Un test cellulare basato su reporter per il monitoraggio dell'efficienza di giunzione

Questo protocollo descrive un test cellulare per il monitoraggio dell'efficienza di splicing, utilizzando un reporter di gestione adattabile. Questo reporter Assay può essere utilizzato per studiare gli effetti delle mutazioni associate alla malattia nei siti Exxon o di giunzione e per progettare la terapia, in particolare una particella, per migliorare il riconoscimento dei siti di giunzione mutanti a cinque punti. Il passaggio nelle cellule Hela aspira il mezzo esaurito e incuba le cellule con tre millilitri di 0,2 viaggi del 5% in contenenti un EDTA millimolare, a 37 gradi Celsius per tre minuti.

Dopo l'incubazione a sette millilitri di DMEM fresco e trasferire la sospensione cellulare in un tubo da 10 millilitri. Centrifugare le cellule. Quindi risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di DMEM fresco e placcare le cellule su un nuovo piatto di coltura tissutale al 20% di confluenza, per la trasfezione transitoria.