Name: Tecniche di manipolazione per ridurre lo stress nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Impara la tecnica di manipolazione 3D per ridurre l'ansia nei topi da laboratorio. Questo metodo migliora il benessere animale e aumenta la replicabilità dei dati nelle ricerche precliniche.

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Gli autori ringraziano il Comitato per la cura degli animali di CAMH per aver supportato questo lavoro, così come gli animali caregiver di CAMH che hanno fornito un ampio feedback sull'utilità della procedura, motivando l'esecuzione degli esperimenti descritti e la presentazione del protocollo dettagliato per altri utenti. Questo lavoro è stato in parte finanziato da CAMH BreakThrough Challenge, assegnato a TP, e da fondi interni di CAMH.

<ol><li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).</li>
<li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mighty+Mouse%3A+the+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Missouri+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li>
<li>Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+inherent+variability+and+experimental+parameters+on+the+reliability+of+small+animal+PET+data%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data.</a> EJNMMI Research. 2 (1), 26(2012).</li>
<li>Howard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Variability%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Control of Variability.</a> ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).</li>
<li>Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+cage+environment+on+rodent+physiology+and+behavior%3A+Implications+for+reproducibility+of+pre-clinical+rodent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research.</a> Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).</li>
<li>Golini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-invasive+Digital+Biomarker+for+the+Detection+of+Rest+Disturbances+in+the+SOD1G93A+Mouse+Model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS.</a> Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).</li>
<li>Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+solution+for+rodent+home-cage+behaviour+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring.</a> PLoS One. 14 (8), 0220751(2019).</li>
<li>Stewart, K., Schroeder, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rodent Handling and Restraint Techniques.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+practicality+of+using+non-aversive+handling+methods+to+reduce+background+stress+and+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20305(2019).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing%3A+the+major+role+of+non-aversive+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999(2017).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Wahlsten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+data+from+different+labs%3A+lessons+from+studies+of+gene-environment+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction.</a> Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).</li>
<li>Nature Neuroscience. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troublesome+variability+in+mouse+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Troublesome variability in mouse studies.</a> Nature Neuroscience. 12 (9), 1075(2009).</li>
<li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281(2020).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice%3A+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718(2015).</li>
<li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Handling+Tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22NC3Rs%22%5BJournal%5D)">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling%3A+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401(2013).</li>
<li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice%3A+An+international+thematic+survey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454(2020).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410(2020).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice%3A+relevance+to+emotionality+and+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li>
<li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare%3A+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life%2C+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior%2C+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li>
<li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li>
<li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649(2020).</li>
<li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+in+group-housed+laboratory+mice%3A+why+can%27t+we+solve+the+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li>
<li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li>
</ol>

Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi da divulgare.

Questo studio e lo sviluppo del metodo si basano sull'osservazione che le tecniche di manipolazione nei topi sono ancora trascurate dalla comunità scientifica e che alcuni laboratori sono ancora riluttanti a implementare tecniche di assuefazione o manipolazione per ridurre lo stress e la reattività dei loro animali prima degli esperimenti. Pur rappresentando un impegno di tempo, la manipolazione degli animali fornisce effetti benefici agli animali che possono contribuire al successo degli esperimenti da eseguire e impedi...

Topi e ratti sono risorse essenziali per gli studi preclinici1,2 per molteplici scopi, tra cui studi endocrini, fisiologici, farmacologici o comportamentali2. Dal crescente numero di studi che coinvolgono animali, è emerso che variabili ambientali incontrollate tra cui l'interazione umana influenzano vari risultati nella ricerca biomedica3,4,5. Ciò è responsabile della significativa variabilità osservata tra esperimenti e laboratori di ricerca4,5, ponendo un avvertimento importante nella ricerca sugli animali.
Sono stati implementati vari approcci con l'obiettivo di limitare l'impatto dei fattori di stress ambientale e ridurre la reattività all'interazione umana. Ad esempio, per limitare l'impatto dei fattori di stress ambientale, la standardizzazione delle condizioni abitative e i sistemi abitativi automatizzati6,7 sono stati implementati in tutti i laboratori. Per quanto riguarda l'interazione con gli esseri umani, gli approcci comunemente usati per la manipolazione e il trasporto degli animali avevano poco riguardo per il disagio e lo stress degli animali. Ad esempio, raccogliere gli animali per la coda o usare la pinna8 aumenta l'ansia basale9,10,11,riduce l'esplorazione9,12 e contribuisce notevolmente alla variabilità interimpiale all'interno e tra gli studi13,14. Di conseguenza, sono stati sviluppati altri approcci, come la tecnica di gestione della tazza, che è applicabile a topi e ratti. In questo approccio, gli animali vengono "coppettati" fuori dalla loro gabbia e tenuti dagli sperimentatori con le mani che formano una tazza9,10,11. Un'altra utile alternativa alla movimentazione della coda prevede l'utilizzo di un tunnel in policarbonato per trasferire i topi9,10,15. Questo approccio elimina l'interazione diretta tra il mouse e lo sperimentatore. Sia l'approccio a coppa che a tunnel hanno mostrato efficacia nel ridurre i comportamenti ansiosi e la paura dello sperimentatore che possono essere esagerati da tecniche di manipolazione avverse, come il pick up / tail handling9,10.
Pertanto, prove crescenti dimostrano l'utilità di una corretta manipolazione del topo per ridurre la variabilità tra gli individui9,11e migliorare il benessere degli animali10. Tuttavia, le tecniche sopra menzionate devono ancora affrontare limitazioni. La tecnica di gestione della tazza è stata implementata con programmi che vanno da 10 giorni (10 sessioni in 2 settimane16)fino a 15 settimane17,che è una notevole quantità di tempo per il personale della struttura e gli sperimentatori. Inoltre, l'efficacia della manipolazione della tazza varia in base al ceppo9 e la manipolazione convenzionale della tazza in mani aperte può portare a topi ingenui o ceppi particolarmente saltellanti a saltare dalla mano9,18. La movimentazione delle gallerie si traduce in risultati più coerenti e generalmente più rapidi nella manipolazione19. I tunnel sono anche usati come arricchimento della gabbia domestica. Aiutano gli animali ad abituarsi a maneggiare rapidamente e forniscono i benefici aggiuntivi dell'arricchimento. La gestione delle gallerie, tuttavia, presenta limitazioni nel trasferimento di animali tra apparati. È interessante notare che Hurst e West9e Henderson et al.20 hanno dimostrato che l'uso di una manipolazione manuale delicata e breve per trasferire gli animali dal tunnel all'apparato non influisce sul loro fenotipo.
Per fornire un'alternativa ai metodi esistenti, con un'assuefazione realizzabile in un breve periodo di tempo, questo articolo descrive una nuova tecnica che espande la tecnica di movimentazione della tazza, quindi non richiede particolari attrezzature. Questo approccio utilizza pietre miliari per valutare il livello di comfort che i topi hanno con il processo di manipolazione. Mostra efficacia nel ridurre la reattività e lo stress del topo (a livello comportamentale e ormonale), facilita la manipolazione di routine e contribuisce a ridurre la variabilità tra gli animali. I dettagli di questa tecnica sono forniti qui e la sua efficacia nel ridurre i comportamenti simili all'ansia, migliorare l'interazione con gli sperimentatori e limitare il rilascio dell'ormone dello stress periferico (corticosterone) sono dimostrati in due studi separati (topi maschi e femmine), rispetto alla gestione del tunnel (controllo positivo) e alle tecniche di manipolazione della coda (controllo negativo).

<table><tbody><tr><td>23 G x 1 pollice Ago ipodermico sterile BD PrecisionGlide per uso generale. Tipo di parete regolare e smusso regolare.</td><td>BD</td><td>2546-CABD305145</td><td>Aghi per raccolta sangue</td></tr><tr><td>BD Vacutainer&reg; Provette EDTA per la raccolta del sangue venoso con lavanda BD Hemagard chiusura, 2,0 ml (13x75 mm), 100/conf.</td><td>BD</td><td>367841</td><td>Provette rivestite in EDTA per il prelievo del sangue</td></tr><tr><td>Bed' o pannocchie &frac14; &rdquo; Lettiera per animali da laboratorio in pannocchie di mais</td><td>Bed-O-Cobs</td><td>BEDO1/4</td><td>Nuova lettiera per l'alimentazione soppressa</td></tr><tr><td>della novità Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>Centrifuge 5424 R</td><td>Per la centrifugazione del sangue.</td></tr><tr><td>Corticosterone ELISA Kit</td><td>Arbor Assays</td><td>K003-H1W</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera digitale</td><td>Panasonic</td><td>HC-V770</td><td>Fotocamera per registrare le interazioni EPM/sperimentatore</td></tr><tr><td>Labirinto Elevated Plus Home</td><td>Made</td><td>n/a</td><td>Labirinto personalizzato composto da quattro bracci in plexiglas nero (due bracci aperti (29 cm di lunghezza per 7 cm di larghezza) e due bracci chiusi (29 cm di lunghezza x 7 cm di larghezza con pareti alte 16 cm)) che formano una forma a croce con i due bracci aperti uno di fronte all'altro tenuto a 55 cm dal pavimento</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Medstore House Brand</td><td>39753-P016-EA95</td><td>Diluire al 70% con acqua distillata, per la pulizia</td></tr><tr><td>Ethovision XT 15</td><td>Noldus</td><td>n/a</td><td>Software automatizzato per il monitoraggio degli animali</td></tr><tr><td>Laboratorio Dieta per roditori</td><td>LabDiet Dieta</td> per <td>roditori 5001</td><td>Scheda di memoria standard per roditori</td></tr><tr><td></td><td>Kingstone Technology</td><td>SDA3/64GB</td><td>Per la registrazione video Camera</td></tr><tr><td>di alimentazione soppressa novità</td><td>fatta in casa</td><td>n/a</td><td>Camera di prova personalizzata in plexiglass con pavimenti e pareti trasparenti lunghi 62 cm, larghi 31 cm e alti 40 cm.</td></tr><tr><td>Tubi in Parlycarbonate</td><td>Home Made</td><td>n/a</td><td>13 cm di lunghezza e 5 cm di diametro</td></tr><tr><td>Purina Yesterday' s news biancheria da letto per giornali riciclati</td><td>Purina</td><td>n/a</td><td>Standard Bedding</td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>Biotek</td><td>Epoch Microplate Reader</td><td></td></tr></tbody></table>

tecniche di manipolazione per ridurre lo stress nei topi

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Gli animali da laboratorio sono sottoposti a molteplici manipolazioni da parte di scienziati o fornitori di assistenza agli animali. Lo stress che questo provoca può avere effetti profondi sul benessere degli animali e può anche essere un fattore confondente per variabili sperimentali come le misure di ansia. Nel corso degli anni, sono state sviluppate tecniche di manipolazione che riducono al minimo lo stress correlato alla manipolazione con particolare attenzione ai ratti e poca attenzione ai topi. Tuttavia, è stato dimostrato che i topi possono essere bituati a manipolazioni utilizzando tecniche di manipolazione. Abituare i topi alla manipolazione riduce lo stress, facilita la manipolazione di routine, migliora il benessere degli animali, diminuisce la variabilità dei dati e migliora l'affidabilità sperimentale. Nonostante gli effetti benefici della manipolazione, l'approccio tail-pick up, che è particolarmente stressante, è ancora ampiamente utilizzato. Questo documento fornisce una descrizione dettagliata e la dimostrazione di una tecnica di manipolazione del topo di nuova concezione intesa a ridurre al minimo lo stress sperimentato dall'animale durante l'interazione umana. Questa tecnica manuale viene eseguita nell'arco di 3 giorni (tecnica di manipolazione 3D) e si concentra sulla capacità dell'animale di abituarsi allo sperimentatore. Questo studio mostra anche l'effetto delle tecniche di gestione del tunnel precedentemente stabilite (utilizzando un tunnel in policarbonato) e la tecnica di raccolta della coda. Specificamente studiati sono i loro effetti sui comportamenti ansiosi, utilizzando test comportamentali (Elevated-Plus Maze e Novelty Suppressed Feeding), interazione volontaria con gli sperimentatori e misurazione fisiologica (livelli di corticosterone). La tecnica di gestione 3D e la tecnica di gestione del tunnel hanno ridotto i fenotipi simili all'ansia. Nel primo esperimento, utilizzando topi maschi di 6 mesi, la tecnica di gestione 3D ha migliorato significativamente l'interazione dello sperimentatore. Nel secondo esperimento, utilizzando una femmina di 2,5 mesi, ha ridotto i livelli di corticosterone. Pertanto, la gestione 3D è un approccio utile in scenari in cui l'interazione con lo sperimentatore è richiesta o preferita, o in cui la gestione del tunnel potrebbe non essere possibile durante l'esperimento.

Due studi separati sono stati condotti con topi C57BL/6. I #1 dello studio includevano maschi di 6 mesi e i #2 dello studio includevano femmine di 2,5 mesi (N = 36 / studio) dei Jackson Laboratories (Cat #000664). I topi sono arrivati nella struttura all'età di 2 mesi. Mentre le femmine #2 sono state maneggiate e testate due settimane dopo l'arrivo, i maschi #1 dello studio sono stati maneggiati e testati solo all'età di 6 mesi (ritardo dovuto alla chiusura della pandemia globale). Durante questo periodo, un topo dello S...

Questo documento descrive una tecnica di manipolazione nei topi, la tecnica di manipolazione 3D, che facilita la manipolazione di routine riducendo i comportamenti simili all'ansia e presenta dettagli su due tecniche correlate esistenti (gestione del tunnel e della coda).

Tecniche di manipolazione per ridurre lo stress nei topi

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Mi chiamo Dr.Thomas Prevot. Sono uno scienziato del Center for Addiction and Mental Health, o CAMH, e un assistente professore presso l'Università di Toronto nel Dipartimento di Psichiatria. Il mio gruppo ha un particolare interesse a ridurre l'ansia e la reattività di base nei topi al fine di ridurre la variabilità dei dati e migliorare il benessere degli animali.I topi hanno dimostrato di essere risorse inestimabili nella scienza di base e nella ricerca preclinica, tuttavia, pochissimi laboratori in tutto il mondo controllano l'ansia di base e la reattività dei loro animali da laboratorio, complicando quindi la replicabilità dei dati tra i laboratori. Un importante fattore che contribuisce all'ansia di base sono le variabili ambientali incontrollate, come le condizioni abitative, l'arricchimento ambientale e l'esposizione allo stress. Mentre la standardizzazione delle condizioni abitative e l'arricchimento hanno contribuito a migliorare questo problema, l'esposizione allo stress durante l'interazione con gli sperimentatori è ancora in gran parte non affrontata nei topi.La manipolazione della coda, il processo di sollevamento del mouse per la coda, è ancora la tecnica di manipolazione del mouse ampiamente utilizzata, nonostante sia particolarmente stressante. Anche se sono emerse alternative alla movimentazione della coda, tra cui la gestione del tunnel e la movimentazione della coppa. L'adozione di queste tecniche è stata lenta.Qui descriviamo una nuova tecnica, simile alla gestione della tazza, che può essere implementata con un minimo di tre giorni di assuefazione o manipolazione 3D. Aumentando gradualmente il grado e la complessità dell'interazione e progredendo in risposta alla reattività del mouse a determinate pietre miliari di manipolazione, possiamo ridurre lo stress e facilitare la manipolazione di routine. Valutiamo l'efficacia della manipolazione 3D nei topi nei test comportamentali, valutando i comportamenti simili all'ansia, l'interazione con gli sperimentatori e l'ormone dello stress periferico, il corticosterone, i livelli e forniamo un confronto con le tecniche di gestione del tunnel e della coda.Aprire delicatamente la gabbia e posizionare il coperchio sul lato. Introduci la tua mano guantata nella gabbia di casa prima di provare a prendere il mouse. Lasciare che il mouse si abitui alla presenza della mano per circa 30 secondi.Quindi prova a prendere il mouse in mani a coppa. Se il mouse non può essere facilmente raccolto, metti insieme entrambe le mani e usale per guidare il mouse verso l'angolo della gabbia. Quindi usa entrambe le mani per prendere il mouse.Una volta rimosso il mouse dalla gabbia, tieni le mani il più piatte e aperte possibile. Consenti al mouse di esplorare liberamente. Ciò fornisce una piattaforma piatta su cui il mouse può calpestare e limita il rischio di mordere.Tieni la mano aperta e piatta, con il palmo in alto. Posiziona l'altra mano accanto al mouse e consenti al mouse di muoversi liberamente da una mano all'altra, senza alcun ritegno. Dopo un minuto di manipolazione con le mani piatte, rilassa il palmo della mano e fissa leggermente il mouse in testa, prima di far rotolare delicatamente il mouse tra le mani.Continua per quattro minuti, alternando il delicato rotolamento tra le mani e l'esplorazione libera delle tue mani aperte. Durante gli ultimi due minuti, eseguire un test di rifugio. Lascia che il mouse si muova sul bordo della tua mano e unisci le due mani.Molto lentamente, coppe le mani in modo che il mouse si inserisca all'interno di un rifugio formato dalle mani. Assicurati di lasciare un'apertura, in modo che il mouse possa scappare se necessario. Cerca di tenere il mouse nel rifugio da cinque a 10 secondi senza alcun ritegno.Ripeti il test del rifugio tre o quattro volte negli ultimi due minuti. Non affrettare il processo. Se il mouse sembra stressato dall'essere confinato all'interno della mano, continuare a rotolare tra le mani e l'esplorazione libera per 30 secondi, quindi riprovare il test del rifugio.Lascia l'esplorazione libera nelle mani per 30 secondi, quindi sostituisci delicatamente il mouse nella sua gabbia. Pulire il piano di lavoro di eventuali feci e urina con etanolo al 70% o una soluzione detergente appropriata. Pulire i guanti di feci e urina se necessario e, quando si passa a una nuova gabbia, sciacquare i guanti con etanolo al 70% o cambiare i guanti.Entro il secondo giorno, dovrebbe già essere fattibile rimuovere il topo dalla gabbia in mani a coppa. Se il mouse sembra reattivo, eseguire la mano piatta e l'esplorazione libera delle teste aperte per 30 secondi a un minuto. Altrimenti, procedere al rotolo tra le mani e al test del rifugio.Esegui il ruolo tra le mani e i passi del rifugio dal primo giorno per due o tre minuti. Eseguire ogni passaggio più volte. Se il mouse sembra a suo agio nel test del rifugio, prova ad accarezzare il mouse sulla schiena e sulla testa.Se il mouse non tenta di fuggire dal contatto, procedere al colpo del naso. Toccare delicatamente il mouse sulla punta del muso. Se non morde o tenta di girare la testa, questo è un buon segno di assuefazione.Per il petting e il nose poke test, non affrettare il processo. Se il mouse appare stressato dall'essere confinato all'interno delle mani, o non vuole essere toccato, continuare con il rotolamento tra le mani per alcuni minuti e poi riprovare. Interrompere questa sessione dopo circa tre minuti di manipolazione, se l'animale reagisce bene al rifugio, accarezzando la testa e il naso.E se l'animale sembra essere disposto a esplorare le tue mani senza alcun segno di stress, come tentativi di fuga, saltare dalle mani o evitare il contatto con le mani. Se il topo continua a mostrare segni di stress o non sta reagendo bene al test del rifugio o al test del naso poke, continuare la sessione fino a raggiungere i cinque minuti, come nel primo giorno. Sostituire il mouse nella sua gabbia e pulire il piano di lavoro e i guanti.Il terzo giorno, procedi attraverso gli stessi passaggi quel secondo giorno. Prendi il mouse nel palmo della mano. Trasferire il mouse tra le mani.Confinare delicatamente il mouse in mani a coppa. Se il mouse risponde bene a questi passaggi, prova ad accarezzare il mouse e a provare il test del naso. Il terzo giorno, il mouse dovrebbe essere abbastanza rilassato da sedersi nel palmo della mano senza allontanarsi, e dovresti essere in grado di procedere attraverso questi passaggi per circa due o tre minuti.Sostituire il mouse nella sua gabbia e pulire il piano di lavoro e i guanti. Il terzo giorno. se l'animale sarà trattenuto per scopi sperimentali, come il gavage orale o l'iniezione intra peritoneale, i topi possono essere sottoposti al test del pizzico del collo.Afferra il mouse per la nuca, tra il pollice e l'indice e solleva il mouse cinque centimetri sopra la mano per due o tre secondi. Questa è normalmente una posizione scomoda per i topi adulti, e se i topi rimangono quasi immobili, sono ben dipendenti alla manipolazione e saranno facili da trattenere per le iniezioni. Rimettete il mouse sulla mano piatta e permettetelo di esplorare liberamente per un minuto.Gli animali sono stati testati per la loro volontà di interagire volontariamente con lo sperimentatore e la facilità di manipolazione in un contesto sperimentale. Nello studio uno, i topi gestiti dalla manipolazione del tubo o dalla manipolazione 3D avevano meno probabilità di fuggire quando uno sperimentatore tentava di raccogliere un topo. Inoltre, i topi di studio gestiti utilizzando la tecnica 3D hanno trascorso più tempo nello stesso quadrante della mano dello sperimentatore, indicando una maggiore volontà di interagire con lo sperimentatore.Nello studio due, i topi gestiti da una manipolazione del tubo o dalla manipolazione 3D avevano meno probabilità di fuggire quando uno sperimentatore tentava di raccogliere il topo rispetto ai topi con la coda. Tuttavia, nello studio due, la tecnica di manipolazione non ha influenzato in modo significativo il tempo trascorso nello stesso quadrante della mano dello sperimentatore. L'effetto del 3D e della gestione del tunnel è stato confrontato con la gestione della coda in due test di comportamenti simili all'ansia, il nuovo test di alimentazione soppressa e il labirinto plus elevato.Nello studio uno, nel nuovo test di alimentazione soppressa, c'era una tendenza a ridurre l'ansia nei topi gestiti a tunnel e in 3D. Nel labirinto più elevato, non c'era alcun effetto complessivo della manipolazione. Quando riassunto come un punteggio Z, c'è stata una significativa riduzione dell'ansia complessiva nei topi gestiti a tunnel e in 3D rispetto ai topi con gestione della coda.Nello studio due, non c'è stato alcun effetto complessivo della manipolazione sulle misure di ansia nel test di alimentazione soppresso della novità o nel labirinto plus elevato. Quando riassunto come un punteggio Z, la tecnica di gestione non ha avuto alcun effetto complessivo sull'ansia. Come misura fisiologica dello stress, abbiamo raccolto il siero dalla coda gestita, 3D maneggiata e tunnel gestito topi 15 minuti dopo una breve sessione di manipolazione e testato i livelli di corticosterone.Non c'è stato alcun effetto complessivo della manipolazione nello studio uno. Nello studio due, la manipolazione 3D ha ridotto significativamente i livelli di corticosterone rispetto alla manipolazione della coda. Sulla base delle osservazioni che le tecniche di manipolazione nei topi non sono ampiamente riconosciute dalla comunità scientifica, abbiamo descritto l'uso di una nuova tecnica di manipolazione.In entrambi gli studi presentati, la gestione del tunnel e del 3D ha ridotto i tentativi dei topi di fuggire quando vengono prelevati, facilitando potenzialmente la manipolazione di routine. Inoltre, nei topi maschi più anziani, questa tecnica ha ridotto i comportamenti ansiosi e aumentato l'interazione con lo sperimentatore. Nelle giovani femmine.questa tecnica ha ridotto i livelli di corticosterone osservati in risposta alla manipolazione. L'implementazione di questa tecnica ha il potenziale per ridurre la variabilità dei dati, migliorare il benessere degli animali e facilitare la gestione di routine.

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