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Articolo metodologico

Taglio cesareo di un modello animale preclinico di corioamnionite scatenata da streptococco di gruppo B (GBS)

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DOI:

10.3791/63221

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29 dicembre 2021

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* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'obiettivo di questo protocollo è quello di descrivere un modello animale preclinico di corioamnionite indotta da streptococco di gruppo B (GBS). Lo studio è progettato per indagare i processi meccanicistici, i potenziali legami causali con i disturbi dello sviluppo e, infine, per sviluppare trattamenti traslazionali antinfiammatori placento e neuroprotettivi.

Abstract

Lo streptococco di gruppo B (GBS) è uno dei batteri più comuni isolati durante la gravidanza umana. È una delle principali cause di infezione/infiammazione della placenta, chiamata corioamnionite. La corioamnionite espone il feto in via di sviluppo a un alto rischio di lesioni d'organo, morbilità perinatale e mortalità, nonché a menomazioni neurocomportamentali per tutta la vita e altri problemi di sviluppo non neurologici. I due sottotipi più frequenti di isolati di GBS da tessuti materni e fetali sono i sierotipi Ia (13%-23%) e III (25%-53%). Il nostro laboratorio ha sviluppato e caratterizzato un modello di corioamnionite indotta da GBS per studiare i successivi impatti sul sistema nervoso centrale del feto in via di sviluppo e per comprendere gli aspetti meccanicistici sottostanti. Questo articolo presenta il design e gli usi del modello preclinico di ratto, che riproduce fedelmente il segno distintivo della corioamnionite indotta da GBS nell'uomo. Questo articolo ha lo scopo di aiutare gli scienziati a riprodurre il progetto sperimentale e di fornire supporto attraverso esempi di risoluzione dei problemi. Il presente modello può anche contribuire a potenziali scoperte attraverso la scoperta di cause, meccanismi e nuove vie terapeutiche, che rimangono incerte in molte menomazioni dello sviluppo derivanti dalla corioamnionite. Inoltre, l'uso di questo modello può essere esteso agli studi delle morbilità perinatali non neurologiche comuni e gravi che interessano, ad esempio, la retina, l'intestino, il polmone e il rene. L'interesse principale di questa ricerca è nel campo delle menomazioni dello sviluppo neurologico fetale indotte da GBS come la paralisi cerebrale (CP), il disturbo da deficit di attenzione e iperattività (ADHD) e il disturbo dello spettro autistico (ASD). La logica a sostegno di questo modello è presentata in questo articolo, seguita da procedure e risultati.

Introduzione

L'attivazione immunitaria materna (MIA) è stata descritta come uno dei fattori di rischio indipendenti più critici per la nascita prematura, la morte fetale e i disturbi cognitivi e comportamentali permanenti nella progenie 1,2,3,4. Gran parte della ricerca preclinica esistente sul ruolo dell'infiammazione gestazionale sulla placenta e sugli esiti dello sviluppo utilizza componenti patogeni, come il lipopolisaccaride (LPS) di E. coli e l'analogo sintetico dell'RNA virale a doppio filamento, la polii....

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati approvati dall'Istituto di ricerca del McGill University Health Centre (RI-MUHC). Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti secondo il Canadian Council on Animal Care.

1. Ratti Lewis gravidi

  1. Ottenere ratti Lewis da fonti commerciali al giorno gestazionale (G)14. Ospitarli in un'adeguata struttura per animali (RI-MUHC animal facility) in un ambiente controllato a 20-23 °C con un ciclo luce/buio di 12 ore e accesso all'acqua e al cibo ad libitum17.
  2. Pesare le dighe ogni giorno per rilevare qualsiasi comport....

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Risultati

L'inoculazione IP di GBS ha provocato un'infezione placentare
La colorazione con immunoistochimica (IHC) (utilizzando anticorpi policlonali che hanno come bersaglio il sierotipo Ia di GBS) ha dimostrato che l'infezione da GBS ha raggiunto il compartimento deciduale della placenta. L'infezione si è diffusa anche dalla decidua al labirinto, alla placca corionica e, in alcuni casi, ai feti, portando alla morte fetale (5,8 ± 0,8 nei GBS esposti rispetto a 9,3 ± 0,6 cuccioli nelle cucciolate di controllo (.......

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Discussione

Passaggi critici nel protocollo
Diversi passaggi del protocollo sono critici e richiedono alcuni controlli di qualità. Ad esempio, esiste il rischio di contaminazione dello stock GBS da parte di altri agenti patogeni. Questo può essere rapidamente identificato utilizzando la tecnica appropriata di identificazione microbica GBS, come l'aspetto della colonia su agar BHI (ad esempio, dimensioni, forma, colore), la placcatura in duplicato della dose di GBS β-emolitico su .......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse finanziari.

Ringraziamenti

Questo studio è stato supportato dall'Istituto di ricerca del McGill University Health Centre (RI-MUHC), dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR). Questo studio è stato reso possibile dalle seguenti agenzie di finanziamento, istituzioni e fondazioni: Canadian Institute of Health Research (CIHR), Foundation of Stars, Fonds de Recherche Québec-Sciences (FRQS), McGill University e Sherbrooke University. Molte grazie alla Dott.ssa Claire Poyart, Università Denis Diderot (Parigi VII), Francia, e alla Dott.ssa Mariela Segura, Università di Montréal, Canada per i generosi doni di GBS.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Provetta sterile da 5 mLBD Biosciences
Provette per falco da 50 mlThermo Fisher339652
Lama o bisturiBD Medical371716
Brain Heart Infusion BrothCriterion (Hardy diagnostics)C5141
CHROMID Strepto B agar plateBioMerieux, Saint-Laurent43461
Columbia blood agar 5 % con terreno di sangue di pecoraThermo ScientificR01215
Forward primer5' - TAC AGC CTG AGG ACA TAT TA3'Sigma
Siringa da insulinaBecton, Dickinson e Co(BD)324702
rattiLewis Charles River Laboratories
MethylbutanSigma AldrichM32631
Provette per prelievo di sangue MicrotainerBecton, Dickinson e Co(BD)365965
Reverse Primer5' - GCA CTT TAA CCC TTC GAT GA -3'PipetteSigma
1 MLThermo Fisher170353N
Pipette sierologiche 10 MLThermo Fisher170356N
Pipette sierologiche 25 MLThermo Fisher170357N
Pipette sierologiche 5 MLThermo Fisher170355N
Superfrost Plus Micro Slide, PremiumVWRCA48311-703
sierologiche

Riferimenti

  1. Hui, C. W., et al. Prenatal immune challenge in mice leads to partly sex-dependent behavioral, microglial, and molecular abnormalities associated with schizophrenia. Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 13(2018).
  2. Costa, A., et al.

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Ristampe e permessi

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