Name: Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Scopri un metodo personalizzabile per indurre infarto miocardico nei topi mediante legatura precisa dell'arteria discendente anteriore sinistra. Questo protocollo riduce i tempi chirurgici, garantisce dimensioni controllabili dell'infarto e migliora la sopravvivenza degli animali.

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Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82070317, 81700390 a Jibin Lin, 8210021880 a Bingjie Lv e 82000428 a Boyuan Wang) e dal National Key R&D Program of China (2017YFA0208000 a Shaolin He).

Gli studi sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'utilizzo degli animali dell'Università di Scienza e Tecnologia di Huazhong (Wuhan, Cina).
NOTA: I topi maschi C57BL/6J (8-10 settimane) sono usati come modelli. I topi hanno libero accesso al cibo e all'acqua e vengono allevati in specifiche condizioni prive di agenti patogeni. L'ambiente viene mantenuto a temperatura controllata (22 °C ± 2 °C) e umidità (45%-65%). I topi sono esposti a un ambiente chiaro/buio di 12 ore presso la struttura per la cura degli animali della Tongji Medical School (Wuhan, Cina) secondo le linee guida stabilite da questa istituzione. Utilizzare strumenti microchirurgici sterili e forniture chirurgiche. Guanti chirurgici e maschere sono necessari durante tutta la procedura. Il flusso di lavoro sperimentale è illustrato nella Figura 1A.
1. Preparazione preoperatoria
<ol><li>Utilizzare un tavolo operatorio rettangolare (OT) con un termoforo preriscaldato (37 °C) durante la procedura chirurgica (Figura 1B). Disinfettare la scheda con luce ultravioletta e alcol al 70% prima di iniziare la procedura.</li>
	<li>Pesare accuratamente tutti i topi per calcolare la dose di farmaci anestetici necessari. Quindi, anestetizzare i topi con ketamina (80 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg) tramite iniezione intraperitoneale. Garantire un'adeguata profondità di anestesia grazie all'assenza di un riflesso di astinenza al pizzicamento delle dita dei piedi e dei riflessi di ammiccamento.</li>
	<li>Posizionare il topo supino sull'OT con una garza sotto la testa per evitare il surriscaldamento degli occhi. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per evitare che si secchino.</li>
	<li>Radere il pelo sul petto precordiale sinistro con un rasoio elettrico. Utilizzare una crema per la rimozione del pelo sul torace pre-rasato e massaggiare uniformemente con un batuffolo di cotone sterile per ~1 min. Pulisci il pelo sciolto in eccesso con una garza.</li>
	<li>Usa lo iodio povidone, seguito da alcol al 70% per pulire l'area. Copri il torace con una garza.</li>
	<li>Utilizzare una sutura 4-0 sotto gli incisivi superiori e fissarla al punto di ancoraggio (vicino al bordo dell'OT sopra il naso) per mantenere la bocca leggermente aperta e facilitare l'incannulamento.</li>
	<li>Tira la coda per mantenere il corpo dritto e fissa la coda all'OT usando del nastro adesivo. Fissare i quattro flettenti e serrarli sugli altri punti di ancoraggio. È importante sottolineare che non allungare eccessivamente gli arti anteriori; in caso contrario, può verificarsi una compromissione respiratoria.</li>
	<li>Usa pinze curve e pinze per aprire la mascella e sollevare la lingua. Usa un illuminatore per visualizzare chiaramente la gola e la glottide.</li>
	<li>Inserire delicatamente una cannula da 22 G con un ago smussato e troncato nella trachea attraverso la bocca ~ 1 cm in gola. Usa una mano per tenere la lingua, muovila leggermente verso l'alto con una pinza smussata e, contemporaneamente, usa l'altra mano per inserire delicatamente il tubo nella trachea. Fare attenzione a non inserire il tubo nell'esofago.</li>
	<li>Rimuovere l'ago delicatamente. Controllare l'intubazione inserendo il tubo nell'acqua per verificare la formazione di bolle prima di collegarlo al ventilatore.</li>
	<li>Collegare il tubo endotracheale a un ventilatore impostato su 120/min e volume corrente regolato a 250 μL. NOTA: L'impostazione del ventilatore viene regolata in base al peso corporeo (in generale, un peso corporeo più elevato richiede un volume corrente più elevato).</li>
	<li>Verificare l'intubazione controllando l'espansione simmetrica bilaterale del torace. Quindi, la connessione viene fissata all'OT con del nastro adesivo per evitare che il tubo cada.</li>
	<li>Posizionare gli elettrodi ECG sulle zampe e collegarli al registratore ECG. Monitorare l'elettrofisiologia cardiaca durante tutta la procedura.</li>
</ol>2. Toracotomia
<ol><li>Rimuovere la garza sul torace. Disinfettare nuovamente con alcol al 70% per le aree di incisione utilizzando tre cicli di scrub. Quindi, coprire il topo con un telo chirurgico sterile con un foro sul campo operatorio per ridurre la contaminazione del sito chirurgico.</li>
	<li>Praticare un'incisione cutanea obliqua (0,8-1,0 cm) lungo la linea medioclavicolare sinistra con un bisturi sterile.</li>
	<li>Eseguire la dissezione smussata dei tessuti sottocutanei per esporre le costole sottostanti. Fare attenzione a non ferire vasi, costole e polmoni. Arrestare l'emorragia utilizzando applicatori sterili in cotone.</li>
	<li>Individuare e praticare un'incisione di circa 6-8 mm nel terzo spazio intercostale. Quindi, eseguire una dissezione smussata dei tessuti nello spazio intercostiero per aprire la cavità toracica. Fare attenzione a non ferire l'arteria toracica interna.</li>
	<li>Usa le pinze per coprire lo spazio intercostale. Inserire i divaricatori fatti in casa pre-sterilizzati (Figura 1C) nella gabbia toracica e tirare indietro per allargare l'incisione a ~6 mm di larghezza. Fissare i divaricatori all'OT con elastici.</li>
	<li>Rimuovere con cautela i tessuti circostanti per esporre completamente il cuore. Staccare delicatamente il pericardio con una pinza curva senza ferire il cuore. Ora è disponibile una visione chiara del cuore.</li>
</ol>3. Legatura LAD
NOTA: Il LAD appare come una sottile linea rossa che corre perpendicolarmente da vicino all'apice e giù attraverso il ventricolo sinistro. Il LAD è di colore rosso vivo, quindi fai attenzione a non scambiarlo per una vena. Di solito, il sito di legatura è ~1-2 mm sotto il padiglione auricolare sinistro. Questa posizione di legatura produrrà circa il 40%-50% dell'ischemia nel ventricolo sinistro. Una posizione più alta creerà una zona di infarto più estesa. Un sito più distale creerà una zona infartuale più piccola.
<ol><li>Utilizzare un microscopio da dissezione e dirigere una luce focalizzata e appropriata per la visualizzazione LAD. Premere delicatamente il sito sotto la posizione di legatura scelta per ingrandire temporaneamente il LAD (≤5 s alla volta). Ricontrollare il LAD in questo modo.</li>
	<li>Usa un ago affusolato (3/8, 2,5 x 5) per passare un 8-0 legatura di seta sotto il LAD al microscopio da dissezione. Attenzione alla profondità dell'ago: non troppo in profondità per entrare nel ventricolo sinistro e non troppo in profondità per evitare di danneggiare il LAD.</li>
	<li>Legare la legatura con un doppio nodo sciolto. Il diametro dell'anello è di circa 2-3 mm.</li>
	<li>Posizionare un tubo in PE-10 da 2-3 mm in un anello parallelo all'arteria.</li>
	<li>Stringere delicatamente l'ansa di legatura fino a quando non si trova intorno all'arteria e al tubo. Quindi, fissa l'anello con un nodo scorsoio. Fare attenzione a non danneggiare la parete miocardica con un'eccessiva pressione di serraggio. NOTA: La legatura non viene eseguita per il gruppo di operazione fittizia.</li>
	<li>Confermare la cessazione del flusso sanguigno nel LAD: osservare un colore più pallido nella parete anteriore del ventricolo sinistro dopo la legatura. Inoltre, un significativo sopraslivellamento del tratto ST entro pochi battiti cardiaci indica anche l'occlusione16. Se è necessaria una legatura permanente (ad es. MI), rimuovere il tubo in PE-10 e legare il LAD direttamente con un nodo. Riprendere la procedura rimanente come indicato al punto 4.3 di seguito.</li>
	<li>Rimuovere i divaricatori dall'incisione. Quindi, chiudi temporaneamente la ferita con una pinza bulldog. La durata dell'ischemia è in accordo con il disegno sperimentale. Assicurarsi che il mouse continui a essere collegato al ventilatore.</li>
</ol>4. Riperfusione
<ol><li>Al termine del periodo di ischemia, rimuovere la pinza bulldog e inserire nuovamente i divaricatori per aprire l'incisione ed esporre il cuore (in particolare il sito di legatura).</li>
	<li>Sciogliere il nodo scorsoio e rimuovere il tubo in PE-10. Confermare il ripristino del flusso sanguigno in questa fase osservando il cambiamento di colore che torna al rosa-rosso entro 20 s. Allo stesso tempo, osserva attentamente l'ECG: una potenziale dissoluzione del sopraslivellamento del tratto ST suggerisce anche la riperfusione.</li>
	<li>Lascia l'8-0 legatura in situ per la successiva colorazione Evans-Blue e TTC. In altri casi, rimuovere la sutura in questa fase.</li>
	<li>Rimuovere i divaricatori e chiudere l'incisione suturando la terza e la quarta costola con una sutura di nylon 4-0. Fare attenzione a non ferire il polmone. Spingi fuori l'aria che potrebbe essere intrappolata nella cavità toracica premendo delicatamente il torace mentre lega i nodi di sutura.</li>
	<li>Chiudere gli strati muscolari con suture continue. Chiudere la pelle con una sutura di nylon 4-0; Sono accettabili suture continue e suture interrotte.</li>
</ol>5. Cure postoperatorie
<ol><li>Osservare attentamente il topo per segni di recupero dall'anestesia, ad esempio movimento della coda o dei baffi. Dopodiché, il topo di solito riprende un normale schema respiratorio con una frequenza respiratoria di circa 150 bpm. Estubare il mouse rimuovendo lentamente il tubo.</li>
	<li>Monitorare il mouse per altri 3-5 minuti per assicurarsi che il distress respiratorio sia assente.</li>
	<li>Somministrare 100 μL di buprenorfina (0,1 mg/mL, n.c.) dopo che il topo inizia a respirare. Per le successive 24 ore, somministrare una dose aggiuntiva ogni 4-6 ore. Fornire ibuprofene come ulteriore sollievo dal dolore nell'acqua potabile come soluzione 0,2 mg/mL per 2 giorni prima e ≤7 giorni dopo l'intervento chirurgico.</li>
	<li>Mantieni i topi al caldo e riduci il rischio di mortalità utilizzando coperte termoisolanti poiché i topi sono inclini all'ipotermia dopo l'anestesia.</li>
</ol>6. Convalida dopo la procedura
<ol><li>Test della troponina-T<ol><li>Raccogliere campioni di sangue dai plessi retroorbitari e isolare i sieri mediante centrifugazione (3.000 × g, 10 min, temperatura ambiente).</li>
		<li>Diluire 20 μL di siero a 100 μL con soluzione salina per il test della troponina-T. Conservare il resto dei campioni a -80 °C.</li>
		<li>Rilevare la troponina T (cTnT utilizzando un kit commerciale seguendo le istruzioni del produttore.</li>
	</ol></li>
	<li>Ecografia cardiaca NOTA: L'ecografia cardiaca viene utilizzata per valutare la funzione cardiaca e le anomalie del movimento della parete in diverse fasi prima e dopo l'intervento chirurgico secondo il disegno sperimentale17,18. Vengono misurati diversi parametri come lo spessore della parete ventricolare, il volume ventricolare, il diametro della cavità ventricolare, la frazione di eiezione e la frazione di accorciamento dell'asse corto.<ol><li>Anestetizzare i topi con ketamina (80 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg) tramite iniezione intraperitoneale.</li>
		<li>Radere il petto con un rasoio elettrico. Utilizzare una crema per la rimozione del pelo e massaggiare uniformemente. Pulisci il pelo sciolto in eccesso con una garza.</li>
		<li>Posiziona il mouse sull'OT e fissa i quattro arti con del nastro adesivo.</li>
		<li>Posizionare la sonda ecografica (30 MHz) sulla regione anteriore del cuore a ~ 30° rispetto allo sterno. La sonda in questa vista è allineata con l'asse lungo del cuore. Impostare l'ecografia in B-Mode; Il ventricolo sinistro, l'atrio sinistro, la valvola mitrale e l'aorta ascendente possono essere identificati chiaramente. Utilizzare l'acquisizione video per ottenere dati per l'analisi successiva.</li>
		<li>Ruotando il trasduttore di 90° in senso orario, si ottiene una visione parasternale dell'asse corto a livello dei muscoli papillari per rilevare chiaramente i ventricoli sinistro e destro. Quindi utilizzare B-Mode e M-Mode per valutare la funzione cardiaca e la morfometria.</li>
		<li>Calcolare il diametro telediastolico del ventricolo sinistro (Dd), il diametro telesistolico (Ds) e lo spessore del setto interventricolare specificando la posizione corrispondente nelle immagini ecografiche. NOTA: La macchina calcolerà manualmente il volume telediastolico ventricolare sinistro (LVEDV) e il volume telesistolico (LVESV). Inoltre, la macchina calcolerebbe i valori per l'accorciamento frazionario (FS) e la frazione di eiezione (EF) utilizzando le formule FS = (Dd-Ds)/Dd × 100% e EF= (LVEDV-LVESV)/LVEDV × 100%. Scegli cinque cicli cardiaci consecutivi e ottieni i loro valori medi.</li>
	</ol></li>
	<li>Misurazione delle dimensioni dell'infarto del miocardio NOTA: La colorazione Evans-Blue/TTC viene utilizzata per misurare le dimensioni dell'infarto perché può valutare la vitalità dei tessuti19. Si consiglia di colorare entro 72 ore dalla riperfusione perché la cicatrice si restringerà. Questa fase viene eseguita dopo l'eutanasia dell'animale con 200 mg/kg di pentobarbital sodico tramite iniezione intraperitoneale.<ol><li>Esporre nuovamente il cuore seguendo le procedure precedenti dai passaggi 2.2-2.5. Quindi, riposizionare il LAD nel sito iniziale convalidato dalla sutura menzionata al punto 4.3 al termine della durata di riperfusione desiderata.</li>
		<li>Incannulare l'aorta e poi perfondere il cuore con 0,3 ml di soluzione Evans Blue all'1%. Il miocardio della regione non ischemica è colorato di blu. Dopo la perfusione, rimuovere rapidamente il cuore tagliando l'aorta con le forbici.</li>
		<li>Quindi, lavare il cuore in una soluzione di KCl (30 mM) per fermare il battito cardiaco. Conservare a -20 °C per ≥4 h dopo aver rimosso il tessuto adiposo circostante.</li>
		<li>Tagliare il cuore in senso trasversale in cinque fette dello spessore di 1 mm utilizzando un bisturi affilato. Pesare le fette e poi incubarle con TTC al 2% per 40 minuti a 37 °C. NOTA: Dopo l'incubazione, le aree dell'infarto sono delimitate come bianche, mentre i tessuti vitali nelle aree non infartuali rimangono rossi.</li>
		<li>Fissare le fette con il 4% di formaldeide per una notte. NOTA: Questa azione migliorerà il contrasto tra l'area dell'infarto e l'area non infartuale. Ridurrà anche le fette.</li>
		<li>Fotografa le fette con una fotocamera digitale. Quindi, calcola l'area a rischio (AAR), l'area dell'infarto e la zona non ischemica utilizzando un software grafico. NOTA: Dopo la doppia colorazione Evans-Blue/TTC, l'area blu è l'area "normale". Le aree rimanenti (comprese il bianco e il rosso) sono le aree a "rischio di ischemia": l'area bianca è l'area dell'infarto del miocardio (IA) e l'area rossa è l'area ischemica (ma non infartuata). Tenendo conto dell'incoerenza delle dimensioni delle fette di cuore, i risultati vengono aggiustati in base al peso. Assegnare: A1-A5 per l'area della zona dell'infarto/area della fetta di cuore; B1-B5 per l'area della zona non infartuale/area della fetta di cuore; W1-W5 per il peso della fetta di cuore. Allora: Peso totale del miocardio infartuato: W1 × A1 + W2 × A2 + W3 × A3 + W4 × A4 + W5 × A5; Peso totale del miocardio non infartuato: W1 × B1 + W2 × B2 + W3 × B3 + W4 × B4+ W5 × B5; Peso totale di AAR = (W1 + W2 +W3 + W4 + W5) - (W1 × A1 + W2 × A2 + W3 × A3 + W4 × A4 + W5 × A5) Finalmente: L'area di ischemia miocardica è calcolata come la percentuale di AAR nel ventricolo sinistro: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63257/63257eq01v2.jpg"> L'area di infarto del miocardio è calcolata come la percentuale di IA nell'AAR: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63257/63257eq02v2.jpg"></li>
	</ol></li>
</ol>

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<li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coronary+arteries+of+the+C57bl%2F6+mouse+strains%3A+Implications+for+comparison+with+mutant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">The coronary arteries of the C57bl/6 mouse strains: Implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li>
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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere alcun conflitto di interessi.

Negli ultimi anni, la creazione di modelli per MI e MIRI nella ricerca clinica e scientifica si è sviluppata rapidamente20,21. Tuttavia, ci sono ancora alcune questioni, come i meccanismi d'azione e come migliorare l'MI/MIRI, che devono essere risolte. Qui viene descritto un protocollo modificato per stabilire un modello murino di MI e MIRI. Diversi punti chiave devono essere considerati attentamente.
Il primo punto chiave è l'intubazi...

L'infarto miocardico acuto (IMA) è una malattia cardiovascolare comune in tutto il mondo e comporta un'elevata mortalità1. I progressi nelle tecnologie rendono disponibile una rivascolarizzazione precoce ed efficace per i pazienti con IMA. Dopo questi trattamenti, in alcuni pazienti, può verificarsi un danno da ischemia-riperfusione miocardica (MIRI)2. Pertanto, è di grande importanza comprendere i meccanismi delle azioni e come migliorare l'MI/MIRI. I topi sono ampiamente utilizzati come modelli a causa del loro basso costo, dei tempi di riproduzione rapidi e della facilità di apportare alterazioni genetiche3. Gli studiosi hanno sviluppato diversi metodi per modellare MIRI e MI negli animali 4,5,6,7,8,9. Questa strategia promuove la ricerca, ma i diversi criteri e metodi utilizzati complicano l'interpretazione dei risultati tra i gruppi di ricerca.
Nei topi, l'infarto miocardico è stato indotto dall'isoproterenolo 10, dalla criolesione11,12 o dalla cauterizzazione13. L'infarto miocardico può essere indotto prontamente dall'isoproterenolo, ma il processo fisiopatologico è diverso da quello dell'infarto miocardico clinico. L'infarto miocardico indotto da criolesione ha una scarsa consistenza, provoca un eccessivo danno miocardico intorno all'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) e può facilmente indurre aritmia. L'infarto miocardico indotto dalla cauterizzazione è molto diverso dal processo naturale dell'infarto del miocardio e la reazione infiammatoria nell'area in fiamme è più intensa; Inoltre, l'approccio chirurgico presenta difficoltà tecniche. Inoltre, ci sono alcuni laboratori14 che stanno sviluppando un modello di infarto miocardico in minipig utilizzando il blocco del palloncino o l'embolizzazione o il metodo della trombosi attraverso tecniche interventistiche. Tutte queste metodiche possono causare direttamente l'occlusione delle arterie coronarie, ma la necessità di dispositivi per angiografia coronarica e, soprattutto, le arterie coronarie di topo troppo sottili rende queste operazioni poco pratiche. Per MIRI, le differenze tra i diversi modelli erano piuttosto modeste, come l'uso di respiratori/micromanipolazione o meno 5,6.
Qui viene descritto un metodo semplice e affidabile in grado di indurre l'infarto miocardico e il modello MIRI, adattato dai metodi 4,5,6,7,8,9,15 precedentemente pubblicati. Questo metodo può simulare i processi fisiopatologici mediante il blocco diretto del LAD attraverso la legatura. Inoltre, alleviando la legatura, questo modello può anche simulare il danno da riperfusione. In questo protocollo, viene utilizzato un microscopio da dissezione per la visualizzazione LAD. Quindi, il ricercatore può identificare prontamente il LAD. Successivamente, un'accurata legatura del LAD porta a un'occlusione del sangue e a un'ischemia ventricolare riproducibili e prevedibili. Inoltre, le alterazioni dell'elettrocardiogramma (ECG) possono essere utilizzate per confermare l'ischemia e la riperfusione, oltre ai cambiamenti di colore del LAD osservati al microscopio. Questa strategia porta a una durata della procedura più breve, a un minor rischio di complicanze chirurgiche e a un minor numero di topi sperimentali necessari. Vengono inoltre descritti i metodi per il test della troponina-T, l'ecografia cardiaca e la colorazione del cloruro di trifeniltetrazolio (TTC). Nel complesso, questo protocollo è utile per gli studi sul meccanismo MI/MIR, nonché per la scoperta di farmaci.

<table><tbody><tr><td>Soluzione di cloruro di sodio allo 0,9</td>% <td>Kelun Industry Group,</td> <td>Cina-4</td><td></td></tr><tr><td>% soluzione di fissaggio della paraformaldeide</td><td>Servicebio, Cina</td><td>G1101-4-0</td><td></td></tr> <tr><td>sutura di seta</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products, Cina</td><td>C412-8-0</td><td></td></tr> <tr><td>sutura</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products, Cina</td><td>H801-Buprenorfina</td><td></td></tr><tr><td></td><td>IsoReag,Cina</td><td>IR-11190-Fotocamera</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Canon,Giappone</td><td>EOS 80D-Crema</td><td></td></tr> <tr><td>depilatoria</td><td>Veet,Francese-Elecsys</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Troponina T hs STAT</td><td>Roche,Germania-Immunoanalizzatore</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>elettrochimico di luminescenza</td><td>Roche,Germania</td><td>Elecsys 2010-Evans</td><td></td></tr> <tr><td>blue</td><td>Sigma,America</td><td>E2129</td><td>- </td></tr><tr><td>Forbici per gli occhi</td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>JC2303-Pinze</td><td></td></tr> <tr><td>emostatiche</td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>J31020-Sistemi</td><td></td></tr> <tr><td>di imaging in vivo ad alta frequenza</td><td>Visualsonics, Canada</td><td>Vevo2100-Ibuprofene</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>PerFeMiKer, Cina</td><td>CLS-12921-Catetere</td><td></td></tr> <tr><td>endovenoso</td><td>Introcan, Germania</td><td>4254090B-Ketamina</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich, America</td><td>&nbsp; K2753-Alcool</td><td></td></tr> <tr><td>medico</td><td>Huichang,</td> <td>Cina-Supporti</td><td></td></tr> <tr><td>per microaghi</td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>WA2040-Cesoie</td><td></td></tr> <tr><td>microscopiche</td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>WA1040-Pinze</td><td></td></tr> <tr><td>microchirurgiche</td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>WA3020-Mouse</td><td></td></tr> <tr><td>elettrocardiografo</td><td>Techman, Cina</td><td>BL-420F-Portaaghi</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Shanghai Medical Instruments, Cina</td><td>JC3202-piano</td><td></td></tr> <tr><td>operativo</td><td>Chico, Cina</td><td>ZK-HJPT-PE-10</td><td></td></tr> <tr><td>tubo</td><td>Huamei,</td> Cina-Pentobarbital <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Merck, America</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1030001-roditore Ventilatore</td><td>Shanghai Alcott Biotech, Cina</td><td>ALC-V8S-P</td><td>-</td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Aomei Industry, Cina</td><td>SZM0745-STL3-T3-Termoforo</td><td></td></tr> <tr><td>termostatico chirurgico</td><td>Globalebio, Cina</td><td>GE0-20W-Cloruro</td><td></td></tr> di <tr><td>trifeniltetrazolio</td><td>Servicebio, Cina</td><td>G1017-Xilazina</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts, Cina</td><td>323004</td><td>-</td></tr></tbody></table>

induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

L'infarto miocardico acuto è una malattia cardiovascolare comune con elevata mortalità. Il danno da riperfusione miocardica può contrastare gli effetti benefici del reflusso cardiaco e indurre un danno miocardico secondario. Un modello semplice e riproducibile di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica è un buon strumento per i ricercatori. Qui, viene descritto un metodo personalizzabile per creare un modello di infarto del miocardio (MI) e MIRI mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) attraverso la micromanipolazione. Il posizionamento accurato e riproducibile della legatura del LAD aiuta a ottenere risultati coerenti per le lesioni cardiache. Le modifiche del segmento ST possono aiutare a identificare l'accuratezza del modello. Il livello sierico di troponina T cardiaca (cTnT) viene utilizzato per valutare la lesione miocardica, l'ecografia cardiaca viene impiegata per valutare la funzione sistolica miocardica e la colorazione con cloruro di Evans-Blue/trifeniltetrazolio viene utilizzata per misurare le dimensioni dell'infarto. In generale, questo protocollo riduce la durata della procedura, garantisce dimensioni dell'infarto controllabili e migliora la sopravvivenza del topo.

Il flusso di lavoro sperimentale è illustrato nella Figura 1A. Il ricercatore può programmare i nodi temporali in base al disegno sperimentale all'inizio dello studio. La durata della legatura LAD è in base allo scopo della ricerca. Per l'infarto miocardico, la ricerca può ignorare la fase di riperfusione. L'ecografia cardiaca è disponibile in diverse fasi dello studio perché non è invasiva, mentre la colorazione Evans-Blue/TTC può essere eseguita solo quando il topo viene sacrificato. Per l...

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Questo studio descrive un metodo personalizzabile per creare un modello di funzione miocardica in Miro mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione. Questo protocollo riduce la durata della procedura, garantisce dimensioni dell'infarto controllabili e migliora la sopravvivenza del topo. Utilizzare un OT rettangolare con un termoforo preriscaldato a 37 gradi Celsius durante la procedura chirurgica.Prima della procedura, disinfettare la scheda con luce ultravioletta e alcol al 70%. Inizia posizionando il mouse sull'OT in posizione supina con una garza sotto la testa per evitare di surriscaldare gli occhi. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per evitare che si secchino.Utilizzare una crema per la rimozione del pelo sul torace e massaggiare uniformemente con un batuffolo di cotone sterile per un minuto. Pulisci il pelo in eccesso con una garza. Usa lo iodio povidone seguito da alcol al 70% per pulire l'area e copri il torace con una garza.Utilizzare una sutura 4-O sotto gli incisivi superiori e fissarla al punto di ancoraggio per mantenere la bocca leggermente aperta e facilitare l'incannulamento. Tira la coda per mantenere il corpo dritto e fissala all'OT usando del nastro adesivo. Fissare i quattro flettenti con del nastro adesivo e stringerli sui punti di ancoraggio.Non allungare eccessivamente gli arti anteriori per evitare compromissioni respiratorie. Usa le pinze per aprire la mascella e sollevare la lingua. Quindi usa un illuminatore per visualizzare la gola e la glottide.Inserire delicatamente una cannula calibro 22 con un ago tronco smussato attraverso la bocca nella trachea, a circa un centimetro lungo la gola. Usa una mano per tenere la lingua e muovila leggermente verso l'alto con una pinza smussata. Contemporaneamente utilizzare l'altra mano per inserire delicatamente il tubo nella trachea.Fare attenzione a non inserire il tubo nell'esofago. Rimuovere con cautela l'ago. Prima di collegarlo al ventilatore, controllare l'intubazione inserendo il tubo nell'acqua per verificare la formazione di bolle.Collegare il tubo endotracheale a un ventilatore impostato a 120 al minuto e il volume corrente regolato a 250 microlitri. Verificare l'intubazione controllando l'espansione simmetrica bilaterale del torace. Quindi fissare la connessione all'OT con del nastro adesivo per evitare che cada.Posizionare gli elettrodi ECG sulle zampe e collegarli al registratore ECG. Monitorare l'elettrofisiologia cardiaca durante tutta la procedura. Rimuovere la garza sul torace.Disinfettare l'area dell'incisione utilizzando tre cicli di scrub con alcol al 70%. Per ridurre la contaminazione del sito chirurgico, coprire il topo con un telo chirurgico sterile con un foro sul campo operatorio. Dopo aver praticato un'incisione cutanea obliqua con un bisturi, esporre le costole eseguendo una dissezione smussata dei tessuti sottocutanei.Fare attenzione a non ferire i vasi, le costole e i polmoni. Utilizzare applicatori di cotone sterili per fermare l'emorragia. Identifica il terzo spazio intercostale e fai un'incisione di circa sei-otto millimetri.Quindi aprire la cavità toracica eseguendo una dissezione smussata dei tessuti nello spazio intercostale. Fare attenzione a non ferire l'arteria toracica interna. Coprire lo spazio intercostale usando le pinze.Inserire divaricatori fatti in casa pre sterilizzati nella gabbia toracica e tirare indietro per allargare l'incisione a circa sei millimetri di larghezza. Fissare i divaricatori all'OT con elastici. Rimuovere con cautela i tessuti circostanti per esporre completamente il cuore.Staccare delicatamente il pericardio con una pinza curva senza ferire il cuore. Utilizzare un microscopio da dissezione e dirigere una luce focalizzata e appropriata per la visualizzazione LAD. Premere delicatamente il sito sotto la posizione di legatura scelta per ingrandire temporaneamente il LAD, quindi ricontrollare il LAD.Sotto un microscopio da dissezione, usa un ago affusolato per passare un 8-0 legatura di seta sotto il LAD. Assicurarsi che l'ago non sia abbastanza profondo da entrare nel ventricolo sinistro e non troppo poco profondo per evitare di danneggiare il LAD. Legare la legatura con un doppio nodo sciolto.Posizionare un tubo in PE-10 da due a tre millimetri in un anello parallelo all'arteria. Stringere delicatamente l'ansa di legatura fino a quando non si trova intorno all'arteria e al tubo. Quindi fissare l'anello con un nodo scorsoio.Fare attenzione a non danneggiare la parete miocardica con un'eccessiva pressione di serraggio. Una colorazione del pallore nella parete anteriore del ventricolo sinistro dopo la legatura conferma la cessazione del flusso sanguigno nel LAD. Se è necessaria una legatura permanente, procedere come descritto nel manoscritto del testo.Rimuovere i divaricatori dall'incisione. Quindi chiudere temporaneamente la ferita con una pinza bulldog. Assicurarsi che il mouse continui a essere collegato al ventilatore.Al termine del periodo di ischemia, rimuovere la pinza bulldog e inserire i divaricatori per aprire l'incisione ed esporre il cuore e il sito di legatura. Sciogliere il nodo scorsoio e rimuovere il tubo in PE-10. Il cambiamento della colorazione pallida in rosa-rosso conferma il ripristino del flusso sanguigno.Allo stesso tempo, per rilevare la riperfusione, osservare l'ECG per una potenziale dissoluzione dell'elevazione del tratto ST. Lascia l'8-0 legatura in situ se si esegue la successiva colorazione Evans blue e TTC. In caso contrario, rimuovere la sutura in questa fase.Rimuovere i divaricatori e chiudere l'incisione suturando la terza e la quarta costola con una sutura di seta 4-O. Fare attenzione a non ferire il polmone. Premere delicatamente il torace mentre si legano i nodi di sutura per espellere l'aria che potrebbe essere intrappolata nella cavità toracica.Chiudere gli strati muscolari con suture continue di seta 4-O. Le immagini standard del processo sperimentale sono state acquisite dall'intubazione endotracheale, dall'incisione cutanea, dalla toracotomia, dall'identificazione LAD e dalla legatura, fino alla riperfusione. Le immagini ECG rappresentative hanno verificato l'ischemia miocardica e la riperfusione con significativo sopraslivellamento del tratto ST dopo la legatura.E lo scioglimento dell'elevazione ST dopo che il nodo scorsoio è stato sciolto. Prima della toracotomia, è molto importante mantenere aperte le vie aeree e la cosa più importante è assicurarsi che il LAD sia saldamente legato ed evitare danni. Questa procedura sarà seguita da un'ecocardiografia per valutare la funzione cardiaca e da una TTC per valutare il danno miocardico.

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Trauma chirurgico induce una risposta infiammatoria. Citochine e ligandi endogeni sono noti per modulare dimensione miocardio a seguito di ischemia e riperfusione. Vi presentiamo una versione modificata del chiuso petto modello di ischemia e di riperfusione murino con pesi appesi per minimizzare gli effetti di toracotomia.

A Murine chiuso del torace modello di ischemia miocardica e riperfusione

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Viene descritto un modello altamente riproducibile per l'infarto del miocardio nei topi con manipolazioni minimamente invasive. Il modello può essere facilmente eseguito, con conseguente elevata riproducibilità e tasso di sopravvivenza. Pertanto, il modello descritto ridurrà il numero di animali necessari come richiesto dal principio delle 3R (Sostituzione, Perfezionamento e Riduzione).

Minimal procedura chirurgica invasiva di indurre infarto miocardico nei topi

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Durante l'intervento chirurgico di ischemia/riperfusione miocardica murina, il corretto posizionamento della legatura occlusiva è tipicamente confermato dall'osservazione visibile del pallore miocardico. In questo articolo, un metodo di conferma elettrocardiografica dell'ischemia e della riperfusione, per integrare il pallore miocardico osservato, è dimostrato nei topi maschi C57Bl/6.

La conferma di ischemia miocardica e riperfusione nei topi mediante il rilievo della superficie elettrocardiografia

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

Questo articolo dimostra un modello per studiare il rimodellamento cardiaco dopo la crioinfortuni miocardica nei topi.

Un modello di criolesionismo per studiare l'infarto miocardico nel mouse

In anestesia adeguata, il cuore del topo è stato esternalizzato attraverso lo spazio intercostale e l'infarto del miocardio è stato indotto con successo legando l'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) utilizzando materiali prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.

Un metodo semplice modificato per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi

Presentato qui è una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria sinistra nei topi. Questo modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia e la risposta infiammatoria associata dopo infarto miocardico.

Legatura coronaria sinistra: un modello chirurgico murino di infarto miocardico

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.

Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale

Questo protocollo modella il danno da ischemia-riperfusione retinica in un occhio di topo inducendo l'ischemia retinica tramite incannulamento della camera anteriore e aumento della pressione intraoculare, seguito dalla normalizzazione della pressione intraoculare per avviare la riperfusione.

Induzione di lesioni da ischemia-riperfusione retinica in un modello di occhio murino

Scopri un metodo personalizzabile per indurre infarto miocardico nei topi mediante legatura precisa dell'arteria discendente anteriore sinistra. Questo protocollo riduce i tempi chirurgici, garantisce dimensioni controllabili dell'infarto e migliora la sopravvivenza degli animali.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

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