Name: Iniezione di scaffold di idrogel Biomateriale al cervello dopo lictus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Scopri l'iniezione di scaffold di idrogel nel modello fototrombotico di ictus nei roditori per studiare la rigenerazione tissutale e il recupero motorio. Questo metodo offre una piattaforma riproducibile per valutare terapie biomateriali.

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Ci piace riconoscere il National Institutes of Health e il National Institute of Neurological Disorders and Stroke per il finanziamento (R01NS079691).

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Gli autori dichiarano che TS è uno dei fondatori di Tempo Therapeutics, che cerca di commercializzare idrogel MAP.

Qui dimostriamo un modello di ictus permanente facilmente riproducibile, minimamente invasivo e descriviamo come iniettare un biomateriale nell'infarto cinque giorni dopo l'ictus. L'uso del colorante fototrombotico Rose Bengal e di un laser collimato a 520 nm collegato al dispositivo stereotassico ci dà la possibilità di posizionare il tratto sulla corteccia motoria del mouse con maggiore precisione. Cinque giorni dopo l'ictus, la posizione dell'infarto è visibile a occhio al centro dell'irradiazione, 2,0 mm medio-latera...

L'ictus è la principale causa di disabilità e la quinta causa di morte negli Stati Uniti1. Circa l'87% di tutti gli ictus sono ischemici, mentre la maggior parte del restante 13% sono emorragici2. Un ictus ischemico è definito come il blocco del flusso sanguigno in un'arteria al tessuto circostante. Questa occlusione si traduce in privazione di ossigeno e successiva necrosi che spesso porta a disabilità permanente nei pazienti sopravvissuti. Mentre c'è stata una diminuzione del tasso di mortalitàdell'ictus 3, la sua prevalenza dovrebbe aumentare a 3,4 milioni di persone entro il 20304. Questo aumento dei sopravvissuti disabili e il conseguente onere economico ha portato a una spinta per la ricerca sull'ictus che si concentra sui meccanismi di riparazione neurale. Dopo l'ictus c'è un periodo infiammatorio che porta alla formazione di una cicatrice che impedisce alla regione necrotica di espandersi. La regione che circonda il nucleo necrotico è definita "peri-infarto" e vi è una forte evidenza che la plasticità in questa regione, che include l'aumento dell'angiogenesi, della neurogenesi e della germinazione assonale, è direttamente collegata al recupero osservato nei modelli animali e umani5. Poiché non esistono modelli in vitro in grado di replicare correttamente le complesse interazioni successive all'ictus, i modelli animali sono essenziali per la ricerca sull'ictus.
Esistono diversi modelli in vivo che possono essere utilizzati per produrre ictus ischemico. Uno dei modelli più comuni utilizzati nei topi è l'occlusione dell'arteria cerebrale media, o MCAo, attraverso l'occlusione distale o prossimale (tramite filamento intra-arterioso). Il modello prossimale, noto anche come filamento MCAo (fMCAo), in genere si traduce in grandi ictus ischemici che comprendono ovunque dal 5% al 50% dell'emisfero cerebrale, a seconda del numero di fattori6. In questi modelli, una sutura o un filamento viene avanzato dall'arteria carotide interna alla base dell'arteria cerebrale media (MCA) e mantenuto in posizione per un determinato periodo di tempo. Questo metodo per l'occlusione, che può essere reso temporaneo o permanente, produce un infarto centrato nello striato e può o meno coinvolgere la corteccia sovrastante6. La dimensione del tratto risultante è altamente variabile e sono necessarie tecniche di imaging, come il doppler laser, per confermare l'efficacia della procedura in ciascun topo. L'occlusione del filamento intra-arterioso o intra-luminale che dura più di 30 minuti produce ictus all'estremità più ampia dell'intervallo di dimensioni. Alcuni ricercatori si sono concentrati su tempi di occlusione del filamento più brevi, che richiedono una sostanziale attenzione sperimentale e la convalida del laboratorio7. I modelli di filamento MCAo nei topi seguono fasi simili di morte cellulare, progressione ischemica e formazione di una regione peri-infartuale come osservato nei casi di ictus umano; tuttavia, gli ictus più grandi assomigliano più da vicino allo stato di malattia degli infarti cerebrali maligni, che sono meno comuni, meno curabili ictus umani6. Nel frattempo, l'occlusione MCA distale richiede un intervento chirurgico e una craniectomia più coinvolti. In questo modello, la parte distale dell'MCA che corre lungo la superficie del cervello è direttamente occlusa con una cravatta di sutura o cauterizzazione. In alcune varianti della tecnica, le arterie carotidi sono unilateralmente occluse unilateralmente o transitoriamente-bilateralmente. Un vantaggio dell'MCAo distale è che produce una corsa a base corticale di dimensioni inferiori rispetto al modello di filamento. Tuttavia, il modello distale produce un output comportamentale più povero a causa della traselezione dell'arteria carotide esterna (ECA), che è anche una preoccupazione con fMCAo6.
Un modello di corsa alternativo che è noto per essere meno invasivo è il modello fototrombotico (PT). Il modello PT si traduce in una posizione ben definita di ischemia ed è associato ad un alto tasso di sopravvivenza8. La tecnica si basa su un colorante fotosensibile iniettato per via intraperitoneale che consente la foto-ossidazione intravascolare semplicemente irradiando il tessuto desiderato con una luce o un laser9. Dopo l'eccitazione, si formano radicali di ossigeno che causano danni endoteliali, che attivano l'aggregazione piastrinica e la formazione di coaguli nell'area irradiata8,9. Lo stretto controllo sulla dimensione e la posizione della corsa, nonché l'elevata riproducibilità del modello PT, lo rendono ideale per lo studio dei biomateriali. Mentre la precisione è resa possibile utilizzando un laser e coordinate stereotassiche, ci sono alcuni svantaggi che possono rendere questo modello meno ideale per pochi studi. A differenza del modello fMCAo, il modello di corsa PT non può essere riperfuso. Pertanto, i materiali per studiare gli agenti neuroprotettivi specifici per i danni a seguito di riperfusione o i meccanismi successivi alla riperfusione non sarebbero utili qui8. Inoltre, a causa dell'insulto microvascolare del modello PT, si vede una penombra ischemica relativamente piccola. Invece, si verifica edema vasogenico locale, che è insolito per l'ictus umano, rendendo questo modello indesiderabile per gli studi farmacologici preclinici focalizzati sull'area peri-infartuale6,8.
L'obiettivo generale delle strategie dei biomateriali nell'ictus è quello di fornire agenti bioattivi o di agire come una matrice extracellulare surrogata per la crescita del tessuto cerebrale. Una strategia che esploreremo utilizzando i nostri metodi è quella di fornire idrogel direttamente nel nucleo dell'ictus, al contrario del tessuto peri-infartuale in cui vengono somministrate molte terapie cellulari attuali10. Il razionale di questo approccio è che la consegna nel tessuto necrotico trovato nel nucleo eviterà di interrompere il tessuto sano circostante o di recuperare. Supponiamo che la diffusione di qualsiasi agente attivo incluso nel biomateriale sarà in grado di raggiungere il peri-infarto dal nucleo, soprattutto perché troviamo che la consegna di biomateriali idrogel riduce lo spessore della cicatrice gliale11. Questo è importante poiché la regione del peri-infarto ha dimostrato di mostrare neuroplasticità dopo l'ictus, rendendola un bersaglio attraente. Inoltre, la consegna di una matrice surrogata al nucleo dell'ictus può essere caricata con12 angiogenici o13 fattori neurogeni per guidare la formazione di nuovo tessuto, così come le cellule per la consegna14. La consegna cellulare è notevolmente migliorata utilizzando una matrice perché protegge le cellule dalle dure forze di iniezione e dall'ambiente locale presente durante il parto, oltre a incoraggiare la differenziazione e l'attecchimento15.
Questi biomateriali terapeutici iniettabili hanno rilevanza clinica nelle applicazioni dell'ictus, in quanto attualmente non esistono terapie mediche che stimolino il recupero neuronale dopo l'ictus. I circuiti neurali sottostanti coinvolti nel recupero si trovano nel tessuto cerebrale adiacente al nucleodell'ictus 16, mentre il nucleo dell'ictus stesso è privo di tessuto neurale vitale. Prevediamo che la consegna di un biomateriale nel nucleo dell'ictus necrotico ha il potenziale per stimolare il tessuto adiacente verso processi rigenerativi attraverso una serie di meccanismi precedentemente menzionati, tra cui il rilascio di depositi di fattori dicrescita 13,la stimolazione della crescita del tessuto e la promozione del recuperodellosviluppo del tessuto cerebrale11, 12,l'alterazione delle risposte immunitarie17e la consegna di terapie derivate da cellule staminali14, 18. Tuttavia, per studiare efficacemente la possibilità di queste applicazioni, è necessario un metodo coerente e riproducibile per indurre l'ictus e iniettare biomateriali. Il modello di corsa PT utilizza tecniche che offrono un controllo preciso sull'orientamento e sulla posizione del tratto. Un laser collegato al dispositivo stereotassico guida gli orientamenti e le pompe collegate ai dispositivi stereotassica controllano la velocità di iniezione del materiale senza la necessità di ulteriori forme di imaging. Pertanto, abbiamo scelto di descrivere i metodi per eseguire un colpo PT nelle cortecce motorie dei topi e per iniettare biomateriali nel nucleo dell'ictus. Qui, utilizziamo idrogel di particelle ricotte microporose (MAP) come biomateriale per iniezione senza cellule aggiunte o fattori di crescita. Inoltre, spieghiamo come recuperare con successo il cervello con biomateriale intatto e discutiamo i saggi di immunochimica utilizzati per analizzare l'esito dell'ictus con e senza iniezione di biomateriali.

<table><tbody><tr><td>10% Siero di capra normale</td><td>VWR</td><td>100504-028</td><td>Per tampone bloccante</td></tr><tr><td>Pre pad alcolico a 2 strati, sterile, medio</td><td>Medline</td><td>MDS090735</td><td></td></tr><tr><td>25uL Hamilton Siringa 702RN, senza ago</td><td>Fishcer Scientific</td><td>14824663</td><td>Siringhe utilizzate per iniettare biomateriali</td></tr><tr><td>25uL Pipetta a spostamento positivo</td><td>Gilson</td><td>M-25</td><td></td></tr><tr><td>2x Beam Expander, 400-650nm</td><td>Thorlabs</td><td>GBE02-A</td><td>Espansore di raggio laser</td></tr><tr><td>Piattaforma di palco regolabile</td><td>Kopf Instruments</td><td>901</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Glucose Transporter GLUT1 anticorpo, coniglio</td><td>Abcam</td><td>ab113435</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo Anti-Iba1, capra</td><td>abcam</td><td>ab5076</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Safety-Lok Set di raccolta del sangue. 25G, 12"</td> <td>Medsupply</td><td>367294</td><td>per perfusioni</td></tr><tr><td>BKF12- Foglio di alluminio nero opaco</td><td>Thorlabs</td><td>BKF12</td><td>Per coprire tutto ciò che è riflettente quando si utilizza il laser.</td></tr><tr><td>Mini forbici per ossa Iris - Strumenti chirurgici Sklar da 3-1/2"</td><td></td> <td>64-2035</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 Topi</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>8-12 settimane di età</td></tr><tr><td>Assemblaggio della gabbia Rob</td><td>Thorlabs</td><td>ER3-P4</td><td>3" Lungo, diametro 6 mm, confezione da 4 - per il fissaggio del laser alle</td></tr><tr><td>frese in acciaio al carbonio sterotax -0,5 mm di diametro</td><td>Strumenti di scienza fine</td><td>19007-05</td><td>Per la creazione di fori per bave</td></tr><tr><td>Cromo (III) solfato di potassio dodecaidrato</td><td>VWR</td><td>EM1.01036.0250</td><td></td></tr><tr><td>Controller compatto per laser a coda di maiale</td><td>Thorlabs</td><td>CLD1010LP</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Swabs</td><td>VWR</td><td>89031-288</td><td></td></tr><tr><td>CP 25 puntali per pipette</td><td>Gilson</td><td>F148012</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG H& L (488)</td><td>abcam</td><td>ab150129</td><td></td></tr><tr><td>Asino Anti-coniglio IgG H& L (647)</td><td>abcam</td><td>ab150075</td><td></td></tr><tr><td>Asino Anti-ratto IgG H& L (555)</td><td>abcam</td><td>ab150154</td><td></td></tr><tr><td>EMS DPX Mountant</td><td>Elecron Microscopy Sciences</td><td>13512</td><td>Soluzione di montaggio per vetrini</td></tr><tr><td>EMS Gelatina in polvere Tipo A 300 Bloom</td><td>Scienze di microscopia elettronica</td><td>16564</td><td>Per vetrini di rivestimento in gelatina</td></tr><tr><td>EMS Paraformaldeide, granulare</td><td>VWR</td><td>100504-162</td><td>Per la realizzazione di 45 PFA</td></tr><tr><td>ESD Worstation kit</td><td>Elmstat</td><td>WSKK5324SB</td><td>Necessità per l'installazione del laser Piastra da</td></tr><tr><td>parete per banco in fibra, non filettata</td><td>Thorlabs</td><td>HCA3</td><td>Necessità di collegare il laser all'albero Kopf</td></tr><tr><td>FiberPort</td><td>Thorlabs</td><td>PAF-X-5-A</td><td>FC/APC& APC, f = 4,6 mm, 350-700 nm, diametro 0,75 mm</td></tr><tr><td>Forbici fini - dritte / affilate-smussate / 10 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo GFAP, ratto</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>Kopf Instruments</td><td>HP-4M</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge Penna barriera idrofobica</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td>Per colorare i</td></tr> <tr><td>vetriniCentro di anestesia multipaziente integrato IMPAC 6</td><td>VetEquip</td><td>901808</td><td></td></tr><tr><td>Iodio, Pad per la preparazione dello iodio</td>, <td>Medx Supple</td>, <td>MED MDS093917H</td><td></td></tr><tr><td>Jewlers Pincipe #5</td><td>GFS, prodotti chimici GFS</td><td>46085</td><td></td></tr>, <tr><td>Occhiali di sicurezza laser</td>, lenti ambrate <td>Thorlabs</td><td>LG10B</td><td>, 35% di luce visibile (disponibili anche le versioni di google)</td></tr> <tr><td>M27-1084 Potente LED a doppio collo d'oca</td><td>United Scope</td><td>LED-11C</td><td></td></tr><tr><td>Medical USP Grade Oxygen Airgas</td><td></td><td>OX USP250</td><td></td></tr><tr><td>Miltex Adson Dressing Pinze,</td><td>Intefra Miltex</td><td>V96-118</td><td></td></tr><tr><td>Mini Cord / Cordless Small Animal Trimmer</td><td>Harvard aparatus</td><td>72-6110</td><td></td></tr><tr><td>Mini-pompa a flusso variabile</td><td>Thomas Scientific</td><td>70730-064</td><td>Pompa per perfusioni</td></tr><tr><td>Mouse Brain Matrici, fette coronali, 1mm</td><td>Kent Scientific</td><td>RBMA-200c</td><td>Per fette TTC</td></tr><tr><td>Mouse Gas Anethesia Head Holder</td><td>Kopf Instruments</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Nanojet Control Box</td><td>Chemyx</td><td>10050</td><td></td></tr><tr><td>Nanojet pump header</td><td>Chemxy</td><td>10051</td><td>Collegare al dispositivo stereotassico per l'iniezione di biomateriale</td></tr><tr><td>Ago RN 30G PT STY 3, 0,5 pollici</td><td>Fishcer Scientific</td><td></td><td></td>NC9459562</tr><tr><td>Auricolari antirottura 60&ordm;</td><td>Kopf Instruments</td><td>922</td><td></td></tr><tr><td>PBS tampone pH 7.4</td><td>VWR</td><td>97062 338</td><td></td></tr><tr><td>Laser a spirale 520 nm, 100mW, 5G Pin</td><td>Thorlabs</td><td>LP520-MF100</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini a carica positiva</td><td>Hareta</td><td>AHS90-WH</td><td></td></tr><tr><td>Misuratore di energia</td> elettrica <td>Thorlabs</td><td>PM100D</td><td>Utilizzato per misurare l'uscita laser in mW</td></tr><tr><td>Unguento veterinario Puralube</td><td>Dr. Foster Smith</td><td>9N-76855</td><td></td></tr><tr><td>Sonda rettale Mouse</td><td>kopf Instruments</td><td>Ret-3-ISO</td><td></td></tr><tr><td>Rose Bengal Dye 95%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330000-5G</td><td></td></tr><tr><td>Albero modificato 8-32 foro filettato 1/2" di profondità</td><td>Kopf Instruments</td><td>1770-02</td><td>Per il collegamento del laser al dispositivo sterotassico</td></tr><tr><td>Sensore di potenza a fotodiodo sottile</td><td>Thorlabs</td><td>S130VC</td><td>Utilizzato con energia elettrica metro</td></tr><tr><td>SM1-Threaed 30 mm Piastra a gabbia 0,35" di spessore 2 Ritenzione</td><td>Thorlabs</td><td>CP02</td><td>Per il collegamento dell'espansore laser</td></tr><tr><td>Sol-M U-100 Siringa per insulina con marcature da 1/2 unità 0,5 mL</td><td>VWR</td><td>10002-726</td><td>Per iniettare il rosa bengala</td></tr><tr><td>StainTray Sistema di colorazione per vetrini</td><td>Simport Scientific</td><td>M920-2</td><td>Per la colorazione di vetrini</td></tr><tr><td>Dispositivo sterotassico</td><td>Kopf Instruments</td><td>940</td><td>Strumento stereotassico</td></tr> per <tr><td>piccoli animali Studente Adson Pinze -1x2 denti</td><td>Strumenti per le scienze fini</td><td>91127-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per studenti - gambi dritti/larghi Strumenti per</td> le <td>scienze fini</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>Regolatore di temperatura</td><td>Kopf Instruments</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Composto OCT Tissue-Tek</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97063-864</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto staffa superiore</td><td>Kopf Instruments</td><td>1770-c</td><td>Per il collegamento del laser al dispositivo sterotassico</td></tr><tr><td>Vetbond Tissue Adhessive 3mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-361931</td><td></td></tr><tr><td>Vogue Professional My Manicure</td><td>Bargin Source</td><td>6400</td><td>Per sbavature</td></tr><tr><td>VWR Sterilizzatori di perline</td><td>VWR VWR</td><td>75999-328</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Tek OCT composto</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Per l'inclusione di tessuti</td></tr></tbody></table>

iniezione di scaffold di idrogel biomateriale al cervello dopo l'ictus

Injection of Hydrogel Biomaterial Scaffolds to The Brain After Stroke

L'ictus è la principale causa di disabilità e la quinta causa di morte negli Stati Uniti. Circa l'87% di tutti gli ictus sono ictus ischemici e sono definiti come il blocco improvviso di un vaso che fornisce sangue al cervello. Entro pochi minuti dal blocco, le cellule iniziano a morire e provocano danni irreparabili ai tessuti. Gli attuali trattamenti terapeutici si concentrano sulla rimozione del coagulo o sulla lisi per consentire la riperfusione e prevenire danni cerebrali più gravi. Sebbene la plasticità cerebrale transitoria possa salvare parte del tessuto danneggiato nel tempo, frazioni significative di pazienti rimangono con deficit neurologici che non si risolveranno mai. C'è una mancanza di opzioni terapeutiche per trattare i deficit neurologici causati dall'ictus, sottolineando la necessità di sviluppare nuove strategie per trattare questa crescente popolazione di pazienti. I biomateriali iniettabili sono attualmente in fase di progettazione per migliorare la plasticità cerebrale e migliorare la riparazione endogena attraverso la somministrazione di agenti attivi o cellule staminali. Un metodo per testare questi approcci è quello di utilizzare un modello di colpo di roditore, iniettare il biomateriale nel nucleo dell'ictus e valutare la riparazione. Conoscere la posizione precisa del nucleo dell'ictus è fondamentale per il trattamento accurato dopo l'ictus, pertanto, un modello di ictus che si traduce in una posizione di ictus prevedibile è preferibile per evitare la necessità di imaging prima dell'iniezione. Il seguente protocollo tratterà come indurre un ictus fototrombotico, come iniettare un idrogel in modo controllato e preciso e come estrarre e criosezionare il cervello mantenendo intatto il biomateriale. Inoltre, evidenzieremo come questi stessi materiali idrogel possono essere utilizzati per la co-consegna di cellule staminali. Questo protocollo può essere generalizzato all'uso di altri biomateriali iniettabili nel nucleo dell'ictus.

Lo scopo di questo metodo era dimostrare come iniettare biomateriali nel cervello dopo l'ictus. Un modello fototrombotico con rose bengal e un laser a 520 nm è stato utilizzato per l'orientamento controllato della lesione del tratto sia in termini di dimensioni che di posizione. Cinque giorni dopo l'ictus l'infarto poteva essere visualizzato durante l'intervento chirurgico (Figura 1B) e mediante TTC e imaging di vetrini macchiati IHC (Figura 2). Un aumento del d...

L'ictus è un problema globale con opzioni di trattamento minime e nessuna terapia clinica attuale per rigenerare il tessuto cerebrale perso. Qui descriviamo i metodi per creare un preciso colpo fototrombotico nella corteccia motoria dei roditori e la successiva iniezione di biomateriali idrogel per studiare i loro effetti sulla rigenerazione dei tessuti dopo l'ictus.

Iniezione di scaffold di idrogel Biomateriale al cervello dopo l'ictus

Stroke is the leading cause of disability and the fifth-leading cause of death in the United States. Approximately 87% of all strokes are ischemic strokes ...

L'iniezione riproducibile di scaffold in idrogel in un modello di ictus ischemico di roditori consente lo studio di come i materiali e altre terapie influenzino la riparazione cerebrale, la rigenerazione e il miglioramento comportamentale. I principali vantaggi dell'utilizzo del modello di ictus fototrombotico per studiare le interazioni tra i materiali cerebrali sono la posizione e le dimensioni riproducibili. Che consentono l'iniezione di materiali nel nucleo della corsa senza imaging.Il modello di ictus fototrombotico è progettato per essere un modello rilevante per l'ictus ischemico, in una regione del cervello, la corteccia motoria, che è comunemente colpita dall'ictus nell'uomo. E per fornire una lettura comportamentale pertinente per l'ictus, che è il controllo motorio dell'arto. In modo da valutare un candidato terapeutico, come un idrogel biopolimerico.Confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi in un topo anestetizzato. Quindi pesare il mouse per determinare la quantità di colorante Rose Bengal da iniettare e fissarlo a un dispositivo stereotassico dotato di laser. Dopo la rasatura e la disinfezione dell'area chirurgica, utilizzare una pinza pe

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Fonte: Wilson, K.L., et al. Iniezione di scaffold di biomateriali in idrogel al cervello dopo l'ictus.  J. Vis. Exp. (2020)Questo video mostra l'iniezione stereotassica di un idrogel nel nucleo dell'ictus di un topo post-ictus, evidenziando il suo ruolo nella formazione di scaffold che imita la matrice extracellulare, promuove l'infiltrazione cellulare e supporta l'angiogenesi, sottolineando il suo potenziale neuroterapico nel recupero dall'ictus.

Iniezione stereotassica di idrogel in un modello murino post-ictus

Matrici di fibrina che contengono fattori di crescita sono stati usati per mantenere le cellule staminali neurali innestate nei siti di completo recisione del midollo spinale. Cellule trapiantate completamente riempite la cavità della lesione e differenziate in diversi tipi di cellule neurali, tra cui i neuroni che si estendevano assoni nel midollo spinale ospite su lunghe distanze.

Promozione della sopravvivenza e la differenziazione delle cellule staminali neurali con fibrina e fattore di crescita Cocktails dopo gravi lesioni del midollo spinale

Questo protocollo mira ad alleviare la limitazione dello scarso attecchimento cellulare per il trattamento con cellule staminali degli infarti del miocardio attraverso l'uso di un sistema di idrogel e di una colla a base di fibrina. Con questo approccio, il contatto cellula-tessuto dopo l'infarto può essere mantenuto, aumentando il potenziale terapeutico degli agenti benefici nel sito della lesione.

Un idrogel Costruire e fibrina-based Glue approccio per fornire Therapeutics in una murino Myocardial Infarction Model.

Per studiare la riorganizzazione cerebrale in condizioni patologiche, abbiamo utilizzato pompe miniosmotiche per la consegna diretta di proteine nel cervello, aggirando la barriera ematoencefalica. I traccianti del tratto vengono quindi iniettati per studiare le alterazioni della connettività cerebrale sotto l'influenza della proteina.

L&#39;impianto di Miniosmotic Pompe e consegna di traccianti Tract allo Studio Riorganizzazione Cervello in condizioni fisiopatologiche

Presenteremo lo sviluppo di auto-assemblati, tridimensionale fasci di somata astrocytic allineati longitudinalmente e processi all'interno di un encasement romanzo biomateriale. Questi ingegnerizzato "ponteggi vivente", che esibiscono micron-scala diametro ancora estendere centimetri di lunghezza, può servire come banchi di prova per lo studio dei meccanismi dello sviluppo neurologico o facilitare la neurorigenerazione di regia della migrazione neuronale e/o assonale path-finding.

Tessutale tridimensionale allineato Astrocyte reti per ricapitolare i meccanismi dello sviluppo e facilitare la rigenerazione del sistema nervoso

Qui, presentiamo un protocollo per la cultura 3D del ratto cellule di glia cervello-derivato, tra cui gli astrociti, microglia ed oligodendrociti. Dimostriamo che la cellula primaria cultura, sintesi di idrogel di acido ialuronico methacrylated (HAMA), incapsulamento delle cellule e HAMAphoto-polimerizzazione e campione di elaborazione per l'imaging al microscopio confocale e scansione elettrone.

Migliorata 3D idrogel culture di cellule gliali primari In Vitro modellazione del Neuroinflammation

Questo protocollo descrive la realizzazione di un sistema di coltura cellulare per consentire la semina delle cellule staminali su un'impalcatura polimero conduttivo per elettrostimolazione in vitro e successive in vivo l'impianto della cellula formativa-seminato impalcatura utilizzando un tecnica mininvasiva.

Elettricamente conduttivo impalcatura di modulare e fornire cellule staminali

La terapia a base di cellule staminali è emersa come una strategia efficiente per riparare i tessuti cardiaci feriti dopo l'infarto del miocardio. Forniamo un'applicazione in vivo ottimale per il trapianto di cellule staminali utilizzando idrogel di gelatina che possono essere enzimaticamente incrociati.

Trapianto intramiocardico di idrogel iniettabili a carico MSC dopo infarto del miocardio in un modello murino

In questo manoscritto, dimostriamo la preparazione di un bioink idrogel bioibrido contenente grafene per l'uso nell'ingegneria dei tessuti periferici. Utilizzando questo materiale bioibrido 3D, viene eseguito il protocollo di differenziazione neurale delle cellule staminali. Questo può essere un passo importante per portare biomateriali simili alla clinica.

Preparazione e caratterizzazione di bioink idrogel bioibrido 3D a base di grafene per la neuroingegneria periferica

Il presente protocollo stabilisce un modello post-resezione di recidiva del glioblastoma (GBM) utilizzando la microscopia per studiare l'effetto terapeutico di un idrogel iniettabile bioresponsivo in vivo.

Modello post-resezione recidiva di glioblastoma per indagini terapeutiche sull'idrogel

In questo studio, sono stati sviluppati e caratterizzati idrogel compositi nervo-mimetici che possono essere utilizzati per studiare e capitalizzare il comportamento pro-rigenerativo delle cellule staminali di derivazione adiposa per la riparazione delle lesioni del midollo spinale.

Sviluppo di terapie combinatorie per le lesioni del midollo spinale utilizzando la somministrazione di cellule staminali

Scopri l'iniezione di scaffold di idrogel nel modello fototrombotico di ictus nei roditori per studiare la rigenerazione tissutale e il recupero motorio. Questo metodo offre una piattaforma riproducibile per valutare terapie biomateriali.

Iniezione di scaffold di idrogel Biomateriale al cervello dopo l'ictus

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