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Optimierter Einbau von Alkynyl-Fettsäure-Analoga zum Nachweis von fettacylierten Proteinen mittels Klickchemie
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Optimized Incorporation of Alkynyl Fatty Acid Analogs for the Detection of Fatty Acylated Proteins using Click Chemistry
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Optimierter Einbau von Alkynyl-Fettsäure-Analoga zum Nachweis von fettacylierten Proteinen mittels Klickchemie

DOI:
10.3791/62107-v

•

07:27 min

•

April 09, 2021

•

, ,
1Department of Biology,University of Waterloo

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 00:44Cell Culture
  • 01:25Preparation and Saponification of Fatty Acid Analogs
  • 03:35Click Reaction on Cell Lysates
  • 04:12Click Reaction on Immunoprecipitated Proteins
  • 05:13Results: Detection of Fatty Acylated Proteins Using Click Chemistry
  • 06:57Conclusion

Summary

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Die Untersuchung der Fettacylierung hat wichtige Auswirkungen auf zelluläre Proteininteraktionen und -krankheiten. Hier wird ein modifiziertes Protokoll zur Verbesserung der Klickchemie von fettacylierten Proteinen vorgestellt, das in verschiedenen Zelltypen angewendet und mit anderen Assays, einschließlich Pulse-Chase und Massenspektrometrie, kombiniert werden kann.

Tags

Alkynyl Fatty Acid AnalogsClick ChemistryFatty Acylated ProteinsFatty Acid LabelingMetabolic LabelingHEK-293 T-cellsBSA-bound Fatty AcidsSaponificationPotassium HydroxideFatty Acid-free BSA

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