Formulazione e caratterizzazione di un sistema di trasporto della dopamina basato sugli esosomi

Gli esosomi potrebbero reagire alle vescicole secrete da una cellula di dimensioni comprese tra 14 e 200 nanometri e dividersi nel carico e nella comunicazione intracellulare, che arriva al sottogruppo più piccolo di vescicole extracellulari. Gli esosomi che si formano a seguito della differenziazione dell'endosoma, hanno origine dalla membrana cellulare. Le cellule staminali possono essere isolate da diverse fonti come il midollo osseo o i tessuti adiposi.

ma le cellule staminali essiccate dei tessuti adulti hanno un potenziale immunogenico più elevato Contro Svantaggi delle dimensioni degli esosomi, si dice che abbia svolto un ruolo importante nelle malattie del sistema nervoso centrale perché può passare attraverso la barriera ematoencefalica. Per iniziare, lavare le cellule staminali mesenchimali della gelatina di Wharton con cinque millilitri di PBS. Quindi aggiungere cinque millilitri di soluzione di tripsina EDTA prima di mettere il pallone in un'incubatrice.

Dopo l'incubazione, raccogliere le cellule e centrifugare a 1.500 G per cinque minuti. Quindi rimuovere il surnatante e aggiungere un millilitro di DMEM-F12 contenente il 10% di FBS nella provetta. Lavare le cellule in coltura con PBS.

Dopo il lavaggio, aggiungere alle cellule il terreno DMEM-F12 privo di siero e metterlo nell'incubatrice. Per isolare gli esosomi, raccogliere il terreno privo di siero e centrifugare a 300 G a quattro gradi Celsius per 10 minuti. Trasferire il surnatante in un'altra provetta e processarlo mediante centrifugazione seriale a velocità più elevate.

Dopo la centrifugazione finale, rimuovere lentamente il surnatante e sciogliere il pellet in un millilitro di PBS. Miscelare mediante vortex e procedere con ultracentrifugazione a 110.000 G per 70 minuti a quattro gradi Celsius. Aggiungere tre millilitri di PBS alla sospensione dell'esosoma raccolta in precedenza mediante ultracentrifugazione e sterilizzare la sospensione diluita mediante filtrazione utilizzando un filtro da 0,22 micron.

Quindi trasferire 500 microlitri della sospensione di esosomi sterilizzati in un'altra provetta. Successivamente, aggiungere in sequenza 500 microlitri di soluzione di dopamina da 0,5 milligrammi per millilitro e saponina nella sospensione sterilizzata. Dopo l'incubazione ultracentrifugare la sospensione.

Il campione può essere utilizzato per l'analisi NTA e DLS per caratterizzare gli esosomi carichi di dopamina o conservato a meno 20 gradi Celsius fino a un ulteriore utilizzo. Nell'analisi NTA, la dimensione media degli esosomi derivati dalla gelatina di Wharton è stata determinata a 98 nanometri e gli esosomi caricati di dopamina a 110 nanometri. Il numero di nanoparticelle rivelate dalle analisi NTA e DLS era coerente tra loro.

Il potenziale zeta degli esosomi derivati dalla gelatina di Wharton è stato misurato come meno 15,7 e gli esosomi carichi di dopamina come meno 17,6 millivolt. L'analisi HPLC degli esosomi carichi di dopamina ha rilevato il picco di dopamina a 6,45 minuti. Il profilo cumulativo di rilascio del farmaco ha rivelato che il 74,8% della dopamina incapsulata è stata rilasciata dagli esosomi entro le prime otto ore.

È stata studiata la citotossicità degli esosomi carichi di dopamina e liberi sui fibroblasti. Sebbene gli esosomi caricati con dopamina non abbiano dimostrato alcun effetto citotossico, la saponina ha diminuito la vitalità dei fibroblasti. Il test MTT ha mostrato una maggiore vitalità cellulare quando i fibroblasti sono stati trattati con gli esosomi caricati con dopamina.

La significatività statistica dei risultati è stata valutata eseguendo un'anova unidirezionale. Inoltre, sono stati studiati gli effetti citotossici di diverse concentrazioni di esosomi liberi sui fibroblasti. La vitalità dei fibroblasti era più alta con esosomi liberi alla concentrazione di 25 microlitri per millilitro.

È molto importante per il sistema nervoso centrale le dimensioni del paziente, il ruolo svolto nei processi come la plasticità, la risposta neurologica, la comunicazione da lato a lato e la neurogenesi nel cervello. Inoltre, grazie alla superficie degli esosomi, si dice, è stato osservato che possono interagire con la cellula bersaglio del farmaco e l'attività erogata durante il farmaco è un completamento. Per la prima volta nello studio, abbiamo sviluppato una nuova formulazione farmacologica incapsulando la dopamina in esosomi derivati da cellule staminali.

Ha proposto che questa formulazione sarà così promettente per il trattamento del morbo di Parkinson.