Name: Trattamento antiretrovirale combinato orale in topi umanizzati infetti da HIV-1 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Impara un metodo orale innovativo per somministrare farmaci antiretrovirali combinati che sopprime la replicazione dell'RNA HIV-1 in topi umanizzati. Questa tecnica riduce lo stress degli animali rispetto alle iniezioni giornaliere.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Vorremmo ringraziare i dottori Romas Geleziunas e Jeff Murry e le persone di Gilead per aver fornito i farmaci antiretrovirali utilizzati in questo studio. Questo lavoro è stato finanziato da NCI 1R01CA239261-01 (a Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core e Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (a Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Questo lavoro è stato sostenuto anche dall'UCLA AIDS Institute, dal James B. Pendleton Charitable Trust e dalla McCarthy Family Foundation.

Il tessuto fetale umano anonimizzato è stato acquisito commercialmente. La ricerca sugli animali è stata condotta secondo i protocolli approvati dall'Università della California, Los Angeles, e (UCLA) Animal Research Committee (ARC) in conformità con tutte le linee guida federali, statali e locali. In particolare, tutti gli esperimenti sono stati condotti in conformità con le raccomandazioni e le linee guida per l'alloggio e la cura degli animali da laboratorio del National Institutes of Health (NIH) e dell'Associazione per la valutazione e l'accreditamento della cura degli animali da laboratorio (AALAC) International ai sensi del numero di protocollo ARC UCLA 2010-038-02B. Tutti gli interventi chirurgici sono stati eseguiti con ketamina (100 mg / kg) / xilazina (5 mg / kg) e anestesia isoflurana (2-3 vol%) e tutti gli sforzi sono stati fatti per ridurre al minimo il dolore e il disagio degli animali.
1. Topi umanizzati infettati da HIV-1
NOTA: I topi umanizzati sono stati costruiti come precedentemente descritto in30,31,49. Il protocollo è brevemente descritto di seguito.
<ol><li>Purificare le cellule progenitrici ematopoietiche CD34+ dal fegato fetale umano tramite microsfere anti-CD34 secondo il protocollo del produttore.</li>
	<li>Anestetizzare topi maschi e femmine di 6-8 settimane NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) e irradiare sub-letalmente (2,7 Gy) prima dell'intervento.</li>
	<li>Impianto di timo, derivato dallo stesso donatore del fegato fetale, sotto la capsula renale insieme al fegato.</li>
	<li>Dopo l'impianto, iniettare topi con 0,5 milioni a un milione di cellule CD34+, per via endovenosa.</li>
	<li>Dopo 8-10 settimane, raccogliere 100 μL di sangue di topo tramite sanguinamento retroorbitale50 in provette da microcentrifuga contenenti 5 μL di EDTA e centrifugare a 350 x g per 3 minuti.</li>
	<li>Conservare il plasma a -80 °C per monitorare la carica virale dopo che il topo è stato infettato da HIV-1. Aggiungere 2 ml di soluzione di NH4C all'83% e incubare per 5 minuti a temperatura ambiente per lisare i globuli rossi.</li>
	<li>Aggiungere 10 ml di RPMI con siero bovino fetale al 10% (FBS) per fermare la lisi. Girare a 300 x g per 5 min.</li>
	<li>Aspirare il surnatante. Colorare le cellule con pannello anticorpale (vedi Tabella dei materiali) e analizzarle mediante citometria a flusso per controllare l'attecchimento delle cellule immunitarie umane.</li>
	<li>Infettare topi che presentano più del 50% di cellule CD45+ circolanti mediante iniezione venosa retroorbitaria51,52 con almeno 200 ng di p24 di un ceppo HIV-1 (cioè NFNSXSL9 30,53,54) usando una siringa da insulina. Raccogliere il sangue bisettimanalmente per l'analisi della citometria a flusso e per misurare la carica virale.</li>
</ol>2. Preparazione di farmaci ART
<ol><li>Pesare i singoli farmaci; ad esempio, per realizzare 10 bicchieri alimentari con cART, utilizzare raschietti cellulari sterili per pesare 250 mg di FTC (Emtricitabina), 375 mg di TDF e 500 mg di RAL o ELV in singole provette sterili da centrifuga da 15 ml in un armadio di biosicurezza.</li>
	<li>Aggiungere 1 mL di DMSO in un tubo FTC da 250 mg (concentrazione finale di 250 mg/ml), aggiungere 1,5 mL di DMSO in un tubo TDF da 375 mg (concentrazione finale di 250 mg/ml) e aggiungere 1mL di DMSO in un tubo RAL o ELV da 500 mg (concentrazione finale di 500 mg/ml). Mescolare o pipetare la miscela di droga fino a completa dissoluzione e si ottiene una soluzione chiara.</li>
	<li>Utilizzare un filtro a membrana idrofilo PVDF da 0,22 μM per sterilizzare le soluzioni con una siringa sterile. Le singole soluzioni farmacologiche possono essere conservate a -20 °C per 12 settimane.</li>
	<li>Quando è pronto per l'uso, scongelare appena un'aliquota di ciascuna soluzione di farmaco a 37 °C fino a quando la soluzione diventa limpida. Mescolare bene usando un pipet.</li>
	<li>Combinare i farmaci e mescolare bene per formare il master mix: 1 mL di FTC in DMSO, 1,5 mL di TDF in DMSO e 1 mL di ELV o RAL in DMSO. NOTA: Questa quantità farà 10 tazze di cibo.</li>
	<li>Aggiungere 350 μL di soluzione master mix cART in una tazza per creare una tazza DietGel Boost cART.</li>
	<li>Aggiungere 0,75 mL di Trimetoprim-Sulfametossazolo (0,48 mg/mL concentrazione finale) nella tazza.</li>
	<li>Mescolare accuratamente con 1 mL di punte sterili per pipette.</li>
	<li>Aliquotare la tazza contenente cART dalla tazza originale con una micro spatola su una piastra di Petri da 60 mm secondo necessità. Pesare il cibo su una bilancia per calcolare la quantità di tazza di cibo contenente cART per ogni gabbia in base al numero di topi.</li>
</ol>3. Somministrazione di farmaci ART a topi infetti da HIV-1
<ol><li>Rimuovere il chow normale dalla gabbia e sostituirlo con una tazza di cibo contenente cART. NOTA: In media, un topo mangerà fino a 5 g di cibo al giorno. Circa una tazza di cibo può essere somministrata a cinque topi per 2 giorni.</li>
	<li>Rinfrescare il cibo cART tre volte a settimana.</li>
	<li>Pesare le tazze usate per monitorare l'assunzione. Pesare i topi settimanalmente per confermare il consumo.</li>
</ol>4. Monitorare la carica virale mediante PCR in tempo reale
<ol><li>Valutare le cellule immunitarie umane (livelli di cellule T CD4 e CD8) e la replicazione dell'HIV-1 nei topi BLT ogni 2 settimane mediante sanguinamento retroorbitale. Raccogliere il plasma seguendo le istruzioni nei passaggi 1.5-1.8.</li>
	<li>Monitorare le cariche virali plasmatiche di topi infettati da HIV-1 prima e durante la somministrazione orale di cART per 8 settimane. Estrarre l'RNA virale plasmatico dal plasma utilizzando un kit di estrazione dell'RNA virale e quantificarlo mediante PCR in tempo reale utilizzando i primer e le sonde (vedi Tabella dei materiali) come precedentemente descritto 27,30,31. Utilizzare il seguente protocollo di ciclismo: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), quindi ciclismo 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) per 45 cicli.</li>
</ol>5. Valutare i rapporti CD4/CD8 mediante citometria a flusso
<ol><li>Preparare sospensioni monocellulari da sangue periferico di sanguinamenti bisettimanali seguendo i passaggi 1.5-1.8.</li>
	<li>Colorare le cellule con marcatori superficiali e analizzare mediante citometria a flusso. Utilizzare i seguenti anticorpi marcatori di superficie 27,30,43,49 nella citometria a flusso: CD45 (clone HI30), CD8 (clone SK1), CD3 (clone OKT3), CD4 (clone RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

SK è uno dei fondatori di CDR3 Inc. I restanti autori dichiarano che la ricerca è stata condotta in assenza di relazioni commerciali o finanziarie che potrebbero essere interpretate come un potenziale conflitto di interessi.

Un metodo di somministrazione orale di cART è stato sviluppato qui per topi umanizzati infetti da HIV-1 combinando tre farmaci antiretrovirali all'interno di alimenti ad alto contenuto di nutrienti. Rispetto alla somministrazione tramite iniezioni giornaliere, la somministrazione orale è più facile da usare, limita la frequenza di somministrazione, riduce la manipolazione degli animali, riduce al minimo lo stress e migliora la sicurezza55. Fino a questo punto, solo pochi studi su topi umanizzati 2...

L'aspettativa di vita degli individui con infezione da virus dell'immunodeficienza umana cronica (HIV) è significativamente migliorata con il trattamento antiretrovirale combinato (cART)1,2. cART riduce con successo la replicazione dell'HIV-1 e aumenta la conta delle cellule T CD4+ alla normalità nella maggior parte dei partecipanti con infezione cronica da HIV-13, con conseguente miglioramento della salute generale e drastica riduzione della progressione della malattia4. Tuttavia, il serbatoio latente di HIV-1 si stabilisce anche quando l'ART viene iniziata durante l'infezione acuta 5,6,7. I serbatoi persistono negli anni durante l'ART e il rapido rimbalzo virale dopo l'interruzione dell'ART è ben documentato 8,9. Le persone che vivono con l'HIV in ART sono anche predisposte a un rischio più elevato di comorbidità come malattie cardiovascolari, cancro e disturbi neurologici10,11,12. Pertanto, è necessaria una cura funzionale per l'HIV. I modelli animali per l'infezione da HIV-1 offrono evidenti vantaggi nello sviluppo e nella convalida di nuove strategie di cura dell'HIV13,14,15. I topi umanizzati, come un piccolo modello animale, possono fornire la ricostituzione multilineare delle cellule immunitarie umane in diversi tessuti, che consente lo studio ravvicinato dell'infezione da HIV16,17,18,19. Tra i modelli umanizzati, il modello umanizzato midollo osseo-fegato-timo (BLT) ricapitola con successo l'infezione cronica da HIV-1 e le risposte immunitarie umane funzionali all'infezione da HIV-1 20,21,22,23,24. Pertanto, il modello murino BLT umanizzato è stato ampiamente utilizzato per indagare vari aspetti nel campo della ricerca sull'HIV. I topi BLT umanizzati non sono solo modelli consolidati per la ricapitolazione dell'infezione persistente da HIV-1 e della patogenesi, ma anche strumenti consequenziali per la valutazione delle strategie di intervento basate sulla terapia cellulare. Gli autori attuali e altri hanno dimostrato che il modello umanizzato di topi BLT ricapitola l'infezione persistente da HIV-1 e la patogenesi 25,26,27 e fornisce strumenti per valutare le strategie di intervento basate sulla terapia cellulare 28,29,30,31,32,33. 
I regimi di cART costituiti da combinazioni di farmaci antiretrovirali assunti quotidianamente sopprimono la replicazione dell'HIV-1 al punto che la carica virale negli individui trattati con successo rimane non rilevabile a lungo termine34. I risultati del trattamento di topi umanizzati con infezione da HIV con regimi di cART clinicamente rilevanti assomigliano a quelli osservati negli individui trattati con ART infetti da HIV-122: i livelli di HIV-1 sono soppressi al di sotto dei limiti di rilevazione e l'interruzione di cART provoca un rimbalzo della replicazione dell'HIV dal serbatoio latente35. L'iniezione sottocutanea (SC)27,36,37 o intraperitoneale (IP)37,38,39 è la via comunemente usata per il trattamento cART nei topi umanizzati. Tuttavia, l'iniezione giornaliera intensiva induce stress agli animali per contenzione fisica40. È anche laborioso e potenzialmente pericoloso per i ricercatori a causa della maggiore esposizione all'HIV durante l'utilizzo di oggetti taglienti. La somministrazione orale è ideale per imitare l'assorbimento, la distribuzione e l'escrezione dei farmaci cART assunti da individui con infezione da HIV-1. La somministrazione orale comporta tipicamente procedure personalizzate e spesso laboriose per mettere i farmaci antiretrovirali in alimenti sterilizzati (necessari a causa dell'immunodeficienza dei topi) 24,37,41 o acqua 42,43,44,45,46 , che può o non può essere chimicamente compatibile con molti farmaci antiretrovirali, o provocare qualcosa che i topi non mangerebbero o berrebbero prontamente (il che influenzerebbe i livelli di dose e farmaco nel corpo). Il nuovo metodo di somministrazione perorale di cART qui proposto supera i precedenti tentativi di somministrazione grazie alla sua compatibilità con diversi tipi di farmaci antiretrovirali, alla sicurezza e alla facilità di preparazione e somministrazione e alla riduzione dello stress e dell'ansia degli animali derivanti dall'iniezione giornaliera.
Tenofovir disoproxil fumarato (TDF), Elvitegravir (ELV) e Raltegravir (RAL) sono farmaci scarsamente solubili in acqua. È interessante notare che si osserva una maggiore biodisponibilità di TDF con cibi grassi, suggerendo che l'inibizione competitiva delle lipasi da parte del cibo grasso può fornire una certa protezione per TDF47. Pertanto, le coppette DietGel Boost sono state selezionate per sostituire il normale chow di roditori come metodo di consegna basato sul loro modesto contenuto di grassi (20,3 g per 100 g) rispetto al normale roditore (10 g per 100 g) e una tipica dieta ricca di grassi per topi (40-60 g per 100 g)48. Il peso totale di una tazza è di 75 g; Pertanto, ogni tazza conterrà la quantità di cibo, e quindi di droga, sufficiente per cinque topi in 3 giorni.

<table><tbody><tr><td>Piastra di Petri da 60 mm</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>Per aliquotazione di alimenti ART</td></tr><tr><td>APC Anticorpi CD8 anti-umani</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>Per citometria</td></tr><tr><td>a flusso BD LSRFortessa</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Per la raccolta dei dati di flusso</td></tr><tr><td>Microsfere CD34</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>Per la generazione di topi NSG-BLT</td></tr><tr><td>Provette</td> <td>da centrifugaFalcon</td><td>14-432-22</td><td>Per sciogliere ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost</td><td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>Per fare il cibo ART</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Donato da Gilead</td></tr><tr><td>Emtricitabina</td><td>Gilead</td><td></td><td>Donato da Gilead</td></tr><tr><td>FITC anti-umano CD3 Antibody</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td>Per citometria a flusso</td></tr><tr><td>Software</td><td>Flowjo FlowJo</td><td></td><td>Per l'analisi dei dati di citometria a flusso</td></tr><tr><td>HIV-1 primer in avanti: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Personalizzato</td><td>per la carica virale RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 probe: 5&prime;-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Personalizzato</td><td>per la carica virale RT-PCR</td></tr><tr><td>HIV-1 primer inverso: 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>IDT</td><td>Personalizzato</td><td>Per Carica Virale RT-PCR</td></tr><tr><td>Tessuto fetale umano</td><td>Advanced Bioscience Resources, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Topi, ceppo NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Per la costruzione dei topi umanizzati</td></tr><tr><td>Pacific Blue anti-umano CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>Per citometria a flusso</td></tr><tr><td>PerCP anti-umano CD4 Antibody</td><td>Biolegend</td><td>300528</td><td>Per citometria a flusso</td></tr><tr><td>QIAamp Kit di RNA virale</td><td>Qiagen</td><td> 52904</td><td>Per misurare la carica virale</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td></td><td>Gifted from Merck</td></tr><tr><td>Raschietti cellulari sterili</td><td>Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>Per l'aliquotazione di alimenti ART</td></tr><tr><td>TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4392653</td><td>Per il rilevamento della carica virale plasmatica</td></tr><tr><td>Tenofovir disoproxil fumarato</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gifted from Gilead</td></tr><tr><td>Trimetoprim-Sulfametossazolo</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>Per mantenere sterile il cibo ART. Ogni cucchiaino da 5 ml contiene 200 mg di sulfametossazolo, USP 40 mg di trimetoprim, USP NMT 0,5% di alcol</td></tr></tbody></table>

trattamento antiretrovirale combinato orale in topi umanizzati infetti da hiv-1

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

La pandemia del virus dell'immunodeficienza umana (HIV-1) continua a diffondersi senza sosta in tutto il mondo e attualmente non esiste un vaccino disponibile contro l'HIV. Sebbene la terapia antiretrovirale combinata (cART) abbia avuto successo nel sopprimere la replicazione virale, non può sradicare completamente il serbatoio da individui con infezione da HIV. Una strategia di cura sicura ed efficace per l'infezione da HIV richiederà metodi su più fronti, e quindi i progressi dei modelli animali per l'infezione da HIV-1 sono fondamentali per lo sviluppo della ricerca sulla cura dell'HIV. I topi umanizzati ricapitolano le caratteristiche chiave dell'infezione da HIV-1. Il modello murino umanizzato può essere infettato da HIV-1 e la replicazione virale può essere controllata con regimi cART. Inoltre, l'interruzione della cART provoca un rapido rimbalzo virale nei topi umanizzati. Tuttavia, la somministrazione di cART all'animale può essere inefficace, difficile o tossica e molti regimi di cART clinicamente rilevanti non possono essere utilizzati in modo ottimale. Oltre ad essere potenzialmente pericoloso per i ricercatori, la somministrazione di cART mediante una procedura di iniezione giornaliera intensiva comunemente usata induce stress da contenzione fisica dell'animale. Il nuovo metodo orale cART per il trattamento di topi umanizzati infetti da HIV-1 descritto in questo articolo ha portato alla soppressione della viremia al di sotto del livello di rilevamento, all'aumento del tasso di ripristino di CD4 + e al miglioramento della salute generale nei topi umanizzati infetti da HIV-1.

Supponendo che un topo medio del peso di 25 g consumi 4 g di cibo al giorno, la dose giornaliera di farmaco attraverso l'assunzione orale corrisponde a 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC e 768 mg/kg RAL. Per verificare se il regime alimentare ottimizzato è tossico e influenza la salute generale rispetto all'iniezione giornaliera di cART, il peso dei topi è stato monitorato settimanalmente prima e durante la cART attraverso l'iniezione orale o sottocutanea. Non ci sono state differenze di peso significative prima della somminis...

Questo protocollo descrive un nuovo metodo per somministrare farmaci antiretrovirali combinati orali che sopprimono con successo la replicazione dell'RNA dell'HIV-1 nei topi umanizzati.

Trattamento antiretrovirale combinato orale in topi umanizzati infetti da HIV-1

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

Questo protocollo descrive un nuovo metodo per somministrare farmaci antiretrovirali combinati orali, o ART, che sopprime con successo la replicazione dell'RNA dell'HIV nei topi umanizzati. Il nuovo metodo ART orale supera i precedenti tentativi di consegna grazie alla sua sicurezza, facilità di preparazione e somministrazione e ridotto stress animale derivante da un'iniezione giornaliera. Il metodo di somministrazione orale proposto per sopprimere la replicazione dell'RNA dell'HIV nei topi umanizzati sarà molto prezioso per studi preclinici proof-of-concept per sviluppare nuovi trattamenti di cura che imitino da vicino la somministrazione del farmaco in individui cronici con infezione da HIV.A dimostrare la procedura sarà Valerie Rezak, responsabile di laboratorio e tecnico del nostro laboratorio. Inizia pesando i singoli farmaci. Prepara 10 bicchieri alimentari con cART utilizzando raschietti per cellule sterili per pesare 250 milligrammi di FTC, 375 milligrammi di TDF e 500 milligrammi di RAL o ELV in singoli tubi da centrifuga sterili da 50 millilitri in un armadio di biosicurezza.Aggiungere DMSO al tubo FTC e TDF per ottenere una concentrazione finale di 250 milligrammi per mi

oral-combinational-antiretroviral-treatment-hiv-1-infected-humanized

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

La generazione e la caratterizzazione di cellule T specifiche tumorali usando topi umanizzati è descritto qui. Umana tessuto timico e geneticamente modificate cellule staminali ematopoietiche vengono trapiantate in topi immunocompromessi. Ciò comporta la ricostituzione di un ingegnerizzato sistema immunitario umano consentendo in esame vivo delle risposte immunitarie anti-tumorali.

Uso del mouse BLT umanizzato come cellule staminali basata su un Modello Tumore Terapia Genica

Questo video mostra un test per valutare l'efficacia della terapia antiretrovirale combinata orale (cART orale) in un modello murino umanizzato infetto da virus dell'immunodeficienza umana-1 (HIV-1). Una combinazione di farmaci che hanno come bersaglio l'HIV-1, tra cui gli inibitori nucleosidici della trascrittasi inversa e gli inibitori del trasferimento del filamento dell'integrasi, viene somministrata insieme a un integratore alimentare e antibiotici. A seguito del consumo di questa miscela...

Terapia antiretrovirale combinatoria orale per il trattamento dell'infezione da HIV-1 in un modello murino umanizzato

Il video dimostra una tecnica per generare un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro il virus dell'immunodeficienza umana (HIV). Il tessuto del timo fetale umano e le cellule staminali ematopoietiche (HSC) ingegnerizzate vengono impiantate nella capsula renale di un topo gravemente immunocompromesso. Le HSC, che esprimono i recettori chimerici dell'antigene (CAR) contro l'HIV, sono mescolate in una miscela proteica gelatinosa che ne promuove la...

Costruzione di un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata contro l'HIV

Questo protocollo descrive i metodi per costruire un modello murino umanizzato di midollo osseo/fegato/timo con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro l'infezione da HIV.

Cellule staminali base Immunità Engineered contro l&#39;infezione da HIV nel modello umanizzato mouse

Questo protocollo fornisce un metodo per stabilire topi umanizzati (hu-NSG) tramite iniezione intraepatica di cellule staminali ematopoietiche umane nella radiazione-condizionato topi NSG neonatali. Il mouse di hu-NSG è suscettibile di infezione da HIV e combinatorio antiretrovirale di combinazione (cART) e serve come un modello fisiopatologico adatto per le indagini di replica e la latenza di HIV.

Umanizzato NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) Mouse modello per studi di latenza e di replicazione dell'HIV

Questo protocollo fornisce un metodo affidabile per stabilire topi umanizzati sia con il sistema immunitario umano che con le cellule epatiche. I topi immunodeficienti contemporanei ricostituiti ottenuti tramite iniezione intrasplessica di epotociti umani e CD34- cellule staminali ematopoietiche sono suscettibili di infezione da virus immunodeficienza umana-1 e ricapitolano i danni al fegato osservati pazienti affetti da HIV.

Istituzione del modello murino TK-NOG dualizzato per la patogenesi del fegato associata all'HIV

Qui sono descritti tre approcci sperimentali per studiare la dinamica dell'infezione da HIV nei topi umanizzati. Il primo consente lo studio di eventi di infezione cronica, mentre i due ultimi consentono lo studio di eventi acuti dopo l'infezione primaria o la riattivazione virale.

Infezione da HIV cronica, acuta e riattivata in modelli di topo immunodeficienti umanizzati

Abbiamo sviluppato un protocollo per la generazione e la valutazione di un modello murino NOG infettato da virus dell'immunodeficienza umana e umile basato sul trapianto di cellule staminali, sull'esposizione al virus dell'immunodeficienza umana intravaginale e sull'RNA PCR digitale a goccia e droplet Quantificazione.

Mitrai NOG umanizzati per l'esposizione all'HIV intravaginale e il trattamento dell'infezione da HIV

Tropismo dell'HIV può essere dedotta dalla regione V3 della busta virale. V3 è amplificato mediante PCR in triplice copia tramite nested RT-PCR, in sequenza, e interpretato utilizzando il software bioinformatico. I campioni con con sequenza di 1 o più (s) con punteggi bassi G2P sono classificati come non-R5 virus.

Inferenza genotipica del virus HIV-1 Tropismo utilizzo basati sulla popolazione sequenziamento del V3

Saggi di citotossicità per misurare le risposte delle cellule naturali litici killer per le cellule infettate da HIV è limitata dalla purezza delle cellule bersaglio. Dimostriamo qui l'isolamento di una popolazione altamente purificata di infezione da HIV-1 primario a cellule T colpi sfruttando la capacità di HIV-1 s di down-modulare CD4.

Preparazione e utilizzo di HIV-1 CD4 infetti primaria + T-Cells come cellule bersaglio nei test di cellule Natural Killer citotossici

Impara un metodo orale innovativo per somministrare farmaci antiretrovirali combinati che sopprime la replicazione dell'RNA HIV-1 in topi umanizzati. Questa tecnica riduce lo stress degli animali rispetto alle iniezioni giornaliere.

Trattamento antiretrovirale combinato orale in topi umanizzati infetti da HIV-1

Esplora altri video