Name: Isolamento di cellule valvolari primarie umane per la modellazione di malattie in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Scopri l'isolamento di cellule valvolari primarie umane per modellare la calcificazione aortica in vitro. Questo protocollo garantisce alta vitalità cellulare e specificità fenotipica per studi cardiovascolari avanzati.

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Vorremmo ringraziare Jason Dobbins per la discussione perspicace e la lettura critica di questo manoscritto. Vorremmo ringraziare il Center for Organ Recovery and Education per il loro aiuto e supporto e ringraziare i donatori di tessuti e le loro famiglie per aver reso possibile questo studio. Tutti i campioni di pazienti sono raccolti da individui iscritti a studi approvati dal comitato di revisione istituzionale dell'Università di Pittsburgh in conformità con la Dichiarazione di Helsinki. I tessuti cadaverici ottenuti tramite il Center for Organ Recovery and Education (CORE) sono stati approvati dal Comitato per la supervisione della ricerca e della formazione clinica che coinvolge i decedenti (CORID).
Alcune figure create con Biorender.com.
CSH è supportato dal National Heart, Lung, and Blood Institute K22 HL117917 e R01 HL142932, dall'American Heart Association 20IPA35260111.

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IS riceve supporto di ricerca istituzionale da Atricure e Medtronic e funge da consulente per Medtronic Vascular. Nessuno di questi conflitti è legato a questo lavoro. Tutti gli altri Autori non hanno nulla da rivelare.

Ottenere il controllo e i tessuti della malattia dall'uomo è fondamentale per la modellizzazione della malattia in vitro ed ex vivo; Tuttavia, mentre si parla spesso delle sfide di colmare il divario tra banco e capezzale, l'ordine inverso - passando dalla suite chirurgica al banco - è spesso un divario altrettanto scoraggiante. Essenziale per uno scienziato di base per ottenere campioni di tessuto umano primario è una collaborazione con uno scienziato chirurgo investito che ha un team di infermieri, tecnici chirurgici, ...

La malattia della valvola aortica calcifica (CAVD) è una patologia cronica caratterizzata da infiammazione, fibrosi e macrocalcificazione dei lembi della valvola aortica. Il rimodellamento progressivo e la calcificazione dei foglietti (definita sclerosi aortica) possono portare all'ostruzione del flusso sanguigno (stenosi aortica) che contribuisce all'ictus e porta all'insufficienza cardiaca. Attualmente l'unico trattamento per CAVD è la sostituzione chirurgica o transcatetere della valvola aortica (SAVR e TAVR, rispettivamente). Non esiste un'opzione non chirurgica per arrestare o invertire la progressione della CAVD e, senza sostituzione valvolare, i tassi di mortalità si avvicinano al 50% entro 2-3 anni 1,2,3. La definizione dei meccanismi alla base di questa patologia identificherà potenziali nuovi approcci terapeutici.
In un adulto sano, i lembi della valvola aortica hanno uno spessore di circa un millimetro e la loro funzione principale è quella di mantenere il flusso unidirezionale di sangue dal ventricolo sinistro4. Ciascuno dei tre lembi è composto da uno strato di cellule endoteliali valvolari (VEC) che riveste la superficie esterna del foglietto e funziona come una barriera. I VEC mantengono l'omeostasi valvolare regolando la permeabilità, l'adesione delle cellule infiammatorie e la segnalazione paracrina 5,6,7. Le cellule interstiziali valvolari (VIC) comprendono la maggior parte delle cellule all'interno del foglietto valvolare8. I VIC sono disposti in tre strati distinti nel volantino. Questi strati sono noti come ventricolari, spongiosa e fibrosa9. Il ventricolo è rivolto verso il ventricolo sinistro e contiene fibre di collagene ed elastina. Lo strato intermedio, la spongiosa, contiene un alto contenuto di proteoglicano che fornisce flessibilità di taglio durante il ciclo cardiaco. Lo strato esterno di fibrosa si trova vicino alla superficie di deflusso sul lato aortico ed è ricco di collagene fibrillare di tipo I e di tipo III che fornisce forza per mantenere la coaptazione durante la diastole10,11,12. I VIC risiedono in uno stato quiescente, tuttavia, fattori come l'infiammazione, il rimodellamento della matrice extracellulare (ECM) e lo stress meccanico possono interrompere l'omeostasi VIC 8,9,13,14,15,16. Con la perdita dell'omeostasi, le VIC attivano e acquisiscono un fenotipo simile ai miofibroblasti in grado di proliferare, contrazione e secrezione di proteine che rimodellano il millieu17 extracellulare. I VIC attivati possono trasformarsi in cellule calcificanti che ricordano la differenziazione di una cellula staminale mesenchimale (MSC) in un osteoblasto 15,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
La calcificazione sembra iniziare nello strato di fibrosa ricco di collagene dai contributi di entrambi i VEC e VIC, ma si espande e invade gli altri strati del foglietto8. Pertanto, è chiaro che sia i VEC che i VIC rispondono agli stimoli per sovraregolare l'espressione dei geni osteogenici, tuttavia, gli eventi precisi che guidano l'attivazione dei geni osteogenici, così come la complessa interazione tra le cellule e la matrice extracellulare del foglietto, rimangono mal definiti. I modelli murini non sono una fonte ideale per studiare i driver non genetici della patogenesi della CAVD, poiché i topi non sviluppano CAVD de novo26,27, quindi è necessario l'uso di tessuti umani primari e delle linee cellulari primarie isolate da questi tessuti. In particolare, ottenere queste cellule in numero elevato e di buona qualità è imperativo, poiché il campo delle colture cellulari 3D e della modellazione organoide si sta espandendo ed è probabile che diventi un'alternativa ex vivo basata sull'uomo ai modelli murini.
Lo scopo del presente metodo è quello di condividere un flusso di lavoro che ha stabilito le condizioni per isolare e far crescere in modo efficiente VEC e VIC ottenuti da valvole rimosse chirurgicamente da donatori umani. Studi precedenti hanno dimostrato il successo dell'isolamento di VEC e VIC da valvole suine28 e murine29, a nostra conoscenza questo è il primo a descrivere l'isolamento di queste cellule nei tessuti umani. Il protocollo qui descritto è applicabile alle valvole asportate umane e aggira e migliora notevolmente il danno causato dal tempo di approvvigionamento spesso lungo tra l'escissione dei tessuti e la lavorazione di laboratorio introducendo l'utilizzo di una soluzione di conservazione a freddo, una soluzione tamponata clinicamente utilizzata nei trapianti di organi che stabilizza notevolmente le cellule del tessuto asportato. Il protocollo qui descritto mostra anche come determinare il fenotipo cellulare e garantire un'elevata efficienza della sopravvivenza cellulare con una minima contaminazione crociata cellulare.

<table><tbody><tr><td>0,45 &mu; m filter</td><td>Thermo Scientific</td><td>7211345</td><td>Piastra di preparazione con rivestimento in collagene</td></tr><tr><td>Piastra per colture cellulari da 10 cm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>Coltura cellulare/espansione della linea cellulare</td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 10 mL</td><td></td><td>Fisher 14955234</td><td>Isolamento VEC/VIC, coltura cellulare, espansione della linea cellulare</td></tr><tr><td>1000 &; Puntali filtranti L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td> Puntali filtranti per <td>colture cellulari/espansione linea cellulare</td></tr><tr><td>10XL</td><td>VWR</td><td>76322-132</td><td>Espansione per colture cellulari/linee cellulari</td></tr><tr><td>Provette coniche da 15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339650</td><td>Conservazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Soluzione acquosa di paraformaldeide al 16%</td><td>Scienze di microscopia elettronica</td><td>15710S</td><td>Fissativo tissutale e cellulare</td></tr><tr><td>190 proof etanolo</td><td>Decon</td><td>2801</td><td>Disinfezione</td></tr><tr><td>1x DPBS: senza calcio, senza magnesio</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td>soluzione salina. Isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Fisher</td><td>BP2944100</td><td>soluzione salina. Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>20 &mu; Puntali filtranti L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td>Coltura cellulare/espansione della linea cellulare</td></tr><tr><td>200 proof Etanolo</td><td>Decon</td><td>2701</td><td>Deparaffinizzazione di campioni di tessuto</td></tr><tr><td>2-propanolo</td><td>Fisher</td><td>A416P 4</td><td>Produzione di piastre rivestite di collagene</td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 5 mL</td><td></td><td>Fisher 14955233</td><td>Isolamento VEC/VIC, coltura cellulare, espansione della linea cellulare</td></tr><tr><td>Provette coniche da 50 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339652</td><td>Conservazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC piastra</td></tr> da <tr><td>60 mm</td><td>GenClone</td><td>25-260</td><td>Isolamento VEC Piastra</td></tr> per <tr><td>coltura cellulare a 6 pozzetti</td><td>Corning</td><td>3516</td><td>Coltura cellulare/espansione della linea cellulare</td></tr><tr><td>Acido acetico, glaciale</td><td>Fisher</td><td>BP2401 500</td><td>Produzione di piastre rivestite di collagene</td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 falloidina</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Fluorescente controcolorante di f-actina</td></tr><tr><td>Belzer UW Soluzione per trapianti per celle frigorifere</td><td>Bridge to Life</td><td>BUW0011L</td><td>Soluzione per la conservazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina, frazione V - Senza acidi grassi 25g</td><td>Bioworld</td><td>220700233</td><td>Conferma VEC con anticorpo CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>Calponin 1</td><td>Abcam</td><td>ab46794</td><td>Anticorpo primario (colorazione VIC positiva)</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1) (89C2)</td><td>Anticorpo primario Cell Signaling</td><td>3528</td><td>(colorazione VEC positiva)</td></tr><tr><td>CD31+ Dynabeads</td><td>Invitrogen</td><td>11155D</td><td>Conferma VEC con CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>CDH5</td><td>Cell Signaling</td><td>2500</td><td>Anticorpo primario (colorazione positiva VED)</td></tr><tr><td>Filtro cellulare con 0,70 &mu; m pori</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>Isolamento VIC</td></tr><tr><td>Collagene 1, proteina della coda di ratto</td><td>Gibco</td><td>A1048301</td><td>Produzione di piastre rivestite di collagene</td></tr><tr><td>Collagenasi II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004176</td><td>Digestione dei tessuti. Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Conflikt Spray disinfettante pronto all'uso</td><td>Decon</td><td>4101</td><td>Disinfezione</td></tr><tr><td>Countess II Contatore di celle automatizzato</td><td>Invitrogen</td><td>A27977</td><td>Contatore di cellule automatizzato</td></tr><tr><td>Vetrini coprivetrini riutilizzabili Countess II</td><td>Invitrogen</td><td>2026h</td><td>Contatore di celle automatizzato Copertura dei vetrini richiesta</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti</td><td>Fisher</td><td>125485E</td><td>Montaggio di campioni di valvole</td></tr><tr><td>Fiale criogeniche</td><td>Olympus Plastics</td><td>24-202</td><td>Congelamento di cellule/campioni di tessuto</td></tr><tr><td>Candeggina disinfettante con CLOROMAX - Formula concentrata&nbsp;</td><td>Clorox</td><td>N/A</td><td>Disinfezione</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>10569044</td><td>Terreni di crescita. EBM di espansione VIC</td></tr><tr><td>- Terreno cellulare endoteliale, terreno basale, privo di rosso fenolo 500</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC3129</td><td>Terreno di crescita. Espansione VEC</td></tr><tr><td>EGM-2 Endothelial Cell Medium-2 - 1 kit Kit SingleQuot Lonza</td><td>Walkersville</td><td>CC4176</td><td>Integratore per terreni di crescita. Espansione VEC</td></tr><tr><td>Microscopio EVOS FL Life</td><td>Technologies</td><td>Numero di modello: AME3300</td><td>Imaging fluorescente</td></tr><tr><td>EVOS XL Microscope</td><td>Life Technologies</td><td>AMEX1000</td><td>Visualizzazione delle cellule durante l'espansione della linea cellulare</td></tr> Siero fetale bovino - Premium Select R&<tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> D Systems</td><td>S11550</td><td>Espansione VIC</td></tr><tr><td>Forbici fini</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>14088-10</td><td>Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Fisherbrand Raschietti cellulari</td><td>Fisher</td><td>08-100-241</td><td>Espansione VIC</td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>Antimicotico: Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>Antibiotico: Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC Vetrini</td></tr><tr><td>Globe</td><td>Scientific Inc</td><td>1358L</td><td>Campioni di valvola di montaggio</td></tr><tr><td>Capra anti-Topo 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>Anticorpo secondario fluorescente</td></tr><tr><td>Capra anti-Topo 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td><td>Anticorpo secondario fluorescente</td></tr><tr><td>Capra anti-Coniglio 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Fluorescente secondario Anticorpo</td></tr><tr><td>capra anti-coniglio 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td>Anticorpo secondario fluorescente</td></tr><tr><td>Invitrogen Countess II FL Vetrino riutilizzabile</td><td>Invitrogen</td><td>A25750</td><td>Contatore automatico di cellule richiesto vetrino</td></tr><tr><td>Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>R37606</td><td>Controcolorante fluorescente</td></tr><tr><td>del nucleo LM-HyCryo-STEM - 2X Terreni di crioconservazione per cellule staminali</td><td>HyClone Laboratories, Inc.</td><td>SR30002</td><td>Conservazione delle cellule congelate</td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio</td><td>Fisher Chemical Permount</td><td>SP15-100</td><td>Montaggio di campioni con valvola</td></tr><tr><td>Mr. Frosty Contenitore di congelamento</td><td>Nalgene</td><td>51000001</td><td>Contenitore per il congelamento controllato dei campioni</td></tr><tr><td>Mycoplasma-ExS Spray</td><td>PromoCell</td><td>PK-CC91-5051</td><td>Disinfezione</td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>Antibiotico. Espansione VIC</td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>Invivogen</td><td>ANTMPT</td><td>Anti-micoplasma. Isolamento ed espansione VIC/VEC</td></tr><tr><td>Anticorpo SM22a</td><td>Abcam</td><td>ab14106</td><td>Anticorpo primario (colorazione VIC positiva)</td></tr><tr><td>Forbici modello Sstandard</td><td>Strumenti di scienza</td><td>14001-14</td><td>Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Batuffolo di cotone sterile</td><td>Puritan</td><td>25806 Isolamento VEC 10WC</td><td></td></tr><tr><td>Cassetta per tessuti umani Swingsette</td><td>Simport Scientific</td><td>M515-2</td><td>Contenitore per inclusione tissutale</td></tr><tr><td>Pinza Taylor (17 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11016-17</td><td>Preparazione dei tessuti, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Soluzione di tripano blu, soluzione</td> per <td>conteggio cellulare</td> <td>Gibco</td><td>15250061</td> 0,4%</tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td>Splitting VIC/VECs</td></tr><tr><td>Kit di Von Kossa</td><td>Polysciences</td><td>246331</td><td>Colorazione di sezioni di paraffina dei tessuti per calcificazione</td></tr><tr><td>anticorpo del fattore di von Willebrand</td><td>Abcam</td><td>ab68545</td><td>Anticorpo primario (colorazione positiva VOC)</td></tr><tr><td>xileni</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3S-4</td><td>Deparaffinizzazione di campioni di tessuto</td></tr><tr><td>&alfa;Anticorpo SMA</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td>Anticorpo primario (colorazione VIC positiva)</td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule valvolari primarie umane per la modellazione di malattie in vitro

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

La malattia della valvola aortica calcifica (CAVD) è presente in quasi un terzo della popolazione anziana. L'ispessimento, l'irrigidimento e la calcificazione della valvola aortica provocano stenosi aortica e contribuiscono all'insufficienza cardiaca e all'ictus. La patogenesi della malattia è multifattoriale e stress come l'infiammazione, il rimodellamento della matrice extracellulare, il flusso turbolento e lo stress meccanico e la tensione contribuiscono alla differenziazione osteogenica delle cellule endoteliali e interstiziali valvolari. Tuttavia, i precisi fattori iniziali che guidano la transizione osteogenica di una cellula sana in una cellula calcificante non sono completamente definiti. Inoltre, l'unica terapia attuale per la stenosi aortica indotta da CAVD è la sostituzione della valvola aortica, in cui viene rimossa la valvola nativa (sostituzione chirurgica della valvola aortica, SAVR) o una valvola sostitutiva completamente pieghevole viene inserita tramite un catetere (sostituzione della valvola aortica transcatetere, TAVR). Queste procedure chirurgiche hanno un costo elevato e comportano gravi rischi; Pertanto, l'identificazione di nuovi bersagli terapeutici per la scoperta di farmaci è imperativa. A tal fine, il presente studio sviluppa un flusso di lavoro in cui i tessuti rimossi chirurgicamente dai pazienti e i tessuti dei cadaveri dei donatori vengono utilizzati per creare linee primarie specifiche del paziente di cellule valvolari per la modellazione della malattia in vitro. Questo protocollo introduce l'utilizzo di una soluzione di conservazione a freddo, comunemente utilizzata nel trapianto di organi, per ridurre i danni causati dal tempo di approvvigionamento spesso lungo tra l'escissione tissutale e la lavorazione di laboratorio con il vantaggio di stabilizzare notevolmente le cellule del tessuto asportato. I risultati del presente studio dimostrano che le cellule valvolari isolate mantengono la loro capacità proliferativa e i fenotipi endoteliali e interstiziali in coltura fino a diversi giorni dopo la rimozione della valvola dal donatore. L'utilizzo di questi materiali consente la raccolta di cellule di controllo e CAVD, da cui vengono stabilite sia le linee cellulari di controllo che quelle di malattia.

Il protocollo di cui sopra delinea i passaggi necessari per la manipolazione dei tessuti valvolari umani e l'isolamento e la creazione di linee cellulari vitali da questi tessuti. I foglietti della valvola aortica vengono elaborati per l'incorporazione di paraffina, congelati a scatto per la conservazione a lungo termine per analisi biochimiche o genetiche e digeriti per l'isolamento di VEC e VIC (Figura 1). Mentre i campioni chirurgici avranno probabilmente una diagnosi clinica di stenosi a...

Questo protocollo descrive la raccolta di valvole aortiche umane estratte durante le procedure chirurgiche di sostituzione della valvola aortica o dal tessuto cadaverico e il successivo isolamento, espansione e caratterizzazione delle cellule endoteliali e interstiziali della valvola primaria specifiche del paziente. Sono inclusi importanti dettagli riguardanti i processi necessari per garantire la vitalità cellulare e la specificità fenotipica.

Isolamento di cellule valvolari primarie umane per la modellazione di malattie in vitro

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...

L'isolamento della cellula endoteliale e interstiziale della valvola primaria umana è fondamentale per comprendere il meccanismo alla base della patogenesi della malattia della valvola aortica calcifica. Quando la valvola viene asportata dal tessuto nativo, la vitalità cellulare diminuisce. Quindi abbiamo identificato un metodo che prolunga la vitalità cellulare.Dopo aver ricevuto i campioni di tessuto valvolare estratti, estrarre la radice aortica e immergere il tessuto in un tubo conico da 50 millilitri contenente una soluzione di risciacquo sterile. Dopo un'incubazione di 10 minuti in un secchiello del ghiaccio su un bilanciere, spruzzare i tubi con etanolo al 70%. In una cappa di coltura di tessuto sterile, trasferire il tessuto in una capsula di Petri e asportare due lembi valvolari.Posizionare un foglietto illustrativo in una fiala criogenica e congelare il tessuto in azoto liquido per meno 80 gradi Celsius. Per fissare il tessuto per la colorazione del contenuto di calcio, tagliare il secondo foglietto a metà dal nodulo alla cerniera e posizionare entrambi i pezzi di tessuto in una cassetta immersa nel 4% di paraformaldeide. Quindi posizionare l'intera configurazione sul bil

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Forniamo un metodo per isolare e popolazioni coltura pura di cellule endoteliali valvola cardiaca (VEC). VEC può essere isolato da entrambi i lati della cuspide o depliant e subito dopo, alla base di cellule interstiziali (VIC) isolamento è semplice.

Isolamento di cellule endoteliali valvolare

Questo articolo fornisce un metodo per isolare e quaglia coltura o pollo...

Isolamento e la coltura di cellule embrionali aviaria progenitrici valvolare

In questo video, dimostriamo l'isolamento delle cellule interstiziali della valvola aortica dal cuore di un topo adulto utilizzando una procedura di collagenasi in due fasi e la loro successiva coltura in un basso volume di terreno di crescita.

Isolamento delle cellule interstiziali valvolari di topo: un metodo enzimatico per isolare e coltivare VIC dalla valvola aortica di topo

La capacità di isolare le cellule endoteliali delle valvole cardiache (VEC) è fondamentale per comprendere i meccanismi di sviluppo, mantenimento e malattia delle valvole.  Qui descriviamo l'isolamento di VEC da topi Tie2-GFP embrionali e adulti utilizzando FACS che consentiranno studi che determineranno il contributo dei VEC nei processi di sviluppo e malattia.

Isolamento di cellule murine endoteliali Valve

Qui, presentiamo un modello di flusso ex vivo in cui le valvole cardiache murine possono essere coltivate consentendo lo studio della biologia della valvola.

Coltura mouse cardiaca Valvole in miniatura Tissue Culture Sistema

Questo protocollo descrive l'isolamento, la cultura e la calcificazione delle cellule interstiziali di ratto-derivato valvola, un modello altamente fisiologico in vitro della malattia della valvola aortica calcificante (CAVD). Lo sfruttamento di questo modello di ratto facilita la ricerca di MCVA ad esplorare le cellule e i meccanismi molecolari che sono alla base di questo complesso processo patologico.

Valvola di isolamento e caratterizzazione del ratto primario cellule interstiziali: un nuovo modello per studiare la calcificazione della valvola aortica

In questo studio, descriviamo il processo di isolamento dei linfociti T da campioni freschi di valvole aortiche calcificate e le fasi analitiche della clonazione delle cellule T per la caratterizzazione dei sottoinsiemi di leucociti adattivi utilizzando l'analisi citometrica a flusso.

Studio della calcificazione della valvola aortica tramite isolamento e coltura di linfociti T utilizzando cellule feeder da Buffy Coat irradiato

Questo articolo descrive l'isolamento delle cellule della valvola aortica del topo con una procedura in due fase di collagenasi. Le cellule isolate della valvola del topo sono importanti per eseguire diversi saggi, come questo saggio di calcificazione in vitro, e per studiare le vie molecolari che portano alla mineralizzazione della valvola aortica.

Isolamento delle celle della valvola interstiziale del topo per studiare la calcificazione della valvola aortica in vitro

Questo documento descrive un metodo basato su colture di espianto per l'isolamento e la coltura di cellule muscolari lisce aortiche umane primarie e specifiche per il paziente e fibroblasti dermici. Inoltre, viene presentato un nuovo metodo per misurare la contrazione cellulare e la successiva analisi, che può essere utilizzato per studiare le differenze specifiche del paziente in queste cellule.

Isolamento delle cellule muscolari lisce aortiche primarie specifiche del paziente e misurazioni semiquantitative di contrazione in tempo reale in vitro

Epatociti primari costituirà un valido strumento per valutare le funzioni biochimiche, molecolari e metaboliche in un sistema fisiologicamente rilevante sperimentale. Noi descriviamo un protocollo affidabile per la perfusione di fegato di ratto in situ, che genera costantemente epatociti vitali fino to1.0 ×...

Isolamento e la coltura primaria di cellule epatiche di ratto

Scopri l'isolamento di cellule valvolari primarie umane per modellare la calcificazione aortica in vitro. Questo protocollo garantisce alta vitalità cellulare e specificità fenotipica per studi cardiovascolari avanzati.

Isolamento di cellule valvolari primarie umane per la modellazione di malattie in vitro

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