Name: Induzione e valutazione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Impara a indurre e valutare le discinesie da levodopa in un modello di ratto con malattia di Parkinson. Questo metodo quantifica intensità e frequenza dei movimenti anomali per testare terapie efficaci.

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Vogliamo riconoscere le lotte di tutti coloro che hanno il morbo di Parkinson e la forza e la resilienza che mostrano ogni giorno, in particolare l'amato padre di KSC, Mark Steece. Il lavoro qui rappresentato è stato sostenuto dal National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NS090107, NS110398) e dal Parkinson Disease Foundation International Research Grant Program, ora Parkinson Foundation. Vorremmo anche ringraziare Molly VanderWerp per la sua eccellente assistenza editoriale.

Gli animali qui presentati sono stati mantenuti e trattati nel rispetto delle linee guida istituzionali. Tutte le procedure per gli animali sono state approvate dal Michigan State University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) in conformità con le normative federali e statali.
1. Conferma senza farmaci dello stato della lesione 6-OHDA
<ol><li>Prova di sospensione della coda posturale 11,12,13 NOTA: Valutare lo stato della lesione almeno 1 settimana dopo l'induzione della lesione 6-OHDA (vedere 9,10,35 per i dettagli sulla lesione) in soggetti sperimentali (ad esempio, maschio o femmina, ratti adulti Sprague Dawley o Fisher 344).<ol>
<li>Sospendere il ratto a circa 6 cm sopra la sua gabbia, tenendo saldamente alla base della coda, per ~ 5 s.</li>
		<li>Registrare la direzione della contorsione del corpo come + per un animale lesionato con successo che torce il controlaterale sul lato lesionato e - per mancanza di torsione o torsione in entrambe le direzioni.</li>
		<li>NOTA: questi test sono facoltativi ma consigliati. Vedere 14,15,16,17 per ulteriori opzioni/variazioni di test senza droga.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Test di trascinamento della regolazione del passo (adattato da16) NOTA: Valutare lo stato della lesione almeno 1 settimana dopo l'induzione unilaterale della lesione 6-OHDA in soggetti sperimentali (ad es. ratti maschi o femmine, Sprague Dawley adulti o Fisher 344).<ol>
<li>Tenere il topo per la base della coda, sollevando i piedi posteriori dalla superficie di ~ 6 cm; trascinare all'indietro su una superficie piatta, liscia ma non scivolosa, ~ 75 cm, oltre 5-10 s.</li>
		<li>Osservare e registrare il numero di movimenti di regolazione del tocco/passo di ciascuna zampa anteriore su tre test ripetuti.</li>
		<li>Segna il soggetto come + per una lesione unilaterale di successo quando si osservano 0-2 rubinetti di zampa anteriore sul lato lesionato, insieme a un rapido tocco (~ 10 rubinetti) dall'ipsilaterale della zampa anteriore al lato lesionato (ad esempio, gli animali lesionati unilateralmente sul lato sinistro mostrano deficit di picchiettamento (0-2 rubinetti) con la zampa anteriore destra controlaterale).</li>
		<li>Al contrario, segnare un tocco da moderato a rapido (5-10 tocchi) da entrambe le zampe anteriori come - per indicare uno stato di lesione incompleto o sconosciuto. NOTA: un animale ansioso può mostrare una rapida regolazione del tapping / step anche se lesionato con successo. Se questo è sospettato, rimetti il topo nella loro gabbia di casa e ri-testa ≥30 minuti dopo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Preparazione dei reagenti e delle forniture
<ol><li>Determinare L-3,4-diidrossifenilalanina estere metilico cloridrato (levodopa o L-DOPA) e benserazide cloridrato, una dose periferica di inibitore della decarbossilasi (vedere Tabella dei materiali), frequenza di valutazione e tempistica sperimentale appropriata per la domanda sperimentale 12,18,19,20 (Figura 1). NOTA: Le domande sperimentali possono essere poste per cercare qualsiasi numero di domande che vanno dal chiedere se una terapia specifica potrebbe ridurre il LID esistente o prevenire l'induzione di LID. Possono anche esplorare se l'efficacia terapeutica dipende dalla dose di levodopa o se l'espressione della LID e / o l'efficacia terapeutica varia a seconda del sesso, della specie e dell'età del soggetto.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig1v3.jpg"> Figura 1: Esempio di tempistica del trattamento. Esempio di L-DOPA dose-escalation timeline di 12 settimane di lunghezza totale, con 8 settimane di iniezioni di L-DOPA a partire da 3 settimane dopo la lesione 6-OHDA e 4 settimane dopo il trattamento sperimentale. In questo esempio, la L-DOPA viene iniettata per via sottocutanea 5 volte a settimana (dal lunedì al venerdì) all'incirca alla stessa ora ogni giorno, per 2 settimane a ciascuna dose di L-DOPA prescritta (3, 6, 9 e 12 mg / kg). Le valutazioni LID comportamentali si svolgono nei giorni 1, 6 e 10 di ciascun livello di dosaggio di L-DOPA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<ol start="2"><li>Pesare i ratti settimanalmente per calcolare la quantità di farmaco appropriata in base alle variazioni di peso in corso durante lo studio. NOTA: A causa dell'aumento dell'attività nei ratti LID +, esiste un potenziale di perdita di peso con trattamenti L-DOPA a lungo termine. Se si verifica una perdita di peso, fornire ai ratti prelibatezze nutrizionalmente complete e altamente appetibili (vedere tabella dei materiali) dopo le iniezioni di L-DOPA.</li>
	<li>Calcolare la quantità di L-DOPA e benserazide necessaria per ogni concentrazione settimanale, soppesando le aliquote liofilizzate per ogni giorno di iniezione e conservando in combinazione per 1-2 settimane a -20 °C in flaconcini di vetro ambrato fino al giorno del trattamento. NOTA: La dose target è di 12 mg/kg o 12 mg di L-DOPA/1000 g di peso corporeo. Esempi di calcoli per determinare la quantità di L-DOPA e soluzione salina necessaria per ogni giorno della settimana utilizzando 12 mg di L-DOPA/kg di peso corporeo ad un volume di iniezione di 1 cc/kg di peso del ratto sono riportati nel fascicolo supplementare 1.</li>
</ol>3. Allestimento della stanza e della gabbia
<ol><li>Il primo giorno di trattamento con L-DOPA 3-4 settimane dopo l'intervento chirurgico alla lesione 6-OHDA, trasferire i ratti in un singolo alloggiamento, incluso l'arricchimento approvato dalla IACUC.</li>
	<li>Mantenere in un unico alloggio durante lo studio per evitare interferenze tra pari con le valutazioni comportamentali.</li>
	<li>Nei giorni di valutazione LID, posizionare le gabbie domestiche su una griglia di acciaio, ruotata con un angolo di circa 45 ° per una visione ottimale del ratto (Figura 2A). Capovolgere i tag di identificazione (Figura 2B) verso l'alto e rimuovere bottiglie d'acqua, rack di cibo e tutti i tipi di arricchimento nella gabbia (Figura 2C) per evitare interferenze con le valutazioni comportamentali.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62970/62970fig02.jpg"> Figura 2: Esempio della gabbia predisposta per le classificazioni LID di esperimenti su ratti su larga scala. (A) È possibile impostare gabbie multiple per la classificazione LID utilizzando grandi scaffalature metalliche che consentono una visione ottimale di ciascun animale. Le gabbie dovrebbero essere distribuite con un angolo di 45 ° con carte d'identità capovolte verso l'alto (B), cibo, bottiglie d'acqua, materiali di nidificazione e altri arricchimenti rimossi per limitare l'oscurità visiva del ratto e le distrazioni al ratto durante l'esame dei comportamenti discinetici (C). Le scaffalature metalliche devono essere a pochi metri di distanza da qualsiasi parete per consentire al valutatore di esaminare il ratto nella parte anteriore o posteriore della gabbia, se necessario. È essenziale etichettare gli apparecchi di arricchimento (ad esempio, le case di ritiro dei ratti rossi C) con i singoli ID degli animali per sostituirli nella stessa gabbia da cui provengono. Ciò è particolarmente importante quando si utilizzano animali di sesso diverso per non aumentare lo stress ai soggetti sperimentali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62970/62970fig02large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
4. Iniezioni di levodopa e valutazione della discinesia
<ol><li>Iniezioni sottocutanee di L-DOPA21,22<ol>
<li>Immediatamente prima dell'iniezione giornaliera di L-DOPA, aggiungere il volume appropriato di soluzione salina sterile alla miscela di L-DOPA liofilizzata e benserazide pre-pesata nel flaconcino ambrato e agitare bene per 10 s (fase 2.3). NOTA: il volume target di iniezione è di 1 mL/1000 g di peso corporeo (con 12 mg di L-DOPA per mL). Il volume della soluzione salina sterile dipenderà dal numero di animali per studio.</li>
		<li>Riempire le singole siringhe (ad esempio, 1,0 o 0,5 mL con ago da 26 G) con il volume richiesto per ciascun animale (1 ml/kg di peso del ratto) ed etichettare ciascuna siringa con l'identificazione individuale dell'animale. NOTA: Tenere le siringhe riempite al riparo dalla luce in sacchetti sterili fino al momento dell'iniezione. La L-DOPA si ossida rapidamente in presenza di ossigeno e luce in ambiente acquoso 23,24,25,26.</li>
		<li>Portare la prima gabbia al banco di iniezione.</li>
		<li>Rimuovere il ratto dalla sua gabbia e posizionarlo sulla superficie di iniezione.</li>
		<li>Trattenere delicatamente la testa e le spalle contro la superficie su cui il ratto è appoggiato con il palmo della mano non dominante.</li>
		<li>Tamponare delicatamente la pelle sulla schiena sovrastante le scapole con il pollice e l'indice della mano non dominante, iniettare il volume di L-DOPA con la mano dominante nello spazio sottocutaneo tra/sotto le dita, mantenendo l'ago il più parallelo possibile al corpo per evitare l'iniezione intramuscolare. NOTA: I ratti non vengono anestetizzati prima dell'iniezione.</li>
		<li>Smaltire ogni singola siringa usata in un contenitore tagliente.</li>
		<li>Sostituire il ratto nella sua gabbia individuale e aggiungere prelibatezze nutrizionalmente complete tranne nei giorni di valutazione LID per evitare interferenze con le valutazioni comportamentali fino a quando le valutazioni non sono complete.</li>
		<li>Impostare il timer per 1-2 minuti a seconda del tempo di valutazione desiderato e del numero di ratti nello studio nei giorni di valutazione. Recupera la gabbia successiva e inietta il ratto successivo quando il timer lo indica.</li>
		<li>Ripeti questo, iniettando un ratto ogni 1-2 minuti, fino a quando tutti i ratti non vengono iniettati.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Valutazione della discinesia indotta da levodopa post-iniezione<ol>
<li>Valutare l'intensità (Tabella 1) e la frequenza (Tabella 2) dei movimenti di discinesia distonica e ipercinetica al numero desiderato di timepoint, che dovrebbe includere l'inizio iniziale del comportamento LID, il comportamento di picco e la fase di declino (vedere il file supplementare 2 per un esempio di foglio di registro di valutazione LID).</li>
		<li>Per i ratti adulti di sesso maschile e femmina Sprague Dawley o Fisher 344 e una dimensione del campione di N = 40 ratti, iniziare le valutazioni di discinesia 20 minuti dopo la prima iniezione di L-DOPA e quindi a intervalli di 50 minuti fino a 220 o 270 minuti dopo l'iniezione, a seconda di quando i comportamenti LID sono stati interrotti nel 90%-100% dei ratti.</li>
		<li>Se si utilizzano intervalli di valutazione di 1 minuto, impostare un timer per 1 minuto. Valuta il primo ratto per un minuto. Passa al ratto successivo e valutalo per 1 minuto. Continua attraverso tutti i ratti, valutando intervalli di 1 minuto.</li>
		<li>Avere un timer posizionato accanto alla gabbia in modo visibile in modo che l'intensità del comportamento LID (Tabella 1) possa essere osservata mentre si stima la frequenza di un dato comportamento (Tabella 2) durante il periodo di valutazione.</li>
		<li>Dopo che le valutazioni per il primo punto temporale sono state completate, ricominciare con il primo ratto al punto temporale successivo (ad esempio, 70 minuti dopo l'iniezione) e continuare all'intervallo desiderato (ad esempio, ogni 50 minuti) fino a quando tutti i punti temporali sono completati. NOTA: A causa della sovrapposizione delle attività di iniezione di L-DOPA e lid rating, sono necessarie due persone nei giorni di valutazione, una per l'iniezione e una per le valutazioni comportamentali.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Non sono stati dichiarati conflitti di interesse.

Qui sono presentati i dettagli per l'induzione riproducibile e la valutazione dei LIT in un modello di ratto parkinsoniano a seguito di lesione unilaterale 6-OHDA del sistema DA nigrostriatale. Mentre una volta si pensava che i roditori non sviluppassero LID e che l'asimmetria rotazionale potesse essere l'analogo di LID nei ratti31, i modelli di ratti e topi sono stati caratterizzati negli ultimi due decenni e sono uno strumento ben accettato per la ricerca LID 15,32,33,34....

Sebbene siano passati più di 50 anni da quando la levodopa (L-DOPA) è stata introdotta per la prima volta come trattamento per gli individui con PD 1,2, rimane notevolmente la terapia più efficace per i sintomi motori parkinsoniani. I sintomi motori clinici associati al PD derivano dalla perdita di neuroni della dopamina (DA) nella substantia nigra (SN) pars compacta, con conseguente drastica diminuzione della dopamina disponibile nello striato. La L-DOPA ripristina efficacemente i livelli di DA striatale, con conseguente beneficio motorio all'inizio della malattia 3,4. Inopportunamente, con il trattamento a lungo termine, la maggior parte degli individui con PD svilupperà discinesie indotte da L-DOPA (LID), tra cui corea, distonia e atetosi, che spesso hanno un impatto significativo sulle attività della vita quotidiana 5,6,7.
Mentre esistono diversi modelli comportamentali di LID nei roditori, le differenze nella modellazione e nella valutazione comportamentale dei LID hanno messo in discussione la riproducibilità dei risultati tra i laboratori e l'affidabilità di questi strumenti sperimentali per la ricerca pre-clinica sul PD. Sviluppato in associazione con uno specialista clinico di disturbi del movimento8, l'attuale protocollo è un metodo semplice per l'induzione e la valutazione della LID ed è appropriato per l'uso in un modello di RATto di PD che utilizza la lesione nigrale unilaterale indotta da 6-idrossidopamina (6-OHDA) 9,10. La scala di valutazione LID fornita qui include il punteggio sia per l'intensità che per la frequenza del comportamento discinetico in varie singole parti del corpo. Vengono inoltre fornite informazioni pertinenti riguardanti l'ottimizzazione del flusso di lavoro degli esperimenti e la cura e la gestione appropriate degli animali parkinsoniani e discinetici.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Timer digitale da 100 minuti</td><td>1111764</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Compass CX Compact Scale</td><td>Ohaus</td><td>30428202</td><td></td></tr><tr><td>5-(2-amminoetil)-1,2,4-benzenetriolo, monobromidrato</td><td>Cayman Chemicals</td><td>25330</td><td>6-OHDA è una neurotossina catecolaminergica che viene utilizzata per indurre lesioni dopaminergiche e sintomi parkinsoniani nei roditori.</td></tr><tr><td>Gabbie</td><td>Allentown Allentown, LLC</td><td>Rat900</td> Le <td>gabbie Allentown offrono la possibilità di vedere i ratti da tutti i lati.</td></tr><tr><td>Vassoi per allergologi BD con ago fissato in modo permanente</td><td>BD</td><td>BD 305540</td><td>Per iniezioni sottocutanee di L-DOPA</td></tr><tr><td>Benserazide cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7283</td><td>La benserazide è un inibitore periferico della decarbossilasi utilizzato con L-DOPA per indurre discinesia in modelli di roditori di PD.</td></tr><tr><td>Fiale di scintillazione ambrata di vetro</td><td>Thermo Scientific</td><td>B7921</td><td>Utilizzato per la conservazione di L-DOPA/benserazide a -20 &deg; C fino a quando non viene miscelato con soluzione fisiologica sterile.</td></tr><tr><td>L-3,4-diidrossifenilalanina estere metilico cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1507</td><td>L-3,4-diidrossifenilalanina estere metilico è un precursore di&nbsp; L-DOPA che attraversa la barriera emato-encefalica e viene utilizzato per trattare i sintomi parkinsoniani nei roditori.</td></tr><tr><td>Paper Mate Sharpwriter Matite meccaniche</td><td>graffette</td><td>107250</td><td></td></tr><tr><td>Dolcetti di arricchimento nutrizionalmente completi per roditori</td><td>Bio-Serv</td><td>F05478</td><td></td></tr><tr><td>Secchiello per ghiaccio rotondo con coperchio, 2,5 L</td><td>Corning</td><td>432129</td><td></td></tr><tr><td>Appunti in plastica standard</td><td>Graffette</td><td>1227770</td><td></td></tr><tr><td>scaffalature mobili lunghe 6' cablate in acciaio</td><td>Uline</td><td>H9488</td><td>La larghezza/altezza può essere regolata in base alle esigenze/al numero di ratti per esperimento</td></tr><tr><td>Soluzione salina sterile 0,9%</td><td>Covidien/Argyle</td><td>1020</td><td>Da miscelare con L-DOPA/benserazide prima delle iniezioni sottocutanee.</td></tr></tbody></table>

induzione e valutazione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto della malattia di parkinson

Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

La levodopa (L-DOPA) rimane la terapia gold standard usata per trattare i sintomi motori del morbo di Parkinson (PD). Tuttavia, movimenti involontari indesiderati noti come discinesie indotte da L-DOPA (LID) si sviluppano con l'uso prolungato di questo precursore della dopamina. Si stima che l'incidenza di LID aumenti a circa il 90% degli individui con PD entro 10-15 anni dal trattamento. Comprendere i meccanismi di questa malattia e sviluppare trattamenti anti-discinesia sia nuovi che efficaci richiede una modellazione coerente e accurata per i test pre-clinici degli interventi terapeutici. Un metodo dettagliato per un'induzione affidabile e una valutazione completa dei LID a seguito di lesione nigrale indotta da 6-OHDA in un modello di RATto di PD è presentato qui. La valutazione LID affidabile nei ratti fornisce un potente strumento che può essere prontamente utilizzato in tutti i laboratori per testare terapie emergenti incentrate sulla riduzione o l'eliminazione di questo onere comune indotto dal trattamento per gli individui con PD.

I LLD nei ratti parkinsoniani possono manifestarsi come una serie di movimenti involontari anormali (AAM), inclusi comportamenti distonici, ipercinetici e stereotipati. I criteri di valutazione LID per tali comportamenti sono presentati qui per includere sia l'intensità (Tabella 1) che la frequenza (Tabella 2). Ciò fornisce un punteggio complessivo di gravità LID per ciascun ratto che riflette sia la qualità (intensità) che la quantità di tempo trascorso a impegnarsi (frequenza) in quest...

Questo articolo descrive i metodi per indurre e valutare le discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto di malattia di Parkinson. Il protocollo offre informazioni dettagliate sull'intensità e la frequenza di una serie di comportamenti discinetici, sia distonici che ipercinetici, fornendo uno strumento affidabile per testare trattamenti mirati a questo bisogno medico insoddisfatto.

Induzione e valutazione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...

Il nostro protocollo fornisce un metodo dettagliato per un'induzione affidabile e una valutazione completa della discinesia indotta da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson. Il vantaggio principale della nostra scala di valutazione della discinesia è che consente di quantificare sia l'intensità di un dato movimento involontario anormale sia la quantità di tempo trascorso a mostrare quel comportamento. Modelli animali affidabili di discinesia indotta da levodopa sono fondamentali per realizzare l'obiettivo finale di trovare trattamenti efficaci per ridurre o eliminare l'effetto collaterale negli individui con malattia di Parkinson.Inizia la preparazione per l'esperimento pesando i ratti settimanalmente per calcolare la quantità di farmaco appropriata in base alle variazioni di peso. Fornire ai ratti prelibatezze nutrizionalmente complete e altamente appetibili. Il primo giorno di trattamento con L-DOPA, trasferire i ratti in un unico alloggio fornito con l'arricchimento approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali.E mantenere i ratti nel singolo alloggiamento durante lo studio per evitare interferenze tra pari con le valutazioni comportamentali. Nei giorni di valutazione della discinesia, rimuovere le bottiglie d'acqua, i rack di cibo e l'arricchimento nella gabbia per evitare interferenze con le valutazioni comportamentali e posizionare le gabbie su una griglia di acciaio con un angolo di circa 45 gradi, quindi capovolgere le etichette di identificazione verso l'alto. Prima dell'iniezione di L-DOPA, aggiungere il volume appropriato di soluzione salina sterile alla miscela di L-DOPA e benserazide liofilizzata pre-pesata nel flaconcino ambrato e agitare bene per 10 secondi.Immediatamente dopo la preparazione, riempire il volume richiesto della miscela L-DOPA-Benserazide per ogni animale in singole siringhe montate con un ago calibro 26 ed etichettare ogni siringa con un'identificazione individuale dell'animale. Dopo aver portato la prima gabbia al banco di iniezione, rimuovere il ratto dalla sua gabbia per posizionarlo sulla superficie di iniezione. Usa la mano non dominante per trattenere la testa e le spalle del ratto con il palmo contro la superficie e scruffare la pelle sul retro sovrastante le scapole con il pollice e l'indice.Utilizzare la mano dominante per iniettare il volume di L-DOPA nello spazio sottocutaneo tra le dita, mantenendo l'ago parallelo al corpo per evitare l'iniezione intramuscolare. Dopo l'iniezione, sposta il topo nella gabbia. Quindi, impostare il timer per uno o due minuti e ripetere la procedura iniettando un ratto ogni uno o due minuti fino a quando tutti i ratti non vengono iniettati.Il giorno della valutazione, posizionare un timer accanto alla gabbia per osservare la discinesia indotta da levodopa o l'intensità del comportamento LID mentre si stima la frequenza di un determinato comportamento durante il periodo di valutazione. Valutare l'intensità e la frequenza dei movimenti di discinesia distonica e ipercinetica, tra cui l'insorgenza iniziale del comportamento LID, il comportamento di picco e la fase di declino al numero desiderato di punti temporali. Se si utilizzano intervalli di valutazione di un minuto, impostare un timer per un minuto per valutare il primo ratto e continuare la valutazione attraverso tutti i ratti a intervalli di un minuto.La valutazione LID per comportamenti involontari anormali nei ratti parkinsoniani è stata classificata per includere l'intensità e la frequenza dei comportamenti. Nei ratti sono stati osservati una serie di movimenti involontari anormali, tra cui comportamenti distonici, ipercinetici e stereotipati. L'analisi rappresentativa fornisce un esempio dei dati presentati come LID a dose di picco nell'intera sequenza temporale sperimentale e nello schema posologico.Il LID della dose di picco è stato definito come un momento in cui il punteggio LID medio del gruppo era il più alto. Inoltre, i dati di valutazione LID sono stati esaminati in ogni corso di valutazione giornaliero a diverse concentrazioni di L-DPOA con i gruppi combinati e tracciati come singoli animali. Il tessuto post-mortem proveniente da soggetti valutati comportamentalmente può essere utilizzato per esplorare i meccanismi molecolari associati alle discinesie indotte da levodopa e l'impatto degli interventi terapeutici su tali meccanismi molecolari.I modelli animali di discinesia indotta da levodopa sono stati utili per chiarire diversi meccanismi che si pensa siano alla base di questa malattia comportamentale. Tale comprensione ha portato alla valutazione preclinica e clinica di diversi obiettivi.

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MALDI Imaging Mass Spectrometry dei neuropeptidi nella malattia di Parkinson

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Forniamo un protocollo per generare un modello farmacologico di topo dystonia DYT/PARK-ATP1A3 attraverso l'impianto di cannulas in gangli basali e cervelletto collegati a pompe osmotiche. Descriviamo l'induzione di movimenti simili alla distonia attraverso l'applicazione di una sfida motoria e la caratterizzazione del fenotipo tramite sistemi di punteggio comportamentale.

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Qui descriviamo il sistema RatWalker, costruito riprogettando l'apparato MouseWalker per adattarsi alle maggiori dimensioni e peso dei ratti. Questo sistema utilizza la riflessione interna totale frustrata (FTIR), l'acquisizione video ad alta velocità e il software di analisi ad accesso aperto per tracciare e quantificare i parametri dell'andatura.

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Il modello 6-idrossidopamina (6-OHDA) è stato utilizzato per decenni per far progredire la comprensione della malattia di Parkinson. In questo protocollo, dimostriamo come eseguire lesioni nigrostriatali unilaterali nel ratto iniettando 6-OHDA nel fascio proencefalico mediale, valutare i deficit motori e prevedere le lesioni utilizzando il test di stepping.

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I modelli di roditori di discinesie indotte da L-DOPA sono strumenti preziosi per identificare interventi terapeutici per attenuare lo sviluppo o alleviare le manifestazioni che emergono a causa della somministrazione ripetuta di L-DOPA. Questo protocollo dimostra come indurre e analizzare movimenti di tipo discinetico nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson.

Valutazione delle discinesie indotte da L-DOPA nel modello di ratto unilateralmente 6-OHDA-lesioned della malattia di Parkinson

Impara a indurre e valutare le discinesie da levodopa in un modello di ratto con malattia di Parkinson. Questo metodo quantifica intensità e frequenza dei movimenti anomali per testare terapie efficaci.

Induzione e valutazione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto della malattia di Parkinson

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