Name: Utilizzo di un modello murino di stress psicosociale in gravidanza come paradigma traslazionale rilevante per i disturbi psichiatrici nelle madri e nei neonati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Scopri un paradigma di stress psicosociale cronico in topi gravide per studiare i disturbi dell'umore perinatale. Questo metodo modella stressori imprevedibili e valuta gli esiti materni e neonatali.

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Gli autori desiderano riconoscere il sostegno del National Institute of General Medical Sciences T32 GM063483-14 grant e della Cincinnati Children's Research Foundation. Per i dati adattati da Zoubovsky et al., 2019, Creative Common License può essere trovato nella seguente posizione: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Tutti gli esperimenti sugli animali descritti sono stati approvati dall'Animal Care and Use Committee presso il Cincinnati Children's Medical Center ed erano in conformità con le linee guida del National Institutes of Health. L'accesso ad libitum al chow e all'acqua standard dei roditori è stato fornito in ogni momento ai topi, anche durante il paradigma CGS. I topi sono stati alloggiati su un ciclo luce-buio di 14 ore / 10 ore (luci su 06:00 h) se non diversamente specificato (cioè esposizione alle luci durante la notte).
1. Preparazione per gli accoppiamenti a tempo
<ol><li>Almeno 2 settimane prima di allestire gli accoppiamenti a tempo, ospitare i topi femmina adulti insieme in una gabbia per topi standard (18,4 cm x 29,2 cm x 12,7 cm), quattro topi per gabbia. Etichetta ogni mouse femminile con un numero ID specifico tramite un marchio auricolare. NOTA: per questo protocollo sono stati utilizzati topi femmina C57BL6 senza gravidanza precedente e tra i 3 ei 6 mesi di età.</li>
	<li>Almeno 1 settimana prima di impostare gli accoppiamenti a tempo, ospitare individualmente i topi maschi adulti da utilizzare per l'accoppiamento.</li>
</ol>2. Impostazione degli accoppiamenti a tempo
<ol><li>Imposta gli accoppiamenti a tempo alle 18:00 h. Prendi due topi femmina e mettili all'interno di una gabbia che contiene un topo maschio alloggiato individualmente. Separare gli accoppiamenti cronos temporizzando la mattina seguente entro le ore 08:00.</li>
</ol>3. Controllo della spina copulatoria, designata come giorno gestazionale 0,5 (G0,5)
<ol><li>Immediatamente dopo aver separato gli accoppiamenti a tempo, verificare la presenza di un tappo copulatorio nei topi femmina. La presenza di una spina copulatoria segnerà G0.5. Lasciare che il mouse tenga la griglia metallica all'interno della gabbia e sollevarla delicatamente per la coda per visualizzare l'apertura vaginale. NOTA: La presenza di un tappo copulatorio indica che si è verificata un'attività sessuale ma non garantisce una gravidanza. Quando si tenta di calcolare il numero di topi sperimentali necessari, aspettarsi che il 50% dei topi sia collegato da accoppiamenti a tempo e una gravidanza per tappare l'incidenza del 60% -70%.</li>
	<li>Utilizzare un semplice esame visivo per identificare la presenza di un tappo copulatorio (una massa indurita biancastra opaca all'interno o leggermente sporgente dall'apertura vaginale). Se il tappo copulatorio non è facilmente identificabile da un semplice esame visivo, inserire delicatamente una sonda smussata nell'apertura vaginale. Identificare i tappi situati più indietro nella vagina dalla resistenza dell'inserimento della sonda.</li>
	<li>Separare i topi femmina con tappi copulatori e la casa del gruppo in gabbie standard per topi, da 3 a 4 topi per gabbia.</li>
</ol>4. Prepararsi per il paradigma CGS
<ol><li>Assegna in modo casuale gabbie che ospitano topi femmina con tappi copulatori in due gruppi su G5.5: controllo e gruppo CGS. Tentare di randomizzare le gabbie per avere un numero approssimativamente uguale di topi per gruppo. Trasferire i mouse per pulire le gabbie standard del mouse ed etichettare con un segno "non disturbare". Designare queste gabbie come "gabbie domestiche" per i topi per posizionarle alla fine di ciascun fattore di stress.</li>
	<li>Designare una stanza separata nella struttura del mouse per eseguire il paradigma CGS. Progettare un regime di stress di 11 giorni, che va da G6.5 a G17.5, per utilizzare ciascuno dei fattori di stress di 7 giorni [esposizione a oggetti estranei (biglie o lego), esposizione agli odori dei predatori (biancheria da letto sporca per topi), inclinazione della gabbia di 30 °, frequenti cambi di biancheria da letto, rimozione della biancheria da letto, movimento sullo shaker] due volte al giorno e per utilizzare ciascuno dei 3 fattori di stress notturni (luci notturne accese, cambio del compagno di gabbia, esposizione alla biancheria da letto bagnata) durante la notte in modo casuale. Per un possibile schema di esempio e uno schema degli esperimenti descritti di seguito, vedere la Figura 1. NOTA: Ogni giorno il fattore di stress dovrebbe rientrare nel ciclo di luce dei topi (luci accese 06:00 h-20:00 h), e durare 2 h, con almeno una pausa di 2 ore tra i fattori di stress. Ogni fattore di stress notturno deve essere impostato all'inizio del ciclo buio (luci spente 20:00 h) e separato all'inizio del ciclo di luce (luci accese 06:00 h).</li>
</ol>5. Esecuzione del paradigma CGS
<ol><li>Impostare fattori di stress specifici su una gabbia statica standard con piano filtrato e bottiglia d'acqua nella stanza designata per il paradigma CGS. Preparare il numero di gabbie statiche necessarie per l'esperimento in base al numero di gabbie di topo designate per essere sottoposte a CGS durante la randomizzazione. Prima di avviare ogni fattore di stress, trasferire le gabbie per topi del gruppo CGS dalla stanza di alloggiamento alla stanza CGS. NOTA: Eseguire la manipolazione / trasferimento dei topi dalla gabbia domestica alla gabbia sperimentale e di nuovo in cappe a flusso laminare.</li>
	<li>Applicare i seguenti fattori di stress secondo il regime pre-progettato (fare riferimento al punto 4.2).<ol>
<li>Esposizione a oggetti estranei (biglie o lego): Posizionare sei biglie (14 mm di diametro) o sei lego (forme diverse, per non superare i 4 cm di altezza) distribuiti casualmente in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi, senza includere i nidiacei del topo. Posizionare i topi insieme alle loro controparti della gabbia domestica nella gabbia statica con oggetti estranei per 2 ore. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress. NOTA: Pulire gli oggetti estranei dopo l'uso.</li>
		<li>Esposizione agli odori dei predatori (lettiera sporca per topi): posizionare 1 cm di profondità della lettiera di ratto sporca fresca dei ratti femmine in una gabbia statica pulita senza lettiera per topi, senza includere i nidiacei del topo. Metti i topi insieme alle loro controparti della gabbia domestica nella gabbia statica con lettiera sporca per topi per 2 ore. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Inclinazione della gabbia di 30 °: posizionare i topi con le loro controparti della gabbia domestica in una gabbia statica pulita con lettiera per topi, senza includere i nidiacei del topo. Inclinare la gabbia a 30° contro il muro per 2 ore. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Frequenti cambi di biancheria da letto: posiziona i topi con le loro controparti della gabbia domestica in una gabbia statica pulita con lettiera per topi, senza includere i nidiacei del topo. Sostituire la biancheria da letto del mouse con una biancheria da letto pulita per mouse ogni 10 minuti per 2 ore. Durante i cambi di biancheria da letto del topo, posizionare delicatamente i topi in una gabbia pulita diversa per evitare il contatto diretto con i topi. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Rimozione della lettiera: posizionare i topi insieme alle loro controparti della gabbia domestica in una gabbia statica pulita vuota (senza lettiera o nidiacei) per 2 ore. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Movimento sullo shaker: posiziona i topi con le loro controparti della gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi, senza includere i nidiacei del topo. Posizionare la gabbia statica in cima a uno shaker da laboratorio reciproco impostato su 140 colpi al minuto per 2 ore. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Esposizione notturna alle luci: posiziona i topi con le loro controparti della gabbia domestica in una gabbia statica pulita con lettiera per topi, senza includere i nidiacei del topo. Tenere le luci accese durante la notte (20:00 h-06:00 h) per interferire con il ciclo buio. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Cambio del compagno di gabbia: trasferire il topo in una gabbia statica pulita con lettiera per topi che viene ospitata da un gruppo diverso di due topi femmina (femmine intatte non parte del trattamento o del gruppo di controllo). Tieni il mouse nella gabbia statica con compagni di gabbia sconosciuti durante la notte. Riportare il topo nella sua gabbia domestica con le sue controparti specifiche della gabbia domestica alla conclusione del fattore di stress.</li>
		<li>Esposizione alla lettiera bagnata: riempire la gabbia statica con lettiera per topi con acqua pulita mantenuta a 24 °C fino a quando la lettiera non è satura di acqua. Metti i topi insieme alle loro controparti della gabbia domestica nella gabbia statica con lettiera bagnata durante la notte. Riportare i topi nella loro gabbia di casa con le stesse controparti alla conclusione del fattore di stress.</li>
	</ol></li>
	<li>Durante il paradigma CGS, mantieni i topi di controllo indisturbati nelle loro gabbie domestiche all'interno della stanza abitativa.</li>
	<li>Sostituire le gabbie domestiche usate con nuove gabbie domestiche su G10.5. Su G17.5, a conclusione del fattore di stress notturno, ha fatto da solo tutti i topi sperimentali per prepararsi al parto e alle valutazioni funzionali a valle.</li>
</ol>6. Monitoraggio dei topi sperimentali durante il paradigma CGS
<ol><li>Monitorare i topi ogni 1 ora durante l'applicazione del fattore di stress, tranne durante i fattori di stress notturni.</li>
	<li>Escludere dall'esperimento i topi che mostrano segni di angoscia, tra cui ferite, letargia o qualsiasi anomalia fisica. Contattare il personale veterinario se necessario.</li>
</ol>7. Misurazione della percentuale di aumento di peso corporeo durante la gestazione nei topi sperimentali (opzionale)
<ol><li>Su G6.5, pesare i topi individualmente prima dell'esposizione a fattori di stress. Su G17.5, al termine del fattore di stress notturno, pesare i topi individualmente. Pesare i topi di controllo nei punti temporali gestazionali equivalenti.</li>
	<li>Misurare la percentuale di aumento di peso corporeo durante la gestazione impostando il peso del primo giorno del paradigma CGS (G6.5) al 100%.</li>
</ol>8. Misurazione del peso relativo della ghiandola surrenale postpartum nei topi sperimentali (opzionale)
<ol><li>Il giorno 2 postpartum (PP2), pesare il controllo e le dighe CGS individualmente. Eutanasia delle dighe per inalazione di anidride carbonica seguita da lussazione cervicale in una cappa aspirante.</li>
	<li>Posizionare i topi su una piastra di dissezione, sterilizzare la zona addominale con il 70% di etanolo e aprire la cavità addominale usando le forbici per effettuare un taglio verticale. Isolare le ghiandole surrenali situate adiacenti al polo anteriore dei reni con una pinna, bilateralmente. Sezionare attentamente il tessuto adiposo che circonda le ghiandole surrenali sotto un microscopio di dissezione.</li>
	<li>Pesare le ghiandole surrenali bilaterali individualmente. Calcola i pesi relativi della ghiandola surrenale in milligrammi per grammo (peso totale delle ghiandole surrenali destra e sinistra / peso corporeo).</li>
</ol>9. Misurazione dell'attività dell'asse surrenale ipotalamico postpartum (HPA) nei topi sperimentali (opzionale)
<ol><li>In preparazione per le misurazioni dell'asse HPA, eutanasizzare le cucciolate a 6 cuccioli per cucciolata il giorno 0 postpartum (PP0). Utilizzare l'inalazione di anidride carbonica, seguita dalla decapitazione con forbici chirurgiche come metodo secondario di eutanasia.</li>
	<li>Il giorno 2 postpartum (PP2), frenare individualmente il controllo e le dighe CGS all'interno di un tubo conico in polipropilene da 50 mL ben ventilato per 20 minuti. Immediatamente dopo lo stress di contenimento, rimuovere il mouse dal tubo conico e trattenere il mouse con la mano non dominante tenendo la pelle sciolta sopra le spalle e posteriore alle orecchie per avere la pelle sopra la mandibola tesa.</li>
	<li>Perforare la vena sottomandibolare con una lancetta leggermente dietro la mandibola ma anteriore al condotto uditivo. Raccogliere fino a 100 μL di sangue materno in un tubo separatore sierico. Dopo la raccolta del campione, applicare una leggera pressione con una garza al sito di puntura per fermare l'emorragia. Riportare le dighe nella gabbia di casa una volta che l'emorragia si ferma.</li>
	<li>Centrifugare il tubo separatore di siero a 21.130 x g per 6 minuti e rimuovere con cura il siero. Conservare il siero a -20 °C per un uso successivo. Misurare la concentrazione sierica di corticosterone con un kit ELISA seguendo il protocollo del produttore.</li>
</ol>10. Misurazione dei cambiamenti comportamentali postpartum nei topi sperimentali (opzionale)
<ol><li>Per prepararsi all'analisi comportamentale, abbattere le cucciolate a 6 cuccioli per cucciolata su PP0.</li>
	<li>Eseguire analisi della frammentazione dell'assistenza materna da PP2 a PP5. Ogni giorno, durante il ciclo di luce, esporre le dighe alla sala prove per un periodo di assuefazione di 5 minuti prima di filmare il comportamento materno per un periodo di 30 minuti.<ol>
<li>Valutare la frammentazione dell'assistenza materna misurando la lunghezza media di un singolo incontro di leccatura / toelettatura e il numero totale di attacchi eseguiti dalle dighe19. NOTA: Il comportamento di leccatura / toelettatura è definito come un comportamento in cui la diga sta prendendo contatto con il corpo del cucciolo con la lingua, o il cucciolo viene maneggiato dalla diga con le zampe. Un incontro è definito come un periodo di tempo ininterrotto in cui la diga è impegnata a leccare / governare i suoi cuccioli.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eseguire l'analisi dell'anedonia tramite test di preferenza del saccarosio (SPT) da PP0 a PP6. Esporre le dighe a una bottiglia da 100 ml di acqua pulita e una bottiglia da 100 ml di soluzione di saccarosio al 4% nella loro gabbia domestica. Misurare la quantità di acqua e saccarosio consumati (in ml) al giorno. Intercambiare il posizionamento della bottiglia nella gabbia di casa. Calcola la preferenza del saccarosio utilizzando le medie degli ultimi 4 giorni: preferenza % = [(consumo di saccarosio / saccarosio + consumo di acqua) x 100].</li>
	<li>Esegui l'analisi del comportamento ansioso tramite un labirinto zero elevato (EZM) su PP8. Posizionare le dighe individualmente sull'apparato EZM costituito da due quadranti chiusi e due quadranti aperti sollevati dal pavimento. Lascia che le dighe esplorino il labirinto indisturbato per 5 minuti. Quantificare il tempo trascorso nel quadrante aperto e il numero di voci nei quadranti aperti.</li>
</ol>11. Misurazione delle variazioni di peso postnatale della prole (opzionale)
<ol><li>Per prepararsi all'analisi del peso della prole, abbattere le cucciolate a 6 cuccioli per cucciolata il giorno della nascita (giorno postnatale 0, PN0).</li>
	<li>Registrare il peso dei cuccioli su PN0 e in diversi punti temporali durante il periodo postnatale (PN2, 7, 15, 21).</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.

L'esposizione delle topi gravide alla CGS perturba la funzione neuroendocrina materna postpartum, compresa la risposta dell'asse HPA a nuovi fattori di stress, ed è associata a varie anomalie comportamentali rilevanti per l'umore perinatale e i disturbi d'ansia. Dato che il modello impiega l'utilizzo di un fattore di rischio ambientale, si prevede una variazione fenotipica più elevata di quella altrimenti osservata nei modelli genetici22. Tuttavia, i risultati ottenuti dall'applicazione del paradi...

I meccanismi alla base di una maggiore suscettibilità ai disturbi neuropsichiatrici nelle madri e nei neonati a seguito di esposizioni materne avverse nel periodo peripartum rimangono in gran parte sconosciuti. Sostanziali alterazioni fisiologiche materne si verificano durante la gravidanza e il passaggio al periodo postpartum, compresi diversi adattamenti neuroendocrini che si ipotizza siano critici non solo per il neurosviluppo della prole sana ma anche per preservare la salute mentale materna1,2. A livello dell'asse ipotalamico ipotalamico surrenale materno (HPA), si osservano adattamenti sia nei livelli circadiani che indotti dallo stress del rilascio di glucocorticoidi, tra cui un ritmo più appiattito dell'attività dell'asse HPA diurno e una risposta smorzata dell'asse HPA ai fattori di stress acuti3,4,5. Dato che una maggiore attività dell'asse HPA è riportata in un sottogruppo di donne con disregolazione affettiva postpartum, tra cui un aumento dei livelli di glucocorticoidi circolanti e feedback negativo inibito6,7,8, l'esposizione a fattori di stress che provocano un aumento della reattività allo stress postpartum e prevengono gli adattamenti dell'asse HPA materno sono pensati per aumentare la suscettibilità ai disturbi neuropsichiatrici.
Per chiarire gli effetti dello stress sulla disregolazione affettiva nelle madri e nei neonati, sono stati generati diversi modelli di stress da roditori nel periodo peripartum. La maggior parte di questi modelli sono caratterizzati dall'applicazione di fattori di stress fisici che si traducono in sfide omeostatiche e alterazioni nello stato fisiologico della diga9, come lo stress cronico di contenimento10 e lo stress del nuoto durante lagestazione 11o l'esposizione allo shock postpartum12. Sebbene questi paradigmi abbiano dimostrato di provocare l'emergere di comportamenti depressivi postpartum e alterazioni nell'assistenza materna10,11,12,sono stati limitati dalla loro incapacità di catturare con precisione la natura psicosociale dei fattori di stress comunemente sperimentati dalle madri umane. Ciò diventa particolarmente importante quando si tenta di rivelare le conseguenze neuroendocrine dello stress cronico nel periodo peripartum, dato che si ritiene che l'elaborazione di diversi tipi di fattori di stress sia mediata da reti neurali variabili che orchestrano l'attivazione dell'asse HPA9.
Per superare questa limitazione, diversi gruppi hanno progettato paradigmi di stress che impiegano insulti psicosociali o una combinazione di fattori di stress fisici e psicosociali. Il modello di separazione materna, in cui le dighe sono separate dai suoi cuccioli per diverse ore al giorno durante il periodo postpartum13,14,e il modello di stress sociale cronico, in cui le dighe sono esposte a un intruso maschio in presenza delle loro cucciolate15,16,sono stati in grado di riprodurre l'emergere di anomalie nella cura materna e fenotipi depressivi associati a paradigmi di stress fisico. Il paradigma dello stress ultramild cronico, in cui le topi femmine gravide sono esposte a una varietà di insulti psicosociali, tra cui l'inclinazione della gabbia e l'illuminazione notturna, nonché insulti fisiologici sostanziali, come lo stress da contenimento e la restrizione alimentare, ha ulteriormente rivelato che l'esposizione a una natura mista di fattori di stress provoca anomalie nel comportamento materno, comprese le menomazioni nell'aggressività materna, così come la disregolazione nell'attività circadiana dell'asse HPA17,18. Coerentemente con questi risultati, un modello alternato di stress di contenimento e sovraffollamento durante la gestazione provoca aumenti dei livelli di corticosterone circadiano materno postpartum e alterazioni nell'assistenza materna, sebbene non si osservino differenze nella riattivazione dell'asse HPA dopo l'esposizione postpartum a nuovi insulti acuti1.
Un'espansione di questo lavoro, generando un paradigma di stress gestazionale che impiega molteplici insulti psicosociali presentati in modo imprevedibile e riduce al minimo l'uso di fattori di stress fisiologici. Gli studi hanno precedentemente dimostrato che questo paradigma di stress psicosociale cronico (CGS) provoca lo sviluppo della disfunzione dell'asse HPA materno, compresa una maggiore reattività allo stress nel primo periodo postpartum19. Questi cambiamenti sono associati ad anomalie nel comportamento materno, comprese alterazioni nella qualità delle cure materne ricevute dai cuccioli e l'emergere di comportamenti anedonici e ansiosi19, caratteristiche coerenti con l'umore perinatale e disturbi d'ansia20,21. Inoltre, l'aumento di peso della prole si riduce durante il periodo postnatale dopo l'esposizione in utero a CGS19,suggerendo che la CGS potrebbe avere persistenti effetti di programmazione negativi nelle generazioni future.
L'obiettivo nello sviluppo del paradigma CGS è stato quello di utilizzare principalmente fattori di stress clinicamente rilevanti, che catturano accuratamente il tipo, l'intensità e la frequenza degli insulti spesso associati alla disregolazione neuroendocrina e allo sviluppo dell'umore perinatale e dei disturbi d'ansia. Qui, lo studio fornisce un protocollo dettagliato su come sottoporre topi femmina gravidi a CGS, nonché valutazioni a valle che possono essere utilizzate per testare la validità del modello.

<table><tbody><tr><td>lancetta animale</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>GR4MM</td><td></td></tr><tr><td>Sonda terminale smussata</td><td>Fine Science Tools</td><td>10088-15</td><td>Utilizzato per verificare la presenza di tappi copulatori</td></tr><tr><td>Bottiglie per SPT</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>WTRBTL S-BL</td><td>Borraccia in vetro da 100 ml con tappo e provetta a sfera, graduata da 1 mL.</td></tr><tr><td>Provette coniche (50 mL)</td><td>Corning Inc.</td><td>352098</td><td>Utilizzato per trattenere i topi per misurare la risposta dell'asse HPA allo stress acuto. Assicurarsi che il tubo conico abbia una piccola apertura all'estremità per la ventilazione.</td></tr><tr><td>Legos</td><td></td> <td>Amazon-Marbles</td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td>Amazon-Mouse</td><td></td></tr> <tr><td>Corticosterone ELISA kit</td><td>Biovendor</td><td>RTC002R</td><td></td></tr><tr><td>Mouse EZM</td><td>TSE</td> <td>Systems-Agitatore</td><td></td></tr> <tr><td>di laboratorio reciproco</td><td>Labnet international</td><td>S2030-RC-B</td><td></td></tr><tr><td>Provette separatori di siero</td><td>Becton Dickinson</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>Costruzione e fornitura di design alternativo</td> con <td>fondo a gabbia statica</td>, Inc.<td>RC71D-PC</td><td></td></tr><tr><td>Gabbia statica - piani ventilati filtrati</td><td>Alternative Design Manufacturing and Supply Inc.</td><td>FT71H-PC</td><td></td></tr></tbody></table>

utilizzo di un modello murino di stress psicosociale in gravidanza come paradigma traslazionale rilevante per i disturbi psichiatrici nelle madri e nei neonati

Using a Murine Model of Psychosocial Stress in Pregnancy as a Translationally Relevant Paradigm for Psychiatric Disorders in Mothers and Infants

Il periodo peripartum è considerato un periodo sensibile in cui le esposizioni materne avverse possono comportare conseguenze negative a lungo termine sia per la madre che per la prole, incluso lo sviluppo di disturbi neuropsichiatrici. I fattori di rischio legati all'emergere della disregolazione affettiva nella diade materno-infantile sono stati ampiamente studiati. L'esposizione allo stress psicosociale durante la gravidanza è costantemente emersa come uno dei predittori più forti. Diversi modelli di roditori sono stati creati per esplorare questa associazione; tuttavia, questi modelli si basano sull'uso di fattori di stress fisici o di un numero limitato di fattori di stress psicosociali presentati in modo ripetitivo, che non catturano con precisione il tipo, l'intensità e la frequenza dei fattori di stress sperimentati dalle donne. Per superare queste limitazioni, è stato generato un paradigma di stress psicosociale cronico (CGS) che impiega vari insulti psicosociali di diversa intensità presentati in modo imprevedibile. Il manoscritto descrive questo nuovo paradigma CGS in cui le topi femmine gravide, dal giorno gestazionale 6,5 al 17,5, sono esposte a vari fattori di stress durante il giorno e durante la notte. I fattori di stress diurni, due al giorno separati da una pausa di 2 ore, vanno dall'esposizione a oggetti estranei o odore di predatore a frequenti cambiamenti nella biancheria da letto, rimozione della biancheria da letto e inclinazione della gabbia. I fattori di stress durante la notte includono l'esposizione continua alla luce, il cambio dei compagni di gabbia o la lettiera bagnata. Abbiamo precedentemente dimostrato che l'esposizione alla CGS provoca lo sviluppo di anomalie neuroendocrine e comportamentali materne, tra cui una maggiore reattività allo stress, l'emergere di modelli di assistenza materna frammentati, anedonia e comportamenti correlati all'ansia, caratteristiche fondamentali delle donne che soffrono di umore perinatale e disturbi d'ansia. Questo modello CGS, quindi, diventa uno strumento unico che può essere utilizzato per chiarire i difetti molecolari alla base della disregolazione affettiva materna, nonché i meccanismi trans-placentati che influenzano il neurosviluppo fetale e provocano conseguenze comportamentali negative a lungo termine nella prole.

L'esposizione delle tope femmine gravide alla CGS provoca cambiamenti nei parametri cronici rilevanti per lo stress, tra cui una riduzione dell'aumento di peso corporeo durante la gravidanza (Figura 2A) e un aumento del peso delle ghiandole surrenali nel primo periodo postpartum (Figura 2B)19. È importante sottolineare che l'esposizione alla CGS provoca anomalie postpartum nella funzione neuroendocrina materna. Le dighe CGS mostrano un as...

Il paradigma dello stress psicosociale cronico (CGS) impiega fattori di stress clinicamente rilevanti durante la gravidanza nei topi per modellare i disturbi psichiatrici di madri e neonati. Qui, forniamo una procedura passo-passo per applicare il paradigma CGS e le valutazioni a valle per convalidare questo modello.

Utilizzo di un modello murino di stress psicosociale in gravidanza come paradigma traslazionale rilevante per i disturbi psichiatrici nelle madri e nei neonati

The peripartum period is considered a sensitive period where adverse maternal exposures can result in long-term negative consequences for both mother and ...

Il nostro protocollo è significativo perché rappresenta un nuovo paradigma per valutare gli effetti dello stress cronico, in particolare lo stress psicosociale, sugli esiti della gravidanza. In questo protocollo, esponiamo topi gravidi a vari insulti psicosociali di diversa intensità in modo imprevedibile. I precedenti paradigmi di modelli animali impiegavano fattori di stress fisici o un numero limitato di fattori di stress somministrati ripetutamente, il che non riflette l'esperienza delle donne durante la gravidanza.Il nostro modello di stress psicosociale cronico supera queste limitazioni. Questo metodo ha ampie ramificazioni per varie aree di ricerca, tra cui la salute mentale materna e la ricerca correlata allo sviluppo infantile avverso e, più in generale, per comprendere le origini dello sviluppo della malattia adulta attraverso eventi intrauterini avversi. Prima di iniziare ogni fattore di stress nel paradigma CGS, portare i topi del gruppo CGS dalla stanza di alloggiamento nella stanza designata per CGS.Esporre i topi a diversi fattori di stress seguendo un regime di stress di 11 giorni che va dal giorno gestazionale 6,5 al 17,5. Per esporre i topi a oggetti estranei, distribuisci in modo casuale sei biglie o sei Lego di forme diverse in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con oggetti estranei per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa.Per esporre i topi all'odore dei predatori, posizionare una lettiera sporca spessa un centimetro da ratti femmine in una gabbia statica pulita senza lettiere o nidiacei di topi. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con lettiera sporca per topi per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi a un'inclinazione della gabbia, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo.Tenere la gabbia inclinata di 30 gradi contro il muro per due ore, quindi riportare i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi a frequenti cambi di biancheria da letto, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Ogni 10 minuti, spostare delicatamente i topi in una gabbia pulita diversa e sostituire la lettiera del mouse.Dopo due ore, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi alla rimozione della lettiera, posiziona tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica vuota e pulita senza lettiere o nidiacei per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi al movimento su uno shaker, posizionare tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo.Posiziona la gabbia statica in cima a uno shaker da laboratorio reciproco impostato su 140 colpi al minuto per due ore, quindi riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre i topi alle luci durante la notte, posiziona tutti i topi da una gabbia domestica in una gabbia statica pulita con biancheria da letto per topi senza i nidiacei del topo. Tenere le luci accese durante la notte per interferire con il ciclo buio.Il giorno seguente, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Per esporre un topo a nuovi compagni di gabbia, trasferire il mouse in una gabbia statica pulita con lettiera del topo contenente due topi femmina sconosciuti. Lascia il topo nella gabbia statica con i compagni di gabbia sconosciuti durante la notte.Il giorno seguente, ha riportato il topo nella sua gabbia di casa con compagni di gabbia familiari. Per esporre i topi alla biancheria da letto bagnata, saturare la lettiera del topo in una gabbia statica con acqua pulita mantenuta a 24 gradi Celsius. Metti tutti i topi da una gabbia domestica nella gabbia statica con biancheria da letto bagnata durante la notte.Il giorno seguente, riporta i topi nella loro gabbia di casa. Dopo che il regime di stress è completo il giorno gestazionale 17.5, ospitare tutti i topi sperimentali per prepararsi al parto e alle valutazioni funzionali a valle. L'esposizione di topi femmina gravide a CGS provoca cambiamenti nei parametri cronici rilevanti per lo stress, come la riduzione dell'aumento di peso corporeo durante la gravidanza e l'aumento del peso delle ghiandole surrenali nel primo periodo postpartum.È importante sottolineare che le dighe CGS presentano anomalie postpartum e funzione neuroendocrina materna, come evidenziato dall'aumento dei livelli sierici di corticosterone a seguito di un nuovo insulto acuto. Inoltre, le dighe CGS mostrano alterazioni nell'assistenza materna come riflesso da un aumento del grado di frammentazione dei segnali materni ricevuti dai cuccioli. La durata media degli attacchi di leccatura / toelettatura è ridotta mentre il numero medio di attacchi è aumentato, indicando numerosi brevi episodi di comportamento nutritivo.La preferenza per il saccarosio è anche depressa nelle dighe CGS rispetto alle dighe di controllo, suggerendo la presenza di anedonia. Infine, le dighe CGS mostrano anche un aumento dei comportamenti legati all'ansia misurato da una riduzione del tempo trascorso nei quadranti aperti dell'EZM rispetto alle dighe di controllo. Nella prole, l'esposizione alla CGS in utero provoca una diminuzione dell'aumento di peso durante il periodo postnatale dal giorno 7 al 21 postnatale, sebbene non ci siano differenze alla nascita.Questa riduzione dell'aumento di peso corporeo è presente nella prole di entrambi i sessi. Quando si tenta questa procedura, stabilire un programma per ottenere gravidanze a tempo e implementare costantemente l'intera serie, sono fondamentali fattori di stress psicosociali imprevedibili variabili. Questa tecnica può aiutare a rispondere a domande interessanti come lo stress psicosociale materno può causare effetti specifici del sesso sulla funzione placentare o sullo sviluppo e sul comportamento del cervello della prole?E questi effetti possono essere invertiti o modificati dall'intervento farmacologico o dalla cura materna postnatale?

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Questo articolo descrive l'uso dei residenti intruso stress sociale cronico come un paradigma etologicamente rilevanti per modello post-partum la depressione e l'ansia in lattazione roditori.

Utilizzando cronica stress sociale a modello depressione post-partum in lattazione Roditore

Il protocollo UCMS (Unpredictable Chronic Mild Stress) è un metodo convalidato per studiare i cambiamenti comportamentali e fisiologici associati allo stress cronico e ai sintomi depressivi. Otto settimane dall'imposizione del protocollo UCMS inducono cambiamenti comportamentali e scarsi risultati di salute nei roditori di entrambi i sessi.

Un Imprevedibile cronica protocollo stress lieve per i sintomi depressivi Istigazione, cambiamenti comportamentali e negativi risultati di salute in Roditore

Stiamo misurando la sensibilità e l'albero di attivazione perigenitale cella meccanico nella prostata maschile C57BL / 6 topi che ha subito un paradigma di stress primi anni di vita - la separazione materna neonatale, al fine di indurre un modello preclinico di sindrome da dolore pelvico / cronico prostatite cronica.

Valutazione della perigenitale Sensibilità e prostatica Mast attivazione delle cellule in un modello murino di Neonatale separazione materna

L'attivazione immunitaria materna (MIA) è un modello per un fattore di rischio ambientale di autismo e schizofrenia. L'obiettivo di questo articolo è fornire una procedura passo dopo passo su come indurre la MIA nei topi gravidi al fine di migliorare la riproducibilità di questo modello.

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Qui vi presentiamo il protocollo sforzo delicato cronico imprevedibile nei topi. Questo protocollo induce un fenotipo simile a depressione a lungo termine e permette di valutare l'efficacia degli antidepressivi putativi a invertire i deficit di tipo di depressiva comportamentistici e neuromolecular.

Il protocollo di sforzo delicato cronico imprevedibile per indurre anedonia in topi

L'infezione materna è un fattore di rischio per i disturbi dello sviluppo neurologico. I modelli murini di attivazione immunitaria materna (MIA) possono chiarire l'impatto dell'infezione sullo sviluppo e sulla funzione del cervello. Qui vengono fornite linee guida generali e una procedura per produrre una prole resiliente e suscettibile esposta a MIA.

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Questo protocollo descrive un modello animale per studiare come le avversità precoci della vita, provocate da un ambiente impoverito e da cure materne imprevedibili durante il primo periodo postnatale, influenzino lo sviluppo cerebrale e il rischio futuro di disturbi mentali.

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Stress cronico da sconfitta sociale nei topi maschi della prima adolescenza

Integrando quattro fattori di stress sociale giornaliero, il presente studio descrive un modello di stress sociale integrato multiplo (MISS) per i disturbi psichiatrici nei topi femmina C57BL/6J. Dopo dieci giorni di ripetuta esposizione a MISS, i topi hanno sviluppato fenotipi depressivi e ansiosi, fornendo così un modello animale naturale basato sull'eziologia per lo studio dei disturbi psichiatrici nei soggetti di sesso femminile.

Un modello di stress sociale integrato multiplo per disturbi psichiatrici in topi femmina C57BL/6J

L'articolo fornisce un protocollo completo per generare un modello murino di attivazione immunitaria materna (MIA) per studiare gli effetti dell'infiammazione gestazionale precoce sul neurosviluppo, inclusi metriche chiave per garantire affidabilità e riproducibilità.

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Utilizzo di un modello murino di stress psicosociale in gravidanza come paradigma traslazionale rilevante per i disturbi psichiatrici nelle madri e nei neonati

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