Sviluppo di una striscia immunocromatografica a flusso laterale per la rilevazione rapida e quantitativa di composti di piccole molecole

La procedura descrive la preparazione dell'oro colloidale e l'assemblaggio delle strisce immunocromatografiche. In primo luogo, l'acido clorourico e il citrato di sodio sono stati utilizzati per la sintesi dell'oro colloidale. Il citrato di sodio è stato aggiunto alla soluzione di acido cloroaurico e bollito per ottenere oro colloidale con dimensioni delle particelle appropriate.

Sintesi, il coniugato anticorpale dell'oro colloidale. Dopo la centrifugazione, le particelle di oro colloidale sono state sciolte in una soluzione appropriata e quindi risuscilate per ottenere una soluzione di oro colloidale. Immergere la membrana in fibra di vetro nella coniugazione per preparare il tampone coniugato.

Eliminare l'antigene artificiale e gli anticorpi secondari sulla membrana NC come linea T e linea C. Collegare rispettivamente la membrana NC, la membrana assorbente, il tampone campione e la membrana in fibra di vetro nel pannelli in PVC. Tagliare il cartone assemblato in una striscia larga 3,5 millimetri.

Confezionare rispettivamente la soluzione acida di cloruro d'oro a piena percentuale e la soluzione di citrato di sodio all'1%. Accendere l'agitatore magnetico e posizionare il pallone su un mixer. Aggiungere 120 millilitri di acqua distillata in un pallone a fondo tondo e riscaldarlo a ebollizione su un agitatore magnetico termostatico.

Continuare a bollire e aggiungere rapidamente 0,5 millilitri di acido cloroaurico a piena percentuale e cinque millilitri di citrato di sodio all'1%. Continuare a riscaldare per cinque o 10 minuti. Osservare il colore della soluzione che cambia dal giallo pallido al rosso vino.

Spegnere l'alimentazione del miscelatore magnetico termostatico, raffreddare a temperatura ambiente e posizionare la miscela in una bottiglia pulita. Conservare a quattro gradi centigradi. Le nanoparticelle d'oro mostrano l'effetto Tyndall.

Le dimensioni e la morfologia delle nanoparticelle d'oro sono state determinate mediante spettroscopia ultravioletta e microscopio elettronico a trasmissione. Aggiungere 100 microlitri di soluzione di cloruro di sodio a otto tubi. Regolare le soluzioni di oro colloidale a pH da 5 a 12 utilizzando 0,1 mol per litro di carbonato di potassio.

Aggiungere 100 microlitri di soluzione di oro colloidale a otto tubi contenenti cloruro di sodio. Riposare per post diversi minuti dopo la miscelazione. Osservare il cambiamento di colore di ogni soluzione di tubo e registrare il tubo che rimane rosso.

Scegli il valore del pH con la quantità più bassa di carbonato di potassio aggiunto e un colore di soluzione stabile come valore di pH ottimale per la preparazione del coniugato. Adattato lo stesso approccio. Osservato il cambiamento di colore e registrare il tubo che rimane rosso.

Scegli la quantità di anticorpi con la concentrazione più bassa di mAB e un colore di soluzione stabile come quantità ottimale di mAB. Prendi una soluzione di oro colloidale da 10 millilitri e usa 0,1 mol per litro di carbonato di potassio per regolare la soluzione al valore di pH ottimale. Aggiungere lentamente SSd mAB con la concentrazione appropriata e agitare a temperatura ambiente per 30 minuti.

Centrifugare la miscela a 2000 RPM per 20 minuti a quattro gradi centigradi. Rimuovere il precipitato contenente impurità dell'oro colloidale precipitato. Centrifugare la miscela a 10.000 giri/min per 40 minuti.

Scartare il surnatante. Il precipitato è coniugato mAB in oro colloidale. Aggiungere l'acido cloridrico Tris, BSA, Tween 20 e PEG 20.000, quindi frullare bene per preparare il tampone di risuspensione.

Aggiungere il buffer di risuspensione e dissociare il precipitato. La striscia di materiale della membrana, compresa la membrana di cellulosa di vetro, la membrana di cellulosa poliestere e il cartone in PVC. Il materiale della membrana, ha bisogno di tracciare e valutare al microscopio sterile per sbarazzarsi della disomogeneità.

Innanzitutto, posizionare la membrana NC sul pannelli in PVC a due centimetri dal bordo dell'estremità della sezione della scheda. In secondo luogo, far cadere due milligrammi per millilitro SSd-BSA sulla membrana NC a due centimetri dal bordo superiore come linea di prova e far cadere 1,5 milligrammi per millilitro oro anti-mouse IgG sulla membrana NC a due centimetri dal bordo inferiore come linea di controllo. Fissare il pad assorbente al foglio di PVC sopra la membrana NC e sovrapporsi alla membrana NC di due millimetri.

Tagliare la membrana in fibra di vetro a cinque centimetri di lunghezza e due centimetri di larghezza e utilizzare come cuscinetto coniugato. Immergere la membrana in fibra di vetro nella soluzione coniugata mAB di nanoparticelle d'oro. Immergere per un po 'per rendere le nanoparticelle d'oro mAB assorbimento.

Asciugare l'ampia membrana nell'incubatore a 37 gradi. Incollare il tampone coniugato pretrattato sotto la membrana NC e la lunghezza sovrapposta con la membrana NC dovrebbe essere di 0,1 centimetri. Tagliare la membrana Fusion3 in 1,8 centimetri di lunghezza e 3,5 centimetri di larghezza e utilizzare come tampone di campionamento.

Quindi, posizionare il tampone campione sulla scheda in PVC e sovrapporsi al tampone coniugato di due millimetri. Tagliare, assemblare il cartone in strisce larghe 3,5 millimetri utilizzando una macchina da taglio e compattare utilizzando un sistema di laminazione batch. Infine, posizionare le strisce reattive nel guscio.

Sigillarli in un sacchetto di alluminio contenente essiccante e conservare al di fuori della luce. L'ICS è ora assemblato. Rilasciare 50 microlitri di soluzione campione sul foro del campione per osservare il processo di cromatografia.

Quindi, analizzare le strisce utilizzando un lettore di strisce portatile. La macchina può fornire il rapporto tra la linea di prova e la linea di controllo. Valutare la specificità, la sensibilità, la ripetibilità e la stabilità del test ICS.

Sono state lette le soluzioni di oro colloidale preparate. Le analisi al microscopio elettronico a trasmissione hanno rivelato che le particelle erano di forma poliedrica e distribuite uniformemente con un diametro medio di 14 nanometri. Le immagini al microscopio elettronico a trasmissione ad alta risoluzione hanno mostrato un modello di frangia continua con una spaziatura di 0,117 nanometri di nanoparticelle d'oro.

L'assorbimento visibile ultravioletto ha indicato che è possibile ottenere diverse dimensioni di particelle d'oro colloidale modificando la proporzione di citrato di sodio e acido cloroaurico. Nell'esperimento quantitativo, le strisce con i risultati dei test di saikosaponin D sono state scansionate utilizzando un lettore ICS portatile. Abbiamo calcolato una curva standard mettendo in relazione le non concentrazioni di saikosaponina D con il corrispondente assorbimento a ciascuna concentrazione.

Dopo l'indagine metodologica, il metodo può essere applicato per la rilevazione quantitativa e semi-qualitativa di composti di piccole molecole. Questa procedura include la preparazione dell'oro colloidale, la sintesi delle nanoparticelle d'oro coniugate mAB, l'assemblaggio della striscia e l'indagine metodologica. Questo lavoro fornisce un protocollo dettagliato per lo sviluppo di strisce immunocromatografiche da utilizzare nella rilevazione rapida e quantitativa di piccole molecole.

Dopo aver visto questo video spero che tu abbia una buona comprensione per la preparazione della striscia immunocromatografica. Grazie per aver guardato e buona fortuna per i tuoi esperimenti.