Mantenimento di colture di laboratorio di Gryllus bimaculatus, un modello ortottero versatile per l'agricoltura degli insetti e la fisiologia degli invertebrati

Queste tecniche descrivono metodi pratici e collaudati per l'allevamento di Gryllus bimaculatus, una mini specie di bestiame chiave allevata per l'alimentazione animale e l'alimentazione umana e un organismo modello alternativo sempre più importante. Questi metodi di laboratorio per la coltura di Gryllus bimaculatus derivano da tecniche comuni in tutta l'industria nordamericana dell'agricoltura di cricket e rappresentano un facsimile su scala di laboratorio delle operazioni di allevamento di cricket. Per iniziare, tarare un contenitore pulito su una bilancia e pesare una massa di fibra di cocco secca delle dimensioni di un pugno umano.

Quindi, posizionare la fibra di cocco in un contenitore sigillabile e pulito, che può ospitare l'espansione fino a sei volte il volume originale. Con le mani pulite, rompere delicatamente ciuffi di fibra di cocco dal pezzo rimosso dal blocco più grande. Successivamente, utilizzando un cilindro graduato da 250 millilitri, misurare il volume corretto di acqua deionizzata per ottenere un rapporto cinque a uno in massa di cinque parti di acqua per una parte di fibra di cocco secca e aggiungere lentamente l'acqua deionizzata misurata, idratando uniformemente tutte le particelle di fibra di cocco.

Successivamente, macerare manualmente i ciuffi per garantire un'idratazione uniforme e ri-tarare il contenitore in cui la fibra di cocco è stata precedentemente pesata. Pesare 75 grammi di fibra di cocco bagnata e trasferirla in una capsula di Petri da 100 millimetri per 15 millimetri usando un cucchiaio di plastica pulito per garantire che la fibra di cocco sia distribuita uniformemente sul fondo del piatto e che non ci siano ciuffi. Quindi, etichettare il lato della capsula di Petri con nastro da laboratorio con un'etichetta che denota la colonia natale e la data dell'evento di raccolta delle uova.

Misurare altri 45 millilitri di acqua deionizzata in un cilindro graduato e aggiungere acqua uniformemente sulla superficie della fibra di cocco imballata nella capsula di Petri per garantire un'idratazione uniforme. Una volta che la capsula di Petri è stata imballata, sigillare la fibra di cocco bagnata rimanente in un recipiente ermetico per la conservazione a meno 20 gradi Celsius. Posizionare il substrato di ovodeposizione idrato in gabbie contenenti le scorte parentali desiderate di grilli il più lontano possibile dal mangime e documentare la data e l'ora.

Quindi, posizionare un piccolo contenitore per la spazzatura autoclavabile sul piano di lavoro. Quindi, posizionare una gabbia di plastica pulita, vuota, da 29,3 litri sul banco accanto al contenitore della spazzatura. Posizionare un'altra gabbia da 29,3 litri contenente le scorte di cricket genitore e il substrato di ovodeposizione sul lato opposto del contenitore della spazzatura dalla gabbia vuota.

Dopo 24 ore, rimuovere il substrato di ovodeposizione dalla gabbia del grillo genitore e posizionarlo su un recipiente di rifiuti autoclavabile. Ispezionare la parte superiore del substrato di ovodeposizione per eventuali particelle di frass o mangime che i grilli potrebbero aver calciato sulla superficie della fibra di cocco. Quindi, rimuovere i contaminanti di fibra di cocco nel contenitore dei rifiuti con una Scoopula pulita o un cucchiaio di plastica e posizionare il cucchiaio di plastica nel contenitore dei rifiuti.

Quindi, posizionare il substrato di ovodeposizione pulito nella gabbia pulita da 29,3 litri. Successivamente, posizionare la gabbia in un'incubatrice impostata a 27 gradi Celsius al 60% di umidità relativa su un fotoperiodo di luce scuro di 12 ore e 12 ore. Riportare la gabbia contenente il bestiame da riproduzione nella posizione originale e cancellare tutti gli oggetti dalla superficie di lavoro.

Quindi, posizionare il contenitore dei rifiuti in un congelatore all'interno dell'impianto dedicato allo stoccaggio di oggetti potenzialmente contaminati da uova di cricket. Quindi, disinfettare la superficie di lavoro con una soluzione di candeggina al 10% e lasciarla riposare per 60 secondi. Asciugare la superficie di lavoro con un tovagliolo di carta pulito.

Dopo aver aperto il congelatore, smaltire il tovagliolo di carta nel contenitore dei rifiuti. Seleziona due piatti di cartone per uova commerciali inutilizzati da 30,8 centimetri per 30,8 centimetri. E con un coltello da utilità o forti cesoie, tagliale in sei strisce separate larghe 10,1 centimetri di uguali dimensioni.

Quindi, spazzolare via i bordi tagliati con le mani per rimuovere le particelle penzolanti di cartone. Quindi, posizionare i sei singoli pezzi di cartone da 10,1 centimetri per 30,8 centimetri verticalmente nella parte inferiore della gabbia, con l'asse più lungo del cartone che attraversa l'asse orizzontale più stretto di una gabbia da 29,3 litri. Posizionare un settimo pezzo di cartone piatto sulla parte superiore dei sei pezzi verticali.

Dopo aver selezionato tre pezzi di tovagliolo di carta marrone ruvido di circa 25 centimetri per 25 centimetri, piegare ciascuno a metà. Quindi, posizionarne due in modo tale che coprano la parte superiore del lato prossimale della struttura del cartone e posizionarne uno sopra la pila di cartone sul lato distale. Al giorno 11 post-ovodeposizione, spostare il substrato di ovodeposizione nell'angolo prossimale destro della gabbia.

Quando si osserva un portello, nebulizzare gli asciugamani di carta posti sopra la parte superiore dei cartoni, fino a quando non sono bagnati, ma non versano attivamente acqua. Quindi, pulire accuratamente entrambi i lati di un coperchio di Petri da 100 millimetri con etanolo al 70% e lasciarlo asciugare. Quindi, raccogliere 50 grammi di mangime in un frullatore monodose da 60 watt e macinare a 10.000 giri / min per un minuto.

Dopo aver misurato un grammo del mangime, agitalo sul coperchio della capsula di Petri nella gabbia. Usando l'estremità pulita di un cucchiaio o Scoopula, distribuire il mangime nel modo più uniforme possibile sul fondo del piatto. Successivamente, sostituisci il mangime ogni due giorni.

Scartare il vecchio mangime nel contenitore dei rifiuti autoclavabile. Monitorare la crescita della muffa sul mangime. E se il mangime inizia ad apparire bianco o verdastro, scartare la capsula di Petri e nutrirsi immediatamente.

A 14 giorni dopo l'ovodeposizione, utilizzare un pennello da 2,54 centimetri per rimuovere i grilli aggrappati al substrato di fibra di cocco natale spazzolando tutti i grilli dalla superficie e dai lati della fibra di Petri nella gabbia. Quindi, posizionare il substrato di ovodeposizione rimosso nel contenitore di rifiuti autoclavabile e conservarlo nel congelatore fino all'autoclave. Quindi, sostituire il substrato natale con un piatto di fibra di cocco fresco per l'idratazione.

Usando una bottiglia di lavaggio dell'acqua deionizzata, aggiungere acqua fino a quando la superficie della fibra di cocco luccica, ma non si accumula. I grilli erano riforniti da una popolazione con una massa media di 21 milligrammi. Alla fine dell'esperimento, la massa media di tutti i grilli giovani e adulti combinati era di 0,724 grammi.

A 65 giorni di età, quando l'esperimento si è concluso, erano presenti 30 maschi adulti e la massa media era di 0,721 grammi, mentre per le 58 femmine adulte, la massa media era di 0,841 grammi. La sopravvivenza tra lo stoccaggio e il raccolto è stata dell'89% ed è stata misurata settimanalmente dal conteggio totale di tutti i singoli grilli in tutte le gabbie. Al giorno 65, circa il 68% di tutti i grilli aveva raggiunto l'instar adulto.

Evitare la formazione di goccioline d'acqua sul fondo del recinto durante l'irrigazione o l'appannamento. Posizionare un tovagliolo di carta sopra il refugia consente un gradiente di umidità e assorbe le goccioline d'acqua dalla nebulizzazione. Questa procedura serve come modello per i ricercatori in molti campi delle scienze della vita per allevare Gryllus bimaculatus come organismo modello.

Ad oggi, sono stati pubblicati pochi protocolli formali per l'allevamento di Gryllus bimaculatus o di qualsiasi altro organismo modello paurometabolo. La codifica e la standardizzazione dei metodi di allevamento per gli insetti utilizzati nell'agricoltura degli insetti consentirà meglio il confronto dei risultati tra i gruppi di ricerca.