Stimolazione durale e test di von Frey periorbitale nei topi come modello preclinico di cefalea

Quali eventi si verificano all'interno delle meningi che contribuiscono al mal di testa in assenza di lesioni tissutali? A differenza dell'uso precedente di modelli di stimolazione durale nei ratti, consente l'uso dell'ampio catalogo di topi geneticamente modificati. La lotta primaria sarebbe localizzare l'intersezione delle suture lambdoidali e sagittali palpando il cranio con l'iniettore.

Per iniziare, creare gli infusori del mouse modificando una cannula interna e un infusore disponibili in commercio con un cappuccio in plastica di silice fusa che è regolabile e si inserisce in una cannula di guida calibro 28. Utilizzare una pinza per regolare il tappo in plastica silice fusa sull'infusore senza piegare l'infusore. Regolare l'infusore su una lunghezza di 6 millimetri misurata dalla punta dell'infusore al bordo del cappuccio in plastica silicea.

Eseguire iniezioni pilota per altri ceppi di topo e regolare la lunghezza per iniettare con precisione la dura madre. Quindi, collegare l'estremità lunga dell'infusore a tubi di plastica di otto pollici o più per contenere cinque microlitri volume. Inserire il tubo garantendo la copertura completa della parte metallica e della parte superiore del tappo di plastica situato sull'infusore per evitare che le bolle d'aria si accumulino nella linea.

Quindi, riempire la microsiringa e fissare l'altra estremità del tubo a una microsiringa di vetro da 10 microlitri, assicurando una tenuta ermetica sulla parte metallica della siringa. Quindi, riempire la siringa con cinque microlitri di PBS o fluido interstiziale sintetico o altri veicoli di scelta per prevenire la formazione di bolle d'aria. Se necessario, inondare la linea con il veicolo per dissipare le bolle preformate.

In alternativa, pre-riempire la siringa e, dopo il collegamento, spingere il fluido attraverso la linea collegata. Una volta che la linea riempita con il veicolo funziona in modo efficiente, caricare cinque microlitri della soluzione nella siringa Hamilton. Una volta che il topo è completamente anestetizzato, applicare un unguento oftalmico sterile sugli occhi e radersi la testa dell'animale, quindi disinfettare la pelle con iodio povidone ed etanolo.

Fissare la testa dell'animale con una mano e tenere l'infusore con la siringa caricata di droga nell'altra. Quindi, utilizzando un infusore, sondare attentamente, individuare e verificare la giunzione delle suture sagittale e lambdoidale sul cranio del topo. Una volta posizionata la sutura e posizionato l'infusore, muovere lentamente e delicatamente l'infusore avanti e indietro fino a quando l'infusore penetra attraverso la pelle e scende nella giunzione fino al tappo di plastica, garantendo l'inserimento dell'intera punta dell'infusore da 6 millimetri nella giunzione.

Quindi, spingere lentamente lo stantuffo della siringa per espellere i cinque microlitri di fluido nella dura madre. Il giorno del test, dopo l'acclimatazione nella stanza, rimuovere un mouse insieme alla tazza dalla rispettiva camera. Mantenere la tazza in posizione orizzontale per un peso corporeo uniformemente distribuito, poiché la distribuzione ineguale del peso può alterare o impedire la risposta degli animali.

Posizionare la tazza con il mouse su un cuscinetto assorbente tenuto sul tavolo sotto il rack di prova. Quindi, per il test di von Frey periorbitale, posizionare il filamento di von Frey da 07 grammi al centro del viso tra gli occhi e applicare una pressione sufficiente sul filamento da far piegare i capelli di von Frey in una formazione a forma di C. Mantenere il contatto con il filamento per circa tre-cinque secondi o fino a quando il mouse non striscia via il filamento usando la testa o le zampe.

Per seguire il metodo Dixon up-down, applicare il filamento successivo di peso inferiore se il mouse risponde al filamento, altrimenti applicare un filamento di peso superiore. La procedura è stata utilizzata per esaminare gli effetti della prolattina durale sull'ipersensibilità facciale evocata meccanicamente. I risultati dello studio hanno dimostrato una riduzione significativa delle soglie di astinenza facciale nei topi ICR femmina in risposta a cinque microgrammi di prolattina durale.

Una dose dieci volte inferiore di 5 microgrammi di prolattina ha anche mostrato soglie di astinenza facciale ridotte, simili a una dose elevata di prolattina. Le iniezioni di prolattina hanno prodotto comportamenti spontanei legati al dolore, che sono stati valutati tramite smorfia. Dural 5 microgrammi di prolattina hanno causato una smorfia significativa nei topi femmina e hanno ulteriormente dimostrato un chiaro ruolo della prolattina durale nei comportamenti femminili simili all'emicrania Test comportamentali utilizzando filamenti di von Frey o smorfie facciali per determinare se lo stimolo, in assenza di lesioni, provoca una risposta al mal di testa.

Questa tecnica può ora essere utilizzata per studiare i meccanismi infiammatori nelle meningi senza preoccuparsi di avvertimenti causati da craniotomie e dalla successiva infiammazione.