenesi.

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Qui presentiamo un metodo semplice ed efficiente per isolare le cellule germinali meiotiche e post-meiotiche vive dai teste di topo adulti. Utilizzando un colorante legante il DNA a bassa citotossicità, eccitato dalla violetta e uno smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza, si possono isolare popolazioni di cellule spermatogeniche altamente arricchite per molte applicazioni a valle.

Isolamento delle cellule spermatogeniche murine utilizzando un colorante legante del DNA permeabile alle cellule violetto

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Separazione delle cellule follicolari e degli ovociti nei follicoli ovarici di Zebrafish

Le tecnologie CRISPR-Cas hanno rivoluzionato il campo dell'editing del genoma. Tuttavia, trovare e isolare la modifica della linea germinale desiderata rimane un importante collo di bottiglia. Pertanto, questo protocollo descrive un metodo robusto per lo screening rapido dello sperma di zebrafish iniettato con F0 CRISPR per le modifiche della linea germinale utilizzando PCR standard, digestione di restrizione e tecniche di elettroforesi su gel.

Screening dello sperma per il rapido isolamento delle modifiche germinali nel pesce zebra

Gli errori meiotici nelle sinapsi e nella ricombinazione sono comuni agli ovociti dei mammiferi. Un'analisi rigorosa delle proteine coinvolte in questi processi è essenziale per capire come e perché l'oogenesi spesso va male. Le tecniche qui presentate consentono un monitoraggio completo della ricombinazione e delle sinapsi per valutare la qualità degli ovociti nei topi.

Preparazione di diffusioni cromosomiche meiotiche da ovociti di topo per la valutazione della sinapsi e della ricombinazione

Scopri la preparazione di sciami cromosomici meiotici da spermatociti di Danio rerio. Questo metodo consente la visualizzazione dell'architettura cromosomica durante la profase I con microscopia a super risoluzione.

Preparazione delle scime cromosomiche meiotiche da Spermatociti di pesce zebra

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