Quantificazione delle densità cellulari e delle proprietà antigeniche mediante levitazione magnetica

Questa tecnica consente la separazione di vari tipi di cellule e cellule sottoposte a vari processi basati esclusivamente sulla densità con poca o nessuna manipolazione in un breve periodo di tempo. I principali vantaggi di questo metodo sono che è minimamente invasivo, richiede piccoli volumi, fornisce risultati rapidi, non dipende dalle classiche lettura e non è richiesto personale specializzato. Questa tecnica può essere applicata per rilevare più malattie, ad esempio anemia e sepsi.

Per iniziare utilizzare il dispositivo di lancing con un clic per pungere il dito del donatore di sangue positivo al fattore rhesus e raccogliere 10 microlitri di sangue in un millilitro di DPBS. Aggiungere un microlitro di colorante fluorescente in una sospensione millilitro delle cellule positive al fattore rhesus per colorare fluorescentemente la membrana plasmatica e incubare a 37 gradi Celsius per 15 minuti. Pellet le celle ruotando a 5.600 volte G per 15 secondi e lavare il pellet tre volte usando un millilitro di DPBS.

Spese di sospensione del pellet in un millilitro di HBSS con calcio e magnesio. Utilizzare il dispositivo di lancing con un clic per pungere il dito del donatore di sangue negativo al fattore rhesus e raccogliere due microlitri di sangue. Per preparare il tubo sperimentale contenente solo perdole, aggiungere 174 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, un microlitro di perli di controllo IgG, un microlitro di pere pesanti con una densità di 1,2 grammi per millilitro e 24 microlitri di gadolinio da 500 millimolari.

Per preparare il tubo di controllo sperimentale contenente IgG, aggiungere 172 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, un microlitro di perli di controllo IgG, un microlitro di pere pesanti, un microlitro di sangue negativo a fattore rhesus, un microlitro di sospensione di sangue positiva al fattore rhesus colorato e 24 microlitri di gadolinio millimolare da 500 millimolari. Per preparare il tubo sperimentale del campione, aggiungere 172 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, un microlitro di pere rivestite di anti-RhD, un microlitro di pere pesanti, un microlitro di sangue negativo al fattore rhesus, un microlitro di sospensione di sangue positivo al fattore rhesus colorato e 24 microlitri di gadolinio millimolare da 500 millimolari. Impostare il dispositivo di levitazione magnetica.

E caricare 50 microlitri del campione in un tubo capillare fino a quando il tubo non viene riempito. Sigillare le estremità del tubo capillare con un sigillante capillare assicurandosi che non ci siano bolle. Posizionare il tubo capillare nel supporto capillare tra i magneti superiore e inferiore, regolare il palco e la messa a fuoco per una visione ottimale.

Attendere circa cinque o 20 minuti affinché le cellule e le perle si depositino nella loro posizione di equilibrio magnetico. Utilizzando questo protocollo, le cellule del sangue sono state separate a seconda dell'altezza di levitazione utilizzando il dispositivo di levitazione magnetica. Sono state utilizzate perle a bassa e alta densità per fornire altezze di levitazione della densità e riferimenti dimensionali.

Le cellule polimorfonucleate levitavano sopra i globuli rossi a 21 millimolari di concentrazione di ioni gadolinio. Le vecchie cellule del sangue levitavano a 60 millimolari di concentrazione di ioni gadolinio. I globuli rossi, le cellule polimorfonucleate e i linfociti sono stati separati a 40 millimolari di concentrazione di ioni gadolinio in base alle loro densità intrinseche.

L'antigene del fattore rhesus è stato rilevato sui globuli rossi utilizzando pere rivestite di anticorpi IgG e anti-RhD. I complessi di globuli rossi di perla non sono stati generati nel campione di controllo IgG, ma sono stati rilevati i globuli rossi colorati fluorescente catturati dalle pere positive al fattore rhesus. Il legame dell'anti-RhB alle cellule positive del fattore rhesus ha creato un complesso di cellule di perla al centro a densità intermittente delle pere non legate e dei globuli rossi negativi.

Inoltre, la complessa formazione è stata confermata osservando la fluorescenza emessa. I complessi di perle B formati tra le perle ad alta e bassa densità rivestite con gli anticorpi per CR1 e CD47 indicano la presenza di vescicole extracellulari derivate dai globuli rossi. Tappare il capillare senza introdurre bolle è il passo più impegnativo e richiede pratica.

Questo metodo potrebbe fornire informazioni per l'ematologia, in particolare focalizzato sulle malattie dei globuli rossi.