Name: Indagine spettrometrica di massa sfaccettata di neuropeptidi in Callinectes sapidus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Scopri l'analisi spettrometrica di massa dei neuropeptidi in Callinectes sapidus per neuroscienza. Questo metodo consente la quantificazione e localizzazione di biomarcatori peptidici utili per terapie innovative.

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Questa ricerca è stata sostenuta dalla National Science Foundation (CHE-1710140 e CHE-2108223) e dal National Institutes of Health (NIH) attraverso la sovvenzione R01DK071801. A.P. è stato supportato in parte dal NIH Chemistry-Biology Interface Training Grant (T32 GM008505). N.V.Q. è stato sostenuto in parte dal National Institutes of Health, nell'ambito del Ruth L. Kirschstein National Research Service Award dal National Heart Lung and Blood Institute all'Università del Wisconsin-Madison Cardiovascular Research Center (T32 HL007936). L.L. desidera riconoscere le sovvenzioni NIH R56 MH110215, S10RR029531 e S10OD025084, nonché il sostegno finanziario di una Vilas Distinguished Achievement Professorship e Charles Melbourne Johnson Professorship con finanziamenti forniti dalla Wisconsin Alumni Research Foundation e dalla University of Wisconsin-Madison School of Pharmacy.

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L'identificazione accurata, la quantificazione e la localizzazione di neuropeptidi e peptidi endogeni presenti nel sistema nervoso sono cruciali per comprendere la loro funzione23,24. La spettrometria di massa è una tecnica potente che può consentire di realizzare tutto questo, anche in organismi senza un genoma completamente sequenziato. Viene dimostrata la capacità di questo protocollo di rilevare, quantificare e localizzare neuropeptidi da tessuti raccolti da ...

Il sistema nervoso è complesso e richiede una rete di neuroni per trasmettere segnali in tutto l'organismo. Il sistema nervoso coordina le informazioni sensoriali e la risposta biologica. Le interazioni intricate e contorte coinvolte nella trasmissione del segnale richiedono molte molecole di segnalazione diverse come neurotrasmettitori, steroidi e neuropeptidi. Poiché i neuropeptidi sono le molecole di segnalazione più diverse e potenti che svolgono un ruolo chiave nell'attivazione delle risposte fisiologiche allo stress e ad altri stimoli, è interessante determinare il loro ruolo specifico in questi processi fisiologici. La funzione neuropeptidica è correlata alla loro struttura aminoacidica, che determina la mobilità, l'interazione del recettore e l'affinità1. Tecniche come l'istochimica, che è importante perché i neuropeptidi possono essere sintetizzati, immagazzinati e rilasciati in diverse regioni del tessuto, e l'elettrofisiologia sono state impiegate per studiare la struttura e la funzionedei neuropeptidi 2,3,4, ma questi metodi sono limitati dal throughput e dalla specificità per risolvere la vasta diversità di sequenze dei neuropeptidi.
La spettrometria di massa (MS) consente l'analisi ad alto rendimento della struttura e dell'abbondanza dei neuropeptidi. Questo può essere eseguito attraverso diverse tecniche di SM, più comunemente cromatografia liquida-ionizzazione elettrospray MS (LC-ESI-MS)5 e desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice MS (MALDI-MS)6. Utilizzando misurazioni di massa ad alta precisione e frammentazione della SM, MS fornisce la possibilità di assegnare la sequenza di amminoacidi e lo stato di modificazione post-traduzionale (PTM) ai neuropeptidi da miscele complesse senza conoscenza a priori per aiutare ad accertare la loro funzione 7,8. Oltre alle informazioni qualitative, la SM consente l'informazione quantitativa dei neuropeptidi attraverso la quantificazione senza etichetta (LFQ) o metodi basati su etichette come l'etichettatura isotopica o isobarica9. I principali vantaggi di LFQ includono la sua semplicità, il basso costo di analisi e la riduzione delle fasi di preparazione del campione che possono ridurre al minimo la perdita di campioni. Tuttavia, gli svantaggi di LFQ includono l'aumento dei costi di tempo dello strumento in quanto richiede più repliche tecniche per affrontare l'errore quantitativo dovuto alla variabilità run-to-run. Ciò porta anche a una diminuzione della capacità di quantificare con precisione piccole variazioni. I metodi basati su etichette sono soggetti a variazioni meno sistematiche in quanto più campioni possono essere etichettati in modo differenziale utilizzando una varietà di isotopi stabili, combinati in un unico campione e analizzati simultaneamente attraverso la spettrometria di massa. Ciò aumenta anche la produttività, sebbene le etichette isotopiche possano richiedere molto tempo e denaro da sintetizzare o acquistare. Anche la complessità spettrale degli spettri di massa a scansione completa (MS1) aumenta con l'aumentare del multiplexing, il che diminuisce il numero di neuropeptidi unici in grado di essere frammentati e, quindi, identificati. Al contrario, l'etichettatura isobarica non aumenta la complessità spettrale a livello MS1, sebbene introduca sfide per gli analiti a bassa abbondanza come i neuropeptidi. Poiché la quantificazione isobarica viene eseguita a livello degli spettri di massa ionica del frammento (MS2), i neuropeptidi a bassa abbondanza potrebbero non essere in grado di essere quantificati poiché componenti della matrice più abbondanti possono essere selezionati per la frammentazione e quelli selezionati potrebbero non avere un'abbondanza abbastanza elevata da essere quantificati. Con l'etichettatura isotopica, la quantificazione può essere eseguita su ogni peptide identificato.
Oltre all'identificazione e alla quantificazione, le informazioni di localizzazione possono essere ottenute dagli SM tramite l'imaging MALDI-MS (MALDI-MSI)10. Rasterizzando un laser su una superficie campione, gli spettri MS possono essere compilati in un'immagine della mappa di calore per ogni valore m/z . La mappatura dell'intensità del segnale neuropeptidico transitorio in diverse regioni attraverso le condizioni può fornire informazioni preziose per la determinazione della funzione11. La localizzazione dei neuropeptidi è particolarmente importante perché la funzione del neuropeptide può differire a seconda della posizione12.
I neuropeptidi si trovano in una minore abbondanza in vivo rispetto ad altre molecole di segnalazione, come i neurotrasmettitori, e quindi richiedono metodi sensibili per il rilevamento13. Ciò può essere ottenuto attraverso la rimozione di componenti della matrice a maggiore abbondanza, come i lipidi11,14. Ulteriori considerazioni per l'analisi dei neuropeptidi devono essere fatte rispetto ai comuni flussi di lavoro di proteomica, principalmente perché la maggior parte delle analisi neuropeptidomiche omettono la digestione enzimatica. Ciò limita le opzioni software per l'analisi dei dati neuropeptidici poiché la maggior parte sono stati costruiti con algoritmi basati su dati proteomici e corrispondenze proteiche informate dal rilevamento di peptidi. Tuttavia, molti software come PEAKS15 sono più adatti all'analisi dei neuropeptidi grazie alle loro capacità di sequenziamento de novo. Diversi fattori devono essere considerati per l'analisi dei neuropeptidi a partire dal metodo di estrazione all'analisi dei dati della SM.
I protocolli qui descritti includono metodi per la preparazione del campione e l'etichettatura isotopica del dimetilico, l'acquisizione dei dati e l'analisi dei dati dei neuropeptidi da parte di LC-ESI-MS, MALDI-MS e MALDI-MSI. Attraverso i risultati rappresentativi di diversi esperimenti, viene dimostrata l'utilità e la capacità di questi metodi di identificare, quantificare e localizzare i neuropeptidi dei granchi blu, Callinectes sapidus. Per comprendere meglio il sistema nervoso, i sistemi modello sono comunemente usati. Molti organismi non hanno un genoma completamente sequenziato disponibile, il che impedisce la scoperta completa di neuropeptidi a livello peptidico. Al fine di mitigare questa sfida, è incluso un protocollo per l'identificazione di nuovi neuropeptidi e l'estrazione di trascrittomi per generare database per organismi senza informazioni complete sul genoma. Tutti i protocolli qui presentati possono essere ottimizzati per campioni di neuropeptidi di qualsiasi specie, nonché applicati per l'analisi di qualsiasi peptide endogeno.

<table><tbody><tr><td><forte>Sostanze chimiche, reagenti e materiali di consumo</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr>matrice di <tr><td>acido 2,5-diidrossibenzoico (DHB)</td><td>Supelco</td><td>39319</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico</td><td>Fisher Chemical</td><td>A38S-500</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile Optima grado LC/MS</td><td>Fisher Chemical</td><td>A955-500</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di ammonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9830</td><td></td></tr><tr><td>Borano piridina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>179752</td><td></td></tr><tr><td>Bruker peptide calibrazione miscela Bruker</td><td>Daltonics</td><td>NC9846988</td><td></td></tr><tr><td>Capillary</td><td>Polymicro</td><td>1068150019</td><td>per realizzare colonne nanoflow (75 &; m diametro interno x 360 &micro; m diametro esterno)</td></tr><tr><td>Tazza per criostato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6032</td><td>qualsiasi tazza o stampo dovrebbe funzionare</td></tr><tr><td>&nbsp; Provette per microcentrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>30108434</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide - D2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>492620</td><td></td></tr><tr><td>Acido formico Optima LC/MS grado</td><td>Fisher Chemical</td><td>A117-50</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Difco</td><td>214340</td><td>posto in 37 &deg; C a bagnomaria per sciogliere</td></tr><tr><td>Penna barriera idrofobica</td><td>Vector Labs</td><td>15553953</td><td></td></tr><tr><td>vetrini rivestiti di ossido di indio e stagno (ITO) Delta</td><td>Technologies</td><td>CB-90IN-S107</td><td>25 mm x 75 mm x 0,8 mm (larghezza x lunghezza x spessore)</td></tr><tr><td>Fiale LC-MS</td><td>Thermo</td><td>TFMSCERT5000-30LVW</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo Optima Grado LC/MS Fisher</td><td>Chemical</td><td>A456-500</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7793</td> Strisce indicatrici di pH <td>con pellicola idrofobica</td></tr><tr><td></td><td>Supelco</td><td>109450</td><td></td></tr><tr><td>Cluster di fosforo rosso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>343242</td><td></td></tr><tr><td>Materiale C18 a fase inversa</td><td>Waters</td><td>186002350</td><td>confezionato manualmente in colonna a nanoflusso</td></tr><tr><td>Penna Wite-out</td><td>BIC</td><td>150810</td><td></td></tr><tr><td>ZipTip</td><td>Millipore</td><td>Z720070</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti e Strumenti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema di spruzzatura automatica a matrice- M5</td><td>HTX Technologies, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga - 5424 R</td><td>Eppendorf</td><td>05-401-205</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat- HM 550</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>956564A</td><td></td></tr><tr><td>Drierite</td><td>essiccante</td><td>2088701</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>WPI</td><td>501764</td><td></td></tr><tr><td>MALDI piastra bersaglio in acciaio inox</td><td>Bruker Daltonics</td><td>8280781</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite XLS</td><td>Rainin</td><td>17014391</td><td>200 &; L</td></tr><tr><td>Q Exactive Plus Ibrido Quadrupolo-Orbitrap</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>RapifleX MALDI-TOF/TOF</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SpeedVac - SVC100</td><td>Savant</td><td>SVC-100D</td><td></td></tr><tr><td>Pulitore ad ultrasuoni</td><td>Bransonic</td><td>2510R-MTH</td><td>per sonicazione</td></tr><tr><td>Omogeneizzatore ad ultrasuoni</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB120110</td><td>FB120 Sonic Dismembrator con sonda CL-18</td></tr><tr><td>Pompa per vuoto- Alcatel 2008 A</td><td>Ideal Vacuum Products</td><td>P10976</td><td>pressione finale = 1 x 10-4 Torr</td></tr><tr><td>Vortex Mixer</td><td>Corning</td><td>6775</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua (37C) - Isotemp 110</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-460-10</td><td></td></tr><tr><td>Software di analisi dati</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Expasy</td><td>https://web.expasy.org/translate/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>FlexAnalysis</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlexControl</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlexImaging</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PEAKS Studio</td><td>Bioinformatics Solutions, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SCiLS Lab</td><td>https://scils.de/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>SignalP 5.0</td><td>https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?SignalP-5.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tBLASTn</td><td>http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=tblastn&BLAST_ PROGRAMMI=tblastn& PAGE_ TYPE=BlastSearch& SHOW_ DEFAULTS=on& LINK_LOC = blasthome</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

indagine spettrometrica di massa sfaccettata di neuropeptidi in callinectes sapidus

Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus

I neuropeptidi sono molecole di segnalazione che regolano quasi tutti i processi fisiologici e comportamentali, come lo sviluppo, la riproduzione, l'assunzione di cibo e la risposta a fattori di stress esterni. Tuttavia, i meccanismi biochimici e il pieno complemento dei neuropeptidi e i loro ruoli funzionali rimangono poco compresi. La caratterizzazione di questi peptidi endogeni è ostacolata dall'immensa diversità all'interno di questa classe di molecole di segnalazione. Inoltre, i neuropeptidi sono bioattivi a concentrazioni 100x - 1000x inferiori a quelle dei neurotrasmettitori e sono soggetti a degradazione enzimatica dopo il rilascio sinaptico. La spettrometria di massa (MS) è uno strumento analitico altamente sensibile in grado di identificare, quantificare e localizzare analiti senza una conoscenza a priori completa. È adatto per profilare globalmente i neuropeptidi e aiutare nella scoperta di nuovi peptidi. A causa della bassa abbondanza e dell'elevata diversità chimica di questa classe di peptidi, diversi metodi di preparazione del campione, parametri di acquisizione della SM e strategie di analisi dei dati sono stati adattati dalle tecniche di proteomica per consentire una caratterizzazione ottimale dei neuropeptidi. Qui, vengono descritti metodi per isolare i neuropeptidi da tessuti biologici complessi per la caratterizzazione, la quantificazione e la localizzazione della sequenza utilizzando la cromatografia liquida (LC)-MS e il desorbimento / ionizzazione laser assistito da matrice (MALDI)-MS. È incluso un protocollo per la preparazione di un database di neuropeptidi dal granchio blu, Callinectes sapidus, un organismo senza informazioni genomiche complete. Questi flussi di lavoro possono essere adattati per studiare altre classi di peptidi endogeni in diverse specie utilizzando una varietà di strumenti.

Il flusso di lavoro per la preparazione dei campioni e l'analisi ms è illustrato nella Figura 1. Dopo la dissezione del tessuto neuronale, vengono eseguite l'omogeneizzazione, l'estrazione e la desalinizzazione per purificare i campioni di neuropeptide. Se si desidera una quantificazione isotopica basata sull'etichetta, i campioni vengono nuovamente etichettati e dissalati. Il campione risultante viene analizzato attraverso LC-MS/MS per l'identificazione e la quantificazione dei neuropeptidi...

La caratterizzazione spettrometrica di massa dei neuropeptidi fornisce informazioni di sequenza, quantificazione e localizzazione. Questo flusso di lavoro ottimizzato non è utile solo per gli studi sui neuropeptidi, ma anche per altri peptidi endogeni. I protocolli forniti qui descrivono la preparazione del campione, l'acquisizione della SM, l'analisi della SM e la generazione di neuropeptidi nel database utilizzando LC-ESI-MS, MALDI-MS spotting e MALDI-MS imaging.

Indagine spettrometrica di massa sfaccettata di neuropeptidi in Callinectes sapidus

Neuropeptides are signaling molecules that regulate almost all physiological and behavioral processes, such as development, reproduction, food intake, and ...

L'analisi dei peptidi endogeni, che sono più piccoli della maggior parte delle proteine, ma più grandi di molti peptidi digeriti è un campo sotto esame. Questo protocollo affronta lo scap nei flussi di lavoro basati sulla spettrometria di massa. La spettrometria di massa è altamente sensibile e può essere utilizzata per colpire specifici neuropeptidi di interesse o può catturare e rilevare una gamma di neuropeptidi all'interno di un campione.La quantificazione e la localizzazione dell'espressione di neuropeptidi mediante spettrometria di massa può portare allo sviluppo di terapie peptidiche e alla scoperta di biomarcatori neuropeptidici per varie malattie. Per iniziare l'estrazione del neuropeptide raccogliere il tessuto cerebrale dal crostaceo e utilizzando una pinza posizionare immediatamente un tessuto ciascuno in un tubo da 0,6 millilitri contenente 20 microlitri di metanolo acidificato. Aggiungere 150 microlitri di metanolo acidificato al campione.Impostare il tempo totale del paziente Sonic su 24 secondi, il tempo di impulso su otto secondi. Mettere in pausa il tempo a 15 secondi un'ampiezza al 50% su un omogeneizzatore ad ultrasuoni e omogeneizzare i campioni sul ghiaccio. Centrifugare il campione a quattro gradi Celsius a 20.000 GS per 20 minuti.Con una pipetta trasferire il surnatante in un tubo e asciugarlo in un concentratore di vuoto a circa 35 gradi Celsius. Per la desalinizzazione ricostituire il campione di tessuto estratto in 20 microlitri di acido formico allo 0,1%. Vortice la soluzione e sonicare in un bagno d'acqua a temperatura ambiente per un minuto.Applicare 0,5 microlitri di campione su una striscia di pH per confermare che il pH è inferiore a quattro. Centrifugare a quattro gradi Celsius e 20.000 GS per 30 secondi. Preparare il lavaggio di equilibratura bagnante in soluzioni di illusione.Ottenere una punta di desalinizzazione da 10 microlitri con resina C18. Posizionare la punta di dissalazione su una pipetta da 20 microlitri impostata su 15 microlitri. Aspirare la punta tre volte con la soluzione bagnante e tre volte con la soluzione di collaborazione equi.Aspirare nel campione 10 volte seguito da lavare tre volte in soluzione di lavaggio scartando ogni lavaggio. Eluire aspirando 10 volte in ciascuna delle soluzioni di illusione in ordine di aumentare l'acetonitrile. Asciugare i neuropeptidi allusi in un concentratore a vuoto.Ricostituire i neuropeptidi essiccati dissalati in cinque microlitri di acido formico allo 0,1%. Vortice la soluzione e sonicarla a bagnomaria a temperatura ambiente per un minuto. Centrifuga brevemente a 2000 GS. Per individuare neuropeptidi e tessuti crostali, pipettare una goccia di tre microliti di campione su un film idrofobo.Pipettare tre microlitri di matrice DHB direttamente sulla goccia campione. Mescolare le soluzioni pipettando su e giù. Pipettare un microlitro della miscela di campioni e matrici in un pozzetto della piastra target in acciaio inossidabile MALDI e utilizzare la punta della pipetta per distribuire ogni miscela ai bordi del pozzo del campione.Individuare un microlitro di calibro uno-a-uno e una miscela di matrice in un pozzo vicino al campione. Inserire la piastra bersaglio contenente punti campione essiccati nello strumento MALDI tandem time-of-flight. Con la matrice DHB impostata la potenza laser al 95% Seleziona il guadagno ottimale automatico del rilevatore e la modalità di movimento intelligente completa del portacampione.Acquisire MS Spectra nell'intervallo da 200 a 3, 200 M su Z e aggiungere più spettri da ogni punto insieme per aumentare il rapporto segnale neuropeptide / rumore. Riempire mezza tazza di criostato con gelatina e lasciarla solidificare a temperatura ambiente. Tenere al caldo la gelatina liquida rimanente a bagnomaria a 37 gradi Celsius.Raccogliere il tessuto neuronale desiderato dall'animale e utilizzare una pinza per immergere immediatamente il tessuto in un tubo da 0,6 millilitri contenente acqua deionizzata per un secondo. Posizionare il tessuto sopra la gelatina solida e riempire il resto della tazza di criostato con gelatina liquida. Utilizzare una pinza per posizionare il tessuto.Posizionare la tazza criostato su una superficie piana e congelare con ghiaccio secco. Per la preparazione del sezionamento separare il campione incorporato di gelatina dallo stampo criostato tagliando via lo stampo. Montare il tessuto incorporato su un mandrino criostato pipettando una goccia di acqua deionizzata da un millilitro sul mandrino e premendo immediatamente il tessuto incorporato sulla goccia.Una volta congelata la pipetta, più acqua deionizzata intorno al tessuto per fissarlo ulteriormente al mandrino. Sezionare il tessuto ad uno spessore approssimativo di una cellula. Montare con il pollice ogni sezione su un vetrino rivestito con ossido di indio stagno posizionando un lato della diapositiva vicino alla sezione e posizionando un dito sull'altro lato della diapositiva per riscaldare lentamente il vetro e consentire alla sezione di aderire alla diapositiva.Esporta De Novo solo peptidi. CSV da picchi con un punteggio medio di confidenza locale maggiore o uguale a 75. Cerca nell'elenco dei peptidi motivi di sequenza noti indicativi di neuropeptidi appartenenti a specifiche famiglie di neuropeptidi.Scegli una sequenza nota di aminoacidi ormonali pre-pro di interesse e usa TB blast N per cercare query pre-pro sequenza ormonale contro un database. Selezionare l'organismo bersaglio e modificare i parametri dell'algoritmo di soglia prevista a 1000 per includere allineamenti a punteggio basso. Esegui il programma blast e quindi controlla i risultati per punteggi di omologia elevati tra sequenze di query e soggetti che producono allineamenti significativi.Salvare il file FASTA contenente la sequenza nucleotidica. Traduci la sequenza nucleotidica ormonale pre-pro in sequenze peptidiche ormonali pre-pro usando lo strumento di traduzione Expasy. Per callinectes sapidus selezionare mitocondriale invertebrato per il codice genetico ed eseguire lo strumento.Controllare la sequenza peptidica del segnale e i siti di scissione dell'ormone pro nelle sequenze peptidiche utilizzando il segnale P.Questo è uno spettro di frammentazione di un neuropeptide identificato con una copertura della sequenza del 100% in un errore di massa del frammento basso con un limite massimo di 0,02 Dalton. Ecco uno spettro di un neuropeptide identificato anche con una copertura di sequenza al 100%, ma con un basso numero di ioni frammento, quindi la fiducia dell'identificazione è bassa. Questi sono i cromatogrammi ionici estratti per un singolo neuropeptide che è stato identificato in due cicli separati e consecutivi.Anche se il tempo di ritenzione differisce leggermente, questo può ancora essere utilizzato per la quantificazione senza etichetta perché lo spostamento temporale è inferiore a un minuto. Questo è un esempio di uno spettro di massa a scansione completa contenente un neuropeptide che è stato marcato con Dimetile con conseguente spostamento di massa di Dalton 4.025 tra le forme leggere e pesanti del neuropeptide. Lo spettro di massa ionica del frammento di un peptide sequenziato De Novo dimostra una buona copertura di frammentazione, dove lo ione frammento B e/o Y è stato osservato per ogni amminoacido con un errore di massa basso di 0,02 Dalton.Ciò indica che è stato osservato un peptide endogeno appartenente alla famiglia dei neuropeptidi RYMI dei crostacei. Esempi di buoni punti che toccano tutti i bordi dell'incisione del pozzo sono mostrati a sinistra. E esempi di punti negativi sono mostrati sulla destra.Dopo l'imaging MALDI MS di neuropeptidi da tessuti callinectes sapidus, sono state ottenute immagini di distribuzione ionica di vari valori M su Z corrispondenti a diversi neuropeptidi. L'ottimizzazione del solvente da estrazione per un particolare tipo di analy è fondamentale. Assicurarsi inoltre che si verifichi una completa omogeneizzazione e regolare il metodo secondo necessità.Nulla verrà rilevato a valle se non viene estratto. Questa tecnica può fornire un elenco fondamentale di importanti neuropeptidi che possono essere ulteriormente studiati come potenziali biomarcatori, oltre a fornire informazioni di localizzazione non mirate senza la necessità di anticorpi.

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