Name: Modello di perforazione endovascolare per emorragia subaracnoidea combinata con risonanza magnetica (MRI) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Scopri un modello di perforazione endovascolare per emorragia subaracnoidea nel topo combinato con MRI per verificare il sito emorragico e quantificare i volumi di sanguinamento. Questo metodo standardizzato supporta la ricerca sulle patologie cerebrovascolari.

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SL è stato sostenuto dal Chinese Scholarship Council. KT è stato sostenuto dalla borsa di studio BIH-MD dell'Istituto di sanità di Berlino e dalla Sonnenfeld-Stiftung. RX è supportato dal BIH-Charité Clinician Scientist Program, finanziato dalla Charité -Universitätsmedizin Berlin e dal Berlin Institute of Health. Riconosciamo il sostegno della Fondazione tedesca per la ricerca (DFG) e del Fondo di pubblicazione ad accesso aperto di Charité - Universitätsmedizin Berlin.

Gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e i regolamenti stabiliti da Landesamt fuer Gesundheit und Soziales (LaGeSo), Berlino, Germania (G0063/18). In questo studio sono stati utilizzati topi maschi C57Bl/6J (8-12 settimane) con un peso di 25 ± 0,286 g (media ± s.e.m.).
1. Preparazione animale
<ol><li>Indurre l'anestesia iniettando ketamina (70 mg/kg) e xilazina (16 mg/kg) per via intraperitoneale. Mantenere la temperatura corporea normale, contribuendo alla rapida induzione dell'anestesia profonda. Testare un'adeguata sedazione con uno stimolo al dolore, come un pizzico di punta, e verificare l'assenza di una reazione.</li>
	<li>Rasare con cura i peli del collo del topo con un rasoio, pulirlo con etanolo al 70% seguito da betadina / clorexidina e applicare l'1% di lidocaina sulla superficie della pelle per il controllo del dolore locale.</li>
	<li>Posizionare il mouse in posizione supina. Utilizzare il nastro adesivo per fissare gli arti e la coda, allungando delicatamente la pelle del collo sul lato opposto dell'intervento chirurgico. Allo stesso tempo, sollevare leggermente il collo.</li>
	<li>Utilizzare unguento oftalmico (ad esempio, 5% dexpantenolo) per prevenire la disidratazione degli occhi durante l'operazione.</li>
</ol>2. Induzione SAH
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63150/63150fig01.jpg"> Figura 1: Immagini passo-passo della tecnica chirurgica. (A) Rappresentazione dell'anatomia dell'arteria carotide destra esposta: il CCA e la sua biforcazione in ICA ed ECA sono identificati, così come i piccoli rami dell'ECA (OA e STA). (B) L'ECA viene mobilitata dal tessuto circostante e legata con due punti di sutura prima di tagliarlo. Una terza legatura deve essere posizionata liberamente vicino alla biforcazione senza occluderla. (C) L'ICA e il CCA sono temporaneamente occlusi (con legatura o clip) per evitare un sanguinamento eccessivo quando la Corte dei conti europea è accuratamente incisa. (D) Il filamento è inserito nella Corte dei conti europea e avanzato nel CCA. La legatura prestabilita deve essere serrata con cura in modo che non si verifichi alcun versamento di sangue, ma l'avanzamento del filamento rimane possibile. (E) L'ICA e il CCA sono riaperti e il moncone della Corte deve essere adattato in direzione cranica. Spingendo il filamento ~ 9 mm in avanti nell'ICA, verrà raggiunta la biforcazione ACA-MCA e il recipiente viene quindi perforato spingendo ulteriormente il filamento di circa 3 mm. (F) Il filamento viene ritirato dopo aver assicurato una rilegatura temporale del CCA. La legatura prestabilita dell'ECA viene rapidamente occlusa e il CCA viene riaperto per consentire la riperfusione. Abbreviazioni: ACA = arteria cerebrale anteriore, CCA = arteria carotide comune, ECA = arteria carotide esterna, MCA = arteria cerebrale media, ICA = arteria carotide interna, OA = arteria occipitale, PPA = arteria pterigopalatina, STA = arteria tiroidea superiore. Barra della scala = 2 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63150/63150fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<ol><li>Aprire la pelle del collo con un bisturi sterile, dal mento al bordo superiore dello sterno (1,5 cm), e separare senza mezzi termini le ghiandole salivari dal tessuto connettivo circostante.</li>
	<li>Separare il gruppo muscolare lungo un lato [in questo caso, il lato destro] della trachea, esponendo la guaina dell'arteria carotide comune (CCA) ricoperta di vasi sanguigni e venule nutrienti. Il CCA e il nervo vagale si trovano in prossimità l'uno dell'altro.</li>
	<li>Dissociare il CCA e lasciare un 8-0 libero sutura di seta attorno al CCA senza legarlo in anticipo. Prestare attenzione alla protezione del nervo vagale, in quanto è facilmente danneggiato (Figura 1A).</li>
	<li>Una tripla biforcazione del CCA, dell'ICA e dell'ECA è visibile lungo il terzo posteriore inferiore della diastasi. Sezionare l'estremità distale dell'ECA e ligatare la nave due volte più distanti possibile.</li>
	<li>Scollegare l'ECA nel punto medio del segmento due volte legato, creando un moncone del vaso.</li>
	<li>Predisporre una legatura per il filamento attorno al moncone ECA, non chiuderlo fino a quando l'inserimento del filamento non è riuscito.</li>
	<li>Utilizzare una sutura o una micro clip per occludere temporaneamente l'ICA e il CCA (Figura 1B).</li>
	<li>Effettuare una piccola incisione (circa la metà del diametro dell'ECA) nell'ECA utilizzando forbici microvascolari. Inserire un filamento di prolene 5-0 (in alternativa 4-0) nell'ECA e farlo avanzare nel CCA.</li>
	<li>Chiudere leggermente la legatura sull'ECA mentre si allenta la micro clip sull'ICA e sul CCA (Figura 1C).</li>
	<li>Tirare delicatamente indietro il filamento e regolare il moncone ECA nella direzione cranica, invaginando il filamento attraverso la biforcazione nell'ICA (Figura 1D).</li>
	<li>Puntare la punta del filamento medialmente con un angolo di ~30° rispetto alla linea mediana tracheale e di ~30° rispetto al piano orizzontale. Spingere il filamento in avanti all'interno dell'ICA. Dopo aver raggiunto la biforcazione ACA-MCA, si incontra resistenza (~ 9 mm).</li>
	<li>Avanzare ulteriormente il filamento di 3 mm, perforando l'ACA giusto. Prelevare tempestivamente il filamento al moncone ECA, consentendo il flusso di sangue nello spazio subaracnoideo.</li>
	<li>Mantenere il filamento in questa posizione per circa 10 s (Figura 1E). La presenza di tremori muscolari, miosi ipsilaterale, respiro affannoso, alterazione del ritmo cardiaco e incontinenza urinaria può essere la prova di successo di un intervento chirurgico.</li>
	<li>Chiudere temporaneamente il CCA per evitare una perdita di sangue in eccesso. Estrarre istantaneamente il filamento e legare l'ECA con la sutura prestabilita. Riaprire il CCA e consentire la riperfusione e l'ulteriore versamento di sangue nello spazio subaracnoideo (Figura 1F).</li>
	<li>Dopo aver controllato la presenza di perdite di sanguinamento, disinfettare la pelle che circonda la ferita per prevenire infezioni cutanee postoperatorie e suturare la ferita con una sutura in fibra di poliestere 4-0 non assorbibile.</li>
	<li>Metti il mouse in una scatola termica fino a quando la coscienza non viene riacquistata. Attendere che l'animale sia completamente sveglio e assicurarsi che abbia riacquistato una coscienza sufficiente per mantenere la reclinazione sternale. Non restituire gli animali alla compagnia di altri topi fino a quando non sono completamente recuperati.</li>
	<li>Somministrare 200-300 mg / kg di peso corporeo paracetamolo per alleviare il dolore postoperatorio.</li>
	<li>Controllare i topi ogni giorno dopo l'intervento chirurgico.</li>
</ol>3. Misurazione mritch
<ol><li>24 ore dopo l'intervento chirurgico, eseguire la risonanza magnetica utilizzando uno scanner per roditori (Tabella dei materiali) e un risonatore dedicato alla testa del mouse: qui è stato utilizzato un risonatore di volume in quadratura di trasmissione / ricezione da 20 mm.</li>
	<li>Posizionare il mouse su una coperta d'acqua circolante riscaldata per garantire una temperatura corporea costante di ~ 37 ° C. Indurre l'anestesia con il 2,5% di isoflurano in una miscela di O2/N2O (30%/70%) e mantenere con l'1,5-2% di isoflurano tramite maschera facciale sotto monitoraggio continuo della ventilazione.</li>
	<li>Per prima cosa eseguire una scansione di riferimento veloce acquisendo 3 pacchetti di slice ortogonali (Tri-Pilot-Multi, FLASH con tempo di ripetizione TR/echo time TE = 200 ms/3 ms, 1 media, angolo di flip FA = 30°, campo visivo FOV = 28 mm x 28 mm, matrice MTX = 256 x 256, spessore fetta 1 mm, tempo totale di acquisizione TA =30 s).</li>
	<li>Quindi utilizzare una sequenza turbo spin-echo 2D pesata T2 ad alta risoluzione per l'imaging (parametri di imaging TR / TE = 5505 ms / 36 ms, fattore RARE 8, medie 6, 46 fette assiali contigue con uno spessore della fetta di 0,35 mm per coprire l'intero cervello, FOV = 25,6 mm x 25,6 mm, MTX = 256 x 256, TA = 13 min).</li>
	<li>Se il risultato non è chiaro, utilizzare un'ulteriore sequenza di eco a gradiente T2* attivata dalla respirazione con la stessa isodistanza della scansione T2w (2D FLASH, TR/TE = 600 ms/6,3 ms, FA = 30°, 1 media, 20 fette assiali con spessore di 0,35 mm, FOV e MTX identici a T2w, TA = 5-10 min a seconda della frequenza respiratoria).</li>
	<li>Trasferire i dati nel formato immagine DICOM e utilizzare il software ImageJ per la classificazione SAH e la volumetria dei coaguli di sangue. I dettagli sulla quantificazione sono elencati come guida passo-passo nel materiale supplementare (Figura supplementare 1).</li>
</ol>

<ol><li>Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Spontaneous subarachnoid haemorrhage.</a> The Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).</li>
<li>van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid haemorrhage.</a> The Lancet. 369 (9558), 306-318 (2007).</li>
<li>Abraham, M. K., Chang, W. -T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid hemorrhage.</a> Emergency Medicine Clinics of North America. 34 (4), 901-916 (2016).</li>
<li>Schertz, M., Mehdaoui, H., Hamlat, A., Piotin, M., Banydeen, R., Mejdoubi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+spontaneous+subarachnoid+hemorrhage+in+martinique%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of spontaneous subarachnoid hemorrhage in martinique.</a> PLOS ONE. 11 (5), 0155945(2016).</li>
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<li>Veelken, J. A., Laing, R. J. C., Jakubowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sheffield+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Stroke. 26 (7), 1279-1284 (1995).</li>
<li>Sugawara, T., Ayer, R., Jadhav, V., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+grading+system+evaluating+bleeding+scale+in+filament+perforation+subarachnoid+hemorrhage+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A new grading system evaluating bleeding scale in filament perforation subarachnoid hemorrhage rat model.</a> Journal of Neuroscience Methods. 167 (2), 327-334 (2008).</li>
<li>Egashira, Y., Shishido, H., Hua, Y., Keep, R. F., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+grading+system+based+on+magnetic+resonance+imaging+in+a+mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">New grading system based on magnetic resonance imaging in a mouse model of subarachnoid hemorrhage.</a> Stroke. 46 (2), 582-584 (2015).</li>
<li>Mutoh, T., Mutoh, T., Sasaki, K., Nakamura, K., Taki, Y., Ishikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+three-dimensional+maximum+intensity+projection+display+to+assist+in+magnetic+resonance+imaging+%28MRI%29-based+grading+in+a+mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Science+Monitor%22%5BJournal%5D)">Value of three-dimensional maximum intensity projection display to assist in magnetic resonance imaging (MRI)-based grading in a mouse model of subarachnoid hemorrhage.</a> Medical Science Monitor. 22, 2050-2055 (2016).</li>
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<li>Leclerc, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+pathophysiology+in+humans+and+rodent+models+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A comparison of pathophysiology in humans and rodent models of subarachnoid hemorrhage.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 71(2018).</li>
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<li>Marbacher, S., Fandino, J., Kitchen, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+intracranial+in+vivo+animal+models+of+delayed+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Standard intracranial in vivo animal models of delayed cerebral vasospasm.</a> British Journal of Neurosurgery. 24 (4), 415-434 (2010).</li>
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</ol>

Nessun conflitto di interessi

In sintesi, un modello murino SAH standardizzato indotto dall'operazione di perforazione del filamento endovascolare è presentato con invasione minore, breve tempo operativo e tassi di mortalità accettabili. La risonanza magnetica viene condotta 24 ore su 24 postoperatoria per garantire il corretto sito di sanguinamento e l'esclusione di altre patologie intracraniche rilevanti. Inoltre, abbiamo classificato diversi gradi di sanguinamento SAH e misurato i volumi di sanguinamento, consentendo ulteriori analisi di sottogrup...

L'emorragia subaracnoidea (SAH) è causata dalla rottura di un aneurisma intracranico e rappresenta un'emergenza pericolosa per la vita, associata a morbilità e mortalità sostanziali, pari a circa il 5% degli ictus 1,2. I pazienti con SAH presentano forti mal di testa, disfunzioni neurologiche e disturbi progressivi della coscienza3. Circa il 30% dei pazienti con SAH muore entro i primi 30 giorni dopo l'evento emorragico iniziale4. Clinicamente, il 50% dei pazienti sperimenta lesioni cerebrali ritardate (DBI) dopo lesioni cerebrali precoci. La DBI è caratterizzata da ischemia cerebrale ritardata e deficit neurologici ritardati. Studi attuali hanno dimostrato che gli effetti sinergici di diversi fattori portano alla perdita della funzione neurologica, tra cui la distruzione della barriera emato-encefalica, la contrazione delle piccole arterie, la disfunzione microcircolatoria e la trombosi 5,6.
Un aspetto unico della SAH è che la patogenesi ha origine da una posizione extraparenchimale ma poi porta a cascate dannose all'interno del parenchima: la patologia inizia con l'accumulo di sangue nello spazio subaracnoideo, innescando una moltitudine di effetti intraparenchimali, come neuroinfiammazione, apoptosi delle cellule neuronali ed endoteliali, depolarizzazione della diffusione corticale e formazione di edema cerebrale7, 8.
La ricerca clinica è limitata da diversi fattori, rendendo il modello animale un elemento critico nell'imitare in modo coerente e accurato i cambiamenti patomeccanici della malattia. Sono stati proposti diversi protocolli modello SAH, ad esempio l'iniezione di sangue autologo nella cisterna magna (ACM). Inoltre, un metodo modificato con una doppia iniezione di sangue autologo nella cisterna magna e nella cisterna del chiasma ottico (APC) rispettivamente 9,10. Mentre l'iniezione di sangue autologo è un modo semplice per simulare il processo patologico del vasospasmo e le reazioni infiammatorie dopo l'emorragia subaracnoidea, il seguente aumento della pressione intracranica (ICP) è relativamente lento e non vengono indotti cambiamenti degni di nota nella permeabilità della barriera emato-encefalica11,12. Un altro metodo, il posizionamento del sangue periarterioso, solitamente utilizzato in grandi modelli di SAH (ad esempio, scimmie e cani), prevede il posizionamento di sangue autologo anticoagulato o di prodotti sanguigni comparabili attorno alla nave. I cambiamenti di diametro dell'arteria possono essere osservati con un microscopio, che funge da indicatore per il vasospasmo cerebrale dopo SAH13.
Barry et al. descrissero per la prima volta un modello di perforazione endovascolare nel 1979 in cui l'arteria basilare è esposta dopo aver rimosso il cranio; l'arteria viene quindi perforata con microelettrodi di tungsteno, utilizzando una tecnica stereotassica microscopica14. Nel 1995, Bederson e Veelken hanno modificato il modello Zea-Longa di ischemia cerebrale e stabilito la perforazione endovascolare, che è stata continuamente migliorata dal15,16. Questo metodo si basa sul fatto che topi e umani condividono una rete vascolare intracranica simile, nota come il cerchio di Willis.
Per la valutazione postoperatoria e la classificazione della SAH nel modello murino, sono stati proposti diversi approcci. Sugawara et al. hanno sviluppato una scala di classificazione che è stata ampiamente utilizzata dal 200817. Questo metodo valuta la gravità della SAH in base ai cambiamenti morfologici. Tuttavia, per questo metodo, la morfologia del tessuto cerebrale del topo deve essere esaminata in visione diretta e, pertanto, il topo deve essere sacrificato per la valutazione. Inoltre, sono stati stabiliti diversi metodi per determinare la gravità della SAH in vivo. Gli approcci vanno dal semplice punteggio neurologico al monitoraggio della pressione intracranica (ICP) a varie tecniche di imaging radiologico. Inoltre, la classificazione MRI si è dimostrata un nuovo strumento non invasivo per valutare la gravità del SAH, correlata al punteggio neurologico18,19.
Qui, viene presentato un protocollo per un modello SAH causato dalla perforazione endovascolare, combinato con la risonanza magnetica postoperatoria. Nel tentativo di stabilire un sistema per oggettivare la quantità di sanguinamento in un ambiente in vivo , abbiamo anche sviluppato un sistema per la classificazione SAH e la quantificazione del volume totale del sangue basato su una risonanza magnetica ponderata T2 ad alta risoluzione 7.0 T. Questo approccio garantisce la corretta induzione della SAH e l'esclusione di altre patologie come ictus, idrocefalo o emorragia intracerebrale (ICH) e complicanze.

<table><tbody><tr><td>Crema per gli occhi</td><td>Bayer</td><td>815529836</td><td>Bepanthen</td></tr><tr><td>Software di analisi delle immagini</td><td>ImageJ</td><td></td><td>In bundle con Java 1.8.0_172</td></tr><tr><td>Sutura di legatura (5-0)</td><td>SMI</td><td></td><td>Seta nera USP</td></tr><tr><td>Sorgente luminosa per microscopio</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>CP-pharma</td><td>797-037</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>MRI</td><td>Bruker</td><td>Pharmascan 70/16</td><td>&nbsp; 7</td></tr><tr><td>Immagini MRI Tesla acquisite software</td><td>Bruker</td><td></td><td>Bruker Paravision 5.1</td></tr><tr><td>Paracetamolo (40 mg/mL)</td><td>bene Arzneimittel</td><td>4993736</td><td></td></tr><tr><td>Filamento di prolene (5-0)</td><td>Erhicon</td><td>EH7255</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio</td><td>Wella</td><td>HS61</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (Forbici fini)</td><td>FST</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (forcipe#1)</td><td>AESCULAP</td><td>FM001R</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (pinze#2)</td><td>AESCULAP</td><td>FD2855R</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (pinza#3)</td><td>Hammacher</td><td>HCS 082-12</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (Porta aghi)</td><td>FST</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>Strumento chirurgico (Vannas Spring Scissors)</td><td>FST</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio operatorio</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Monitoraggio della ventilazione</td><td>Stony Brook</td><td></td><td>Monitoraggio di piccoli animali e Sistema di gating</td></tr><tr><td>Sutura per ferite(4-0)</td><td>Erhicon</td><td>CB84D</td><td></td></tr><tr><td>Xylavet</td><td>CP-pharma</td><td>797-062</td><td>20 mg/mL</td></tr></tbody></table>

modello di perforazione endovascolare per emorragia subaracnoidea combinata con risonanza magnetica (mri)

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging (MRI)

Il modello di perforazione del filamento endovascolare per imitare l'emorragia subaracnoidea (SAH) è un modello comunemente usato - tuttavia, la tecnica può causare un alto tasso di mortalità e un volume incontrollabile di SAH e altre complicanze intracraniche come ictus o emorragia intracranica. In questo protocollo viene presentato un modello murino SAH standardizzato, indotto dalla perforazione del filamento endovascolare, combinato con la risonanza magnetica (MRI) 24 ore dopo l'operazione per garantire il corretto sito di sanguinamento ed escludere altre patologie intracraniche rilevanti. In breve, i topi C57BL/ 6J vengono anestetizzati con un'iniezione intraperitoneale di ketamina/xilazina (70 mg/16 mg/kg di peso corporeo) e posti in posizione supina. Dopo l'incisione del collo della linea mediana, l'arteria carotide comune (CCA) e la biforcazione carotidea sono esposte e una sutura di polipropilene monofilamento non assorbibile 5-0 viene inserita in modo retrogrado nell'arteria carotide esterna (ECA) e avanzata nell'arteria carotide comune. Quindi, il filamento viene invaginato nell'arteria carotide interna (ICA) e spinto in avanti per perforare l'arteria cerebrale anteriore (ACA). Dopo il recupero dall'intervento chirurgico, i topi subiscono una risonanza magnetica 7.0 T 24 ore dopo. Il volume di sanguinamento può essere quantificato e classificato tramite risonanza magnetica postoperatoria, consentendo un robusto gruppo sperimentale SAH con la possibilità di eseguire ulteriori analisi di sottogruppo in base alla quantità di sangue.

Mortalità Per questo studio, un totale di 92 topi maschi C57Bl / 6J di età compresa tra 8-12 settimane sono stati sottoposti a operazione SAH; in questi, abbiamo osservato un tasso di mortalità complessivo dell'11,9% (n = 12). La mortalità si è verificata esclusivamente entro le prime 6-24 ore dopo l'intervento chirurgico, suggerendo la mortalità perioperatoria e il sanguinamento SAH stesso come i fattori che contribuiscono più probabilmente.
Grado di sanguinamento ...

Qui presentiamo un modello murino SAH standardizzato, indotto dalla perforazione del filamento endovascolare, combinato con la risonanza magnetica (MRI) 24 ore dopo l'operazione per garantire il corretto sito di sanguinamento ed escludere altre patologie intracraniche rilevanti.

Modello di perforazione endovascolare per emorragia subaracnoidea combinata con risonanza magnetica (MRI)

The endovascular filament perforation model to mimic subarachnoid hemorrhage (SAH) is a commonly used model - however, the technique can cause a high ...

Il modello di perforazione endovascolare combinato con la risonanza magnetica postoperatoria consente la verifica del sanguinamento e l'esclusione di altre patologie intercraniche. Uno dei vantaggi di questo approccio è la possibilità di quantificare il volume di sanguinamento per ulteriori analisi di sottogruppi. Inizia radendo i peli del collo del topo.Applicare unguento oftalmico durante la procedura. Igienizzare la pelle con etanolo al 70% seguito da Betadine o clorexidina e applicare l'1% di lidocaina. Posizionare il mouse in posizione supina con la testa e il busto rivolti verso l'alto.Stabilizzare il topo dorsalmente usando del nastro adesivo sulle quattro estremità. Allunga la pelle del collo ed elevala. Aprire la pelle del collo dal mento al bordo superiore dello sterno e separare le ghiandole salivari dal tessuto connettivo adiacente.Esporre la guaina dell'arteria carotide comune separando i muscoli lungo un lato della trachea. Esporre il campo chirurgico con un divaricatore o un tampone di garza sterile e staccare l'arteria carotide e lasciare libero 8-0 sutura di seta senza legarlo, assicurando di non danneggiare il nervo vagale. Sezionare l'estremità distale dell'ECA e legare le navi due volte in posizione distale.Nel punto medio del segmento di filamento due volte legato disgiunge l'ECA e crea un moncone del vaso. Lasciare una sutura di seta intorno all'ICA senza chiuderla. Predisporre una legatura per il filamento attorno al moncone ECA.Non chiuderlo fino a quando l'inserimento del filamento non è riuscito. Chiudere temporaneamente ICA e CCA utilizzando una sutura o una micro clip. Usando le forbici microvascolari, fai un'incisione nell'ECA e inserisci un filamento di prolene 5-0 in alternativa 4-O e avanzalo in CCA.Chiudere la legatura sull'ECA mentre si stacca la micro clip su ICA e CCA. Tirare indietro delicatamente il filamento e regolare il moncone ECA nella direzione cranica mentre si invagina il filamento attraverso la biforcazione nell'ICA. Posizionare la punta del filamento medialmente con un angolo di circa 30 gradi rispetto alla linea mediana tracheale in piano orizzontale e spingerla all'interno dell'ICA.Alla biforcazione ACA-MCA si osserva resistenza. Spostare il filamento in avanti fino a tre millimetri e perforare l'ACA destro. Prelevare rapidamente il filamento al moncone ECA consentendo il flusso sanguigno nello spazio subaracnoideo.Posizionare il filamento in questa posizione per 10 secondi. Ritirare il filamento. Il CCA può essere temporaneamente chiuso in anticipo per evitare un'eccessiva perdita di sangue e quindi ritirare il filamento.Ligate l'ECA utilizzando suture prestabilite e riaprite il CCA se lo avete chiuso in precedenza. La presenza di tremori muscolari, miosi ipsilaterale, ansimare per il respiro, alterato ritmo cardiaco e incontinenza urinaria può essere la prova di successo della chirurgia. Assicurarsi che non vi siano perdite di sanguinamento e disinfettare la pelle.Suturare la ferita. Metti il topo in una scatola termica e attendi che l'animale abbia una coscienza sufficiente per avere la reclinazione sternale. Per alleviare il dolore, somministrare 1,2 milligrammi per millilitro di paracetamolo.Utilizzando uno scanner per roditori su un risonatore della testa del topo eseguire la risonanza magnetica dopo 24 ore di intervento chirurgico, Posizionare il mouse su una coperta d'acqua circolante riscaldata a 37 gradi Celsius. Innanzitutto, eseguire una scansione di riferimento rapido acquisendo tre pacchetti di sezioni ortogonali. Quindi utilizzare una sequenza di eco di rotazione turbo 2D pesata T2 ad alta risoluzione per l'imaging.Trasferire i dati nel formato immagine DICOM e utilizzare il software Imagej per la classificazione SAH e la volumetria dei coaguli di sangue. Per garantire il corretto sito di sanguinamento ed escludere altre patologie intracraniche, le scansioni MRI sono state eseguite 24 ore dopo l'intervento. Il grado di sanguinamento SAH è stato quantificato in base alle scansioni MRI ponderate T2.Tra i topi esaminati, il 14% degli animali è stato classificato come sanguinamento di grado zero senza evidenza radiologica per SAH o emorragia. La maggior parte degli animali ha mostrato gradi di sanguinamento compresi tra uno e tre e il 10% ha mostrato un grado di sanguinamento quarto che è stato definito SAH lungo l'ictus e / o ICH. È stato quantificato il volume di sanguinamento totale di ciascun grado SAH, in base allo spessore SAH, che aiuta a determinare l'area di sanguinamento.Il volume di sanguinamento calcolato in base allo spessore assiale del SAH ha mostrato differenze significative nei rispettivi sottogruppi di grado da uno a tre. Durante l'intero intervento chirurgico, una dissezione accurata del tessuto connettivo circostante è fondamentale per il corretto posizionamento delle suture. Assicurati che la lunghezza del moncone ECA sia sufficiente in modo da avere uno spazio di lavoro confortevole per la legatura, l'incisione e l'inserimento del filamento.Non spingere mai il filamento in avanti quando si avverte resistenza prima della biforcazione MCA-ACA per evitare la perforazione prematura del vaso.

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Emorragia subaracnoidea aneurismatica (SAH) è il sanguinamento che si verifica nello spazio subaracnoideo quando una rottura dell'aneurisma. Mentre la morbilità e la mortalità di questo evento è stato su un declino a causa di migliori approcci terapeutici, il rischio di vasospasmo dopo emorragia subaracnoidea continua ad essere la stessa che era diversi anni fa. L'importanza della creazione di un modello animale completo e riproducibile per identificare gli eventi scatenanti di vasospasmo...

Un basso Rat modello di mortalità per valutare ritardata vasospasmo cerebrale dopo emorragia subaracnoidea sperimentale

Inizia con un paziente con diagnosi di aneurismi cerebrali, una condizione in cui i vasi sanguigni nel cervello si gonfiano e si riempiono di sangue. Fissare la testa del paziente all'interno della bobina di testa di una macchina per la risonanza magnetica. Avviare l'imaging. Il sistema genera un forte campo magnetico, allineando i protoni nel tessuto cerebrale lungo la sua direzione. Avviare l'eco a gradiente rapido preparato per la magnetizzazione o la sequenza MPRAGE applicando un impulso a...

Risonanza magnetica per immagini di aneurismi cerebrali mediante MPRAGE

Gli spazi perivascolari (PVS) sono spazi pieni di liquido attorno ai vasi sanguigni cerebrali coinvolti nel drenaggio dei liquidi. Per esaminare le alterazioni della PVS durante un ictus di un piccolo vaso, eseguire la risonanza magnetica (MRI) della regione dei gangli della base nel cervello del paziente. Il protocollo di imaging include le sequenze FLAIR (Fast Spin Echo e FLAIR) pesate in T2. L'imaging pesato in T2 migliora il contrasto tra la PVS piena di liquido cerebrospinale (CSF) e il...

Risonanza magnetica degli spazi perivascolari nel cervello umano durante un ictus di un piccolo vaso

Il video dimostra l'induzione di un'emorragia subaracnoidea tramite perforazione endovascolare in un modello murino. Viene praticata un'incisione nella regione del collo del topo anestetizzato per accedere all'arteria carotide comune e alla sua biforcazione. Un filamento viene inserito attraverso le arterie per perforare un ramo dell'arteria intracranica, inducendo un'emorragia subaracnoidea.

Induzione di un'emorragia subaracnoidea in un modello murino attraverso la perforazione endovascolare

Un modello di topo standardizzato di emorragia subaracnoidea da Circolo endoluminale di Willis perforazione viene descritto. Nave di perforazione e emorragia subaracnoidea sono monitorati da un monitoraggio della pressione intracranica. Inoltre diversi parametri vitali vengono registrati e controllati per mantenere condizioni fisiologiche.

Un modello murino di emorragia subaracnoidea

Il modello sperimentale di emorragia subaracnoidea (SAH) con shunt sanguigno controllato a pressione intracranica nel coniglio combina le procedure standard: incannulamento dell'arteria succlavia e puntura transcutanea della cisterna magna, che consente di imitare da vicino le condizioni fisiopatologiche umane dopo SAH. Presentiamo istruzioni dettagliate e discutiamo i punti chirurgici chiave per una creazione sperimentale di SAH di successo.

Il Coniglio Blood-shunt modello per lo studio di acuta e sequele tardive di emorragia subaracnoidea: Aspetti tecnici

L'obiettivo di questo articolo è di presentare un metodo che consente una ricostruzione 3-dimensionale dell'albero cerebrovascolare in topi dopo micro tomografia computata e determinazione dei volumi di segmenti vascolari intero che possono essere utilizzati per quantificare il vasospasm cerebrale in modelli murini di emorragia subaracnoidea.

Un metodo volumetrico per la quantificazione di Vasospasm cerebrale in un modello murino di emorragia subaracnoidea

Abbiamo descritto in questo protocollo un modello di topo standardizzato di emorragia subarnoide (SAH) con una doppia iniezione di sangue intero autologo nella cisterna magna. L'elevato grado di standardizzazione della procedura a doppia iniezione rappresenta un modello medio-acuto di SAH con relativa sicurezza per quanto riguarda la mortalità.

Doppia iniezione diretta di sangue nella Cisterna Magna come modello di emorragia subarachnoide

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Modello di perforazione endovascolare per emorragia subaracnoidea combinata con risonanza magnetica (MRI)

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