Un metodo semplice modificato per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi
3 dicembre 2021
In anestesia adeguata, il cuore del topo è stato esternalizzato attraverso lo spazio intercostale e l'infarto del miocardio è stato indotto con successo legando l'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) utilizzando materiali prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.
Questo rapporto presenta un approccio unico per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi. Il metodo attuale è semplice, fa risparmiare tempo e utilizza i tubi chirurgici e le attrezzature che si trovano facilmente nella maggior parte dei laboratori. La creazione di modelli di infarto del miocardio fornisce una premessa per studiare i meccanismi passati del rimodellamento post-infarto miocardico e la variazione di nuove terapie.
Applicare la crema depilatoria sul petto del topo e attendere un minuto. Quindi rimuovere delicatamente la crema depilatoria e i capelli con una garza bagnata. Fissare il mouse su una piattaforma chirurgica in posizione supina.
Disinfettare l'area chirurgica come descritto nel testo. Quindi posizionare un telo sterile intorno all'area disinfettata. Fai un taglio cutaneo di 0,5 centimetri lungo la linea che collega lo xifoide e l'ascella e separa senza mezzi termini i muscoli pettorale maggiore e pettorale minore usando una pinza.
Aprire il quarto spazio intercostale utilizzando un emostato Micro-Mosquito. Esternare il cuore spingendolo verso il quarto spazio intercostale con l'indice della mano sinistra. Fissare il cuore con la mano sinistra e legare il ramo discendente anteriore sinistro con una sutura 6/0 a tre millimetri dalla sua origine.
Riposizionare rapidamente il cuore nella cavità toracica. Evacuare l'aria dalla cavità toracica premendo delicatamente sulla cavità toracica. Per la gestione del dolore post-operatorio, iniettare buprenorfina per via sottocutanea ogni quattro-sei ore per un massimo di settantadue ore dopo l'intervento.
Posiziona il mouse su un termoforo per riprenderti dall'anestesia. Fissare il topo sottoposto a eutanasia sulla piattaforma chirurgica in posizione supina. Fai un'incisione ventrale di circa tre o quattro centimetri nella parte superiore dell'addome.
Tagliare le costole da entrambi i lati della cavità toracica, quindi rimuovere il diaframma. Perfondere il cuore con 10 millilitri di PBS freddo a quattro gradi Celsius 1X attraverso l'iniezione intraventricolare. Quindi raccogli il cuore tagliando la radice aortica e conservandola immediatamente a meno 80 gradi Celsius.
Tagliate il cuore congelato in fette spesse un millimetro su ghiaccio usando delle lamette da barba. Incubare le fette di cuore preparate in una soluzione all'1% di TTC disciolta in un PBS 1X a 37 gradi Celsius per 10-15 minuti. Quindi fotografa le fette utilizzando una fotocamera digitale.
Dopo la legatura dell'arteria coronaria, l'analisi della colorazione TTC ha indicato l'induzione riuscita dell'infarto miocardico e i cambiamenti temporali delle dimensioni della cicatrice post-infarto miocardico. I risultati dell'analisi di sopravvivenza hanno mostrato mortalità conclamata entro sette giorni dall'infarto miocardico nei topi C57BL/6J maschi e femmine. La rottura ventricolare è stata una ragione comune per la morte post-infarto del miocardio.
La valutazione ecocardiografica post-infarto del miocardio ha dimostrato il successo dell'induzione della disfunzione contrattile e del rimodellamento ventricolare. Quando si tenta di esternare il cuore, non premere prima la cavità toracica e, seguendo la nostra resistenza, indica la necessità di regolare la direzione rispetto alla lode ponderata. A seguito di questa procedura, è possibile eseguire l'iniezione intramiocardica di vettori o cellule virali per testare l'efficacia delle terapie geniche o delle terapie cellulari in materia di malattie cardiache.
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici
Panoramica
In questo articolo viene presentato un metodo per indurre infarto miocardico nei topi, utilizzando materiali chirurgici facilmente reperibili. La tecnica consente lo studio del rimodellamento post-infarto miocardico e la valutazione di nuovi trattamenti terapeutici.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Ricerca cardiovascolare
- Modelli di infarto miocardico
- Tecniche chirurgiche negli studi sugli animali
Sfondo
- L'infarto miocardico è un ambito fondamentale della ricerca cardiovascolare.
- Comprendere il rimodellamento post-infarto è essenziale per lo sviluppo di nuovi trattamenti.
- I metodi esistenti possono essere complessi o richiedere attrezzature specializzate.
- Questo studio mira a semplificare il processo utilizzando materiali di laboratorio comuni.
Scopo dello studio
- Stabilire un modello affidabile di infarto miocardico nei topi.
- Facilitare la ricerca sul rimodellamento cardiaco post-infarto miocardico.
- Permettere la sperimentazione di terapie geniche e cellulari nelle malattie cardiache.
Metodi Utilizzati
- Applicazione di crema depilatoria per la preparazione chirurgica.
- Esternalizzazione del cuore attraverso lo spazio intercostale.
- Ligatura dell'arteria discendente anteriore sinistra.
- Cura post-operatoria e valutazione dell'infarto miocardico.
Risultati principali
- L'induzione riuscita di infarto miocardico è stata confermata mediante colorazione con TTC.
- I tassi di mortalità sono stati osservati entro sette giorni dal MI.
- Sono stati documentati disfunzione contrattile e rimodellamento ventricolare.
- Il metodo consente interventi terapeutici successivi.
Conclusioni
- Il metodo descritto è efficiente e riproducibile per indurre infarto miocardico nei topi.
- Fornisce una piattaforma per ulteriori ricerche sulle terapie cardiache.
- Studi futuri possono basarsi su questo modello per esplorare diverse interazioni.
Domande Frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
Modelli robusti di infarto miocardico (MI) in vivo sono essenziali per la valutazione preclinica di terapie cardiache e per studi meccanicistici sul rimodellamento post-MI. Questo protocollo semplificato di legatura dell'arteria coronaria consente l'induzione riproducibile di MI nei topi, sostenendo la ricerca traslazionale e la verifica di ipotesi terapeutiche in fase iniziale. L'accessibilità e l'efficienza del metodo facilitano un'adozione più ampia all'interno di portafogli di ricerca e sviluppo preclinico e scoperta.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo di Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Permette l'analisi dei percorsi di danno cardiaco e dei meccanismi di rimodellamento post-infarto miocardico.
- Consente la validazione funzionale di bersagli terapeutici in un contesto in vivo rilevante per la malattia.
- Facilita la riduzione del rischio meccanicistico per interventi candidati mirati alla riparazione cardiaca.
Sviluppo di screening e saggi
- Fornisce una piattaforma standardizzata per valutare l'efficacia di terapie geniche o cellulari dopo infarto miocardico.
- Produce una dimensione dell'infarto e una disfunzione contrattile riproducibili, per una valutazione quantitativa.
- Consente l'integrazione successiva con esami di imaging e saggi istologici per letture affidabili.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Si allinea a endpoint rilevanti per la malattia, come il rimodellamento ventricolare e l'analisi della sopravvivenza.
- Permette una continuità dalla scoperta dei meccanismi alla validazione preclinica di terapie.
- Consente la valutazione del momento ottimale per l'intervento e del suo impatto sugli esiti post-infarto miocardico.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo protocollo di induzione dell'IM si colloca all'interfaccia tra la fase iniziale di scoperta e la validazione preclinica, consentendo studi basati su ipotesi e il screening di candidati in un modello fisiologicamente rilevante.
- Biologia della scoperta: Facilita la verifica di ipotesi sui meccanismi di danno e riparazione cardiaca.
- Screening: Fornisce un'induzione riproducibile di infarto per studi comparativi di efficacia.
- Analisi: Permette la misurazione quantitativa della dimensione dell'infarto, della funzione contrattile e della sopravvivenza.
- Ricerca traslazionale: Collega le conoscenze meccanicistiche alla valutazione preclinica di terapie in vivo.
- Riutilizzo aziendale: Offre un modello scalabile e accessibile per svariati programmi di ricerca cardiaca.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva nella validazione degli obiettivi e negli studi meccanicistici.
- Valore operativo: Standardizza l'induzione di IM, riducendo la variabilità tecnica e il carico formativo.
- Valore strategico: Accelera le decisioni di avanzamento o interruzione per i candidati terapeutici cardiaci.
- Impatto sul portafoglio: Permette una priorizzazione degli interventi mirati al rimodellamento post-IM adeguata al livello di rischio.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze chirurgiche e familiarità con l'anatomia cardiaca murina.
- Necessita dell'accesso a strumenti chirurgici di base e a infrastrutture per le cure post-operatorie.
- Richiede una standardizzazione tra i gruppi per la riproducibilità negli studi multicentrici.
- È adattabile alla somministrazione di terapie geniche o cellulari dopo la legatura, negli studi di intervento.
- La mortalità e la variabilità tecnica devono essere monitorate e riportate per garantire l'integrità dei dati.
