Un sistema di imaging ad alta definizione regolabile per studi comportamentali di adulti drosofili

A causa delle sue dimensioni scomode, Drosophila è difficile da immaginare. Questo metodo dimostra l'imaging del comportamento e della morfologia delle mosche attraverso l'uso di uno stereomicroscopio. Questo protocollo può essere utilizzato sia per la ricerca scientifica che per l'insegnamento.

A dimostrare la procedura saranno Ms.Li Tong e la signora Weng Yujia, studenti universitari che fanno formazione alla ricerca sotto la mia guida. Per iniziare, crea una camera di osservazione del comportamento della mosca, o FBOC, usando un tappo di bottiglia di plastica traslucida di circa 17 per 22 millimetri o tagliando una sezione di 17 millimetri dall'estremità spessa di una punta di pipetta da cinque millilitro. Versare l'1% di agar nell'FBOC per regolarne la profondità.

Se il cibo deve essere collocato nell'FBOC, versare l'agar per ottenere una profondità di 12 millimetri. Se il cibo non ha bisogno di essere collocato nell'FBOC, versare l'agar a una profondità di cinque millimetri per tracciare più facilmente dove si trovano i moscerini della frutta. Se si utilizza una punta della pipetta per creare un FBOC, posizionare la sezione della punta della pipetta di taglio in una piastra di Petri da 35 o 60 millimetri.

Versare il gel di agar all'1% nella capsula di Petri ad uno spessore di circa cinque millimetri e attendere che l'agar si solidifichi e sigilli sul fondo dell'FBOC. Quindi versare il gel di agar nell'FBOC allo spessore desiderato. Crea una base FBOC perforando un foro profondo 10 millimetri al centro di un pezzo di foglio di schiuma di etilammina con lo stesso diametro dell'FBOC.

Inserire l'FBOC nel foro. Preparare cibo a mosca se necessario con mezzo di lievito, dieta artificiale o saccarosio puro o glucosio, a seconda dello scopo dell'osservazione. Per determinare visivamente se le mosche si stanno nutrendo, aggiungere coloranti alimentari al cibo ad una concentrazione finale di 12,5 milligrammi per 100 millilitri.

Versare il cibo preparato in una capsula di Petri ad un'altezza di otto millimetri. Dopo la solidificazione, posizionare il cibo su un rettangolare disegnato su carta e tagliare il cibo di conseguenza e posizionarlo su un pezzo di plastica e tagliarlo in una piramide quadrangolare o piramide quadrangolare del frusto per consentire la registrazione del comportamento della mosca da diverse angolazioni mentre le mosche atterrano sul cibo. Taglia un pezzo di plastica e usa una pinzetta per posizionare la plastica e il cibo al centro dell'FBOC.

Versare l'1% di gel di agar in una bottiglia vuota pulita ad uno spessore di 1-2 centimetri e posizionarlo a temperatura ambiente per 1-2 ore. Trasferisci le mosche sulla bottiglia e posizionala a 25 gradi Celsius per 36 ore o più. Raffreddare e inattivare le mosche nel ghiaccio tritato, ordinarle su un impacco di ghiaccio e trasferirle al FBOC come descritto in precedenza.

Dopo aver trasferito le mosche all'FBOC, coprilo con 30-40 millimetri di UV o filtro trasparente affinché la fotocamera formi un complesso FBOC. Posizionare il complesso FBOC sotto lo stereomicroscopio per l'osservazione. Illumina l'FBOC.

Montare mini luci video a LED per flash hot shoe mount stand e posizionare le luci sui lati sinistro e destro dell'FBOC. Accendi le luci e imposta la temperatura del colore da 5.000 a 5. 600 Kelvin e la luminosità al 100% Accendi le luci video a LED e regola il microscopio stereo zoom fino a quando il bordo dell'FBOC può essere chiaramente visto ad occhio nudo. Sposta l'FBOC al centro del campo visivo.

Collegare il morsetto dell'adattatore universale per fotocamera digitale del telescopio a un oculare dello stereomicroscopio. Quindi collegare saldamente una fotocamera digitale compatta all'adattatore ruotando alternativamente la vite di montaggio della fotocamera e la vite di fissaggio della fotocamera. Accendere la fotocamera digitale e ruotare le manopole di regolazione orizzontale/verticale fino a quando il bordo FBOC appare chiaramente al centro del campo visivo circolare luminoso sullo schermo LCD della fotocamera.

Ruotare la ghiera di modalità in modalità automatica con priorità di apertura. Premere la modalità di messa a fuoco sul multiselettore, scegliere il primo piano macro e quindi premere il pulsante OK. Spostare l'interruttore dello zoom dall'estremità grandangolare all'estremità del teleobiettivo e ingrandire l'immagine circolare fino a quando la sua parte centrale non riempie l'intero schermo LCD.

Premi il pulsante di registrazione del filmato e inizia a registrare il comportamento della mosca. Ruota la manopola di messa a fuoco del microscopio fino a quando le mosche nell'FBOC sono chiaramente visibili. Scegli il comportamento di volo di interesse per l'osservazione o la registrazione video.

Ruotare la manopola dello zoom per ingrandire e rimpicciolire per ottenere l'ingrandimento desiderato per l'osservazione o la registrazione video. La fotografia rappresentativa scattata attraverso il filtro UV è chiara e nitida, molto simile alla fotografia scattata quando la fiala di coltura non è coperta. La qualità della foto scattata attraverso il vetro della capsula di Petri è molto scarsa e in parte sfocata.

Una fotografia presa dalla registrazione video che mostra i dettagli di ogni parte del corpo della mosca è mostrata qui. Poiché la fotocamera è collegata a uno stereomicroscopio zoom, è molto facile scattare da scatti panoramici a scatti ravvicinati utilizzando il sistema di zoom. Utilizzando questo protocollo, il comportamento della mosca può essere osservato e documentato per più angoli di visione.

Ad esempio, la mosca femmina strofina costantemente l'ovopositore con le zampe posteriori durante il processo di deposizione delle uova. Questo dettaglio del comportamento di deposizione delle uova non può essere visto chiaramente dal lato. Utilizzando questo metodo semplice ed economico, possiamo scattare una panoramica o un primo piano del comportamento e della morfologia delle mosche e ottenere un video o una foto di buona qualità.