Name: Aggravamento dellischemia miocardica in seguito allesposizione al particolato in un modello animale di aterosclerosi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Scopri come costruire un modello animale composito di ischemia miocardica combinato con aterosclerosi ed esposizione acuta a particolato. Questo metodo offre un'alta percentuale di successo per la ricerca cardiovascolare.

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Questo modello è stato sviluppato con il supporto della National Natural Science Foundation of China (n. 81673640, 81841001 e 81803814) e del Major National Science and Technology Program of China for Innovative Drug (2017ZX09301012002 e 2017ZX09101002001-001-3).

Tutte le attività animali qui descritte sono state approvate dal Comitato etico animale dell'Istituto di materia medica cinese, Accademia cinese delle scienze mediche cinesi. Per lo studio sono stati utilizzati topi maschi ApoE−/− (sfondo C57BL/6) di 6-8 settimane di età.
1. Preparazione sperimentale
<ol><li>Preparare anestetici a tribromoetanolo (15 mg/ml): sciogliere 0,75 g di tribromoetanolo in 1 mL di alcool terz-amilico (vedere Tabella dei materiali). Dopo completa dissoluzione, diluirlo a 50 ml con soluzione salina sterile. Conservare la soluzione a 4 °C in un contenitore sterile ed evitare l'esposizione alla luce. NOTA: In questo protocollo, il tribromoetanolo è stato utilizzato a causa del tempo di recupero ottimale dell'anestesia e del tasso di sopravvivenza degli animali. Seguire le raccomandazioni del comitato etico animale locale quando si seleziona il regime di anestesia.</li>
	<li>Preparare la sospensione di PM: misurare 5 mg di DPM (particolato diesel, vedere tabella dei materiali) in provette da centrifuga da 10 ml. Aggiungere 5 ml di soluzione salina normale e capovolgere il tubo per mescolare bene. Utilizzare la pellicola di paraffina per sigillare il tubo e quindi metterlo in un pulitore ad ultrasuoni per 2-3 ore (40KHz, 80w) per la rottura ad ultrasuoni. NOTA: La sospensione deve essere omogenea e priva di agglomerati di particelle. Agitare bene prima dell'uso.</li>
</ol>2. Induzione dell'aterosclerosi nei topi
<ol><li>Nutrire i topi con una dieta ricca di grassi (tuorlo d'uovo in polvere 10%, strutto 10%, sterolo 1%, mangime di mantenimento 79%, vedi Tabella dei materiali) per 12 settimane.</li>
	<li>Per stimare il progresso dell'aterosclerosi, selezionare 2-3 topi in modo casuale e verificare se c'è una placca nell'arco aortico mediante ecografia o osservazione anatomica diretta17. NOTA: Per l'osservazione anatomica, gli animali sono stati selezionati tramite campionamento casuale e sottoposti a eutanasia dopo l'anestesia. Quindi, la loro cavità toracica è stata aperta e i vasi sanguigni sono stati visualizzati direttamente. L'osservazione anatomica è di solito più affidabile perché l'ecografia potrebbe non rilevare tutte le placche.</li>
	<li>Una volta che l'aterosclerosi ha giudicato formato, preparare i topi per il passo successivo.</li>
</ol>3. Intubazione orotracheale ed esposizione acuta al particolato
NOTA: PM sarà esposto una volta alla settimana per 4 settimane dopo 12 settimane di alimentazione ricca di grassi e continuamente dato una dieta ricca di grassi.
<ol><li>Preparare una tavola di dissezione (vedi Tabella dei materiali) con un elastico che si fissa a 1,5 cm dal bordo superiore. Fissare la scheda di dissezione con un angolo di 60° rispetto al piano del tavolo.</li>
	<li>Anestetizzare il topo usando l'anestetico a tribromoetanolo mediante iniezione intraperitoneale (0,1 ml per ogni 10 g di peso corporeo). Dopo 2-3 minuti, capovolgi il mouse per verificare se c'è un riflesso raddrizzante. Eseguire un pizzico del dito del piede per confermare la sedazione. Rilasciare lubrificante sterile sugli occhi.</li>
	<li>Disinfettare la scheda di dissezione con salviettine imbevute di alcool.</li>
	<li>Posizionare il topo anestetizzato in posizione supina sulla tavola e agganciare gli incisivi superiori all'elastico.</li>
	<li>Utilizzare un piccolo faretto a LED (vedi Tabella dei materiali) con un tubo flessibile. Focalizzare la luce sulla trachea, che si trova intorno al punto medio della linea ascellare.</li>
	<li>Metti un piccolo batuffolo di cotone sterile nella bocca del topo, quindi arrotola il tampone per far uscire la lingua.</li>
	<li>Tenere la lingua e tirarla delicatamente verso l'alto per rendere la cavità orale, la faringe e la trachea nella stessa direzione longitudinale. La glottide, che è l'ingresso della trachea, sarà mostrata come un punto luminoso, che si apre e si chiude ad ogni respiro.</li>
	<li>Continua a tenere delicatamente la lingua. Inserire la cannula (22 G) nella trachea del topo mirando alla glottide, estraendo il nucleo dell'ago dopo che la cannula è stata inserita nella trachea.</li>
	<li>Utilizzare una pistola per pipette con una piccola quantità di soluzione salina normale per verificare se il tubo è correttamente nella donnola. Se il tubo è nella posizione giusta, la colonna di liquido nella pistola per pipette rimbalzerà ad ogni respiro.</li>
	<li>Far cadere 50 μL di sospensione DPM (preparata al punto 1.2) nel tubo con una pistola per pipette. La sospensione verrà inalata naturalmente nei polmoni del topo mentre respira. NOTA: Per garantire una respirazione regolare, è meglio dare al mouse due volte la sospensione DPM (25 μL per una volta), a 10 s di distanza.</li>
	<li>Rimuovere l'ago per animali domestici dopo l'esposizione al PM. Attendere che il topo rimanga sui termofori fino a quando non hanno ripreso conoscenza (10-20 minuti) e poi rimetterlo nella gabbia di casa.</li>
</ol>4. Legatura coronarica
NOTA: L'operazione di modellazione dell'ischemia miocardica (legatura dell'arteria coronaria) viene eseguita alla 16asettimana.
<ol><li>Preparare strumenti chirurgici. Dopo l'autoclave, conservare tutti gli strumenti chirurgici in una scatola di strumenti sigillata. Immergerli in alcool al 75% per 20-30 minuti prima dell'intervento.</li>
	<li>Costruire la piattaforma chirurgica. Per ottenere la corretta pendenza della piattaforma, utilizzare un coperchio del piatto di coltura cellulare (150 mm x 25 mm). Piegare la seta 0-0 (lunghezza 10-15 cm) a metà e attaccare le estremità del filo alla parte superiore della piattaforma inclinata usando del nastro adesivo per creare un anello di sospensione.</li>
	<li>Anestetizzare i topi seguendo la procedura descritta al punto 3.2. NOTA: deve essere garantito un intervallo di 1 settimana tra ogni somministrazione di tribromoetanolo.</li>
	<li>Disinfettare la piattaforma con salviettine imbevute di alcool.</li>
	<li>Porre il mouse in posizione supina sulla piattaforma di intubazione e agganciare gli incisivi superiori all'anello di sospensione descritto al punto 4.2. Incolla la coda, gli arti e i baffi.</li>
	<li>Rimuovere i peli del torace sinistro e parte del torace destro adiacente con crema depilatoria prima dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Eseguire l'intubazione orotracheale nei topi seguendo la procedura descritta nei punti 3.4-3.8.</li>
	<li>Collegare l'ago per animali domestici con un ventilatore per animali (vedere la tabella dei materiali). Impostazione del ventilatore: frequenza respiratoria - 120 volte / min; rapporto inspirazione/respirazione - 1:1.1; volume corrente - 1,7 ml.</li>
	<li>Pulire la pelle con iodophor e alcool per disinfettare.</li>
	<li>Esponi il cuore. Fai un taglio della pelle per 0,5-1 cm con le forbici oftalmiche e rinforza i muscoli (muscolo pettorale superficiale e muscolo serrato anteriore) per esporre le costole. Bloccare la costola con una pinzetta oftalmica (con ganci) e quindi fare un piccolo taglio al terzo spazio intercostale (vedi Tabella dei materiali). Crea una finestra operativa con strumenti di apertura del torace fatti in casa. NOTA: Il taglio cutaneo si trova a circa un terzo del processo xifoideo e della linea ascellare.</li>
	<li>Strappare le membrane pericardiche. Quindi è possibile ligare LAD seguendo i passaggi 4.11-4.14. NOTA: Se i lobi polmonari bloccano la vista, spingerlo dietro il cuore usando un piccolo batuffolo di cotone sterile.</li>
	<li>All'inizio, individua il LAD.</li>
	<li>Tenere la sutura sterile di seta 6-0 con un ago usando una pinza emostatica microvascolare (vedi Tabella dei materiali). Passare la seta attraverso una larghezza di 2 mm di miocardio nell'area in cui si trova l'arteria coronaria. NOTA: Non cercare di ligare solo il LAD, che può causare gravi emorragie intraoperatorie.</li>
	<li>Posizionare un breve pezzo di seta sterile 5-0 tra la legatura e i tessuti miocardici per prevenire la rottura dei tessuti.</li>
	<li>Legare saldamente il LAD e il piccolo fascio del miocardio attorno ad esso. La legatura è considerata di successo quando la parete anteriore del ventricolo sinistro (LV) diventa pallida; L'elevazione del segmento ST può essere osservata simultaneamente se è collegata una macchina per elettrocardiogramma.</li>
	<li>Spremere delicatamente l'aria dal petto. Sutura dei muscoli intercostali e della pelle in sequenza con seta sterile 5-0. NOTA: Per spremere l'aria dal torace, chiudere il torace al momento dell'espansione polmonare e utilizzare l'indice e il medio per spremere delicatamente la gabbia toracica nel mezzo e consentire all'aria di fuoriuscire da oltre l'ultimo punto. Le siringhe possono anche essere utilizzate per estrarre il gas toracico. NOTA: Si raccomanda una semplice sutura interrotta, poiché i topi possono rosicchiare la seta quando sono svegli.</li>
</ol>5. Recupero
<ol><li>Pulisci tutta la macchia di sangue dopo l'intervento chirurgico, o il topo verrebbe attaccato da altri.</li>
	<li>Posizionare il mouse su una piastra riscaldante in posizione laterale sdraiata. Monitorare continuamente i segni del topo per 5-20 minuti fino a quando non si riprendono dall'anestesia. Il tempo di monitoraggio dipende dallo stato del corpo. NOTA: I topi respirano più facilmente nella posizione laterale sdraiata.</li>
	<li>Una volta recuperato il riflesso di raddrizzamento, trasferire i topi in gabbie di recupero pulite su una piastra riscaldante con cibo e bottiglia d'acqua. Continuare a monitorare per 15-30 minuti per garantire la sopravvivenza del mouse. Tenere il mouse lontano dagli altri prima che possa muoversi in modo completamente autonomo.</li>
	<li>Per prevenire l'infezione della ferita, iniettare penicillina sodica per via intramuscolare secondo la dose desiderata (1,00,000-1,50,000 U/kg). Per i dettagli, si prega di fare riferimento all'etichettatura del farmaco per la conversione del dosaggio.</li>
	<li>Rimetti il mouse nella gabbia di casa. Continuare a monitorare per le prossime 24 ore prima della raccolta dei campioni. Somministrare analgesici per esperimenti a lungo termine.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti da dichiarare.

La creazione di un modello animale composito è leggermente diversa dal modello MI singolo. Mantenere un alto tasso di sopravvivenza è impegnativo nello sviluppo del modello composito. La gravità dell'aterosclerosi nei topi ApoE−/− diventerà più grave con l'estensione del tempo di alimentazione ad alto contenuto di grassi7 e la debolezza dei topi porta ad un aumento della mortalità. Pertanto, è necessario monitorare continuamente le condizioni dei topi durante l'esperimento e regolare il...

L'inquinamento atmosferico è stato associato ad un'elevata mortalità per tutte le cause e ha contribuito a un carico significativo di malattie più della somma dell'inquinamento delle acque, dell'inquinamento del suolo e dell'esposizione professionale1. Un rapporto dell'OMS ha rivelato che l'inquinamento atmosferico esterno ha causato 4,2 milioni di morti premature sia nelle città che nelle aree rurali di tutto il mondo nel 20162. Il 91% delle persone in tutto il mondo vive in luoghi in cui la qualità dell'aria supera i limiti delle linee guida dell'OMS2. Inoltre, il particolato fine (PM) (≤2,5 μm di diametro, PM2,5) è riconosciuto come la minaccia più significativa per l'inquinamento atmosferico per la salute pubblica globale3, in particolare per le persone che vivono in città di paesi a basso e medio reddito.
Gli effetti negativi dell'inquinamento atmosferico sulle malattie cardiovascolari meritano maggiore attenzione. Studi precedenti hanno dimostrato che il PM porta ad un aumento del rischio di malattie cardiovascolari (CVD)4. L'esposizione ad alte concentrazioni di particelle ultrafini per diverse ore può portare ad un aumento della mortalità per infarto miocardico. Per le persone con una storia di infarto miocardico, l'esposizione a particelle ultrafini può aumentare significativamente il rischio di recidiva5. Inoltre, è generalmente accettato che l'esposizione al PM accelera la progressione dell'aterosclerosi6.
Per la ricerca medica, è fondamentale selezionare un modello animale adatto. Esistono già modelli animali di aterosclerosi semplice7, modelli animali di ischemia miocardica8 e modelli animali di esposizione al PM9. Il topo ApoE−/− (apolipoproteina E eliminata) è un modello murino tradizionale utilizzato negli studi sull'aterosclerosi. La capacità di eliminare le lipoproteine plasmatiche nei topi ApoE−/− è gravemente compromessa. L'alimentazione con dieta ricca di grassi causerebbe grave aterosclerosi, simile alla dipendenza dalla dieta della cardiopatia aterosclerotica osservata negli esseri umani7. La legatura dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) è un metodo classico per indurre l'evento ischemico 8,10. L'infusione tracheale è stata utilizzata in molte ricerche e si distingue dai modelli di esposizione11,12 per la sua migliore simulazione e il costo inferiore.
Tuttavia, i modelli animali di singola malattia hanno limitazioni significative nella ricerca scientifica. L'ischemia miocardica indotta semplicemente dalla legatura LAD non è simulata nella situazione reale. Nello stato naturale, l'ischemia miocardica è solitamente causata dalla rottura della placca e dalle arterie coronarie bloccate13. I pazienti con cardiomiopatia ischemica di solito presentano lesioni basiche aterosclerotiche13. Ci sono anche metabolismo lipidico anormale e reazioni infiammatorie nel corpo14. Pertanto, l'ischemia causata da fattori fisici o in condizioni naturali ha diverse manifestazioni patologiche. Studi esistenti hanno dimostrato che l'infarto e l'infiammazione nei modelli di ischemia miocardica con aterosclerosi sono più gravi15,16. L'esposizione al PM può aggravare ulteriormente l'aterosclerosi e l'ischemia miocardica inducendo infiammazione e stress ossidativo1. Tre fattori di solito coesistono allo stato naturale, quindi la situazione reale potrebbe essere meglio simulata utilizzando un modello composto.
Questo protocollo descrive lo sviluppo di un modello animale di ischemia miocardica (IM) che combina aterosclerosi (AS) ed esposizione acuta al PM. I topi ApoE-/− sono stati nutriti con una dieta ricca di grassi per indurre l'aterosclerosi. L'esposizione polmonare di PM è stata imitata gocciolando la sospensione di PM attraverso la trachea. La legatura del LAD nei topi è stata utilizzata per indurre ischemia miocardica. Questi metodi sono stati combinati e ottimizzati per simulare meglio lo stato della malattia e migliorare il tasso di sopravvivenza degli animali. Non è necessaria alcuna unità di grande esposizione o macchina per anestesia a gas, rendendo l'esperimento facile da eseguire. Questo modello può essere utilizzato per studiare l'impatto dell'esposizione al PM nell'inquinamento atmosferico sull'aterosclerosi e sulla cardiomiopatia ischemica e condurre ricerche su nuovi farmaci sviluppati per trattare malattie con fattori così complessi.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-Tribromoetanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr>Disinfettante <td></td><td></td><td></td><td>alcolico al 75%</td></tr><tr><td>Ventilatore per animali</td><td>Shanghai Alcott Biotech</td><td>ALC-V8S Tamponi</td><td></td></tr><tr><td>di</td><td></td><td></td> cotone <td>Sterili</td></tr><tr><td>Tamponi di cotone per neonati</td><td></td><td></td><td>Sterili, di circa 3 mm di diametro</td></tr><tr><td>Piatto</td> <td>di colturaCorning</td><td>430597</td><td>150 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Particolato diesel</td><td>National Institute of Standards Technology</td><td>1650b</td><td></td></tr><tr><td>Scheda</td><td></td><td></td> di dissezione <td>Circa 25 x 17 cm. La tavola da dissezione può essere sostituita con una tavola di legno della stessa dimensione</td></tr><tr><td>Dieta ricca di grassi per topi</td><td></td><td></td><td>Prescrizione: tuorlo d'uovo in polvere 10%, strutto 10%, sterolo 1%, mangime di mantenimento 79%</td></tr><tr><td>Disinfettante</td><td></td><td></td><td></td>iodoforo</tr><tr><td>Faretto</td><td></td><td></td> LED <td>5 V, 3 W, con tubi e fascette Palla di</td></tr><tr><td>filato di seta medica</td><td>Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.</td><td>-</td><td>0-0</td></tr><tr><td>Nastro medico</td><td>3M</td><td>1527C-0</td><td></td></tr><tr><td>Pinze emostatiche micro vascolari Shanghai</td><td>Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>Portaaghi</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>JC32010</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>salina normaleForbici oftalmiche</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>Y00040</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta oftalmica, 10 cm, curva, con ganci</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>JD1080</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta oftalmica, 10 cm, curva, con denti</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fabbrica di strumenti chirurgici</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette</td><td>Axygen</td><td>T-200-Y-R-S</td><td>0-200 &mu; L</td></tr><tr><td>Pipetta</td><td>eppendorf</td><td>3121000074</td><td>100 uL</td></tr><tr><td>Spilla</td><td></td><td></td> da balia <td>Circa 4,5 cm di lunghezza, per la realizzazione di strumenti per l'apertura del torace</td></tr><tr><td>Cannule per flebo per piccoli animali</td><td>Baayen healthcare suzhou</td><td>BAAN-322025</td><td>CATETERE IV 22FG x 25 MM</td></tr><tr><td>Ago da sutura con filo</td><td>Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.</td><td>-</td><td>6-0, Linea di nylon</td></tr><tr><td>Ago da sutura con filo</td><td>JinHuan Medical</td><td>F503</td><td>5-0</td></tr><tr><td>Siringa</td><td></td><td></td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Tert-amil alcool</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zoom stereomicroscopio</td><td>Mshot</td><td>MZ62</td><td></td></tr></tbody></table>

aggravamento dell'ischemia miocardica in seguito all'esposizione al particolato in un modello animale di aterosclerosi

Aggravation of Myocardial Ischemia upon Particulate Matter Exposure in Atherosclerosis Animal Model

I problemi di salute causati dall'inquinamento atmosferico (in particolare l'inquinamento da particolato) stanno ricevendo sempre più attenzione, soprattutto tra i pazienti con malattie cardiovascolari, il che aggrava i disturbi complicati e causa una prognosi infausta. Il modello di esposizione semplice all'ischemia miocardica (MI) o al particolato (PM) non è adatto per tali studi su malattie con cause multiple. Qui è stato descritto un metodo per costruire un modello composito che combina esposizione al PM, aterosclerosi e ischemia miocardica. I topi ApoE-/− sono stati nutriti con una dieta ricca di grassi per 16 settimane per sviluppare l'aterosclerosi, l'instillazione tracheale della sospensione standard di PM è stata eseguita per simulare l'esposizione polmonare di PM e l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra è stata legata una settimana dopo l'ultima esposizione. L'instillazione tracheale di PM può simulare l'esposizione polmonare acuta riducendo significativamente il costo dell'esperimento; La classica legatura dell'arteria discendente anteriore sinistra con intubazione tracheale non invasiva e un nuovo dispositivo di espansione ausiliaria possono garantire il tasso di sopravvivenza dell'animale e ridurre la difficoltà dell'operazione. Questo modello animale può ragionevolmente simulare i cambiamenti patologici del paziente di infarto miocardico aggravato dall'inquinamento atmosferico e fornire un riferimento per la costruzione di modelli animali relativi a studi che coinvolgono malattie con molteplici cause.

I topi sono stati sottoposti a eutanasia 24 ore dopo la legatura dell'arteria coronaria e il sangue è stato raccolto dopo l'anestesia. I topi sono stati anestetizzati con tribromoetanolo (come da fase 3.2) e il campione di sangue è stato raccolto dal seno retroorbitale. Il cuore è stato prelevato e il grado di ischemia è stato esaminato mediante colorazione con cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) (Figura 1). I tessuti normali diventano rossi quando il TTC reagisce con ...

Questo protocollo descrive un modello animale composito con esposizione al particolato (PM) che aggrava l'ischemia miocardica con aterosclerosi.

Aggravamento dell'ischemia miocardica in seguito all'esposizione al particolato in un modello animale di aterosclerosi

The health problems caused by air pollution (especially particulate pollution) are getting more and more attention, especially among cardiovascular ...

Il protocollo qui è per la costruzione di un modello animale composto di ischemia miocardica. Combinazione con la sclerosi aterica e l'esposizione acuta al PM. Questo è un modello animale più affidabile per la ricerca sulle malattie correlate.Questo modello animale può simulare meglio tali malattie in una situazione reale. Inoltre questo metodo ha un alto tasso di successo ed è facile da eseguire. Il modello può essere utilizzato per la ricerca patologica e lo sviluppo di farmaci di malattie con fattori complessi.Questo modello può fornire una piattaforma per la ricerca cardiovascolare e tossicologica ambientale e contribuisce con idee e riferimenti per la ricerca della malattia multifattoriale. L'intubazione orotracheale, l'apertura fessurata del torace e la corretta posizione di legatura sono le chiavi del successo di questo modello. È essenziale mantenere il briefing del mouse e prevenire l'emorragia.Inizia selezionando due o tre topi a caso e controlla se c'è una placca nell'arco aortico mediante ecografia o osservazione anatomica diretta. Anestetizzare il mouse selezionato e posizionarlo in posizione supina sulla scheda del mouse. Agganciare gli incisivi superiori all'elastico.Focalizzare un piccolo faretto a LED con un tubo flessibile sulla trachea, che si trova intorno al punto medio della linea ascellare. Metti un piccolo batuffolo di cotone sterile nella bocca del topo e poi arrotola il tampone per far uscire la lingua. Tenere la lingua e tirarla delicatamente verso l'alto per rendere la cavità orale, la faringe e la trachea nella stessa direzione longitudinale.La glottide, che è l'ingresso della trachea, può essere vista come un punto luminoso che si apre e si chiude ad ogni respiro. Inserire una colza calibro 22 nella trachea del topo mirando alla glottide, quindi estrarre il nucleo dell'ago. Utilizzare una pistola per pipette con una piccola quantità di soluzione salina normale per verificare se il tubo è correttamente nel respiro sibilante.Se il tubo è nella posizione corretta, la colonna di liquido nella pistola per pipette rimbalzerà ad ogni respiro. Far cadere 50 microlitri di sospensione DPM nel tubo con una pistola per pipette. Rimuovere l'ago per animali domestici dopo l'esposizione al PM.Tenere il mouse sulla piastra elettrica fino a quando non riprende conoscenza, quindi riposizionare il mouse nella gabbia di casa. Posizionare il mouse in posizione supina sulla piattaforma di intubazione e fissare il mouse. Rimuovere i peli del torace sinistro e parte del torace destro adiacente con crema depilatoria.Quindi collegare l'ago per animali domestici con un ventilatore per animali. Pulire la pelle con iodoformio e alcool per disinfettare. Fai un taglio della pelle per circa un centimetro con le forbici oftalmiche e rinforza i muscoli per esporre le costole.Bloccare la costola con una pinzetta oftalmica con dente e fare un piccolo taglio al terzo spazio intercostale. Crea una finestra operativa con strumenti di apertura del torace fatti in casa e poi strappa le membrane pericardiche. Tenere la sutura sterile di seta sei zero con un ago usando una pinza emostatica microvascolare.Passa la seta attraverso una larghezza di due millimetri di miocardio nell'area in cui si trova l'arteria coronaria. Posizionare un breve pezzo di seta sterile cinque zero tra la legatura e i tessuti miocardici per prevenire la rottura dei tessuti. Legare strettamente l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra e il piccolo fascio del miocardio attorno ad esso.La legazione è considerata di successo quando la parete anteriore del ventricolo sinistro diventa pallida. Spremere delicatamente l'aria dal petto. Quindi suturare i muscoli intercostali e la pelle in sequenza con seta sterile cinque zero.Pulire tutta la macchia di sangue dopo l'intervento chirurgico e quindi posizionare il mouse su una piastra elettrica in posizione laterale sdraiata. Monitorare continuamente i segni del topo per circa cinque a 20 minuti fino a quando non si riprendono dall'anestesia. Una volta recuperato il riflesso di raddrizzamento, trasferire il mouse in una gabbia di recupero pulita su una piastra riscaldante con la bottiglia di cibo e acqua.Continuare a monitorare per 15-30 minuti per garantire la sopravvivenza del mouse. Infine, iniettare penicillina sodica per via intramuscolare secondo la dose desiderata per prevenire l'infezione della ferita. Il grado di ischemia è stato esaminato mediante colorazione TTC.I tessuti normali diventano rossi quando il TTC reagisce con la succinato deidrogenasi. Mentre i tessuti ischemici rimangono pallidi a causa della diminuzione dell'attività della deidrogenasi. Le immagini rappresentative mostrano i tessuti cardiaci che non hanno subito alcun intervento chirurgico per infarto miocardico o esposizione a PM, hanno subito un intervento chirurgico per infarto miocardico ma nessuna esposizione al PM e hanno subito un intervento chirurgico per l'infarto miocardico e l'esposizione al PM.L'esposizione al PM ha aggravato l'ischemia miocardica. Oil Red O può colorare con precisione i grassi neutri, come i trigliceridi nei tessuti. Le macchie rosse nella foto indicano placche.Le placche nell'aorta di topi wild type con dieta regolare, topi knockout APO E con dieta ricca di grassi e topi knockout APO E con una dieta ricca di grassi e soffrivano di esposizione al PM sono mostrate qui dalla colorazione O rosso olio. L'alimentazione ad alto contenuto di grassi ha portato all'aterosclerosi nei topi knockout APO E e l'esposizione al PM ha aggravato l'aterosclerosi. È importante assicurarsi che il tubo endotracheale sia inserito correttamente durante la sieromiotomia.L'operatore deve completare l'operazione di intubazione in modo rapido, preciso e prestare sempre attenzione alle condizioni respiratorie dell'animale durante l'operazione. Il nostro metodo aiuta i ricercatori che si occupano dell'intersezione tra inquinamento atmosferico e malattie cardiovascolari. Qui forniamo un'idea.Naturalmente, i ricercatori possono anche svolgere direttamente ricerche basate sul modello animale che abbiamo descritto.

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Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Descriviamo le procedure per quantificare e caratterizzare le lesioni aterosclerotiche in modelli murini utilizzando il sezionamento di precisione del seno aortico e dell'aorta ascendente combinato con analisi istochimica e immunoistochimica.

Analisi quantitativa e caratterizzazione delle lesioni aterosclerotiche nel seno aortico murino

Questo video mostra due modelli di intimale sviluppo placca nelle arterie murini e sottolinea le differenze di iperplasia miointimale e aterosclerosi.

Indurre miointimale Iperplasia Versus aterosclerosi nei topi: Introduzione di due modelli validi

Questo studio descrive una procedura invasiva per l'induzione dell'aterosclerosi accelerata nei topi. Rispetto ad altri metodi che utilizzano lesioni indotte da elettricità o crioindotti, la lesione indotta dalla meccanica imita la condizione umana di mentonosi dopo le terapie di revascolazione ed è ideale per lo studio dei meccanismi molecolari coinvolti.

Induzione di aterosclerosi accelerata nei topi: il modello "Wire-Injury"

Qui dimostriamo un protocollo per standardizzare le procedure di campionamento di un modello porcino stabilito di infarto miocardico acuto al fine di aumentarne il valore traslazionale nella comprensione della patofisiologia della lesione del miocardio di ischemia/riperfusione e per testare nuovi farmaci candidati.

Miglioramento di un modello di infarto miocardico porcina cassa chiusa tramite la normalizzazione del tessuto e le procedure di campionamento di sangue

Descriviamo un protocollo per indurre aterosclerosi nella radice aortica di ApoE- / - topi alimentati con una dieta atherogenic, attraverso un continuo rilascio di aldosterone. Inoltre vengono descritti metodi per caratterizzare la composizione della placca.

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Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

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Questo protocollo delinea i passaggi per indurre l'infarto miocardico nei topi preservando il pericardio e il suo contenuto.

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A Murine chiuso del torace modello di ischemia miocardica e riperfusione

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Scopri come costruire un modello animale composito di ischemia miocardica combinato con aterosclerosi ed esposizione acuta a particolato. Questo metodo offre un'alta percentuale di successo per la ricerca cardiovascolare.

Aggravamento dell'ischemia miocardica in seguito all'esposizione al particolato in un modello animale di aterosclerosi

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