Name: Gerbilli mongoli come modello animale di guarigione delle ferite (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Scopri il modello animale di gerbilli mongoli per studiare l'anatomia e la guarigione della cornea. Questo metodo offre vantaggi significativi per la ricerca oftalmologica e le terapie corneali.

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Vorremmo ringraziare l'ingegnere Rodrigo de la Fuente per il suo prezioso aiuto e supporto tecnico. Ringraziamo anche María Eugenia Corbela per la narrazione e Priscilla Hazrún per l'edizione delle figure. Hugo Luján ci ha permesso di utilizzare le strutture del Centro di ricerca e sviluppo in immunologia e malattie infettive (CIDIE).

Tutte le procedure di ricerca sono state approvate dalla "Commissione istituzionale per la cura e l'uso degli animali da laboratorio" dell'Universidad Católica de Córdoba e hanno seguito la Guida del Consiglio Nazionale delle Ricerche per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. Queste procedure sono state approvate anche dalle autorità della "Facultad de Ciencias de la Salud" dell'Universidad Católica de Córdoba e dell'"Instituto de la Visión Cerro".
1. Manipolazione del gerbillo e anestesia
NOTA: Tutti gli animali erano specifici gerbilli mongoli maschi privi di patogeni (SFP) e sono stati tenuti nelle strutture del Centro di Ricerca e Sviluppo in Immunologia e Malattie Infettive (CIDIE) (Córdoba, Argentina). Sono stati ottenuti dall'Universidad de La Plata (Buenos Aires, Argentina).
<ol><li>Ospitare i gerbilli socialmente in gabbie di polisulfone letto con letti di pannocchie. Fornire cibo e acqua di rubinetto filtrata in bottiglie d'acqua ad libitum. Assicurarsi che l'intervallo di temperatura ambiente sia compreso tra 18 °C e 24 °C e che venga utilizzato un ciclo luce-buio di 12:12 ore.</li>
	<li>Pesare ogni gerbillo separatamente e identificare ciascuno per evitare confusione. Fai un segno con un pennarello a inchiostro indelebile sulla base della coda del gerbillo. Usa una pinzetta per tenere l'orecchio del gerbillo e fare un segno usando il pennarello indelebile sull'orecchio del roditore. Se sono disponibili un laboratorio e un grande biotino, assegnare una gabbia unica per ciascun roditore con l'identificazione corrispondente.</li>
	<li>Disinfettare la cappa a flusso laminare con una soluzione di etanolo al 70%. Posizionare tutti gli strumenti chirurgici e monouso, inclusi aghi, siringhe e rastrelliere, nell'area di lavoro all'interno del cappuccio. Posizionare anche una schiuma chirurgica monouso nel cappuccio.</li>
	<li>Utilizzare un piccolo contenitore di plastica aperto per mantenere il roditore sulla bilancia di precisione per facilitare la misurazione.</li>
	<li>Usa tre gerbilli mongoli maschi di 6 mesi di dimensioni e pesi simili (~ 80 g) per questo esperimento. Uno alla volta, posizionare ogni gabbia con il roditore all'interno della cappa a flusso laminare. Apri le gabbie, identifica ciascuno dei gerbilli e pesali sulla bilancia. NOTA: I gerbilli sono animali innocui ma delicati. Indossare guanti monouso quando si maneggiano i gerbilli.</li>
	<li>Afferrare il gerbillo con la mano non dominante per tenerlo saldamente per la coda. Usa la mano dominante, con il pollice e l'indice dietro le orecchie, per tenere l'animale con la regione ventrale rivolta verso l'alto. Usa il mignolo per tenere la coda.</li>
	<li>Riempire una siringa con un ago da 30 G con 1 mL di ketamina e xilazina. Somministrare l'anestesia per via intraperitoneale nel roditore (50-100 mg/kg di ketamina e 2 mg/kg di xilazina)9 usando la mano dominante. La durata dell'effetto sarà di circa 20-50 minuti (possono verificarsi variazioni).</li>
	<li>Per assicurarsi che il gerbillo sia completamente anestetizzato, controllare con un pizzico della punta, un pizzico della coda e un riflesso corneale, ecc., Prima di fare incisioni nella cornea. NOTA: Eseguire tutte le procedure solo nell'occhio destro.</li>
</ol>2. Tomografia a coerenza ottica (OCT) della cornea
<ol><li>Posizionare teli chirurgici sterili per proteggere l'apparecchiatura da secrezioni o peli di animali.</li>
	<li>Assicurati che uno degli operatori tenga l'animale mentre un altro operatore scatta le immagini. L'operatore deve appoggiare le mani sull'apparecchiatura mentre tiene il gerbillo in modo che l'occhio del gerbillo sia il più stabile e ancora possibile da studiare. Appoggia la mano che tiene il gerbillo sul poggiamento del mento..</li>
	<li>Avviare il software che controlla lo Strumento di personalizzazione di Office, premere Scatta immagine , quindi Salva immagine desiderata. Eseguire più fette sagittali e coronali della cornea. Immagina l'occhio sotto l'OCT e crea più fette per visualizzare il segmento anteriore della cornea del roditore. NOTA: Se l'immagine ottenuta non è nitida e l'occhio si è leggermente spostato, ripetere la procedura più volte per ottenere immagini sufficienti.</li>
	<li>Utilizzando il software OCT, eseguire misure pachimetriche delle regioni centrali e periferiche. Nella schermata principale del software, premere Scatta immagine, quindi premere il pulsante Salva immagine desiderata .</li>
	<li>Eseguire misurazioni sull'occhio normale o di controllo e immediatamente dopo la cheratectomia fototerapeutica sugli altri occhi dei roditori.</li>
</ol>3. Cheratectomia fototerapeutica laser ad eccimeri (PTK)
<ol><li>Posizionare teli chirurgici sterili sul dispositivo laser ad eccimeri per proteggere l'apparecchiatura da secrezioni o peli di animali.</li>
	<li>Instillare una goccia di proparacaina cloridrato topica (0,5%) nell'occhio da trattare 5 minuti prima della procedura chirurgica.</li>
	<li>Usa la mano non dominante per tenere saldamente il gerbillo. Con la mano dominante, apri le palpebre dell'animale in modo che le immagini possano essere catturate correttamente. Per essere in grado di mettere a fuoco e ottenere un'immagine nitida, assicurarsi che le mani della persona che tiene il gerbillo poggiano sulla testa dell'apparecchiatura. Posizionare le mani che tengono l'animale dove un paziente metterebbe il collo.</li>
	<li>Eseguire l'ablazione PTK sull'occhio destro. Utilizzare i seguenti parametri: un'ablazione tra 60 μm e 62 μm di spessore, una zona ottica di 3 mm, una durata di 4 s e un totale di 1.867 impulsi. NOTA: PTK viene eseguito solo su gerbillo 2 e gerbillo 3. In questa fase, il secondo operatore prepara e attiva il laser per ablare il tessuto corneale.</li>
	<li>Immediatamente dopo la procedura, scattare fotografie ed eseguire analisi OCT per registrare e documentare i cambiamenti superficiali negli occhi trattati.</li>
	<li>Una volta completata la procedura, riposizionare il roditore nella gabbia, monitorare i segni vitali (frequenza cardiaca: 360 battiti al minuto; temperatura rettale: 37-38,5 ° C; frequenza respiratoria: 90 respiri al minuto) e lasciare che l'animale si riprenda dall'anestesia.</li>
</ol>4. Risveglio dei gerbilli dopo PTK corneale
<ol><li>Somministrare buprenorfina (da 0,1 mg/kg a 0,05 mg/kg) e atipamezolo (0,1-1 mg/kg) tramite iniezioni intraperitoneali.</li>
	<li>Posizionare ogni gerbillo nella rispettiva gabbia domestica e monitorare i segni vitali per il normale risveglio (la temperatura corporea normale è 37-39 ° C).</li>
	<li>Applicare un unguento eritromicina per mantenere la superficie pulita e prevenire l'infezione. Eseguire questa procedura due volte al giorno.</li>
	<li>Somministrare buprenorfina (ogni 6-12 ore) per via sottocutanea (0,01-0,05 ml) per analgesia e unguento oculare per due giorni consecutivi dopo PTK.</li>
</ol>5. Metodo dell'eutanasia
<ol><li>Esegui l'eutanasia nella gabbia domestica quando possibile.</li>
	<li>Introdurre anidride carbonica compressa (CO2) nella gabbia domestica. Una velocità di riempimento del 30% -70% del volume della camera al minuto con CO2 aggiunto all'aria esistente nella gabbia domestica è sufficiente per ottenere una miscela che soddisfi l'obiettivo (per una camera di volume da 10 L, utilizzare una portata di 3-7 L / min). Utilizzare la dislocazione cervicale (come metodo secondario di eutanasia) per garantire la morte del roditore.</li>
	<li>A 24 h e 96 h dopo l'intervento chirurgico per gerbillo 2 e gerbillo 3, rispettivamente, rimuovere l'animale dalla gabbia domestica per eseguire l'enucleazione del bulbo oculare (sia il bulbo oculare normale che quello sottoposto a intervento chirurgico) per osservare la guarigione corneale.</li>
	<li>Posizionare l'animale sul tavolo operatorio e verificare l'assenza di battito cardiaco per circa 1 minuto.</li>
</ol>6. Chirurgia oculare
<ol><li>Rimuovere le palpebre superiori e inferiori per accedere al bulbo oculare. Utilizzare pinze chirurgiche e forbici per rimuovere le palpebre. La dimensione dell'area di lavoro è così piccola e delicata che la rimozione delle palpebre consente di enucleare il bulbo oculare senza danneggiarlo.</li>
	<li>Per enucleare il bulbo oculare, praticare un'incisione nel canto esterno e guidare le forbici in direzione posteriore. Ripetere questa procedura dal canto interno separando il bulbo oculare dall'orbita.</li>
	<li>Sezione il nervo ottico nella parte posteriore del bulbo oculare. Va chiarito che il plesso orbitale posteriore di solito genera un leggero sanguinamento quando si esegue questa tecnica, il che rende difficile il lavoro.</li>
	<li>Introdurre il bulbo oculare in un tubo di microcentrifuga con soluzione salina sterile per 30 s a 1 minuto per lavare il sangue residuo.</li>
	<li>Posizionare il bulbo oculare in una provetta da microcentrifuga contenente il 10% di formaldeide per successive analisi anatomo-patologiche come descritto di seguito. Scatta più immagini e fotografie.</li>
</ol>7. Analisi anatomo-patologica
<ol><li>Incorporare l'intero occhio in formalina tamponata al 10% per 6-24 ore.</li>
	<li>Tagliare il tessuto usando un microtomo. Assicurarsi che il tessuto tagliato abbia uno spessore di 3 mm.</li>
	<li>Immergere il tessuto in alcool al 96% per 30-90 minuti e ripetere questa procedura due volte.</li>
	<li>Mettere il tessuto in alcool isopropilico per 30-90 minuti e ripetere questa procedura due volte.</li>
	<li>Metti il tessuto in xilene o sostituto dello xilene per 1-3 ore.</li>
	<li>Incorporare il tessuto in cherosene liquido per almeno 1 ora.</li>
	<li>Utilizzare un blocco per posizionare il tessuto e incorporarlo in paraffina liquida. Lasciarlo solidificare (metterlo in un luogo freddo) e tagliarlo.</li>
	<li>Preparare il microtomo per il sezionamento secondo le istruzioni del produttore.</li>
	<li>Successivamente, utilizzare macchie come l'ematossilina e l'eosina.</li>
	<li>Ottenere immagini con la fotocamera aggiunta al microscopio.</li>
</ol>

<ol><li>Kuo, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Corneal wound healing.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 15 (4), 311-315 (2004).</li>
<li>Agrawal, V. B., Tsai, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial wound healing.</a> Indian Journal of Ophthalmology. 51 (1), 5-15 (2003).</li>
<li>Lu, L., Reinach, P. S., Kao, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial wound healing.</a> Experimental Biology and Medicine. 226 (7), 653-664 (2001).</li>
<li>Rathi, V. M., Vyas, S. P., Sangwan, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototherapeutic+keratectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Phototherapeutic keratectomy.</a> Indian Journal of Ophthalmology. 60 (1), 5-14 (2012).</li>
<li>Baumeister, M., Bühren, J., Ohrloff, C., Kohnen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+re-epithelialization+following+phototherapeutic+keratectomy+for+recurrent+corneal+erosion+as+in+vivo+model+of+epithelial+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Corneal re-epithelialization following phototherapeutic keratectomy for recurrent corneal erosion as in vivo model of epithelial wound healing.</a> Ophthalmologica. 223 (6), 414-418 (2009).</li>
<li>Fagerholm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototherapeutic+keratectomy%3A+12+years+of+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Phototherapeutic keratectomy: 12 years of experience.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 81 (1), 19-32 (2003).</li>
<li>Mohan, R. R., Stapleton, W. M., Sinha, S., Netto, M. V., Wilson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+generating+corneal+haze+in+anterior+stroma+of+the+mouse+eye+with+the+excimer+laser%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A novel method for generating corneal haze in anterior stroma of the mouse eye with the excimer laser.</a> Experimental Eye Research. 86 (2), 235-240 (2008).</li>
<li>Shah, D., Aakalu, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+corneal+epithelial+wound+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Murine corneal epithelial wound modeling.</a> Methods in Molecular Biology. 2193, 175-181 (2021).</li>
<li>Gerbil-Specific Anesthesia Guidance. Animal Resources Center. The University of Texas at Austin. , Available from: 
 <a target="_blank" href="research.utexas.edu/wp-content/uploads/sites/7/2020/02/Gerbil_Anesthesia_Guidance_ARC_112519.pdf">research.utexas.edu/wp-content/uploads/sites/7/2020/02/Gerbil_Anesthesia_Guidance_ARC_112519.pdf</a> (2020).</li>
<li>Zorio, D. A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+sequencing+and+initial+annotation+of+the+Mongolian+gerbil+%28Meriones+unguiculatus%29+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo sequencing and initial annotation of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus) genome.</a> Genomics. 111 (3), 441-449 (2019).</li>
<li>Kalha, S., Kuony, A., Michon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+abrasion+with+ocular+burr+as+a+model+for+cornea+wound%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial abrasion with ocular burr as a model for cornea wound.</a> Journal of Visualized Experiments. (137), e58071(2018).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electroretinogram+of+Mongolian+gerbil+%28Meriones+unguiculatus.%29%3A+Comparison+to+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">The electroretinogram of Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus.): Comparison to mouse.</a> Neuroscience Letters. 589, 7-12 (2015).</li>
<li>Baker, A. G., Emerson, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grating+acuity+of+the+Mongolian+gerbil+%28Meriones+unguiculatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Grating acuity of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus).</a> Behavioural Brain Research. 8 (2), 195-209 (1983).</li>
<li>Govardovskii, V. I., Röhlich, P., Szél, A., Khokhlova, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cones+in+the+retina+of+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+unguiculatus%3A+An+immunocytochemical+and+electrophysiological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Research%22%5BJournal%5D)">Cones in the retina of the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus: An immunocytochemical and electrophysiological study.</a> Vision Research. 32 (1), 19-27 (1992).</li>
<li>Zanandréa, L. I., Oliveira, G. M., Abreu, A. S., Pereira, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+lesions+in+gerbils+%28Meriones+unguiculatus%29+infected+with+low+larval+burden+of+Toxocara+canis%3A+Observations+using+indirect+binocular+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+da+Sociedade+Brasileira+de+Medicina+Tropical%22%5BJournal%5D)">Ocular lesions in gerbils (Meriones unguiculatus) infected with low larval burden of Toxocara canis: Observations using indirect binocular ophthalmoscopy.</a> Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. 41 (6), 570-574 (2008).</li>
<li>Cheng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+de+novo+sequencing%2C+assembly+and+annotation+of+the+Mongolian+gerbil+genome+with+transcriptome+sequencing+and+assembly+from+several+different+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Enhancement of de novo sequencing, assembly and annotation of the Mongolian gerbil genome with transcriptome sequencing and assembly from several different tissues.</a> BMC Genomics. 20 (1), 903(2019).</li>
<li>Henriksson, J. T., McDermott, A. M., Bergmanson, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimensions+and+morphology+of+the+cornea+in+three+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Dimensions and morphology of the cornea in three strains of mice.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 50 (8), 3648-3654 (2009).</li>
<li>Panagiotopoulos, M., Gan, L., Fagerholm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroma+remodelling+during+healing+of+corneal+surface+irregularities+induced+by+PTK%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Stroma remodelling during healing of corneal surface irregularities induced by PTK.</a> Acta Ophthalmologica Scandinavica. 85 (4), 387-394 (2007).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

La fisiologia della guarigione delle ferite corneali è un equilibrio tra la rigenerazione dei tessuti e il mantenimento dell'omeostasi. Un'eccessiva guarigione delle ferite può portare a fibrosi e cicatrici, che alla fine possono comportare la perdita della funzione degli organi. Con la rapida evoluzione delle procedure chirurgiche corneali, l'importanza di comprendere la guarigione delle ferite corneali e gli eventi fisiologici e patologici coinvolti non può essere sopravvalutata11. 
<p class...

Alcuni degli aspetti più importanti della guarigione delle ferite corneali, che sono preoccupazioni chiave per la chirurgia del segmento anteriore, sono l'integrità dell'architettura epiteliale, il mantenimento della trasparenza dello stroma corneale e, infine, il risultato in termini di proprietà refrattive della cornea1.
La cornea è il tessuto chiaro più esterno nella parte anteriore del bulbo oculare ed è, quindi, suscettibile di traumi, infezioni e ustioni; La guarigione compromessa di queste ferite può compromettere la salute visiva2.
Allo stato attuale, sono disponibili diversi modelli animali per studiare la guarigione corneale, e alcuni di essi sono migliori di altri, a seconda della specie e del tipo di meccanismo da studiare1. Ci sono alcune registrazioni di precedenti indagini sulla retina dei gerbilli2. Tuttavia, finora, non esiste letteratura pubblicata sui processi cicatriziali nella cornea di questi roditori.
Qui, presentiamo Meriones unguiculatus (gerbillo mongolo) come modello animale di guarigione delle ferite nella cornea. Vengono descritte le procedure per ottenere la guarigione corneale dopo cheratectomia fotorefrattiva, che ci permettono di studiare i diversi tipi di processi cicatriziali corneali, comprendere la guarigione delle ferite in termini di fasi dinamiche del tessuto vivente e, infine, pianificare appropriati trattamenti futuri3. La cheratectomia fototerapeutica è una tecnica altamente riproducibile con la possibilità di controllare con precisione parametri come la profondità e il diametro della lesione corneale4. Inoltre, questa tecnica non richiede procedure con strumenti chirurgici o soluzioni chimiche (ad esempio, soluzione salina, formalina, alcool, ecc.) che possono aggiungere variabili specifiche agli strumenti o all'operatore che esegue la procedura5.
Tre gerbilli maschi di 6 mesi di dimensioni e pesi simili (circa 90 g) sono stati utilizzati per l'esperimento presentato in questo articolo. Le procedure sono state eseguite solo con l'occhio destro. Un gerbillo (indicato come gerbillo 1 o controllo) non è stato sottoposto a cheratectomia fototerapeutica ed è stato enucleato per valutare tutte le normali strutture oculari. La cheratectomia fototerapeutica comporta l'erogazione controllata di luce ultravioletta generata dal laser ad eccimeri alla cornea ed è stata sviluppata per eseguire la chirurgia refrattiva6. È stato utilizzato in altri roditori, come i topi7. Gli altri due gerbilli sono stati sottoposti a cheratectomia fototerapeutica. Uno di questi è stato enucleato a 24 ore (indicato come gerbillo 2) e l'altro a 96 ore dopo l'intervento chirurgico (indicato come gerbillo 3).
Per eseguire questo esperimento, è stato filmato un gerbillo selezionato a caso per ogni condizione da studiare, ma questo esperimento è stato precedentemente eseguito con 16 gerbilli in totale per ogni condizione. Per motivi di editing, è stato deciso di utilizzare un gerbillo selezionato casualmente per ogni condizione (tre gerbilli in totale) come esempio.
L'obiettivo principale di questa ricerca è quello di esplorare il miglior modello animale disponibile. Tuttavia, è importante notare che non tutte le specie hanno caratteristiche oculari simili a quelle dell'occhio umano8. Questo articolo descrive la metodologia utilizzata per studiare la cornea di Meriones unguiculatus e la procedura eseguita per generare la lesione corneale, che ci permettono di studiare il processo di guarigione.

<table><tbody><tr><td>Anestesia</td><td>Tododrogas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tubi</td><td>Tododrogas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eccimero Laser</td><td>Technolas</td><td>2022445</td><td></td></tr><tr><td>Fluoresceina</td><td>Poen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Ofcor</td><td>3339</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Tododrogas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanti</td><td>Tododrogas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tomografia a coerenza ottica</td><td>Optovue</td><td>659007</td><td></td></tr><tr><td>Proparacaine</td><td>Poen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici,</td><td>Ofcor</td><td>3336</td><td></td></tr>, <tr><td>Teli sterili</td>, <td>Soporte hospitalario</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, Garze sterili,</td><td>Soporte hospitalario</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, Siringhe e aghi,</td><td>Tododrogas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilazina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gerbilli mongoli come modello animale di guarigione delle ferite

Mongolian Gerbils as an Animal Model of Wound Healing

Gli studi sulla guarigione delle ferite corneali sono stati condotti per lungo tempo e hanno contribuito a ridurre la sofferenza e sviluppare trattamenti che contribuiscono a migliorare la salute degli occhi dei pazienti. Storicamente, la guarigione corneale è stata studiata in roditori come topi e ratti, ma questi modelli potrebbero non imitare completamente i disturbi umani. Tuttavia, le informazioni su altri roditori come i gerbilli mongoli (Meriones unguiculatus) sono scarse nella ricerca corneale.
Qui, descriviamo una tecnica per sviluppare un nuovo modello animale per studiare la guarigione corneale dopo cheratectomia fotorefrattiva. A causa della limitata letteratura disponibile sulla cornea di M. unguiculatus, descriviamo anche un'analisi istologica della cornea normale. Queste tecniche di ricerca possono anche essere impiegate nello studio delle malattie degli occhi a causa della somiglianza tra le cornee dei gerbilli mongoli e gli esseri umani in termini di genetica, anatomia e fisiologia.

Nel presente studio, l'intera struttura corneale è stata accuratamente analizzata utilizzando tecniche istologiche e studi complementari del segmento anteriore, come la tomografia a coerenza ottica. L'analisi delle immagini mediante tomografia a coerenza ottica delle strutture del segmento anteriore mostra un epitelio e uno stroma normali (Figura 1), con spessori corneali centrali e periferici rispettivamente di 160 μm e 106 μm ± 2 μm. Altre pubblicazioni hanno anche dimostrato che la cornea...

Questo articolo descrive un nuovo modello animale sviluppato per studiare l'anatomia e l'istologia della cornea e dei suoi processi di guarigione. Questo nuovo modello animale utilizza il gerbillo mongolo, che ha una cornea con molte somiglianze con la cornea umana.

Gerbilli mongoli come modello animale di guarigione delle ferite

Corneal wound healing studies have been conducted for a long time and have helped to reduce suffering and develop treatments that contribute to improving ...

Studi precedenti dimostrano che la cheratectomia fotorefrattiva o PRK transepiteliale, è uno dei migliori modelli animali per lo studio della guarigione corneale, e anche, i cambiamenti associati allo sbrigliamento istopatologico della cornea epiteliale. Lavorare con i gerbilli mongoli come modello animale ha diversi vantaggi rispetto ad altri roditori. In primo luogo, la cornea ha gli stessi strati istologici della cornea umana.In secondo luogo, l'occhio è anatomicamente più grande dell'occhio di altri roditori, consentendo una più facile manipolazione. Tutta questa ricerca è stata effettuata nelle strutture del Centro di ricerca e sviluppo in immunologia e malattie infettive dell'Universidad Catolica de Cordoba. Il primo passo è stato quello di disinfettare la superficie di lavoro dell'armadio a flusso laminare.A tale scopo è stato utilizzato il 70% di alcol. Strumenti chirurgici da utilizzare. Nell'area di lavoro sono stati collocati materiali monouso come aghi e siringhe e farmaci per anestetizzare il roditore.Un campo chirurgico monouso dovrebbe anche essere posizionato per contenere secrezioni e peli di roditori, se necessario. Tre gerbilli mongoli maschi di sei mesi di dimen

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Abbiamo sviluppato una tecnica minimamente invasiva per creare un modello di lesione ischemica coniglio orecchio dividendo l'arteria centrale, nervi e il fascio neurovascolare cranica. Un tunnel sottocutaneo quindi taglia tutti i tessuti sottocutanei. Questa procedura provoca un'interruzione minima pelle e può essere tranquillamente utilizzato in animali diabetici.

Una tecnica semplificata per produrre un modello di lesione ischemica

Un modello murino di guarigione della ferita cutanea che può essere utilizzato per valutare composti terapeutici in contesti fisiologici e fisiopatologici.

Modello murino di guarigione delle ferite

Descriviamo un non-invasiva in vivo imaging protocol che è semplice e conveniente, utilizzando L-012, un a chemiluminescenza luminol-analogico, per visualizzare e quantificare le specie reattive dell'ossigeno (ROS) generate in un modello murino di excisional ferita.

In Vivo Formazione immagine di specie reattive dell'ossigeno in un murino ferita modello

Qui, presentiamo un protocollo per un saggio in vitro graffio utilizzando fibroblasti primari e per un saggio di guarigione della ferita della pelle in vivo nei topi. Entrambi i test sono metodi semplici per valutare la guarigione delle ferite in vitro e in vivo.

Scratch Migration Ssay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro e In Vivo Analisi della Guarigione delle Ferite

Qui vengono descritti due modelli di guarigione delle ferite murine, uno progettato per valutare le risposte di guarigione della ferita cellulare e citochina e l'altro per quantificare il tasso di chiusura della ferita. Questi metodi possono essere utilizzati con modelli di malattia complessi come il diabete per determinare i meccanismi di vari aspetti della scarsa guarigione delle ferite.

Valutazione della guarigione acuta delle ferite utilizzando l'impianto di spugna alcolica sottocutaneo dorsale e modelli di ferite cutanee della coda excisionali.

Lo scopo di questo studio era quello di sviluppare un modello murino di guarigione delle ferite da ustione. Un'ustione termica è stata indotta sulla pelle dorsale dei topi utilizzando un modello di ottone preriscaldato. Il tessuto bruciato è stato disretto e sovrapposto con un innesto cutaneo raccolto dalla coda di un topo donatore geneticamente simile.

Un modello Murine di una ferita da ustione ricostruita con un innesto di pelle allogenica

Questo protocollo descrive come generare ferite escisionali bilaterali a pieno spessore nei topi e come monitorare, raccogliere e preparare successivamente le ferite per l'analisi morfometrica. È inclusa una descrizione approfondita di come utilizzare sezioni istologiche seriali per definire, quantificare e rilevare con precisione i difetti morfometrici.

Modello di guarigione delle ferite escisionali murine e analisi istologica delle ferite morfometriche

Qui, viene descritto un protocollo per la creazione di una ferita da abrasione epiteliale corneale centrale nel topo usando una trefina e uno spud smussato della mazza da golf. Questo modello di guarigione delle ferite corneali è altamente riproducibile e viene ora utilizzato per valutare la guarigione delle ferite corneali compromesse nel contesto delle malattie.

Un modello di abrasione epiteliale per lo studio della guarigione delle ferite corneali

Il modello di ferita diabetica indotta da streptozotocina nei ratti SD maschi è attualmente il modello più utilizzato per studiare la guarigione delle ferite nel diabete mellito di tipo I. Questo protocollo descrive i metodi utilizzati per costruire questo modello. Presenta e affronta anche potenziali sfide ed esamina la progressione e le caratteristiche angiogeniche delle ferite diabetiche.

Un protocollo per la costruzione di un modello di ferita di ratto del diabete di tipo 1

Le ferite rappresentano una sfida sanitaria globale. Questo studio ha sviluppato una cabina fotografica standardizzata utilizzando la planimetria digitale per ridurre al minimo la variabilità della misurazione della ferita. Il monitoraggio delle ferite nei topi per 14 giorni ha rivelato un aumento iniziale dell'area e del perimetro della ferita, seguito da una chiusura graduale. Questa metodologia può aiutare a valutare la cinetica di chiusura della ferita in modelli preclinici.

Planimetria digitale per la valutazione della cinetica di chiusura della ferita in un modello murino

Viene descritto un modello di ferita cutanea di ratto che consente la valutazione di vari agenti terapeutici in condizioni fisiologiche o patologiche attraverso le diverse fasi del processo di guarigione. Inoltre, è dettagliato un protocollo per eseguire la planimetria manuale al fine di monitorare la velocità di contrazione della ferita durante la riparazione dei tessuti.

Un modello chirurgico di ferite cutanee per ratti: un approccio per studi di guarigione delle ferite e valutazione dei biomateriali

Scopri il modello animale di gerbilli mongoli per studiare l'anatomia e la guarigione della cornea. Questo metodo offre vantaggi significativi per la ricerca oftalmologica e le terapie corneali.

Gerbilli mongoli come modello animale di guarigione delle ferite

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