Name: Un modello di topo di Sarcoma di tessuto molle incompleto resected per test (Neo)adiuvante Terapie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Scopri un modello murino di resezione incompleta di sarcoma dei tessuti molli per testare terapie (neo)adiuvanti. Questo metodo standardizza la ferita chirurgica e il tumore residuo, facilitando studi preclinici sull'immunoterapia postoperatoria.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questo lavoro è sostenuto dalle sovvenzioni dal Calzino a Sarcoma! dell'Associazione Sarcoma australiana e neozelandese, della Children's Leukemia & Cancer Research Foundation e della Perpetual Philanthropy. W.J.L è supportato da una Simon Lee Fellowship e da una borsa di ricerca del National Health and Medical Research Council e del Cancer Council WA.

Gli animali utilizzati in questi esperimenti sono stati ottenuti dall'Animal Resource Centre (Perth, Australia Occidentale). Gli animali sono stati mantenuti in condizioni standard prive di agenti patogeni presso l'Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Australia Occidentale). Tutti gli esperimenti sono stati effettuati seguendo il protocollo approvato dal Comitato etico animale Harry Perkins Institute of Medical Research. In questi esperimenti sono stati utilizzati topi BALB/c di 8-12 settimane di età. La linea cellulare del fibrosarcoma WEHI 164 è stata ottenuta da CellBank Australia (Westmead, Nuovo Galles del Sud).
1. Inoculazione delle cellule
<ol><li>Preparazione di cellule e animali<ol>
<li>Assicurarsi che la linea di celle sia mantenuta nel supporto consigliato. Ad esempio, mantenere weHI 164 linea cellulare in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 media integrata con 2 mM L-glutamina, 10% siero bovino fetale, 20 m HEPES, 0.05 mM 2-mercaptoenol, 100 U/mL penicillina, e 100 g / mL streptomica. NOTA: Passare le cellule almeno 3 e fino a 5 volte dopo essere state rimosse dall'immagazzinamento criogenico. Per garantire una vitalità cellulare ottimale, le cellule devono essere divise quando sono tra 70-80% confluente. Le linee cellulari tumorali devono essere testate per il micoplasma, poiché l'infezione può alterare la crescita cellulare e influenzare la risposta immunitaria in vivo.</li>
		<li>Un giorno prima dell'inoculazione, radere i topi sul fianco inferiore destro usando i clipper. NOTA: in questo esperimento sono stati utilizzati topi femminili BALB/c, di età compresa tra 8-12 settimane, di peso normale (16 -22 grammi).</li>
		<li>Il giorno dell'inoculazione, raccogliere WEHI 164 cellule quando 70-80% confluente per tentativpsinizzazione.<ol>
<li>Aspirare il mezzo di coltura dai flaconi di coltura dei tessuti e quindi aggiungere la soluzione sterile di fosfato tamponata (1x PBS), per rimuovere le tracce rimanenti del siero bovino fetale (FBS).</li>
			<li>Aspirare la PBS dai flaconi della coltura dei tessuti. Aggiungere 3 mL di 0,05% di ciplo (per un flacone T75) e quindi girare il flacone in modo che l'intera superficie del flacone con le cellule sia coperta da trypsin.</li>
			<li>Incubare il pallone a 37 gradi centigradi, 5% dicovampiera di CO 2 per 3 min. Controllare periodicamente le cellule, toccando i lati del pallone per vedere se le cellule si sono sloggiate.</li>
			<li>Rimuovere i flaconi dall'incubatrice a coltura cellulare e aggiungere 5 mL di supporti integrati con FBS per neutralizzare la trypsin. NOTA: Non lasciare le cellule in trypsin più a lungo del necessario, in quanto ciò può danneggiare le cellule e portare a bassa vitalità cellulare.</li>
			<li>Sospensione Pipet più volte per ottenere una sospensione a cella singola. Trasferire la sospensione cellulare a un tubo centrifuga conico.</li>
			<li>Cellule di Pellet ruotando a 350 x g per 3 min.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Lavare le cellule tre volte in 1x PBS.<ol>
<li>Risospendere le cellule in 50 mL di pbS sterile 1x e lavare le cellule con il tubo delle sospensioni cellulari su e giù. Cellule di Pellet ruotando a 350 x g per 3 min.</li>
			<li>Aspirare le cellule sovrnatali e risospendere in 15 mL di sterile 1x PBS. Lavare le cellule con la sospensione cellulare con voglia su e giù. Cellule di Pellet ruotando a 350 x g per 3 min.</li>
			<li>Aspirare le cellule sovrnatali e risospendere in esattamente 10 mL di sterile 1x PBS. Lavare le cellule come al punto 1.1.4.2 e trasferire una piccola quantità (circa 100 lL) di sospensione cellulare in un tubo di centrifuga per il conteggio. Cellule di Pellet ruotando a 350 x g per 3 min.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Determinare il numero di cella utilizzando il metodo di esclusione blu Trypan utilizzando un emocitometro o un contatore cellulare automatizzato. Risospendere le cellule in sterile 1x PBS ad una concentrazione di 5 x 106 cellule / mL. Mantenere la sospensione cellulare sul ghiaccio. NOTA: La vitalità delle cellule tumorali deve essere uguale o superiore all'80 % per garantire una crescita tumorale riproducibile.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inoculazione sottocutanea<ol>
<li>Mescolare accuratamente la sospensione cellulare e riempire una siringa con un ago da 26 G con 100 -L di sospensione cellulare (5 x 105 celle) in sterile 1x PBS. Ripetere la miscelazione delle cellule prima di caricare la siringa successiva. NOTA: Mantenere le cellule sul ghiaccio per tutta la procedura per mantenere la vitalità.</li>
		<li>Trattenere il mouse in modo appropriato, garantendo l'accesso al fianco inferiore destro. Inoculare il topo sottocutaneo sul fianco inferiore destro rasato. NOTA: Assicurarsi che l'inoculazione non sia nel peritoneo sollevando leggermente l'ago, che dovrebbe essere visibile sotto la pelle. Un nodulo simile a una bolla dovrebbe formarsi sotto la pelle dopo l'inoculazione.</li>
		<li>Monitorare i topi come richiesto dall'approvazione etica applicabile ed eseguire la resezione chirurgica quando i tumori sono cresciuti fino a una dimensione di circa 50 mm2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Resezione chirurgica parziale del tumore
NOTA: Questo protocollo richiede DUE ricercatori; uno per le procedure chirurgiche (SURGEON) e un altro per il monitoraggio del topo (ASSISTANT).
<ol><li>Configurazione chirurgia<ol>
<li>Il giorno 12 post inoculazione, quando i tumori hanno raggiunto una dimensione di circa 50 mm2, dosi di topi con 100 (L L) di buprenorfina s.c. nella mischia del collo, 30 minuti prima dell'intervento chirurgico.</li>
		<li>Impostare l'area chirurgica con un tergiglio riscaldato coperto con panca e impostare un cono naso per l'anestesia. Sterilizzare gli strumenti chirurgici prima dell'uso e tra ogni animale utilizzando uno sterilizzatore di perline di calore, consentendo agli strumenti di raffreddarsi prima dell'uso. Avere le seguenti apparecchiature chirurgiche pulite e a portata di mano: clorhesidina, tampone, garza, gel occhio, due pinze curve, forbici, applicatore clip, rimozione clip, clip ripieno (Figura 2A, 2B).</li>
		<li>Riscaldare la camera di riscaldamento a 37 gradi centigradi e impostare un altro blocco di calore per il recupero (Figura 2C). Posizionare gli utensili sterilizzati su una superficie sterile come le pastiglie autoclaved.</li>
	</ol></li>
	<li>Anestesia<ol>
<li>Posizionare il mouse nella camera di induzione e anesizzare il mouse con il 4% di isoflurane (4% in 100% di ossigeno ad una velocità di flusso di 1 L/min) fino a quando la frequenza respiratoria rallenta a circa 60 respiri al minuto (1 al secondo) (questo di solito prende <1 min). NOTA: Non lasciare il mouse nella camera per troppo tempo che possa portare ad asfissia e morte. Avere solo un topo sotto anestesia alla volta.</li>
		<li>Trasferire il mouse sul pad di calore sul tavolo di intervento chirurgico, posizionare il mouse con il naso nel cono del naso e mantenere lo stato anestetico con 3-4% isoflurane in 100% ossigeno ad una portata di 0,5 L/min. Monitor la frequenza respiratoria per garantire che la profondità di anestesia è mantenuta. NOTA: l'ASSISTANT deve monitorare la respirazione del topo durante l'intervento chirurgico per garantire il corretto livello di anestesia è mantenuto. Abbassare la concentrazione anestetica se la respirazione diventa troppo lenta o aumentare la concentrazione se la profondità dell'anestesia è troppo bassa. Se il mouse inizia a ansimante, rimuovere il mouse dal cono naso, diminuire la concentrazione anestetica, e attendere fino a quando la respirazione si normalizza prima di mettere sul cono naso di nuovo.</li>
		<li>Eseguire un "test di pizzico" e un "test del riflesso corneale"14 per assicurarsi che il mouse sia completamente anetizzato prima di iniziare l'intervento chirurgico. NOTA: Il movimento di qualsiasi parte del mouse indica che il mouse non è completamente afizzato. All'animale deve essere immediatamente somministrato un anestetico aggiuntivo aumentando la concentrazione anestetica.</li>
		<li>Coprire gli occhi del mouse con una piccola quantità di gel oftalmico per evitare la secchezza degli occhi.</li>
	</ol></li>
	<li>Procedura chirurgica (SURGEON)<ol>
<li>Swab l'area chirurgica 3 volte con clorhessia alcolica. Utilizzando pinze e un paio di forbici, fare un 1 cm di incisione dritta lungo il lato dorsale, 3 mm di distanza dal tumore (Figura 3A, 3B). NOTA: la standardizzazione dell'incisione a 1 cm in ogni topo (utilizzando un righello) consente di valutare uniformemente la guarigione della ferita tra i topi. Individuare l'incisione di 3 mm di distanza dal tumore consente la successiva terapia adiuvante intratutale senza perdite dalla ferita.</li>
		<li>Utilizzando una pinzetta, tirare via la facia e il tessuto adiposo sottocutaneo tra il tumore e il peritoneo. Il tumore sottocutaneo è normalmente attaccato al lato della pelle.</li>
		<li>Aprire la ferita tenendo delicatamente la pelle sul lato portante del tumore utilizzando una pinzetta e "invertire" il tumore in modo che sia visibile all'esterno (Figura 3C, 3D). NOTA: La sezione del tumore da debulked deve essere più vicina all'apertura, per avere abbastanza pelle per chiudere la ferita. Fare attenzione a non tagliare la pelle quando si rimuove il tumore.</li>
		<li>Utilizzando un paio di forbici, tagliare la capsula tumorale dalla metà per rimuovere, a partire dalla base del tumore più vicina all'apertura.</li>
		<li>Per la chirurgia del 50% del debulk, tagliare attraverso il centro del tumore. Utilizzando pinze curve, raccogliere la sezione del tumore da rimuovere (50%); raccogliere eventuali resti dalla zona debulked.</li>
		<li>Per 75% debulk, eseguire un 50% debulk tumore come nella parte 2.3.5 sopra. Quindi tagliare a metà il restante 50% del tumore e raccogliere il 25% del tumore, utilizzando la forza curva come descritto sopra.</li>
	</ol></li>
	<li>Chiusura del sito chirurgico<ol>
<li>Posizionare il tumore rimanente sotto la pelle, e con le pinze, tirare i lembi della pelle insieme e allineare la pelle lungo la ferita.</li>
		<li>Tenere la pelle insieme 5 mm dal bordo della ferita e utilizzare clip chirurgiche per chiudere la ferita, iniziando sul lato più vicino alle pinze. Applicare tutte le clip necessarie per garantire che nessun tessuto sottostante sia esposto. In genere, da tre a quattro clip vengono applicate con spazi di 2 mm tra le clip. NOTA: se le clip non sono ben applicate, rimuoverle con un ritaglio e sostituirle con nuove clip.</li>
	</ol></li>
	<li>Recupero dei topi (ASSISTANT)<ol>
<li>Lasciare che i topi si riprendano mettendoli nella camera calda di riscaldamento (37 gradi centigradi).</li>
		<li>Posizionare la gabbia del mouse sul pad di calore. Monitorare i topi nella camera di riscaldamento fino a quando non si sono ripresi dall'anestetico (sveglia e camminata) e poi rimettere i topi nella gabbia. Lasciare la gabbia sul pad di calore per altri 10 minuti, fino a quando i topi sono diventati più attivi.</li>
		<li>Dare ai topi cibo bagnato e morbido. Monitorare i topi 1 ora dopo l'intervento chirurgico per il recupero e assicurarsi che le clip rimangano in posizione. Assicurarsi che la gabbia sia a metà del blocco di calore per consentire agli animali di autoregolare la temperatura incustodita.</li>
		<li>Dose topi con 8,1 mg/kg di buprenorfina (100 -L sottocutaneamente nella mischia del collo), 6-8 ore dopo l'intervento chirurgico (alla fine della giornata). Monitorare i topi la mattina seguente e dosare di nuovo i topi con una buprenorfine di 0,1 mg/kg (100 litri nella mischia del collo). Dare più cibo bagnato come necessario.</li>
		<li>Monitorare i mouse ogni giorno per i prossimi sette giorni. Le clip possono essere rimosse dopo sette giorni utilizzando la rimozione clip.</li>
	</ol></li>
	<li>Trattamento adiuvante o neoadiuvante<ol>
<li>Trattare i topi peri-operatori con (neo)terapia adiuvante in un dato momento, a seconda del trattamento di interesse.</li>
		<li>Ad esempio, trattare i topi con una dose di 100 g di anti-CTLA-4 intraperitonealmente (i.p.) il giorno 15 dopo l'inoculazione, o con tre dosi di 200 g anti-PD-1 i.p. il giorno 15, 17 e 19 dopo l'inoculazione.</li>
	</ol></li>
	<li>Controlli sperimentali<ol>
<li>Quando si utilizza questo modello per valutare gli effetti della guarigione dell'infiammazione/ ferita, considerare l'utilizzo dei seguenti gruppi di controllo: 1) Controllo senza chirurgia (trattamenti possono ancora essere somministrati intratumoralmente); 2) Controllo della chirurgia finta: un'incisione chirurgica è fatta nella pelle; il tumore è manipolato ed esposto, ma nessun tessuto tumorale viene rimosso; la ferita è chiusa con clip.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686(2018).</li>
<li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li>
<li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+the+study+of+10%2C000+patients+with+soft+tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li>
<li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li>
<li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li>
<li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2%2C084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li>
<li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li>
<li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+surgery+and+immunotherapy%3A+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+ImmunoTherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86(2018).</li>
<li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li>
<li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li>
<li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969(2014).</li>
<li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial%2C+but+not+complete%2C+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li>
<li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology & Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. B16 as a mouse model for human melanoma. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOverwijk%2C+WW+%22Current+Protocols+in+Immunology%22">Current Protocols in Immunology</a>. , Chapter 20, Unit 20-21 (2001).</li>
<li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li>
<li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37(2018).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li>
<li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li>
<li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253(2014).</li>
<li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li>
<li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li>
<li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (7), (2018).</li>
</ol>

Nessuna divulgazione.

Forniamo un protocollo per un modello murino di resezione chirurgica incompleta del sarcoma dei tessuti molli per testare le terapie peri-operatorie. Abbiamo anche standardizzato l'incisione chirurgica per consentire la valutazione della guarigione della ferita tra topi dopo il trattamento.
Il posizionamento del tumore è una parte importante di questo protocollo. Abbiamo optato per un modello tumorale sottocutaneo per consentire un facile accesso chirurgico al sito del tumore e la somministraz...

La chirurgia rimane l'opzione di trattamento principale per molti tumori solidi1, tra cui sarcoma dei tessuti molli2,3. Nonostante i miglioramenti nelle tecniche di chirurgia del cancro, e le combinazioni con (neo)terapie associate, c'è ancora un alto rischio di ricaduta del cancro e metastasi a seguito della resezione tumorale primaria4,5. Nel sarcoma dei tessuti molli, le ricadute si verificano particolarmente locoregionale, nel sito di intervento chirurgico, con conseguente aumento della morbilità e della mortalità. In ambito clinico, può essere difficile ottenere margini abbastanza ampi (ad esempio, a causa di vincoli anatomici), con conseguente resezione incompleta e successiva ricorrenza tumorale6. Lo stress chirurgico e il successivo processo di guarigione delle ferite sono noti per creare un microambiente tumorale immunosoppressivo favorevole per la ricorrenza del tumore7,8. Pertanto, la scoperta e lo sviluppo di nuove terapie per il sarcoma dei tessuti molli, in particolare le immunoterapie, dovrebbe idealmente prendere in considerazione la risposta chirurgica di guarigione della ferita.
La maggior parte degli studi preclinici per le terapie adiuvanti vengono inizialmente effettuati utilizzando modelli di topo singenici o xenotrapianto sottocutanei, senza incorporare lo stress chirurgico e la risposta di guarigione delle ferite9,10. Pertanto, abbiamo sviluppato un modello di sarcoma dei tessuti molli topo subgenico singenico che incorpora una resezione chirurgica incompleta. WEHI 164 cellule fibrosarcoma sono inoculated sottocutaneamente, e una volta che i tumori sono stabiliti, rimuoviamo 50-75% della massa tumorale (Figura 1A-E). I tumori ricrescono costantemente dal tumore rimanente. Questo modello consente di testare le terapie adiuvanti considerando l'effetto dello stress chirurgico e della guarigione delle ferite. Modelli chirurgici simili di resezione incompleta sono stati utilizzati in una serie di studi da diversi gruppi e trovati per essere riproducibili ed efficaci11,12,13. Qui, forniamo una descrizione dettagliata di questo protocollo.

<table><tbody><tr><td>Siringa da insulina da 26 gauge da 0,5 ml</td><td>Becton Dickinson, Australia</td><td>326769</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>2-Mercaptoetanolo</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>21985023</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Macchina per gas anestetici</td><td>Darvall Vet, Australia</td><td>SKU: 2848</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Anti-CTLA-4</td><td>BioXcell, USA</td><td>BE0164</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Anti-PD-1</td><td>BioXcell, USA</td><td>BP0273</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Buprenorfina cloridrato Iniezione, 0,3 mg/mL</td><td>RB healthcare UK Limited, Regno Unito</td><td>55175</td><td>Prescrizione</td></tr> medica <tr><td>Scrub chirurgico alla clorexidina 4%</td> <td>Perigo Australia, Australia</td><td>CHL01449F(scrub</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Fetale Siero bovino fetale</td><td>CellSera, Australia</td><td>AU-FBS-PG</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Pinze Fine 10,5 cm</td><td>Casa chirurgica, Australia occidentale</td><td>CC74110</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Pinze Fine 12 cm Casa chirurgica seghettata</td><td>, Australia Occidentale</td><td>CC74212</td><td>Nessuna</td></tr><tr><td>Forcipe Halsted 14 cm</td><td>Casa chirurgica, Australia Occidentale</td><td>CD01114</td><td>Nessuna</td></tr><tr><td>Camera di riscaldamento</td><td>Datesand Ltd, Regno Unito</td><td>Mini-Thermacage</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>HEPES (1M)</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>15630080</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Henry Schein Animal Health, Australia</td><td>SKU: 29405</td><td>Ordine di prescrizione</td></tr><tr><td>Unguento lubrificante per gli occhi</td><td>Alcon</td><td>n/a</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Penicillina/streptomicina 1000X</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>15140122</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Soluzione tamponata con fosfato 10x</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>70013-032</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Clip reflex da 7 mm</td><td>in grado scientifico, Australia</td><td>AS59038</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Applicatore di clip per ferite riflesse da 7 mm</td><td>Able scientific, Australia</td><td>AS59036</td><td>None</td></tr><tr><td>Dispositivo di rimozione della clip per ferite riflesse</td><td>Able scientific, Australia</td><td>AS59037</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Circuito respiratorio per anestesia Qube per roditori</td><td>Darvall Vet, Australia#</td><td>7885</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutammina</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>21870092</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Forbici Iris STR 11 cm</td><td>Casa chirurgica, Australia occidentale</td><td>KF3211</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Forbici Iris STR 9 cm</td><td>Casa chirurgica, Australia occidentale</td><td>JH4209</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Camera di induzione piccola</td><td>Darvall Vet, Australia</td><td>SKU: 9630</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>TrypLE express 1x</td><td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td><td>12604-021</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Germinatore 500 Sterilizzatore di perline di vetro</td><td>Cellpoint Scientific Inc., USA</td><td>5-1460-DK</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello di topo di sarcoma di tessuto molle incompleto resected per test (neo)adiuvante terapie

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

La chirurgia è spesso il primo trattamento per molti tumori solidi. Tuttavia, le ricadute locali si verificano frequentemente a seguito della resezione tumorale primaria, nonostante le terapie adiuvanti o neo-adiuvanti. Ciò si verifica quando i margini chirurgici non sono sufficientemente privi di tumore, con conseguente cellule tumorali residue. Da un punto di vista biologico e immunologico, la chirurgia non è un evento nullo; l'ambiente di guarigione delle ferite è noto per indurre vie sia pro- e anti-tumorale. Di conseguenza, i modelli preclinici per lo sviluppo di farmaci volti a prevenire le ricadute locali dovrebbero incorporare la resezione chirurgica durante il test di nuove terapie (neo)adhavant, per modellare le impostazioni cliniche in pazienti trattati con chirurgia.
Qui, descriviamo un modello murino di resezione chirurgica incompleta del sarcoma dei tessuti molli WEHI 164 che consente di testare (terapie neo)adiuvanti nell'impostazione di una risposta di guarigione della ferita. In questo modello, 50% o 75% del tumore viene rimosso, lasciando dietro di sé alcuni tessuti tumorali in situ per modellare la malattia residua lorda dopo l'intervento chirurgico in ambiente clinico. Questo modello consente di testare le terapie nel contesto della chirurgia, considerando anche la risposta di guarigione della ferita, che può influenzare l'efficacia dei (neo)trattamenti associati. La resezione chirurgica incompleta si traduce in ricrescita riproducibile del tumore in tutti i topi in assenza di terapia adiuvante. Il trattamento adiuvante con blocco dei checkpoint si traduce in una ridotta ricrescita del tumore. Questo modello è quindi appropriato per testare le terapie nel contesto della chirurgia di debulking e della relativa risposta di guarigione della ferita e può essere esteso ad altri tipi di cancro solido.

La crescita del tumore a una dimensione di 50 mm2 è una dimensione ideale per il debulk parziale. La resezione chirurgica incompleta di 50 mm2 tumori risulta in 100% (n.5) ricrescita riproducibile dei tumori in assenza di immunoterapia adiuvante (Figura 4A). Successivamente abbiamo usato il modello per testare le immunoterapie adiuvanti usando anticorpi contro molecole di checkpoint Cytotoxic T Lymphocyte Associated Prot...

In questo protocollo, descriviamo un modello murino di resezione chirurgica incompleta del sarcoma dei tessuti molli per testare (neo)le terapie adiuvanti.

Un modello di topo di Sarcoma di tessuto molle incompleto resected per test (Neo)adiuvante Terapie

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Questo protocollo mira a imitare l'impostazione clinica della malattia residua dopo la chirurgia di debulking del tumore, e quindi ci consente di testare nuove terapie oncologiche nel contesto della guarigione postoperatoria delle ferite. Il vantaggio di questa tecnica è che consente la standardizzazione della quantità di ferita inflitta e della quantità di tumore per rimanere. Questa tecnica è particolarmente importante per gli studi preclinici in quanto identificando nuovi trattamenti per i tumori, che ricadute localmente un esempio del quale è il sarcoma dei tessuti molli.Questa dimostrazione visiva è fondamentale per dimostrare la tecnica di inversione, che ci consente di esporre il tumore attaccato al lato della pelle. Inizia questa procedura con l'inoculazione sottocutanea delle cellule tumorali preparate nei topi, come descritto nel protocollo di testo. Il giorno 12, dopo l'inoculazione, quando i tumori hanno raggiunto una dimensione di circa 50 millimetri quadrati, dosare topi con 100 microlitri di buprenorfina per via sottocutanea nello scruff del collo, 30 minuti prima dell'intervento chirurgico.Impostare l'area chirurgica con il dissipatore di calore coperto da panca e i

a-mouse-model-incompletely-resected-soft-tissue-sarcoma-for-testing

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Questo video descrive il protocollo per stabilire un modello murino di metastasi spontanee di xenotrapianti derivati da pazienti con cancro del colon-retto o PDX. Questi modelli di xenotrapianto imitano parzialmente le caratteristiche dei carcinomi umani e comprendono gli aspetti critici delle neoplasie maligne umane, tra cui l'invasione e le metastasi.

Modelli murini di metastasi spontanee: una piattaforma per studiare il potenziale metastatico delle cellule di cancro colorettale iniettate ortotopicamente

Questo video illustra i test di terapia adiuvante o aggiuntiva in un modello murino con tumori sottocutanei resecati in modo incompleto. Il topo parzialmente resecato con tumore è trattato con un anticorpo che ha come bersaglio la proteina anti-citotossica delle cellule T regolatorie, riducendo potenzialmente la ricrescita tumorale e suggerendo un'efficace terapia adiuvante.

Una terapia adiuvante in un modello murino con un tumore sottocutaneo non completamente resecato

Fonte: Alomari, S., et al. Implementazione della resezione minimamente invasiva del tumore cerebrale nei roditori per la raccolta di tessuti ad alta vitalità. J. Vis. Exp. (2022)Questo video mostra l'uso di un sistema di resezione minimamente invasivo (MIRS) per asportare il tessuto tumorale da un topo anestetizzato a cui è stato impiantato un tumore. La procedura prevede il fissaggio del mouse su un telaio stereotassico, la riapertura del sito chirurgico precedente per accedere al cervello e...

Resezione del tumore cerebrale in un topo utilizzando un sistema di resezione minimamente invasivo

Un modello di tumore di topo di stress chirurgico viene utilizzato per esplorare come postoperatorio soppressione immunitaria promuove la malattia metastatica e per valutare le terapie perioperatorie immunostimolante.

Un tumore modello murino di stress chirurgico per esplorare i meccanismi di immunosoppressione post-operatorio e valutare Novel perioperatoria Immunoterapie

Modelli di spontanea carcinoma renale (RCC) progressione della malattia metastatica possono essere usate per valutare i trattamenti in un ambiente clinicamente rilevante. Questo protocollo dimostra procedure diverse per l'impianto ortotopico di cellule tumorali del rene, la corretta nefrectomia, e, infine, delinea una guida necroscopico per il punteggio visiva e bioluminescente di carico metastatico e localizzazione.

Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia

Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi.

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

Mancano modelli pre-clinici che valutano la terapia adiuvante che mirano alla metastasi del cancro al seno. Per risolvere questo problema, abbiamo sviluppato un modello murino di metastasi adenocarcinomi mammarie polmonari de novo , in cui le terapie somministrate nell'ambiente adiuvante (resezione chirurgica postale dei tumori primari) possono essere valutate per efficacia nell'effetto delle metastasi polmonari precedentemente seminate.

Procedure chirurgiche e metodologia per un modello preclinico murino di De Novo Metastasi del cancro del mammario

Attuazione di un modello ortotopico di carcinoma renale nei topi immunocompetenti offre al ricercatore un sistema clinicamente rilevante definito dalla presenza di un tumore e metastasi polmonari primarie renali nello stesso animale. Questo sistema può essere utilizzato per testare preclinica una varietà di trattamenti in vivo.

Un Cell Carcinoma Singenico modello murino di renale metastatico per quantitativo e longitudinale Valutazione della preclinici Terapie

Iniezione diretta di cancro-derivato di vescicole extracellulari (SVE) conduce alla riprogrammazione del midollo osseo, sostenendo la progressione del tumore; Tuttavia, le celle che mediano questo effetto è poco chiaro. Qui, descriviamo un protocollo dettagliato per studiare EV-mediata di cellule staminali tumorali mesenchimali (MSC) interazioni in vivo, rivelando un ruolo cruciale per MSCs EV-educato in metastasi.

Un modello murino preclinico di Osteosarcoma per definire la comunicazione mediata della vescicola extracellulare tra tumore e cellule staminali mesenchimali

Nel contesto clinico, i pazienti con cancro al pancreas localizzato saranno sottoposti a pancreatectomia seguita da un trattamento adiuvante. Questo protocollo qui riportato mira a stabilire un metodo sicuro ed efficace per modellare questo scenario clinico nei topi nudi, attraverso l'impianto ortotopico del cancro al pancreas seguito da pancreatectomia distale e splenectomia.

Un modello ortotopico di topo resezionale del cancro al pancreas

Qui viene mostrato un metodo unico per resezionare chirurgicamente tumori carcinoma squamoso orale stabiliti nella cavità orale.

Modello di resezione tumorale rilevante per traduzione per modelli preclinici di murina di carcinoma squamoso orale

Scopri un modello murino di resezione incompleta di sarcoma dei tessuti molli per testare terapie (neo)adiuvanti. Questo metodo standardizza la ferita chirurgica e il tumore residuo, facilitando studi preclinici sull'immunoterapia postoperatoria.

Un modello di topo di Sarcoma di tessuto molle incompleto resected per test (Neo)adiuvante Terapie

Esplora altri video