Name: Un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Scopri un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante per studiare le risposte delle cellule T helper di tipo 2. Questo metodo riproduce le caratteristiche cliniche dell'NEC nei neonati prematuri.

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Gli autori ringraziano la Clinical Biological Resource Bank del Guangzhou Women and Children's Medical Center per aver fornito il campione clinico e il Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center per la fornitura di topi. Questa ricerca è stata sostenuta dalla National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Questa ricerca è stata approvata dal Comitato etico medico del Guangzhou Women and Children's Medical Center (n. 174A01) e dal Comitato etico animale del Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Tutti gli animali sono stati allevati nella stessa stanza in un ambiente specifico privo di agenti patogeni (SPF) e gli esperimenti sono stati condotti in un ambiente convenzionale. I topi utilizzati per l'allevamento avevano 7-8 settimane; i topi per indurre NEC (n = 72) sono stati separati dalla diga il giorno 4, e le dighe (n = 14) sono state tenute nella gabbia originale e allattate i topi del gruppo di controllo (Cont.) (n = 24).
1. Preparazione di reagenti e dispositivi
<ol><li>Preparare il sostituto del latte per i topi BALB/c nel rapporto corrispondente (latte prematuro in polvere per bambini: latte di capra in polvere = 2:1). NOTA: Le composizioni nutrizionali finali del latte artificiale12 sono riportate nella Tabella 1.</li>
	<li>Soluzione di LPS (2,5 mg/mL)<ol>
<li>Sciogliere un totale di 10 mg di polvere di LPS in 4 ml di acqua distillata sterilizzata, mescolare bene e conservare in frigorifero a -20 °C dopo l'aliquotazione. NOTA: la soluzione LPS viene conservata al buio a 2-8 °C per l'uso immediato o a -20 °C per la conservazione a lungo termine.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Indurre enterocolite necrotizzante nei topi neonatali BALB/c
<ol><li>Dai da mangiare ai topi neonatali.<ol>
<li>Tenere i topi neonatali nella stessa gabbia con la diga, allattata dalla diga nei giorni 0-4.</li>
		<li>La notte del giorno 4 (quando i topi neonatali pesano 2,5-3 g), separare i topi neonatali nel gruppo NEC dalla diga per indurre NEC, tenerli in un'incubatrice per animali e nutrirli con la formula. Tuttavia, il gruppo Cont. è autorizzato a rimanere e ad essere alimentato dalla diga. NOTA: I topi neonatali che sono separati dalla diga devono essere allevati in un'incubatrice a causa della loro debole regolazione della temperatura corporea.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparare il tubo di gavage immergendolo in contenitori di alcol al 75% per 1-2 minuti e lavarli due volte in acqua pulita e a doppia distillazione. NOTA: Per evitare la contaminazione incrociata tra i topi, il processo di cui sopra deve essere eseguito dopo aver alimentato ciascun topo.</li>
	<li>Indurre il modello NEC.<ol>
<li>Prendi i topi neonatali dalla diga il giorno 4 e digiunali per una notte.</li>
		<li>Gavage i topi con LPS (20-30 μL alla volta) e nutrirli con la formula il giorno 5 (40-50 μL alla volta).</li>
		<li>Dal giorno 5 in poi, sottoporre i topi a un ciclo ipossia-reossigenazione-freddo-shock due volte al giorno per 5 giorni. Posizionare i topi in un dispositivo di ipossia al 5% di O2 per 90 s e riossigenarli per 3 minuti; ripetere questo processo cinque volte. Quindi, posizionare i topi in un ambiente a 4 ° C per 15 minuti e quindi trasferirli in un'incubatrice. Vedere la Figura 1A,B per il processo di induzione. NOTA: Un ciclo di ipossia-reossigenazione-stimolazione del freddo è stato eseguito una volta al mattino e una volta nel pomeriggio. Una miscela di 5% O2 con 95% N2 è stata preparata nel contenitore e la concentrazione è stata misurata con un rilevatore di ossigeno.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Osservare da vicino tutti i topi, pesarli ogni giorno, registrare la sopravvivenza dei topi durante il periodo di induzione e registrare le caratteristiche delle feci (con o senza feci appiccicose / feci sanguinolente). NOTA: il modello NEC stabilito dura 5 giorni.</li>
	<li>Il giorno 10 o prima, quando i topi mostrano sintomi NEC (ileo, ematochezia, diarrea)13, eutanasizzare i topi mediante anestesia per inalazione con isoflurano, quindi raccogliere immediatamente il tessuto intestinale. Non raccogliere tessuti dai topi che sono morti spontaneamente. NOTA: In questo studio, il punto finale dell'eutenasia del topo è stato adattato quando il topo ha mostrato ematochezia e cianosi di tutto il corpo.</li>
</ol>3. Gavage il mouse
<ol><li>Fissare la testa del topo, tenendo il tubo gastrico nella mano destra. Inserire il tubo gastrico dall'angolo sinistro della bocca del mouse. NOTA: La testa è stata fissata con l'indice sulla testa del mouse e premuta delicatamente all'indietro e verso il basso per evitare che il mouse si pieghi in avanti durante l'operazione e influenzi l'inserimento del tubo gastrico.</li>
	<li>Spostare lentamente il tubo al centro della bocca. Dopo aver inserito il tubo di circa 2-3 cm, spingere 40-50 μL di formula o 20-30 μL di LPS nel tratto digestivo. Vedere la Figura 2A,B per il gavage. NOTA: In circostanze normali, il tubo gastrico viene inserito nel tratto digestivo senza intoppi. Se il topo ha un forte riflesso di vomito, il tubo gastrico è stato inserito nella trachea per errore. Il tubo gastrico deve essere estratto delicatamente e il topo deve essere lasciato riposare per un po 'prima di tentare di nuovo il gavage. Inoltre, la procedura gavage viene utilizzata per indurre il modello di NEC prima dell'eutanasia dei topi.</li>
</ol>4. Raccogliere campioni di tessuto intestinale fresco per la colorazione di ematossilina ed eosina (H & E)
<ol><li>Immergere il tessuto ileo fresco del topo in formalina al 10% per 24 ore.</li>
	<li>Incorporare i tessuti nella paraffina e tagliarli in sezioni da 4 μm.</li>
	<li>Deparaffinizzare le sezioni in xilene e reidratarle successivamente in etanolo assoluto, etanolo al 95%, etanolo all'80%, etanolo al 70% e acqua distillata, immergendole per 5 minuti in ogni passaggio. Colorare le sezioni con soluzione di ematossilina per 5 minuti e differenziarle in acido cloridrico all'1% in alcool al 75% per 5 s. Infine, macchiarli con una soluzione di eosina per 1 minuto. NOTA: Dopo la colorazione con soluzione di ematossilina, deve essere differenziato con acido cloridrico all'1% in etanolo per rimuovere la soluzione di ematossilina eccessivamente legata e il colorante citoplasmatico di ematossilina. La concentrazione dell'1% di acido cloridrico è adatta per il tessuto intestinale.</li>
	<li>Esaminare l'istopatologia del tessuto intestinale con ingrandimento 40x.</li>
</ol>

<ol><li>Horbar, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+and+neonatal+morbidity+among+infants+501+to+1500+grams+from+2000+to+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009.</a> Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).</li>
<li>Stoll, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+outcomes+of+extremely+preterm+infants+from+the+NICHD+Neonatal+Research+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network.</a> Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).</li>
<li>Neu, J., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis.</a> New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).</li>
<li>Sangild, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invited+Review%3A+The+preterm+pig+as+a+model+in+pediatric+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology.</a> Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).</li>
<li>Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+an+equivalent+clonotype+among+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).</li>
<li>Kuroda, E., Yamashita, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+enhanced+macrophage-mediated+prostaglandin+E2+production+and+its+suppressive+role+in+Th1+activation+in+Th2-dominant+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice.</a> Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).</li>
<li>Fornefett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+clinics%2C+pathologies+and+immune+responses+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+infected+with+Streptobacillus+moniliformis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis.</a> Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).</li>
<li>Rosas, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+influences+immune+responses+and+disease+outcome+of+cutaneous+L.+mexicana+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice.</a> International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).</li>
<li>Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+preterm+infants+and+the+influence+of+milk+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">T cells in preterm infants and the influence of milk diet.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1035(2020).</li>
<li>Nanthakumar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+excessive+intestinal+inflammation+in+necrotizing+enterocolitis%3A+an+immature+innate+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response.</a> PLoS One. 6 (3), 17776(2011).</li>
<li>Afrazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+and+treatment+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Toll-like+receptors+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond.</a> Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).</li>
<li>Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk-substitutes+comparable+to+rat%27s+milk%3B+their+preparation%2C+composition+and+impact+on+development+and+metabolism+in+the+artificially+reared+rat%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat.</a> British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin-induced+myeloid-derived+suppressor+cell+therapy+attenuates+pathologic+inflammatory+conditions+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).</li>
<li>MohanKumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+neonatal+model+of+necrotizing+enterocolitis+caused+by+anemia+and+red+blood+cell+transfusions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions.</a> Nature Communications. 10 (1), 3494(2019).</li>
<li>He, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitory+presence+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+neonates+is+critical+for+control+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation.</a> Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).</li>
<li>Cho, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+pathoimmunology+of+necrotizing+enterocolitis+reveals+novel+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities.</a> Nature Communications. 11 (1), 5794(2020).</li>
<li>Halpern, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+IL-18-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).</li>
<li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP3K2-regulated+intestinal+stromal+cells+define+a+distinct+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche.</a> Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).</li>
<li>Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+new+insights+into+pathogenesis+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms.</a> Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).</li>
<li>Chuang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cow%27s+milk+protein-specific+T-helper+type+I%2FII+cytokine+responses+in+infants+with+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.

Il NEC è l'emergenza del sistema gastrointestinale più comune per i neonati, con un'alta incidenza e mortalità, specialmente nei neonati prematuri1,2,3. Tuttavia, la sua patogenesi non è ancora chiara. Attualmente si ritiene che il danno alla mucosa, l'invasione di agenti patogeni e l'alimentazione enterale siano fattori ad alto rischio per NEC3. Ad oggi, gli animali utilizzati per il modello NEC sono pri...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
<img alt="Timeline diagram of NEC induction; process includes LPS, formula, hypoxia, reoxygenation stimulation." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="NEC induction timeline diagram, days after birth, LPS-formula hypoxia reoxygenation protocol" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was&#160;updated.

Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

L'enterocolite necrotizzante (NEC), la più grave malattia gastrointestinale (GI), si verifica nella maggior parte dei neonati prematuri (>90%), in particolare quelli con peso alla nascita molto basso (VLBW)1. Nei neonati VLBW, l'incidenza della malattia varia dal 10% al 12% e la mortalità dei bambini con diagnosi di NEC è compresa tra il 20% e il 30%2,3. La causa del NEC può essere correlata a lesioni della mucosa, invasione da parte di batteri patogeni e alimentazione intestinale, che può portare a risposte infiammatorie e all'induzione di lesioni intestinali in ospiti sensibili3. La patogenesi del NEC non è chiara. Ricerche pertinenti mostrano che la risposta immunitaria del bambino affetto è anormale e la suscettibilità genetica, la tensione microvascolare e i cambiamenti batterici intestinali possono svolgere un ruolo importante nella malattia3.
Il modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca sulla patogenesi del NEC. Le specie animali utilizzate per i modelli NEC sono maiali, ratti e topi. Tuttavia, a causa del lungo periodo di gestazione, dei cicli di crescita e dei costi elevati, negli ultimi anni i suini non sono stati la prima scelta per i modelli NEC e sono stati sostituiti con ratti o topi4. Poiché ci sono differenze nel background immunitario di diversi ceppi di topo5, diversi studi devono utilizzare diversi ceppi di topi per stabilire modelli animali NEC. I topi BALB/c hanno una caratteristica importante; quando sono infettati o affrontano danni esterni, la polarizzazione delle cellule TH2 durante l'infezione nei topi è significativamente più forte di quella in altri ceppi di topi6,7,8. Le cellule T helper svolgono un ruolo cruciale nella comparsa e nella progressione di NEC, in particolare lo sviluppo di cellule TH23,9,10,11. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB / c per stabilire il modello NEC, che potrebbe essere utile per la ricerca sulla malattia NEC sulle cellule T.

<table><tbody><tr><td>Etanolo assoluto</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>100092683</tr><tr><td>Latte di capra in polvere</td><td>&nbsp; Petag&nbsp;</td><td></td><td></td>71795558417</tr><tr><td>soluzione colorante HE</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>G1003</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD.</td><td>R510&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Adrich</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>Ossigeno medico</td><td>vari</td><td>vari</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>NIKON</td><td>Sistema di imaging NIKON (DS-Ri2)</td><td></td></tr> <tr><td>Resina neutra</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>10004160</tr><tr><td>Paraffina</td><td>vari</td><td>vari</td><td></td></tr><tr><td>Latte prematuro in polvere</td><td>Abbott</td><td>57430</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>10023418</tr><tr><td>1% Acido cloridrico</td><td>vari</td><td>vari</td><td></td></tr><tr><td>10% Formalina</td><td>LEAGENE</td><td>DF0110</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello murino balb/c neonatale di enterocolite necrotizzante

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi neonatali BALB/c sono usati raramente. Studi correlati hanno dimostrato che quando i topi sono infetti, la differenziazione delle cellule Th2 è predominante nei topi BALB / c rispetto ai topi C57BL / 6J. Gli studi hanno suggerito che la presenza e lo sviluppo di NEC sono associati ad un aumento delle cellule T helper di tipo 2 (Th2) e sono generalmente accompagnati da infezione. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB/c neonatali per indurre un modello NEC con caratteristiche cliniche e cambiamenti patologici intestinali simili a quelli osservati nei bambini con NEC. Ulteriori studi sono necessari per determinare se questo modello animale potrebbe essere utilizzato per studiare le risposte delle cellule Th2 in NEC.

Il modello NEC murino BALB/c è stato indotto dall'alimentazione con formula, dall'alimentazione con LPS, dall'ipossia e dalla stimolazione a freddo. Durante il periodo di induzione, i topi sono stati osservati per patologia intestinale, caratteristiche delle feci, cambiamenti di peso corporeo e sopravvivenza giornaliera. Immagini rappresentative dell'intestino tenue durante l'induzione del NEC; i numeri nella foto rappresentano il punteggio di patologia intestinale da 0 (epitelio normale) a 4 (il più grave) (<strong clas...

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi neonatali BALB/c sono usati raramente. Studi correlati hanno dimostrato che quando i topi sono infetti, la differenziazione delle cellule Th2 è predominante nei topi BALB / c rispetto ai topi C57BL / 6J. Gli studi hanno suggerito che la presenza e lo sviluppo di NEC sono associati ad un aumento delle cellule T helper di tipo 2 (Th2) e sono generalmente accompagnati da infezione. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB/c neonatali per indurre un modello NEC con caratteristiche cliniche e cambiamenti patologici intestinali simili a quelli osservati nei bambini con NEC. Ulteriori studi sono necessari per determinare se questo modello animale potrebbe essere utilizzato per studiare le risposte delle cellule Th2 in NEC.

Un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Questo studio utilizza topi BALB / c per stabilire il modello NEC, che sarà utile per la ricerca sulla malattia sulle cellule T. Il quinto giorno, i due gruppi non mostrano differenze significative sulle dimensioni del corpo. Tuttavia, il giorno 10 i topi NEC erano significativamente più sottili dei topi di controllo.Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. Il modello NEC potrebbe essere vantaggioso per studiare la polarizzazione delle cellule T. A dimostrare la procedura sarà Yan Tian, un post-laurea del mio laboratorio.Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno. Dal quinto giorno in poi, metterli in un dispositivo per ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Quindi, posizionare i topi in un ambiente a quattro gradi Celsius per 15 minuti e trasferirli in un'incubatrice.Osservare da vicino tutti i topi, pesarli ogni giorno, registrare la sopravvivenza dei topi durante il periodo di induzione e registrare se le loro feci sono sanguinolente e appiccicose. Tenendo il tubo gastrico nella mano destra, fissare la testa del mouse con l'indice sulla testa del topo premuto delicatamente all'indietro e verso il basso. Inserire il tubo gastrico dall'angolo sinistro della bocca e spostarlo lentamente di due o tre centimetri al centro della bocca.Spingere da 40 a 50 microlitri di formula o da 20 a 30 microlitri di LPS nel tratto digestivo. Se il topo ha un forte riflesso di vomito e il tubo gastrico entra nella trachea, estrarre delicatamente e lasciare riposare il topo prima di tentare di nuovo il gavage. Immergere il tessuto fresco dell'illum di topo nel 10% di formalina, incorporare i tessuti nella paraffina e tagliarli di quattro sezioni micrometriche.Per deparaffinizzare le sezioni, metterle in xilene. Immergere per cinque minuti con successo in etanolo assoluto, 95% etanolo, 80% etanolo, 70% etanolo e acqua distillata. Quindi, colorare le sezioni con soluzione di ematossilina per cinque minuti e differenziarle in acido cloridrico all'1% e alcool al 70% per cinque secondi.Infine, macchiarli con una soluzione di eosina per un minuto ed esaminare l'istopatologia del tessuto intestinale a 40 volte l'ingrandimento. Le fotomicrografie del punteggio di patologia intestinale da zero a quattro hanno mostrato mucosa intatta e normale, lieve separazione sottomucosa e lamina propria, moderata separazione sottomucosa e lamina propria, grave separazione sottomucosa e lamina propria e scomparsa dei villi intestinali con necrosi intestinale. Il punteggio di patologia intestinale era significativamente più alto nel gruppo NEC rispetto al controllo con un valore P inferiore a 0,001.Lo sgabello è stato valutato da zero con pellet ben formati a tre con feci liquide. Il giorno 10, i punteggi delle feci dei gruppi NEC erano significativamente più alti nel gruppo NEC con un valore P inferiore a 0,001. Il quinto giorno, i due gruppi non hanno mostrato differenze significative nelle dimensioni del corpo.Tuttavia, il giorno 10, i topi nel gruppo NEC erano significativamente più sottili e più piccoli dalla testa alla coda rispetto ai topi del gruppo di controllo. Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. L'area ileocecale resecata del tessuto intestinale da pazienti NEC ha mostrato necrosi del tessuto della mucosa intestinale.In questo studio, i topi del gruppo NEC hanno anche sviluppato emorragia ileocecale e necrosi. Quando si imbavaglia il mouse, assicurarsi che il mouse non abbia difficoltà a evitare di effettuare l'inserimento del tubo gastrico. Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno.Dal quinto giorno in poi, mettere poi in un dispositivo ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Questo modello potrebbe essere utile per la ricerca sulla malattia NEC sulle cellule T e potrebbe aiutare a studiare le risposte delle cellule Th2 nel NEC.

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