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Imaging dal vivo e quantificazione dell'infezione virale in topi transgenici K18 hACE2 utilizzand...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Imaging dal vivo e quantificazione dell'infezione virale in topi transgenici K18 hACE2 utilizzando SARS-CoV-2 ricombinante che esprime reporter

Full Text
3,411 Views
08:41 min
November 5, 2021

DOI: 10.3791/63127-v

Desarey Morales Vasquez1, Kevin Chiem1, Jesus Silvas1, Jun-Gyu Park1, Chengjin Ye1, Luis Martínez-Sobrido1

1Texas Biomedical Research Institute

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes the use of fluorescent or luminescent-expressing recombinant SARS-CoV-2 for in vivo and ex vivo live imaging of viral detection and tracking in K18 human ACE2 transgenic mice. This technique allows for effective evaluation of therapeutics for SARS-CoV-2 infection.

Key Study Components

Area of Science

  • Virology
  • In vivo imaging
  • Transgenic mouse models

Background

  • Understanding SARS-CoV-2 infection dynamics is crucial for therapeutic development.
  • In vivo imaging systems (IVIS) facilitate real-time monitoring of viral behavior.
  • K18 hACE2 transgenic mice are a relevant model for studying SARS-CoV-2.
  • Fluorescent and luminescent reporters enhance detection capabilities.

Purpose of Study

  • To develop a protocol for tracking SARS-CoV-2 infections in vivo.
  • To assess pathogenicity, viral replication, and trophism using imaging techniques.
  • To improve therapeutic evaluation methods for SARS-CoV-2.

Methods Used

  • Use of luciferase- and fluorescence-expressing recombinant SARS-CoV-2.
  • In vivo imaging with IVIS after substrate injection.
  • Monitoring bioluminescence signal post-imaging setup.
  • Shaving mice to enhance imaging clarity.

Main Results

  • Effective tracking of SARS-CoV-2 in the K18 hACE2 transgenic mouse model.
  • Demonstrated feasibility of in vivo and ex vivo imaging for viral studies.
  • Provided insights into viral dynamics and therapeutic responses.
  • Established a reliable method for assessing SARS-CoV-2 pathogenicity.

Conclusions

  • The protocol offers a robust approach for studying SARS-CoV-2 infections.
  • In vivo imaging enhances understanding of viral behavior and treatment efficacy.
  • This technique can be adapted for other viral studies in transgenic models.

Frequently Asked Questions

What is the significance of using K18 hACE2 transgenic mice?
These mice are a relevant model for studying SARS-CoV-2 infections due to their expression of human ACE2, the virus's entry receptor.
How does the imaging technique improve therapeutic evaluation?
It allows for real-time monitoring of viral dynamics and treatment responses, providing valuable insights into therapeutic efficacy.
What are the advantages of using luminescent reporters?
Luminescent reporters enhance the sensitivity and specificity of viral detection in live subjects.
Why is shaving the mice recommended?
Shaving improves the clarity of the bioluminescence signal, enhancing imaging results.
Can this protocol be adapted for other viruses?
Yes, the imaging techniques can be modified for studying various viral infections in transgenic models.
What is the role of IVIS in this study?
IVIS is used for in vivo imaging to monitor viral infections and track their progression in real-time.

Questo protocollo descrive la dinamica delle infezioni virali utilizzando la luciferasi e la fluorescenza che esprimono la ricombinante (r)SARS-CoV-2 e un sistema di imaging in vivo (IVIS) in topi transgenici K18 hACE2 per superare la necessità di approcci secondari necessari per studiare le infezioni da SARS-CoV-2 in vivo.

Il nostro protocollo ha descritto l'uso di SARS-CoV-2 ricombinante fluorescente o luminescente per il rilevamento virale di imaging live in vivo ed ex vivo e il tracciamento virale nel modello murino transgenico ACE2 umano K18 dell'infezione da SARS-CoV-2. Il vantaggio principale di questa tecnica è l'applicazione e la fattibilità del rilevamento e del tracciamento virale per studi in vivo ed ex vivo di SARS-CoV-2 nel modello murino transgenico ACE2 umano K18. L'uso dell'imaging in vivo di SARS-CoV-2 nel modello murino transgenico DI ACE2 umano K18 rappresenta un'opzione eccellente per valutare le terapie per il trattamento dell'infezione da SARS-CoV-2 in vivo.

L'implementazione dei reporter SARS-CoV-2 rappresenta un'opzione eccellente per valutare la patogenicità, la replicazione virale e il trofismo in vivo. Per gli studi in vivo con luciferasi che esprime SARS-CoV-2, si raccomanda la rasatura dei topi e l'imaging tempestivo dopo l'iniezione del substrato per migliorare il segnale di bioluminescenza. Iniziare il monitoraggio della bioluminescenza avviando il sistema di imaging in vivo, o IVIS, e impostando i parametri, fare clic sulla modalità immagine su Bioluminescenza, quindi aprire il filtro e impostare il tempo di esposizione su Auto.

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Immunologia e infezione Numero 177 SARS-CoV-2 coronavirus fluorescenza bioluminescenza virus competenti per la replicazione virus reporter NanoLuc luciferasi venere proteina fluorescente infezione virale imaging in vivo IVIS Ami HT K18 hACE2 topi transgenici

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