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DOI: 10.3791/61122-v
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L'obiettivo del test delle sostanze reattive dell'acido tiobarbiturico è quello di valutare lo stress ossidativo in campioni biologici misurando la produzione di prodotti di perossidazione lipidica, principalmente malondialdeide, utilizzando la spettrofotometria a lunghezza d'onda visibile a 532 nm. Il metodo qui descritto può essere applicato al siero umano, ai lisati cellulari e alle lipoproteine a bassa densità.
Pertanto, il test TBARS è utilizzato al meglio per la valutazione generale intra-laboratorio dello stress ossidativo nei campioni biologici, in cui i livelli relativi di TBARS vengono confrontati direttamente tra campioni che sono stati conservati ed elaborati insieme. Questi test hanno un costo estremamente basso di circa 3 per testare 96 campioni rispetto ai kit disponibili in commercio, che costano circa 400, e consentono di analizzare un solo lotto di campioni. Il metodo qui descritto può essere ulteriormente adattato per applicazioni specifiche, tra cui campioni biologici, studi di stabilità e quelle per le quali l'aggiunta di antiossidanti o altri tipi di conservanti per campioni prima dell'analisi è appropriata o obbligatoria.
Per evitare risultati molto variabili, preparare reagenti freschi, assicurandosi che il pH non sia superiore a quattro per i reagenti colorati e rimuovere eventuali bolle nella piastra di rigonfiamento nidese prima di misurare l'assorbanza. Iniziare preparando una soluzione acquosa allo 0,8% di acido tiobarbiturico. Preparare una soluzione di idrossido di sodio a cinque molari sciogliendo quattro grammi di perle di idrossido di sodio in 20 millilitri di acqua.
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