Modellazione dell'ictus nei topi: occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide esterna

Nel modello di filamento qui descritto, il ripristino completo del flusso sanguigno e la sua registrazione, sono requisiti per garantire un afflusso producibile tra i topi, specialmente negli studi sull'ictus traslazionale. Questo modello presenta due vantaggi principali rispetto ad altri modelli di corsa descritti in precedenza. Non è richiesta craniotomia e si ottiene una completa riperfusione del vaso sanguigno.

Il modello di filamento è un intervento chirurgico complesso che coinvolge la manipolazione del processo di diverse arterie. La visualizzazione e la spiegazione di tutti questi sono piccoli ma importanti passi, potrebbero accelerare il periodo di apprendimento dei neurochirurghi. Collegare la coperta termica per mantenere la temperatura dell'area operativa e la temperatura corporea del mouse durante l'anestesia a 37 gradi Celsius.

Preparare forbici e pinze per autoclave, soluzione di etanolo al 70% e unguento per occhi di dexpantenolo e tenere diversi pezzi di cotone e sutura di poliestere intrecciato rivestito Five O, pronti per l'uso. Preparare una soluzione salina allo 0,9% in una siringa da un millilitro senza ago per mantenere idratato il sito di incisione. Preparare un supporto per la sonda laser Doppler tagliando la punta di una punta della pipetta da 10 microlitri.

Una volta che il mouse è completamente anestetizzato, posizionarlo in posizione prona nell'area operativa. Inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura durante le procedure chirurgiche. Dopo aver disinfettato il sito chirurgico, tagliare questo cuoio capelluto tra l'orecchio sinistro e l'occhio per esporre l'osso del cranio.

Quindi, tagliare e ritirare il muscolo temporale per visualizzare le arterie cerebrali multiple o MCA sotto il cranio. Fissare la parte esterna della punta tenendo la sonda laser Doppler o la fibra sopra l'MCA sinistro con colla e chiudere la pelle in modo che anche la pelle sia incollata. Applicare da due a tre gocce di colla indurente per accelerare il processo.

Assicurarsi che la fibra Laser Doppler non sia incollata e possa essere facilmente rimossa dal supporto della punta in qualsiasi momento. Girare il mouse in posizione supina, quindi mettere il muso nel cono di anestesia e fissare le zampe con del nastro adesivo. Disinfettare la pelle e i capelli che circondano il torace e fare un'incisione della linea mediana lunga due centimetri nel collo.

Utilizzare una pinza per separare la ghiandola sottomandibolare della pelle e il muscolo sternomastoideo. Utilizzare divaricatori per esporre il campo chirurgico e trovare l'arteria carotide comune sinistra o CCA. Sezionare il CCA libero dal tessuto connettivo e dai nervi circostanti senza danneggiare il nervo vagale ed eseguire una legatura transitoria prima della biforcazione.

Sezionare l'arteria carotide esterna o ECA e legare un nodo permanente nella parte visibile più distale. Posizionare un'altra sutura sotto l'ECA e vicino alla biforcazione, quindi preparare un nodo sciolto da utilizzare in seguito. Sezionare l'arteria carotide interna o ICA e posizionare una clip microvascolare su di essa a circa cinque millimetri sopra la biforcazione.

Assicurati di non danneggiare il nervo vagale. Quindi tagliare un piccolo foro nell'ECA tra le legature strette e sciolte, assicurandosi di non tagliare l'intera ECA. Introdurre il filamento e farlo avanzare verso il CCA.

Stringere la legatura allentata nell'ECA attorno al lume per fissare momentaneamente il filamento in quella posizione. Rimozione della clip microvascolare e prevenzione del sanguinamento. Dopo aver rimosso la clip microvascolare, inserire il filamento attraverso l'ICA fino a raggiungere l'origine dell'MCA.

Fissare il filamento in questa posizione stringendo ulteriormente il nodo attorno all'ECA. Registrare i valori Doppler laser prima e dopo l'inserimento del filamento. Rimuovere il divaricatore e spostare il muscolo sternomastoideo nella ghiandola sottomandibolare prima di suturare la ferita.

Rimuovere la sonda laser Doppler e posizionare l'animale in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per un'ora. Posizionare il mouse in posizione prona nell'area operativa con il muso nella maschera di anestesia, quindi fissare le zampe dell'animale con del nastro adesivo. Inserire la sonda laser Doppler nel supporto della sonda.

Rimuovere la sutura della ferita e utilizzare una pinza per separare la pelle, la ghiandola sottomandibolare e il muscolo sternomastoideo. Utilizzare divaricatori per esporre il campo chirurgico. Allentare la sutura ECA che stringe il filamento e tirare delicatamente il filamento.

Evitare di danneggiare il rivestimento in gomma siliconica del filamento durante la rimozione. Registrare i valori doppler laser prima e dopo la rimozione del filamento. Legare strettamente la sutura ECA e confermare l'aumento del flusso sanguigno cerebrale nel dispositivo laser Doppler.

Aprire la legatura transitoria prima della biforcazione dal CCA per ripristinare il flusso sanguigno completo. Rimuovere il divaricatore e spostare il muscolo sternomastoideo nella ghiandola sottomandibolare prima di suturare la ferita. Quindi, posizionare l'animale in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per un'ora per riprendersi dall'anestesia.

Dopo il recupero, i topi ritornano nelle loro gabbie in una stanza a temperatura controllata e si prendono cura degli animali aggiungendo pellet di cibo umido e idrogel in piccole piastre di Petri sul pavimento della gabbia e iniettano analgesia ogni 12 ore fino al terzo giorno dopo l'intervento chirurgico. Una volta ripristinato il flusso sanguigno nel CCA dopo aver rimosso il filamento, si verifica una completa riperfusione del cervello, che è simile alla situazione osservata dopo il successo della trombectomia meccanica nei pazienti umani. Gli animali colpiti da ictus hanno presentato un cambiamento significativo nel punteggio neuro composito e focale, ma non nel punteggio neuro generale rispetto agli animali finti.

Il volume dell'infarto recuperato è stato anche eseguito utilizzando la colorazione viola cresolo delle sezioni cerebrali seriali coronali 24 ore dopo l'induzione dell'ictus. L'area della lesione comprende la corteccia somatosensoriale e motoria, nonché le strutture subcorticali, come lo striato. La media del volume dell'infarto era compresa tra 61 e 62 millimetri quadrati, che rappresentano il 48% dell'emisfero cerebrale interessato.

È importante eseguire un'adeguata dissezione del CCA, ECA e RCA senza causare danni al tessuto adiacente, in particolare al nervo vago, per avere una buona visualizzazione di tutte le strutture e poter inserire il filamento e occludere l'origine MCA.