Name: Ottimizzazione della tecnica del bracciale per il trapianto di cuore di Murine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: Impara la tecnica del bracciale ottimizzata con approccio a tubo interno per il trapianto cardiaco eterotopico cervicale nel topo. Questo metodo riduce i tempi operatori e migliora l'efficienza chirurgica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato sostenuto dal Fujian Provincial Health Education Joint Research Project (WKJ2016-2-20), dalla National Natural Science Foundation of China (81771271 e 81800664), dal Programma Nazionale di Ricerca e Sviluppo della Cina (2018YFA010830 4) e il progetto di istruzione e ricerca scientifica per gli insegnanti giovani e di mezza età nella provincia del Fujian (JAT170714), la Fondazione di Scienze Naturali della Provincia di Hunan in Cina (2019JJ50842) e Huxiang Young Talents della Provincia di Hunan (2019RS2013).

Gli animali (BALB/c, C57BL/6, maschio, 8-12 settimane) sono ospitati in una struttura specifica priva di agenti patogeni presso il Xiamen University Laboratory Animal Center. Il C57BL/6 viene utilizzato come ricevente e il BALB/c viene utilizzato come donatore. Tutte le procedure sono eseguite secondo le linee guida del Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali (IACUC).
NOTA: Per l'operazione sono necessari una serie di strumenti microchirurgici, tra cui micro forbice, micro pinze dritte, pinze micro curve e micro assi (Tabella e materiali, Figura 1B, C, D, E). È necessaria una coppia di morsetti bulldog monouso (Figura 1F). Due polsini per la vena giugulare esterna e l'arteria carotide vengono preparati tagliando i tubi di poliammide personalizzati con un bisturi n. 10 al microscopio. Il diametro della vena e del bracciale dell'arteria è rispettivamente di 0,9 mm e 0,55 mm. Inoltre, il diametro del tubo interno per il corrispondente bracciale venoso è di 0,6 mm, e questi della camera d'aria per il bracciale dell'arteria corrispondente è 0,28 mm (Figura 1G).
1. Preparazione del destinatario
<ol><li>Anestesizzare il mouse ricevente con pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Utilizzare clipper meccanici atraumatici per rimuovere i capelli nella regione cervicale laterale destra.</li>
	<li>Utilizzare un applicatore sterile di punta di cotone per pulire l'area chirurgica con antisettico di iodio seguito da 70% di etanolo.</li>
	<li>Posizionare il mouse nella posizione supina sulla piattaforma di funzionamento. Coprire il topo con una garza sterile.</li>
	<li>Utilizzare una forbice oftalmica per fare un'incisione trasversale dalla linea mediana inferiore del collo all'articolazione della spalla-clavicola destra.</li>
	<li>Isolare la vena giugulare esterna destra con micro pinze curve per esporre abbastanza lunghezza, tagliare i rami tramite elettrocoagulazione e ligare il vaso all'estremità distale utilizzando una sutura di seta 6-0.</li>
	<li>Bloccare la vena giugulare esterna prossicante utilizzando un morsetto bulldog e poi transetto la vena prossimica alla legatura utilizzando una micro forbice.</li>
	<li>Lavare il lume del vaso con 100 U/mL 0-4 gradi salina epararizzata per rimuovere qualsiasi sangue residuo.</li>
	<li>Tirare la vena giugulare esterna attraverso il polsino della vena utilizzando micro pinze dritte; inserire la venosa camera d'aria nel lume come stent, e sempret la parete del vaso sopra il polsino con pinze micro dritto (Figura 2A).</li>
	<li>Fissare l'endotelio del recipiente all'estremità prossimale del bracciale utilizzando un 8-0 circumferenziale sutura di seta (Figura 2B).</li>
	<li>Utilizzare micro pinze dritte per ritirare la venosa camera d'aria dal recipiente venoso.</li>
	<li>Eseguire una dissezione smussata con micro pinze curve per isolare l'arteria carotide destra adiacente al bordo interno dello sternocleidomastoide.</li>
	<li>Bloccare l'arteria carotide destra prossicante utilizzando un morsetto bulldog, legiare la distally dell'arteria carotide utilizzando una sutura di seta 6-0 e utilizzare una micro forbice per transetto l'arteria carotide prosibilmente alla legatura.</li>
	<li>Lavare l'arteria carotide con 100 U/mL 0-4 gradi salina eparinizzata per rimuovere qualsiasi sangue residuo.</li>
	<li>Passare l'arteria carotide attraverso il bracciale dell'arteria e inserire la camera d'aria dell'arteria nel recipiente dell'arteria utilizzando micro pinze dritte (Figura 2C).</li>
	<li>Evert il vaso sopra il bracciale utilizzando micro pinze dritte; fissare l'endotelio della nave eversi utilizzando un sutura di seta (Figura 2D).</li>
	<li>Ritirare la camera d'aria dell'arteria dal vaso dell'arteria con micro pinze dritte. NOTA: conservare la ghiandola submandibolare del destinatario.</li>
</ol>2. Preparazione del donatore
<ol><li>Anestesizzare il topo del donatore con pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Utilizzare tagliatori meccanici atraumatici per rimuovere i capelli nella regione addominale.</li>
	<li>Posizionare il mouse nella posizione supina sulla piattaforma di funzionamento. Coprire il topo con una garza sterile.</li>
	<li>Utilizzare un applicatore sterile di punta di cotone per pulire l'area chirurgica con antisettico di iodio seguito da 70% di etanolo.</li>
	<li>Fare un'incisione mediana addominale con una forbice oftalmica ed esporre la cavità addominale.</li>
	<li>Utilizzare micro pinze curve per esporre la vena cava inferiore, quindi iniettare per via endovenosa 200 -L di 100 U/mL 0-4 s'C eparinizzato salina per 20 g di peso corporeo attraverso la vena inferiore cava.</li>
	<li>Eseguire la toracotomia con le forbici oftalmiche, tagliare le costole attraverso le incisioni della linea midaxillaria bilaterale, capovolgere la parete anteriore del torace verso l'esterno per esporre la cavità toracica.</li>
	<li>Accisa il timo con micro pinze curve.</li>
	<li>Esporre l'aorta, e poi perfondere 200 - LL di 100 U/mL 0-4 salinizzato all'arteria coronaria attraverso l'arco aortico. NOTA: Evitare di perfondere eventuali bolle di gas nel cuore del donatore.</li>
	<li>Utilizzare una micro forbice per transect l'aorta ascendente all'inizio dell'arco aortico.</li>
	<li>Transettale l'arteria polmonare all'inizio dei due rami principali con una micro forbice.</li>
	<li>Ligate la vena cava superiore e inferiore vena cava proximally utilizzando una sutura di seta 6-0 e utilizzare un micro forbice per transetto vena distally alla legatura.</li>
	<li>Ligate le vene polmonari insieme, circonferenzialmente, utilizzando una singola sutura di seta 6-0, e tagliare i rami di vena distay alla legatura utilizzando un micro forbice.</li>
	<li>Rimuovere l'innesto cardiaco dai tessuti molli circostanti; conservarla in salina eparinizzata da 0 a 4 gradi centigradi.</li>
</ol>3. Impianto cardiaco
<ol><li>Posizionare il cuore del donatore a testa in giù nella regione del collo destro del destinatario.</li>
	<li>Inserire l'arteria polmonare del cuore del donatore in un anello di seta 6-0 con micro pinze dritte.</li>
	<li>Avvolgere il lume del vaso intorno al bracciale venoso, quindi stringere i anelli di sutura di seta 6-0 intorno al bracciale per fasciare l'articolazione del vaso.</li>
	<li>Eseguire l'anastomosis dell'aorta dell'innesto e del bracciale dell'arteria seguendo i passaggi descritti nel passaggio 3.2.</li>
	<li>Rilasciare la vena giugulare bloccata seguita dall'arteria giugulare bloccata. Mantenere l'articolazione del vaso non contorta e assicurarsi che il flusso sanguigno sia libero. NOTA: Il ritmo del sinusto che ritorna a più di 200 volte entro 1 min è considerato normale.</li>
	<li>Inumidire il cuore del donatore usando una salina calda (37 gradi centigradi) e controllare se l'innesto sta sanguinando. Impostare l'innesto cardiaco pulsante nello spazio sottocutaneo, quindi suturare l'incisione.</li>
</ol>4. Cura postoperatoria e valutazione dell'innesto
<ol><li>Registrare il tempo al ritmo del seno normale e la conservazione del ritmo del seno normale per almeno 5 minuti dopo il rilascio del morsetto per monitorare la funzione di innesto post-operatorio.</li>
	<li>Posizionare il destinatario da solo su una coperta calda fino a quando il destinatario si sveglia dall'anestesia. Somministrare l'analgesia buprenorfina, 0,05 mg/kg, s.c,, al termine dell'intervento e ogni 12 ore per 72 ore dopo l'intervento chirurgico.</li>
	<li>Registrare giornalmente il peso e lo stato di recupero postoperatorio del destinatario. In caso di >15% perdita di peso rispetto a quella alla data dell'intervento chirurgico, paralisi emiplegica, o infezione, eutanasia il destinatario tramite inalazione isoflurane terminale21.</li>
	<li>Monitorare la sopravvivenza dell'innesto dalla palpazione quotidiana. L'intervento è considerato di successo se l'allotrapianto murino sopravvive per >72 ore. Valutare la funzione di innesto, come precedentemente riportato22: Scala 3 - vigorosamente pulsato e frequenza; Scala 2 - meno pulsato; Scala 1- fibrillazione e rifiuto imminente; o Scala - 0, perdita di battito cardiaco e rifiuto completo.</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li>
<li>Que, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+cold+ischemia+time+in+mouse+heart+transplantation+using+supercooling+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation.</a> Transplantation. , (2019).</li>
<li>Wang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+murine+cardiac+allograft+arteriopathy+by+long-term+blockade+of+CD40-CD154+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions.</a> Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+technique+for+lung+retransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Surgical technique for lung retransplantation in the mouse.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), Pt 1 64-69 (1983).</li>
<li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice%3A+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PLoS One. 8 (10), 77278(2013).</li>
<li>Miller, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+restoration+of+transplantation+tolerance+after+acute+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection.</a> Nature Communications. 6, 7566(2015).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Jagged-1+combined+with+blockade+of+CD40+pathway+prolongs+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival.</a> Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).</li>
<li>Xie, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+costimulation+blockade+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+alloantigen-primed+memory+T+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice.</a> Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+monoclonal+antibodies+with+DST+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+memory+T+cells+to+induce+long-lived+heart+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice.</a> Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).</li>
<li>Dai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+CD27%2FCD70+pathway+to+reduce+the+generation+of+memory+T+cells+and+markedly+prolong+the+survival+of+heart+allografts+in+presensitized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice.</a> Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonged+allograft+survival+by+arsenic+trioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide.</a> Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonging+allograft+survival+by+1alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D%283%29+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice.</a> Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+trioxide+is+a+novel+agent+for+combination+therapy+to+prolong+heart+allograft+survival+in+allo-primed+T+cells+transferred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice.</a> Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44%2FCD70+blockade+and+anti-CD154%2FLFA-1+treatment+synergistically+suppress+accelerated+rejection+and+prolong+cardiac+allograft+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+cervical+cuff+technique+for+rat-to-mouse+heterotopic+heart+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. , (2017).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Blanchard, J. M., Pollak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+perfusion+and+storage+of+heterotopic+heart+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice.</a> Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).</li>
<li>Felix, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H2-DMalpha%28-%2F-%29+mice+show+the+importance+of+major+histocompatibility+complex-bound+peptide+in+cardiac+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection.</a> Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).</li>
<li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Wang, K., Zhang, N., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+mouse+heterotopic+heart+graft+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation.</a> Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).</li>
<li>Plenter, R. J., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+heterotopic+heart+transplant+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine heterotopic heart transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), (2014).</li>
<li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907(2015).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).</li>
<li>Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submandibular+Gland-preserving+Technique+for+Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Transplantation. 102 (11), 464-465 (2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I modelli di trapianto di cuore di topo sono strumenti importanti per la ricerca sull'immunologia dei trapianti, in quanto sono disponibili strumenti e materiali per valutare i meccanismi immunitari di questo modello e un gran numero di topi modificati nel gene. Tuttavia, le sfide tecniche microchirurgiche, come la sutura e l'eversione delle navi, ne hanno limitato l'uso diffuso. Nel presente studio, abbiamo studiato alcune sfide tecniche fondamentali del trapianto di cuore murino e abbiamo ottenuto buoni risultati. Un p...

L'istituzione di trapianti di cuore eterotopici di topo attraverso anastomosi end-to-end all'interno dell'addome nel 1973 è stata una pietra miliare nella ricerca sull'immunologia dei trapianti di base1. Questo modello ha fornito uno strumento importante e valido per analizzare i meccanismi della lesione di reperfusione di ischemia2, rigetto immunologico e tolleranza3,4. Tuttavia, la natura complessa e dispendiosa in termini di tempo della chirurgia e il potenziale per le infezioni possono provocare gravi adeguarsi addominali perioperatorie e reazioni infiammatorie, con conseguente bassa efficienza per il modello di trapianto di cuore eterotopico.
La tecnica di trapianto di cuore eterotopico cervicale è stata descritta per la prima volta da Chen nel 19915. In questo modello, la vena giugulare esterna del destinatario viene anastomosed all'arteria polmonare dell'innesto e l'arteria carotide viene anastomosed all'aorta ascendente. I principali vantaggi di questo metodo sono la comodità del monitoraggio e la riduzione dei traumi al destinatario. Nello stesso anno, Matsuura descrisse una tecnica migliorata, in cui la fine della vena giugulare esterna e dell'arteria carotide venivano eversate su un polsino in Teflon e fissate con una legatura di seta circonferenziana6. Alcuni ricercatori hanno anche fissato il bracciale all'arteria polmonare destra nel cuore del donatore prima di inserire il bracciale nella vena giugulare esterna del destinatario7. Finora, la tecnica del bracciale è stata ampiamente applicata in vari modelli di trapianto di piediloni vascolari, compresi quelli per il polmone8, fegato9e trapianto renale10.
Ad oggi, ci sono diverse difficoltà associate alla tecnica del bracciale. Ad esempio, l'arteria carotide è difficile da evert sopra il bracciale a causa dell'elasticità aggiuntiva, con conseguente capovolgimento del tessuto all'indietro. Quindi, pratica aggiuntiva e un dilatatore microchirurgico può essere richiesto per completare questa fase. Inoltre, la preparazione del recipiente cervicale può richiedere fino a 25 minuti.
Per risolvere questi problemi, introduciamo la tecnica della camera d'aria, che si basa sulla tecnica del bracciale e include il fissaggio del polsino sulla vena giugulare esterna e sull'arteria carotide utilizzando una camera d'aria per aiutare con l'eversione della parete del vaso. Inoltre, con una formazione semplice, la preparazione del destinatario è ridotta a 15,5 minuti. Questa tecnica riduce la complessità dell'operazione e non richiede ulteriore pratica o l'uso di un dilatatore vascolare. Può essere applicato in tutte le ricerche immunitarie dei trapianti, in particolare per verificare la tolleranza immunitaria di terze parti durante la quale il ricevente riceve due allotrapianti cardiaci, uno all'interno dell'addome e l'altro nel collo11. Raccomandiamo inoltre la cooperazione tra due chirurghi esperti per stabilire questo modello, con un chirurgo che prepara l'animale ricevente e l'altro che raccoglie e impianta il cuore del donatore. Tale collaborazione può ridurre il tempo di funzionamento a 25 minuti. Utilizzando questa procedura ottimizzata, abbiamo stabilito modelli di trapianto di cuore di topo singenico, allogenico12,13,14,1515,16,17,18,19e xenogenei modelli di trapianto di cuore di topo20.
La logica per lo sviluppo della tecnica della camera d'aria era quella di ridurre i tempi di funzionamento per la creazione di un modello di trapianto di cuore di topo con un alto tasso di successo. L'ottimizzazione del modello di trapianto di cuore cervicale facilita l'acquisizione di alti tassi di successo in un breve periodo di tempo di chirurgia rispetto alla tradizionale tecnica di sutura e polsino21. Inoltre, il modello di cooperazione può ridurre ulteriormente il caldo tempo ischemico del cuore donatore rispetto agli interventi chirurgici eseguiti con un unico operatore.

<table><tbody><tr><td>Bracciale per arteria</td> Tubo in poliammide <td>autocostruito</td><td></td><td>. diametro: 0,55 mm, lunghezza: 1,0 mm</td></tr> tubo <tr><td>interno per arteria tubo in</td> poliammide <td>autocostruito</td><td></td><td>. Diametro: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Micro pinze curve</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>WA3050</td><td>1/8 d'arco, punta da 0,3 mm senza gancio</td></tr><tr><td>Micro portaaghi</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>WA2050</td><td>Punta da 0,2 mm</td></tr><tr><td>Micro forbici</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica</td> <td>di strumenti chirurgiciWA1050</td><td>Dritto, lunghezza lama: 10 mm</td></tr><tr><td>Micro pinze diritte</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>WA3060</td><td>Punta da 0,15 mm senza gancio</td></tr><tr><td>Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps</td><td>Scanlan International Inc</td><td>1001-531</td><td>Pressione di serraggio 20&ndash; 25 grammi</td></tr><tr><td>Bracciale per vene</td> Tubo in poliammide <td>autocostruito</td><td></td><td>. diametro: 0,9 mm, lunghezza: 1,2 mm</td></tr><tr><td>Tubo interno per vene</td> Tubo in poliammide <td>autocostruito</td><td></td><td>. Diametro: 0,6 mm</td></tr></tbody></table>

ottimizzazione della tecnica del bracciale per il trapianto di cuore di murine

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Il trapianto cardiaco di Murine è stato eseguito per più di 40 anni. Con i progressi nella microchirurgia, alcune nuove tecniche sono state utilizzate per migliorare l'efficienza chirurgica. Nel nostro laboratorio, abbiamo ottimizzato la tecnica del bracciale con due passaggi principali. In primo luogo, abbiamo usato la tecnica della camera d'aria per inserire una camera d'aria temporanea nella vena giugulare esterna e nel vaso sanguigno carotide per facilitare l'eversione del vaso sul polsino. In secondo luogo, abbiamo eseguito un completo trapianto cardiaco eterotopico attraverso la collaborazione di due chirurghi esperti. Queste modifiche hanno ridotto effettivamente il tempo di funzionamento a 25 minuti, con un tasso di successo del 95%. In questo rapporto vengono descritte in dettaglio queste procedure e viene fornito un video supplementare. Riteniamo che questa relazione sulla tecnica del bracciale migliorata offrirà una guida pratica per il trapianto di cuore eterotopico murino e migliorerà l'utilità di questo modello murino per la ricerca di base.

Operazione chirurgica Tempo
Dopo l'allenamento, un chirurgo esperto può eseguire con successo l'operazione entro 35 minuti utilizzando la tecnica della camera d'aria, in cui sono necessari circa 15,5 minuti per la preparazione del destinatario, 10,9 minuti per la preparazione del donatore e 4,4 minuti sono necessari per le anastomosi cardiache del donatore. Il tempo di ischemia freddo e caldo (dalla preparazione del donatore all'impianto cardiaco) è ridotto a 15,3 minuti rispe...

Introduciamo un approccio della camera d'aria alla tecnica del polsino per il trapianto di cuore eterotopico cervicale del topo per aiutare a evert il vaso sopra il polsino. Abbiamo scoperto che la cooperazione tra due chirurghi esperti riduce notevolmente i tempi di funzionamento.

Ottimizzazione della tecnica del bracciale per il trapianto di cuore di Murine

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Ciao a tutti. Mi chiamo Dr.Zhongquan Qi.È ampiamente noto che la tecnica del polsino è stata utilizzata come trapianto cardiaco dal 1991. Sebbene ci siano stati grandi progressi nella chirurgia medica e nella nuova tecnica chirurgica, ci sono ancora alcune difficoltà basate sulla tecnica del polsino.È una forma di svelamento, in cui ti mostreranno una mezza tecnica optimotica, che può eguagliare significativamente l'efficienza chirurgica. Le procedure principali sono l'inserimento di un temporaneamente in quel tubo nella visiera. La prova ha letto l'ISO quasi la metà.Inserimento della tecnica del tubo. Un chirurgo qualificato può eseguire l'operazione entro 35 minuti con un tasso di successo del 95%. Quindi possono utilizzare il modulo di funzionamento del chirurgo termico, che migliora ulteriormente l'efficienza dell'operazione che mostra nello skeptimic e il tempo di funzionamento verrà ridotto a circa 35 minuti.Grazie. Ed è questo che lega la ricetta e miglia con il pentobarbital. Utilizzare tosaerba meccaniche atraumatiche per rimuovere i capelli nella regione cervicale successiva destra.Utilizzare un applicatore sterile a punta di cotone per pulire l'area chirurgica con antisettico allo iodio seguito dal 70% di etanolo. Posizionare il mouse in posizione supina sulla piattaforma operativa. Coprire il topo con garza sterile.Utilizzare una forbice oftalmica per effettuare un'incisione trasversale dalla linea NACMEC inferiore di un terzo all'articolazione della clavicola della spalla destra. Isolare la vena jungulare esterna destra con micro forcep curve per esporre una lunghezza sufficiente. Tagliare i brunch tramite elettro coagulazione.E localizzare la nave al disto e usando una sutura di sei 2 06. Bloccare la vena junglar esterna prossimalmente utilizzando un morsetto a polvere. E poi tradurre la vena prossimamente alla legatura usando una micro forbice.Lavare il lume del vaso con 100 unità per millilitro 02 quattro Gradi Celsius eparina saliente per rimuovere qualsiasi sangue residuo. Tirare la vena junglar esterna attraverso la vena cava usando micro forcette dritte. Inserire la camera d'aria della vena nel lume come stent e sopra la parete del vaso sopra la curva con micro forcette dritte.Fissare l'irritante endotelio Faso all'estremità prossimale della curva usando una sutura circonferenziale da otto a 06. Utilizzare micro forcep dritti per ritirare la camera d'aria venee dal vaso venae. Eseguire la dissezione smussata con micro forcep per isolare l'arteria carotidea destra, adiacente al bordo interno dello sternocleidomastoide.Blocca l'arteria carotidea destra prossimamente usando un morsetto babcock. Individuare l'arteria carotide distostamente usando una sutura da sei a 06. E usa una micro forbice per trattare l'arteria carotide prossimale alla legatura.Lavare l'arteria carotide con 100 unità per millilitro 02 quattro Celsius eparina saliente per rimuovere qualsiasi sangue residuo. Passare l'arteria carotide attraverso la curva dell'arteria e inserire la camera d'aria dell'arteria nel vaso dell'arteria utilizzando micro forcette dritte. Puntare al recipiente sopra la curva utilizzando micro forcette dritte.Fissare l'endotelio facile invertito usando una sutura circonferenziale da otto a 06. Ritirare la punta interna dell'arteria dal vaso dell'arteria con micro forcette dritte. L'anestesia e la sua infezione sono le stesse del ricevente.Fai un'incisione della linea media addominale con una forbice oftalmica ed esponi la cavità addominale. Utilizzare le forcep a micro curva per esporre la vena cava inferiore. E poi iniettare per via endovenosa 200 microlitri di 100 unità per millilitro 02 quattro Gradi Celsius eparina saliente per 20 grammi di peso corporeo attraverso la vena cava inferiore.Eseguire la toracotomia con forbici oftalmiche. Taglia le costole attraverso le palette Romita incisioni di luce ascellare. Sbattere la parete anteriore del torace verso l'esterno per esporre la cavità toracica.Asporta il timo con micro forcep. Esporre l'aorta e quindi abbondante 200 microlitri di 100 unità per millilitro 02 quattro Gradi Celsius eparina saliente all'arteria coronarica attraverso l'arco aortico. Usa una micro forbice per traseleggere l'aorta ascendente all'inizio dell'arco aortico.Trasezionare l'arteria polmonare all'inizio dei due rami principali con una micro forbice. Individuare la vena cava superiore e la vena cava inferiore approssimativamente utilizzando una sutura da sei a 02 e utilizzare una micro forbice per traseleggere il distillato di vena alla legatura. Individuare le vene polmonari insieme in modo circonferenziale usando una singola sutura da sei a 06 e tagliare i rami della vena distally alla legatura usando una micro forbice.Rimuovere l'innesto cardiaco dai tessuti molli circostanti. Posizionare il cuore del donatore a testa in giù nella regione del collo destro del ricevente. Inserire l'arteria polmonare del cuore donatore in un anello da sei a 06 con micro forcep dritte.Avvolgere il lume del vaso intorno alla vena cava e quindi stringere l'anello di sutura da sei a 06 intorno al vitello per piegare l'articolazione del vaso. Eseguire l'anastomosi dell'aorta dell'innesto e della curva dell'arteria. Rilasciare la vena giugulare goffa seguita da arteria giugulare goffa.Tenere il vaso unito e attorcigliato e assicurarsi che il flusso sanguigno non sia strutturato. Impostare l'innesto cardiaco di passaggio nello spazio sottocutaneo e quindi suturare l'incisione. Registrare il tempo al normale ritmo del seno e la conservazione del normale ritmo del seno per almeno cinque minuti dopo il rilascio del morsetto per monitorare la funzione di innesto post operatorio.Posizionare il destinatario da solo sull'unica coperta fino a quando il destinatario non si sveglia dall'anestesia. Nel complesso, anche se il nostro intervento chirurgico utilizza tecniche di polsini che sono state riportate, abbiamo stabilito la tecnica del nucleo interno basata su questo. Ridurre la difficoltà in chirurgia e ridurre il tempo di anastomosi con la tecnica di ottimizzazione.Abbiamo suggerito il motto di incorporazione a doppia chirurgia per migliorare ulteriormente l'efficienza dell'operazione mostrata nello schema. E il tempo di funzionamento sarà ridotto a circa 25 minuti. Un cuore allografto BALBC completamente non corrispondente a MHC può essere rifiutato con otto giorni dopo il trapianto in topi ricevente C57BL6.I trapianti di cuore sigeneici utilizzati nella nostra ricerca sono sopravvissuti per più di 100 giorni tranne un raro caso a causa di una perdita di peso del 15% rispetto al peso normale prima dell'operazione. L'istopatologia dell'allografto il settimo giorno rivelò caratteristiche tipiche del rigetto acuto, incluso un pesante infiltrato cellulare con necrosi tissutale. Gli innesti sigeneici sono quasi normali senza evidenza di necrosi del miocita o infiltrazione cellulare infiammatoria.100 giorni dopo il trapianto di cuore sinogenetico, l'endotelio vascolare del sito di anastomosi può essere raccolto e macchiato da immunofluorescenti. In questa analisi, non sono stati osservati ringhi aversi della parete vascolare, trombosi o ispessimento dell'intima. L'imaging elettro microscopico ha rivelato che un endotelio liscio e una regolare formazione longitudinale della crosta con le cellule endoteliali disposte in modo ordinato e vicino senza sedimenti evidenti sulla superficie.

optimization-of-the-cuff-technique-for-murine-heart-transplantation

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Il modello murino di trapianto di cuore cervicale è adatto per immunologica nonché studi danno da ischemia riperfusione. Abbiamo modificato la procedura utilizzando una tecnica bracciale non sutura ed eseguito più di 1.000 trapianti di successo con questo approccio.  Qui, forniamo ulteriori dettagli di questa tecnica per integrare il video.

Murino cervicale Cuore trapianto Modello utilizzando una tecnica Cuff Modificato

Il manoscritto descrive i passaggi necessari per eseguire il trapianto di cuore eterotopico nel topo.

Murini eterotopica cuore Tecnica Trapianto

La tecnica della cuffia accorcia e facilita il modello di trapianto eterotopico di cuore cervicale nei topi, evitando anastomosi di sutura tecnicamente impegnative di piccoli vasi. I dettagli tecnici mostrati in questo video paper dovrebbero consentire ai ricercatori di stabilire questo modello nei loro laboratori.

Eterotopico cervicale trapianto cardiaco nei topi

Qui, presentiamo un protocollo di trapianto aortico eterotopico nei topi utilizzando la tecnica del bracciale non-suture in un modello di murino cervicale. Questo modello può essere utilizzato per studiare la patologia sottostante della vasculopatia allotrapianto cronica (CAV) e può aiutare a valutare nuovi agenti terapeutici al fine di prevenirne la formazione.

Modello di trapianto aortico cervicale murine utilizzando una tecnica di manette non sutura modificata

Nel presente protocollo, un modello di trapianto di cuore di topo viene utilizzato per studiare il meccanismo di rigetto dell'allotrapianto cardiaco. In questo modello di trapianto di cuore eterotopico, l'efficienza operativa è migliorata e la sopravvivenza degli innesti cardiaci è assicurata da un'anastomosi cervicale end-to-end dell'impianto cardiaco utilizzando una tecnica di bracciale modificata.

Una tecnica di bracciale modificata per il modello di trapianto di cuore eterotopico cervicale del topo

I modelli di trapianto cardiaco murino rappresentano preziosi strumenti di ricerca per lo studio dell'immunologia dei trapianti. Il presente protocollo descrive il trapianto cardiaco cervicale eterotopico di topo che prevede il posizionamento di polsini sull'arteria carotide comune del ricevente e sul tronco dell'arteria polmonare del donatore per consentire il flusso sanguigno laminare.

Trapianto cardiaco cervicale eterotopico di topo utilizzando bracciali vascolari

Questo protocollo fornisce informazioni tecniche per la ricostruzione dei vasi utilizzando la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo.

Ricostruzione vascolare con la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo

Questo protocollo presenta una tecnica di trapianto cervicale eterotopico senza cuffia e basata su suture nei topi, progettata per consentire il posizionamento affidabile di un secondo innesto cardiaco eterotopico per valutare la tolleranza immunitaria specifica del donatore in condizioni fisiologiche con minima interferenza da materiale estraneo.

Modello cervicale senza suture con cuffia per trapianto cardiaco eterotopico secondario per valutare la tolleranza immunitaria specifica del donatore nei topi

Questo protocollo presenta una tecnica semplificata di anastomosi per suture end-to-side per il trapianto di cuore cervicale murino, fornendo un modello robusto e riproducibile per lo studio dell'immunologia dei trapianti.

Trapianto cardiaco eterotopico cervicale usando la tecnica dell'anastomosi end-to-side per studiare l'immunologia del trapianto

In questo video, dimostriamo la procedura di CD40-attivazione e l'espansione delle cellule B da splenociti murini di C57BL / 6 topi, che può essere utilizzato come modello di una cellula presentanti l'antigene (APC) per studiare l'induzione di immunità.

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

Impara la tecnica del bracciale ottimizzata con approccio a tubo interno per il trapianto cardiaco eterotopico cervicale nel topo. Questo metodo riduce i tempi operatori e migliora l'efficienza chirurgica.

Ottimizzazione della tecnica del bracciale per il trapianto di cuore di Murine

Esplora altri video